目的:通过网络药理学研究半枝莲-党参药对治疗膀胱癌的作用机制。方法:查询中药系统药理学数据库分析平台（TCMSP）筛选半枝莲-党参药对的药物成分，使用Swiss Target Prediction预测药物成分的作用靶点；运用GeneCards获取膀胱癌的疾病靶点，利用venny 2.1获取交集靶点。使用STRING进行蛋白-蛋白相互作用分析并使用Cytoscape构建"药物-靶点-通路"网络，利用Metascape进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析。将裸鼠随机分为模型组和治疗组，建立膀胱癌小鼠模型。模型组小鼠灌胃等剂量溶剂，治疗组建模后第8天灌胃半枝莲-党参药对0.2 ml，剂量为342.86 mg/kg，2次/d。建模后第28天，测量裸鼠瘤体大小，并采用酶联免疫吸附试验法检测前列腺素G/H合成酶2（PTGS2）、PTGS1、核受体辅活化子2（NCOA2）、维甲酸X受体α（RXRA）、孕酮受体（PGR）、丝裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、网状内皮增生病毒癌基因同源物A（RELA）、蛋白激酶B1（Akt1）水平。结果:半枝莲-党参药对的45个药物成分通过多条通路直接作用于187个疾病靶点治疗膀胱癌，主要核心成分为槲皮素、木犀草素、汉黄芩素、7-甲氧基-2-甲基异黄酮、黄芩素、β-谷甾醇和豆甾醇等，关键靶点为PTGS2、PTGS1、NCOA2、RXRA、PGR、MAPK1、RELA和Akt1等。GO富集分析显示，生物过程主要涉及对激素的反应、细胞对脂质的反应、对外来刺激的反应、对细菌分子的反应等，细胞组分主要涉及转录调控复合体、膜筏、膜微区、RNA聚合酶Ⅱ转录调控复合物等，分子功能主要涉及转录因子结合、DNA结合转录因子结合、RNA聚合酶Ⅱ特异性DNA结合转录因子结合、核受体活性、配体激活的转录因子活性等。KEGG通路富集分析显示半枝莲-党参药对治疗膀胱癌的主要信号通路为晚期糖基化终产物及其受体（AGE-RAGE）、白细胞介素-17（IL-17）、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）、肿瘤坏死因子（TNF）、MAPK、缺氧诱导因子-1（HIF-1）、细胞凋亡、p53、Toll样受体等。动物实验验证显示，半枝莲-党参药对能够明显改善裸鼠的瘤体大小，同时也能改善PTGS2、PTGS1、NCOA2、RXRA、PGR、MAPK1、RELA、Akt1表达水平。结论:半枝莲-党参药对主要通过调节AGE-RAGE、IL-17、PI3K-Akt、TNF、MAPK、HIF-1、细胞凋亡、p53、Toll样受体等信号通路的PTGS2、PTGS1、NCOA2、RXRA、PGR、MAPK1、RELA、Akt1等靶点治疗膀胱癌。

目的:探究毛蕊异黄酮苷(calycosin-7-O-β-D-glucoside, CG)改善糖皮质激素诱导肝细胞脂质合成的作用机制。方法:地塞米松(dexamethasone, Dex)、CG、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)激动剂AICAR、AMPK抑制剂compound C、AMPK失活(AMPK-DN)及组成性激活(AMPK-CA)腺病毒处理HepG2细胞后，使用CCK8法、油红O染色、三酰甘油和总胆固醇检测盒、实时定量PCR及Western印迹法分别检测细胞活性、细胞脂质含量、脂质合成相关基因的表达及AMPK的磷酸化水平。结果:CG显著减少Dex诱导的HepG2细胞中脂质含量及脂质合成关键酶硬脂酰辅酶A去饱和酶(Scd1)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(Fasn)与转录因子固醇调控元件结合蛋白1c(Srebp-1c)的表达，并上调AMPK的磷酸化水平，而该保护效应可被AMPK抑制剂与AMPK-DN腺病毒所抑制。结论:CG可通过激活AMPK抑制糖皮质激素诱导的肝细胞脂质合成。

