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衣原体质粒编码蛋白对衣原体在消化道定植及其耐受胃酸杀伤的作用
编辑人员丨1天前
目的:初步探索鼠衣原体质粒编码蛋白(pGP)维持鼠衣原体定植在消化道的作用,并分析具体参与鼠衣原体在消化道抵制胃酸杀伤作用的pGP种类。方法:选取6周龄雌性健康C57BL/6J小鼠进行灌胃感染不同剂量的鼠衣原体,包括质粒完整衣原体、质粒缺乏衣原体、质粒缺陷衣原体(pGP3S-CM、pGP4S-CM、pGP5S-CM、pGP6S-CM、pGP7S-CM、pGP8d-CM)。于感染后第3、7、14、21、28、35、42、49、56、63天采集直肠拭子,感染后第3、7、14、21、28天取小鼠消化道不同部位组织(胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠、盲肠),离心取上清液,将上清液接种于海拉细胞进行间接免疫荧光染色,荧光显微镜下计数衣原体包涵体,计算组织中鼠衣原体的感染数量。将pH值为1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0的模拟胃酸分别与质粒完整衣原体、pGP3S-CM和pGP4S-CM共同孵育10 min,计算经过不同pH值模拟胃酸杀伤后存活鼠衣原体的数量。统计学比较采用两独立样本 t检验。 结果:采用剂量分别为1×10 3衣原体包涵体形成单位(IFUs)、1×10 4 IFUs、1×10 5 IFUs、1×10 6 IFUs质粒完整衣原体灌胃小鼠后,感染第7至56天小鼠直肠拭子均可检测到质粒完整衣原体,而质粒缺乏衣原体仅在高剂量1×10 5 IFUs和1×10 6 IFUs灌胃小鼠感染后第14天、第7天的直肠拭子中分别被检测到,较质粒完整衣原体在消化道被检出时间明显延迟。采用1×10 5 IFUs质粒完整衣原体灌胃小鼠感染后第3至21天的胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠组织中均可检测出衣原体,第28天后局限在盲肠、结肠、直肠,而质粒缺乏衣原体以相同剂量灌胃感染后仅在第14、21、28天的盲肠、结肠、直肠中被检出。pGP3S-CM与pH值为3.0、3.5、4.0、4.5模拟胃酸共同孵育后存活的鼠衣原体数量均低于质粒完整衣原体组,差异均有统计学意义( t=-0.79、-6.44、-6.99、-6.96,均 P<0.05),而pGP3S-CM与pH值为5.0~7.0的模拟胃酸共同孵育后存活鼠衣原体数量与质粒完整衣原体组差异无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:鼠衣原体质粒可以促进鼠衣原体在消化道内不同部位组织相互作用,使衣原体存活并长期定植,质粒缺乏使鼠衣原体无法在胃和小肠中定植。其中pGP3、pGP4对于鼠衣原体在消化道定植起主要影响,pGP3参与鼠衣原体耐受胃酸杀伤保证鼠衣原体定植于消化道起关键作用。
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编辑人员丨1天前
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红色荧光蛋白mCherry在衣原体感染模型中的应用
编辑人员丨1天前
目的:建立红色荧光蛋白mCherry在衣原体中稳定表达的方法,并使用荧光菌株Cm-mCherry构建有效的衣原体感染模型。方法:构建含有红色荧光蛋白mCherry的重组质粒pmCherry::CM,利用氯化钙法将pmCherry::CM转化至衣原体质粒缺失株CMUT中,经过筛选与纯化得到荧光菌株Cm-mCherry。Cm-mCherry感染HeLa229细胞后观察包涵体中红色荧光的发光情况,并与间接免疫荧光染色法比较,评估细胞感染模型构建是否成功;Cm-mCherry感染小鼠后,通过测定下生殖道载菌量、冷冻切片观察上生殖道衣原体红色荧光、分离生殖道评价输卵管积水发病情况,确定Cm-mCherry的感染力、侵袭力与致病性,评估动物感染模型构建是否成功。结果:红色荧光蛋白mCherry在转化株Cm-mCherry中稳定表达,红色荧光蛋白标记法与间接免疫荧光染色法一致度高;Cm-mCherry小鼠感染模型中,感染率为100%(10/10),下生殖道载菌量可稳定保持高水平,在上生殖道冷冻切片中可观察到带有红色荧光的包涵体,输卵管积水发病程度与Cm野生株差异无统计学意义( P>0.05),证实Cm-mCherry有较好的感染力、侵袭力与致病性。 结论:成功建立红色荧光蛋白mCherry在衣原体中稳定表达的方法,转化后的荧光菌株Cm-mCherry有较好的感染力、侵袭力与致病性,可用于衣原体细胞、动物感染模型的构建,为研究衣原体感染机制提供良好的实验工具。
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编辑人员丨1天前
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连续传代对鼠衣原体生长相关性状及其毒力影响的初步研究
