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基于16S rRNA测序技术探讨骨松益骨方对去卵巢大鼠肠道菌群的影响
编辑人员丨1周前
目的 基于肠道菌群探究骨松益骨方(GusongYigu de-coction,GSYG)治疗绝经后骨质疏松症(postmenopausal oste-oporosis,PMOP)的机制.方法 SPF级SD大鼠60只随机分成假手术组(Control)、模型组(Model)、骨松益骨方低剂量组(GSYG-L,1.25 g·kg-1)、骨松益骨方中剂量组(GSYG-M,2.5 g·kg-1),骨松益骨方高剂量组(GSYG-H,5 g·kg-1)和阿仑膦酸钠组(Al,0.89 mg·kg-1),每组10只.HE染色观察骨组织形态变化,micro CT观察大鼠的股骨组织结构变化;取Control组、Model组、GSYG-H组大鼠结肠粪便样本,提取DNA,利用Illumina Miseq平台进行高通量测序.结果 与Control组比较,Model组大鼠骨小梁稀疏;BV/TV、Tb.Th、Tb.N 及 BMD 均明显降低(P<0.01),SMI、Tb.Sp 明显升高(P<0.01);与 Model 组比较,GSYG-L、GSYG-M、GSYG-H组和Al组骨小梁数目增加,骨微结构得到改善,且BV/TV、Tb.Th、Tb.N 及 BMD 明显增加(P<0.05),SMI、Tb.Sp 明显降低(P<0.05).肠道菌群测序结果显示,与Control组比较,Model组大鼠肠道菌群多样性降低,厚壁菌门丰度降低,而拟杆菌门丰度增加;与Model组比较,GSYG-H组厚壁菌门丰度增加,拟杆菌门丰度减少.结论 GSYG能够改善PMOP患者的骨微结构,增加骨密度,其作用机制可能与增加肠道菌群的多样性、调节肠道菌群结构有关.
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编辑人员丨1周前
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1型糖尿病小鼠肠道菌群与免疫状态演变的实验研究
编辑人员丨1周前
目的:探究链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病(T1DM)小鼠在不同时期的肠道功能、血清相关抗体、脾脏细胞因子谱表达与肠道菌群的演变。方法:取3~4周龄雄性C57BL/6小鼠28只,采用随机抽样法分为对照组(NC组,13只)和STZ组(15只)。STZ组连续5 d空腹腹腔注射STZ 50 mg·kg -1·d -1,NC组注射等体积溶剂。实验第3周测定随机血糖>16.7 mmol/L为建模成功,定义为基线水平,两组各取6只小鼠处死,剩余小鼠观察4周,即实验第7周(实验终点)处死剩余小鼠。每周测量体重、随机血糖和每日饮水量。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测脾脏细胞因子谱[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-6、IL-17、IL-4、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)]、血清相关抗体[胰岛细胞抗体(ICA)、胰岛素自身抗体(IAA)与谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)]和结肠紧密连接蛋白1(ZO-1)的表达;采用流式细胞术检测脾脏CD4 +FoxP3 +调节性T细胞(Treg)水平;对粪便进行16SrRNA菌群测序分析。组间比较采用独立样本 t检验。采用Spearman相关分析法分析CD4 +FoxP3 +Treg细胞、肠道菌群、各免疫生化指标之间的相关性。 结果:流式细胞术与ELISA结果显示,在基线水平,与NC组相比,STZ组小鼠脾脏CD4 +FoxP3 +Treg、TGF-β、TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-17与血清ICA、IAA表达水平增加,脾脏IL-4、IL-10表达水平下降(均 P<0.05);在实验终点,与NC组相比,STZ组小鼠脾脏TNF-α、IFN-γ、IL-6,血清GADA、ICA与结肠ZO-1表达水平增加(均 P<0.05)。16SrRNA测序结果显示,与NC组相比,STZ组乳杆菌属丰度明显下降( P<0.05),拟杆菌属、阿克曼菌属、普雷沃菌属和颤螺菌属丰度明显上升(均 P<0.05)。Spearman相关性分析结果表明,乳杆菌属丰度与IL-10水平呈正相关( r=0.65, P<0.05),与TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-17和GADA水平呈负相关( r值-0.61~-0.58,均 P<0.05);颤螺菌属丰度与TGF-β、TNF-α、IL-6和IAA水平呈正相关( r值0.55~0.72,均 P<0.05),与IL-10水平呈负相关( r=-0.59, P<0.05)。 结论:多次低剂量STZ诱导的T1DM小鼠可能存在CD4 +Foxp3 +Treg及TGF-β介导的负性免疫调节和以增加结肠ZO-1表达的肠道调节,其中颤螺菌属与乳杆菌属丰度改变可能参与免疫调节。