目的:探讨山楂叶总黄酮（FHL）对急性心肌梗死（AMI）大鼠心功能的影响及其作用机制。方法:SPF级雄性Sprague-Dawley大鼠60只，9周龄，体重300~350 g，采用随机数字表法选取 10只作为假手术组，余50只用于建立AMI模型。采用冠状动脉结扎法建立大鼠AMI模型，其中36只建模成功，随机数字表法将其分为AMI组及FHL低、中、高剂量组（每组 n=9），按10 ml/kg体重分别腹腔注射生理盐水及浓度为0.3、0.6、1.2 mg/ml的FHL溶液。假手术组仅穿线不结扎，按10 ml/kg体重给予等量生理盐水。给药干预均为1次/d，连续4周。超声心动图检测各组大鼠左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室舒张末期前壁厚度（LAWD）、左心室射血分数（LVEF）及左心室舒张末压（LVEDP）。然后处死大鼠，取左心室前壁组织制作切片，常规苏木精-伊红（HE）染色观察大鼠心肌组织病理学改变。另取切片进行原位末端转移酶标记法（TUNEL）染色，计算心肌细胞凋亡率。分别采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blot法检测大鼠心肌组织中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、糖原合成酶激酶3（GSK3β）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）mRNA和蛋白的相对表达水平及磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化GSK3β（p-GSK3β）蛋白的相对表达水平。 结果:与假手术组比较，AMI组及FHL低、中、高剂量组大鼠LVEDD、LVEDP均较大，LAWD、LVEF均较小（ P均<0.05）。与AMI组比较，FHL低、中、高剂量组大鼠LVEDD、LVEDP均较小，LAWD、LVEF均较大（ P均<0.05），且随FHL剂量增加LVEDD和LVEDP减小，LAWD和LVEF增大（ P均<0.05）。FHL低、中剂量组大鼠的LVEDD和LAWD差异无统计学意义（ P均>0.05）。HE染色结果显示，假手术组大鼠心肌组织结构正常，AMI组大鼠梗死区可见坏死心肌组织，心肌纤维排列紊乱，心肌间质大量炎性细胞浸润，FHL低、中、高剂量组大鼠心肌损伤较AMI组轻，心肌纤维排列整齐，但仍有部分断裂及少量炎性细胞浸润，梗死区有散在的岛状正常心肌组织，其中FHL高剂量组大鼠心肌损伤最轻。TUNEL染色结果显示，与AMI组比较，FHL低、中、高剂量组大鼠心肌细胞凋亡率均较低（ P均<0.001），但仍均高于假手术组（ P均<0.001），且随FHL剂量增加心肌细胞凋亡率降低（ P均<0.05）。RT-qPCR检测结果显示，与AMI组比较，FHL低、中、高剂量组大鼠心肌组织中PI3K、cyclin D1 mRNA表达水平较高，但仍低于假手术组（ P均<0.05），且随FHL剂量增加PI3K、cyclin D1 mRNA表达水平升高（ P均<0.05）。Western blot法检测结果显示，与AMI组比较，FHL低、中、高剂量组大鼠心肌组织中PI3K、p-Akt、p-GSK3β、cyclin D1蛋白表达水平较高，但仍低于假手术组（ P均<0.05），且随FHL剂量增加PI3K、p-Akt、p-GSK3β、cyclin D1蛋白表达水平升高（ P均<0.05）。 结论:FHL可有效改善AMI大鼠心功能，其可能通过激活PI3K/GSK3β/cyclin D1信号通路发挥调控作用。