编辑人员丨1天前
目的:探讨体外特殊条件下鼠衣原体( Chlamydia muridarum, Cm)连续传代培养后在感染性、生长发育以及致病性等生物学性状上的变化,为筛选减毒活疫苗,筛查毒力相关基因提供依据。 方法:将实验室 Cm野生株(G0)通过常规细胞培养,在辅助或不辅助培养条件下交替连续传代后,将亲本株G0与获得的传代株G28进行衣原体感染离心依赖性、细胞吸附能力、衣原体感染细胞生长曲线、衣原体形成的噬斑大小以及两种菌株在感染小鼠生殖道后所形成的输卵管病变情况进行检测。 结果:与亲本株G0相比,传代株G28对感染离心条件的依赖性显著下降( P<0.05);对感染细胞的吸附能力却明显上升( P<0.05);G0与G28在感染细胞32 h内的生长曲线差异并无统计学意义;在感染细胞中所形成的噬斑大小也无明显区别;但体内毒力试验中,G0感染小鼠后致输卵管病变率为87.5%,而G28的输卵管病变率仅为37.5%,两者形成差异有统计学意义。 结论:Cm传代株G28与亲本株G0相比,在感染能力显著增强的情况下,其致病性却显著降低,为后续鉴定毒力基因,进一步提取基因型单一的减毒株并应用于衣原体减毒活疫苗带来了希望。
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编辑人员丨1天前
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IL-21/IL-21R介导的CD4 +T细胞在沙眼衣原体小鼠肺炎菌株呼吸道感染中的作用
编辑人员丨1天前
目的:探讨IL-21/IL-21R介导的CD4 +T细胞在沙眼衣原体呼吸道感染中的作用。 方法:利用C57BL/6小鼠(WT小鼠)和IL-21R -/-小鼠,鼻腔吸入沙眼衣原体小鼠肺炎菌株( Chlamydia muridarum, Cm)建立小鼠沙眼衣原体呼吸道感染模型。流式细胞术检测小鼠 Cm呼吸道感染后0、3、7、14 d小鼠肺、脾组织中CD4 +T细胞数量、活化程度和功能,ELISA分析脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4的含量。监测过继转移WT-CD4 +T细胞和IL-21R -/--CD4 +T细胞的na?ve WT小鼠 Cm呼吸道感染后的体重变化,并分析感染后14 d的肺部细菌载量和病理情况,流式细胞术检测肺中性粒细胞(CD45 +CD11b +Gr-1 high)、肺泡巨噬细胞(CD45 +F4/80 +CD11c high)、Th1(IFN-γ +CD4 +)和Th2(IL-4 +CD4 +)细胞的比例,ELISA分析脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4的含量。 结果:Cm呼吸道感染后,与WT小鼠相比,IL-21R -/-小鼠脾、肺组织CD4 +T细胞数量和活化程度以及Th1细胞比例均升高,Th2细胞比例下降,脾细胞培养上清中IFN-γ含量升高,IL-4含量下降。过继转移IL-21R -/--CD4 +T细胞的受体小鼠在 Cm呼吸道感染后体重下降幅度减小,肺组织细菌载量和病理情况减轻,肺Th1细胞比例升高,脾细胞培养上清中IFN-γ含量增加。 结论:IL-21/IL-21R介导的CD4 +T细胞通过抑制Th1细胞免疫应答加重 Cm呼吸道感染。
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编辑人员丨1天前
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沙眼衣原体小鼠肺炎菌株呼吸道感染诱导肺泡巨噬细胞和肺间质巨噬细胞浸润并极化
编辑人员丨1天前
目的:探讨沙眼衣原体呼吸道感染对肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages, AMs)和肺间质巨噬细胞(interstitial macrophages, IMs)浸润并向M1型或M2型极化的影响。方法:C57BL/6小鼠以鼻腔吸入沙眼衣原体小鼠肺炎菌株( Chlamydia muridarum, Cm)建立小鼠沙眼衣原体呼吸道感染模型。采用流式细胞术检测 Cm呼吸道感染后0 d、3 d、7 d、14 d肺组织中AMs (CD45 +F4/80 +CD11c +)和IMs (CD45 +F4/80 +CD11c -)比例并分析细胞数目,同时检测AMs和IMs中M1型巨噬细胞(CD80 +、CD86 +、MHCⅡ +、iNOS +细胞)比例和M2型巨噬细胞(CD206 +、Arg1 +细胞)比例。 结果:(1) Cm呼吸道感染诱导AMs和IMs浸润,与未感染组(0 d)比较,感染后3 d AMs和IMs比例和数目显著增加( P<0.05和 P<0.01),感染后7 d AMs和IMs数目均达峰值( P<0.001)。(2)与未感染组比较,感染后3 d AMs中CD80 +和CD86 +细胞比例明显升高( P<0.05和 P<0.01);AMs中MHCⅡ +细胞比例在感染后持续升高,于14 d达峰值( P<0.05),CD206 +细胞比例在感染后持续降低( P<0.05)。