[目的]黄酮醇合成酶(FLS)是石竹目植物中多酚类次生代谢的关键酶,为探究FLS基因在藜麦生长发育中的功能,对FLS基因家族进行鉴定和表达分析.[方法]利用生物信息学分析网站,鉴定出CqFLS家族成员,分析其基因结构、蛋白的理化性质、二级结构、三级结构、启动子顺式元件以及系统进化关系等,并通过基因克隆、构建表达载体的方法分析其蛋白表达情况.[结果]共鉴定出 3 个CqFLSs基因,不均匀分布在 2 条染色体上,CqFLSs启动子区域包含水杨酸、脱落酸、茉莉酸甲酯和干旱诱导等元件;CqFLS2.1g发现多处InDel和SNP变异,在ch01 28871893、28871125、28872881 处编码核苷酸删除,且均注释为上游效应,未检测到移码突变;FLS家族系统进化树分析可知,与其他两个基因相比,CqFLS2.1g与CqFLS1.1g、CqFLS3.10g处于不同分支,表达水平也存在差异,CqFLS2.1g可能发生分化;同时,基因表达分析表明,3 个CqFLSs基因在青白 1 号籽粒中整体表达量高于青黑 1 号和贡扎 4 号.对克隆出的CqFLS1.1g用 0.3 mmol/L的IPTG诱导,在 20℃和 37℃的条件下均可成功表达.[结论]CqFLS1.1g 在花的形成以及籽粒发育过程中发挥作用,而CqFLS2.1g则主要参与藜麦籽粒的形成,CqFLS的表达具有组织特异性,在藜麦生长发育过程中发挥重要的作用.

目的:基于生物信息学、分子对接及动物实验探讨完带汤治疗盆腔炎性疾病后遗症(sequelae of pelvic inflammatory dis-ease,SPID)的作用机制.方法:通过基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库检索SPID相关数据集,借助limma分析筛选差异表达基因.通过HERB数据库检索完带汤作用靶点,将其与SPID差异表达基因取交集,作为完带汤治疗SPID的关键靶点.将关键靶点导入STRING数据库,绘制蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络图.通过Cytoscape软件的Analyze Network插件进行拓扑分析,从而筛选核心靶点.通过Web Gestalt数据库进行基因本体(Gene Ontol-ogy,GO)功能分析,借助Reactome平台进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析.采用HERB数据库和中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)获取核心靶点对应的化学成分,将其作为完带汤治疗SPID的关键成分.利用AutoDock软件对完带汤关键成分与核心靶点进行分子对接验证.从46 只SD大鼠中随机选取10 只作为空白组,其余大鼠沿输卵管-卵巢方向注入混合菌液0.1 mL从而建立SPID模型.将造模成功的大鼠随机分为模型组、头孢呋辛酯组、完带汤组,每组7 只,灌胃21 d,每日1次.HE染色观察输卵管病理形态学改变,ELISA检测血清转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)水平.结果:从GEO数据库获取GSE165004 数据集,筛选得到SPID的差异表达基因3 073 个.完带汤作用靶点446 个,完带汤治疗SPID的关键靶点58 个.通过PPI网络筛选得到10 个核心靶点,包括丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3 beta,GSK-3β)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 9(caspase 9,CASP9)等.GO和KEGG分析结果主要涉及白细胞介素-4 和白细胞介素-13 信号、凋亡的内在途径、生物调节、代谢过程、细胞增殖等.分子对接显示,完带汤关键成分与核心靶点具有较好的结合活性.HE染色显示,空白组大鼠输卵管结构清晰正常;模型组大鼠输卵管结构欠清晰,黏膜上皮细胞减少,可见炎性细胞浸润;头孢呋辛酯组、完带汤组大鼠输卵管结构基本清晰,可见少量炎性细胞浸润.ELISA结果显示,与空白组比较,模型组大鼠血清TGF-β1 水平升高(P<0.01);与模型组比较,头孢呋辛酯组、完带汤组大鼠血清TGF-β1 水平降低(P<0.01).结论:完带汤可能通过薯蓣皂苷元、毛蕊异黄酮等活性成分作用于MAPK1、TGF-β1 等靶点,抑制炎症反应,从而发挥治疗SPID的作用.

目的:探讨黄蜀葵花总黄酮(TFA)对棕榈酸(PA)诱导HepG-2细胞脂质沉积模型的干预效应及机制.方法:体外培养人肝源HepG-2细胞,应用PA处理以构建细胞脂质沉积模型,然后从黄蜀葵花中提取TFA,以TFA或蛋白激酶B(AKT)抑制剂作为干预剂,对PA诱导的细胞脂质沉积模型进行预处理,应用油红O染色、酶联免疫吸附实验和免疫印迹实验(Western blotting)检测细胞脂质代谢、AKT1和脂联素(APN)信号通路蛋白表达水平.结果:与PA模型组比较,TFA或AKT抑制剂干预后,细胞脂质沉积程度(％)、游离脂肪酸(FFAs)和甘油三酯(TG)水平降低,而APN水平升高(P＜0.05).Western blotting实验显示PA模型组AKT1和固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)表达水平上调而APN和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)水平下调(P＜0.05).与PA模型组比较,TFA或AKT抑制剂干预显示AKT1下调而APN水平上调,其下游信号GSK3β表达上调而SREBP-1表达下调(P＜0.05).结论:TFA拮抗PA诱导的HepG-2细胞脂质沉积可能与其介导AKT1抑制及APN信号通路激活有关.

目的 观察金莲花总黄酮腹腔注射对大鼠脑缺血再灌注损伤的治疗作用并探讨其机制.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组,每组18只.除假手术组外,各组均采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞模型;假手术组手术操作与模型组基本相同但未插线栓.金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组在造模完成后分别腹腔注射金莲花总黄酮及铁死亡抑制剂Lip-1,假手术组、模型组腹腔注射等量生理盐水,连续给药3 d,每天1次.采用Longa评分法对大鼠的神经功能缺损进行评分,TTC染色测算脑组织梗死体积百分比,比色法检测脑组织氧化应激指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),Western blotting法检测脑组织铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链脂酰辅酶A合成酶(ACSL4)、转铁蛋白受体1(TFR1)、膜铁转运蛋白1(Ferroportin-1).结果 神经功能缺损评分、脑梗死体积百分比模型组>金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组>假手术组(P均<0.05).脑组织ROS、MDA含量模型组>金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组>假手术组,GSH-Px含量假手术组>金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组>模型组(P均<0.05).脑组织GPX4、TFR1、Ferro-portin-1蛋白表达模型组<金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组、假手术组,ACSL4蛋白表达模型组>金莲花总黄酮组、铁死亡抑制剂组、假手术组(P均<0.05).结论 金莲花总黄酮腹腔注射对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的治疗作用,其机制可能与抑制脑组织铁死亡有关.

类黄酮在植物耐低温胁迫方面发挥着重要作用,为揭示低温对毛竹(Phyllostachys edulis)叶片中类黄酮合成的影响,采用分光光度法测定了不同生长时期和低温胁迫下毛竹幼苗叶片中的类黄酮含量,通过生物信息学方法对毛竹类黄酮早期生物合成关键酶基因进行了鉴定,并用qPCR方法分析了其表达模式.结果表明,随着叶片的生长,类黄酮含量呈现先升高后降低的趋势,而低温下,功能叶片中类黄酮含量则呈现上调趋势,且在8 h时达极显著水平.在毛竹基因组中鉴定了类黄酮早期生物合成3个酶基因家族共29个成员,包括20个查尔酮合酶基因(PeCHSs)、8个查尔酮异构酶基因(PeCHIs)和1个黄酮-3-烃化酶基因(PeF3H1),这些基因的启动子中均含有响应低温及其他非生物胁迫的调控元件.PeCHSs倾向在根和叶中表达,而PeCHIs为组成型表达.在不同生长时期的叶片中,仅PeCHS1 表达与类黄酮的含量变化趋势一致;而低温胁迫下,3 个PeCHSs、2个PeCHIs和PeF3H1在功能叶片中呈上调表达,与类黄酮含量变化趋势一致.因此,毛竹可能通过提高类黄酮早期生物合成酶基因的表达量促进类黄酮的合成来响应低温胁迫.