(3)与未感染组比较,感染后3 d IMs中CD80 +和CD86 +细胞比例显著升高( P<0.05和 P<0.001),感染后14 d MHCⅡ +细胞比例明显升高( P<0.01),CD206 +细胞比例变化差异无统计学意义。(4)AMs中iNOS +细胞比例在感染后持续升高( P<0.01);AMs中Arg1 +细胞比例在感染后持续降低,与未感染组比较,感染后7 d和14 d显著降低( P<0.05)。IMs中iNOS +细胞比例于感染后7 d达峰值( P<0.001),IMs中Arg1 +细胞比例变化差异无统计学意义。 结论:Cm呼吸道感染诱导AMs和IMs浸润并刺激AMs和IMs向M1型巨噬细胞极化,减弱AMs中M2型巨噬细胞极化水平,而对IMs中M2型巨噬细胞极化无显著影响。
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编辑人员丨1天前
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沙眼衣原体小鼠肺炎株呼吸道感染诱导巨噬细胞浸润并向M1极化
编辑人员丨1天前
目的:探讨沙眼衣原体小鼠肺炎株( Chlamydia muridarum, Cm)呼吸道感染对巨噬细胞浸润及向M1/M2极化的影响。 方法:经鼻腔给予C57BL/6小鼠1×10 3包涵体形成单位(inclusion-forming units, IFU) Cm建立小鼠沙眼衣原体呼吸道感染模型。流式细胞术检测肺组织中F4/80 +总巨噬细胞及CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ(major histocompatibility complex Ⅱ,MHCⅡ)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)、CD206表达情况;实时荧光定量聚合酶链反应检测肺组织中iNOS、CD206、CCL2 mRNA表达。 结果:Cm呼吸道感染诱导小鼠肺组织中巨噬细胞增加,与未感染组比较,感染后第3天F4/80 +巨噬细胞显著增加,并且持续到第7天; Cm感染后,M1型巨噬细胞表面标志CD86、MHCⅡ及M1型巨噬细胞相关趋化因子CCL2表达增加,巨噬细胞向M1型极化;M2型巨噬细胞表面标志CD206逐渐降低。进一步研究发现,M1型巨噬细胞活化指标iNOS在感染后增加,第7天达到高峰。 结论:Cm呼吸道感染后可诱导巨噬细胞在肺组织大量浸润,且向M1型巨噬细胞极化。
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编辑人员丨1天前
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树突状细胞在沙眼衣原体小鼠肺炎株呼吸道感染中免疫保护作用的研究
编辑人员丨1天前
目的:探讨树突状细胞(dendritic cells, DC)在沙眼衣原体小鼠肺炎株( Chlamydia muridarum, Cm)呼吸道感染中的作用以及对适应性免疫应答的影响。 方法:C57BL/6小鼠经鼻腔吸入1×10 3包涵体形成单位(inclusion-forming units, IFU) Cm建立小鼠呼吸道感染模型。流式细胞术检测感染后0、3、7 d脾组织中总CD11c +MHCⅡ +DC比例和共刺激分子(CD40、CD80和CD86)表达情况;qPCR检测小鼠脾组织中DC细胞因子IL-12p40、IL-10和IL-6 mRNA的表达;磁珠分选出 Cm感染后7 d的小鼠脾组织DC并过继转移给受体小鼠,于感染后14 d利用细胞内细胞因子染色检测受体小鼠Th1应答水平。 结果:Cm感染诱导小鼠脾组织DC大量浸润并且共刺激分子表达增加;脾组织DC细胞因子IL-12和IL-10 mRNA的表达在感染后3 d达到高峰;将 Cm感染小鼠脾组织DC过继转移给受体小鼠,受体小鼠感染 Cm后疾病减轻,肺组织衣原体繁殖降低,且肺和脾组织中的Th1细胞比例显著升高。 结论:DC在 Cm感染后成熟、活化并促进Th1细胞免疫应答,在衣原体呼吸道感染中发挥免疫保护作用。
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编辑人员丨1天前
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沙眼衣原体质粒编码蛋白3的致病性及免疫保护性研究
编辑人员丨2024/4/27