目的 探究7,8-二羟基黄酮(7,8-DHF)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨分化的影响和机制.方法 将从健康人牙周膜组织中分离培养的hPDLSCs用不同浓度的7,8-二羟基黄酮(0,0.5,1,5,10,20,40 μmol/L)处理,通过MTT法检测hPDLSCs活性.将hPDLSCs分为5组:对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和XAV939(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂)组.各组hPDLSCs均用成骨诱导液培养,对照组的成骨诱导液不添加药物,低剂量组、中剂量组和高剂量组的成骨诱导液中分别添加0.5,1,5 μmol/L的7,8-二羟基黄酮,XAV939组的成骨诱导液中同时添加5 μmol/L的7,8-二羟基黄酮和10 μmol/L的XAV939.各组hPDLSCs共培养21 d,每2 d更换培养基,检测碱性磷酸酶(ALP)活性.通过茜素红染色观察钙化结节形成(OD590 nm).通过qRT-PCR检测Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、Wnt-3a、β-catenin 和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的 mRNA 表达水平.通过 Western blot 检测 Wnt-3a、β-catenin 和 GSK-3 β的蛋白表达水平.结果 不同浓度的7,8-二羟基黄酮处理后,hPDLSCs的相对活力差异无统计学意义(F=1.693,P=0.152).与对照组相比,低剂量组、中剂量组和高剂量组hPDLSCs的ALP相对活性升高,钙化结节形成量升高,Runx2、OCN、OPN和BMP-2的mRNA相对表达量升高,Wnt-3a和β-catenin蛋白相对表达量升高,GSK-3β蛋白相对表达量降低(均P＜0.05).与低剂量组相比,中剂量组和高剂量组hPDLSCs中ALP相对活性升高,钙化结节形成量升高,Runx2、OCN、OPN和BMP-2的mRNA相对表达量升高,Wnt-3a和β-catenin蛋白相对表达量升高,GSK-3β蛋白相对表达量降低(均P＜0.05).与高剂量组相比,XAV939组hPDLSCs中ALP相对活性降低,钙化结节形成量降低,Runx2、OCN、OPN和BMP-2的mRNA相对表达量降低,Wnt-3a和β-catenin蛋白相对表达量降低,GSK-3β蛋白相对表达量升高(均P＜0.05).结论 7,8-二羟基黄酮通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进hPDLSCs成骨分化.

目的 探讨消痔丸对醋酸诱导大鼠肛门溃疡模型的药效作用及其可能的作用机制.方法 以醋酸诱导大鼠肛门溃疡模型,将造模成功大鼠分为模型组、消痔丸(0.81、1.62、3.24 g/kg)组、柑橘黄酮片(0.27 g/kg)组和痔炎消片(0.86 g/kg)组,另设置对照组,每组 10 只.对照组与模型组ig给予同等体积的 0.1%CMC-Na溶液.各组连续ig给药 10 d,1 次/d.观察各组大鼠表观指标,并采用Image J软件计算溃疡面积;苏木素-伊红染色法观察肛门直肠组织病理学,并进行分级评分;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠肛门组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量;免疫组化法检测肛门组织中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、转化生长因子β1(TGFβ1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)蛋白表达.结果 与模型组相比,消痔丸组可显著改善醋酸所致大鼠肛周溃疡、肿胀、黏液分泌等情况,加快大鼠肛周黏膜上皮修复,溃疡面积缩小,减少间质或黏膜下水肿及炎性细胞浸润和炎性渗出物;消痔丸组可抑制肛周组织中MMP-9、IL-6、TNF-α分泌和iNOS、VEGFA蛋白表达,增加TGF-β1 表达(P＜0.05、0.001).结论 消痔丸对醋酸诱导的肛门溃疡模型治疗作用显著,主要通过抑制IL-6、TNF-α、MMP-9 相关细胞因子分泌和iNOS、VEGFA蛋白表达,升高TGF-β1 表达,从抗炎消肿、抑制基质降解、促进组织生长因子表达等途径,起到消肿生肌作用.