目的 探索沙眼衣原体(CT)质粒编码蛋白 3(Pgp3)的致病性及免疫保护性.方法 CT L2 构建株(GFP)、野生株(WT)和质粒缺失株(PF)分别感染Hela细胞,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)和间接免疫荧光法(IFA)检测Pgp3 蛋白表达水平;L2 GFP、WT和PF菌株经阴道分别感染C3H小鼠,感染后不同时间点经IFA评估生殖道包涵体形成单位(IFU)数量;组氨酸标记的Pgp3(His-Pgp3)体外刺激人输卵管上皮细胞,24 h后经Hoechst 33 528 染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况;L2 WT体外感染L929 和L929-Pgp3 细胞,在感染后 30、60 及 80h固定细胞并计算IFU和细胞核数量.L2 GFP和WT菌株经阴道分别感染C3H小鼠,50 d后各组均以L2 WT菌株攻毒,攻毒后不同时间点评估生殖道IFU数量.结果 L2 GFP Pgp3 蛋白表达水平高于L2 WT,L2 PF无Pgp3 蛋白表达;小鼠感染后第3、7、10 和 14 天,L2 GFP感染组IFU数量显著高于L2 WT和L2 PF感染组,且L2 GFP组感染周期最长;Pgp3 体外干预组细胞凋亡率显著低于空白组,L2 WT体外感染L929 和L929-Pgp3 细胞 60h和 80h后,L929-Pgp3 组IFU值显著高于L929 组,且宿主细胞消亡数量显著低于L929 组;动物实验显示L2 GFP组经L2 WT菌株攻毒后下生殖道IFU数量显著低于L2 WT组,且L2 GFP组感染周期显著短于L2 WT组.结论 Pgp3 可抑制宿主细胞凋亡并促进CT在细胞间播散感染;内源性Pgp3 有良好的免疫保护性.
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编辑人员丨2024/4/27
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泛醌氧化还原酶铁硫蛋白4通过影响线粒体功能参与肺炎衣原体感染诱导的血管平滑肌细胞焦亡
编辑人员丨2023/11/11
[目的]探究肺炎衣原体(C.pn)感染诱导血管平滑肌细胞(VSMC)焦亡及其可能机制.[方法]组织贴块法培养大鼠原代VSMC,利用C.pn感染VSMC模型,使用倒置相差显微镜观察C.pn感染后VSMC形态学的变化,试剂盒检测C.pn感染VSMC后乳酸脱氢酶(LDH)含量变化,Western blot实验检测GSDMD和Caspase-1的表达,串联质谱标签法定量蛋白质组学实验和GO富集分析检测线粒体氧化磷酸化和氧化呼吸链Complex相关蛋白的变化.[结果]与对照组相比,倒置相差显微镜下可见C.pn感染后VSMC膜外出现气泡状囊泡,C.pn感染VSMC 36 h、48 h后LDH含量分别增加38.92%和79.54%(均P<0.001),焦亡相关蛋白GSDMD表达增加1.74倍和 1.67 倍(均P<0.001);C.pn 感染 VSMC 48 h 后 Caspase-1 表达(pro-Caspase-1)和活性(Caspase-1 p12/p10)分别增加2.69倍和3.47倍(均P<0.001);质谱结果显示,C.pn感染VSMC后有20种差异表达的蛋白质富集在氧化磷酸化通路中,同时发现,Complex Ⅰ泛醌氧化还原酶铁硫蛋白4(NDUFS4)下降最为显著.进一步的Western blot实验结果显示,C.pn感染VSMC 36 h、48 h后NDUFS4的表达水平分别下降了 57.5%和57%(均P<0.001).[结论]C.pn感染可能通过抑制NDUFS4表达影响线粒体功能,从而诱导VSMC焦亡.
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编辑人员丨2023/11/11
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丹枝饮对盆腔炎性疾病后遗症小鼠JNK信号传导通路及相关炎性因子的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 建立盆腔炎性疾病后遗症(SPID)小鼠模型,通过观察丹枝饮对IL-6、IL-8、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)表达影响,以c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)为观察指标,探讨丹枝饮药理作用及JNK信号传导通路的相关性.方法 选用雌性小鼠24只,随机分为空白组、模型组、丹枝饮组及阿司匹林组.采用官腔种植鼠衣原体方法建立SPID小鼠模型.给药治疗3个动情周期后小鼠眼眶取血,ELISA法检测IL-6及IL-8蛋白水平;Western Blot法检测子宫组织MCP-1、MIP-2、p-JNK、JNK相对蛋白量;免疫组化法检测子宫组织JNK磷酸化水平.结果 与空白组比较,模型组IL-6、IL-8、MCP-1、MIP-2及JNK磷酸化水平升高(P<0.01),差异有统计学意义;与模型组比较,丹枝饮组IL-6、IL-8、MCP-1、MIP-2及JNK磷酸化水平降低(P<0.01),差异有统计学意义.结论 丹枝饮的抗炎作用可能与调节SPID炎症机体血清中IL-6、IL-8含量相关,其抗炎作用机制可能是通过抑制JNK信号传导通路而下调MCP-1及MIP-2表达.
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编辑人员丨2023/8/6