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编辑人员丨1周前
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直肠癌与直肠黏膜菌群相关性研究
编辑人员丨1周前
目的:通过对直肠癌患者肿瘤部位和癌旁部位及健康直肠黏膜菌群进行分析,探讨直肠黏膜菌群与直肠癌的关系。方法:选取2018年7月至2019年9月温州医科大学附属第一医院行直肠癌根治手术的94例直肠癌患者肿瘤黏膜(CM组)和癌旁黏膜(AM组),100例健康者直肠黏膜(NM组)作为研究对象。细菌培养定量检测患者和正常黏膜主要细菌,高通量测序分析3组黏膜菌群,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测双歧杆菌等关键菌丰度差异。正态分布资料采用 t检验,非正态分布资料采用K-W检验。 结果:培养显示双歧杆菌在直肠癌肿瘤黏膜高于健康者(6.60±0.81比5.66±0.68, t=10.312, P<0.01)、乳酸杆菌在直肠癌肿瘤黏膜高于健康者(6.58±0.59比5.44±0.71, t=13.527, P<0.01)、肠球菌在直肠癌肿瘤黏膜高于健康者(6.22±0.87比4.64±0.80, t=12.351, P<0.01)。16SrRNA扩增子焦磷酸测序显示直肠癌患者CM及AM菌群多样性和丰富度均显著高于NM,qPCR结果显示NM中嗜黏液艾肯曼菌、消化球菌、长双歧杆菌、两歧双歧杆菌丰度分别是CM的12.55倍( t=13.500, P<0.05)、4.89倍( t=10.960, P<0.05)、2.27倍( t=8.242, P<0.05)、1.97倍( t=5.230, P<0.05)。 结论:直肠癌患者直肠黏膜菌群与健康人存在显著差异,直肠癌患者的肿瘤局部黏膜菌群多样性及丰度均发生了明显变化,局部黏膜菌群改变可能在直肠癌发生发展中发挥了一定作用。
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编辑人员丨1周前
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鼻腔微生物多样性对慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者手术预后的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)患者鼻腔微生物多样性,以及术后复发者鼻腔微生物组学特征和炎性细胞及因子特点,以了解微生物组学因素对CRSwNP手术预后的影响。方法:2017年12月至2018年12月期间,招募于四川大学华西医院耳鼻咽喉科接受手术治疗的77例CRSwNP患者,其中男34例,女43例,年龄29~76岁。收集患者的鼻腔分泌物和鼻息肉组织。于分泌物中提取鼻腔微生物DNA,基于16S核糖体RNA(16S rRNA)进行高通量测序,检测细菌群落组成。使用Luminex分析鼻息肉组织中白细胞介素(IL)-5、IL-8、IL-17A、IL-17E、IL-18、IL-27和干扰素γ(IFN-γ)等细胞因子。计数外周血和鼻息肉组织中嗜酸粒细胞和中性粒细胞含量。术后随访1年,记录鼻息肉的复发情况,分析鼻息肉复发与炎性因子、炎性细胞计数及鼻腔微生物多样性特征的相关性。对二分类变量采用卡方检验,对连续变量采用Mann-Whitney U检验,两组之间平均相对丰度的差异比较采用Wilcoxon秩和检验。结果:随访1年时复发患者12例,其中男5例,女7例。复发组与未复发组患者在年龄、性别、哮喘、变应性鼻炎、湿疹等方面的差异无统计学意义。复发组的鼻部症状总分[42.3(30.2,67.1), M( Q1, Q3),后同]明显高于未复发组[37.8(29.4,50.3)], Z=-4.930, P<0.001。鼻息肉组织中,复发组患者嗜酸粒细胞[40.83(22.33,102.00)个/HP,HP为高倍视野,后同]和中性粒细胞[30.83(20.33,56.44)个/HP]数量显著高于未复发组[13.72(13.50,48.33)个/HP和18.50(12.00,26.08)个/HP, Z值分别为-6.997、-8.243, P值均<0.001]。复发组IFN-γ、IL-17A、IL-17E、IL-18的表达量明显高于未复发组,但阳性率差异无统计学意义。属水平上,未复发组患者鼻腔棒状杆菌属的平均相对丰度为(11.90±20.31)%,高于复发组的(0.15±0.20)%,但校正后差异无统计学意义(FDR P=0.638)。未复发组葡萄球菌属平均相对丰度为(8.17±27.70)%,低于复发组的(8.99±15.89)%,但校正后差异无统计学意义(FDR P=0.638)。 结论:CRSwNP患者中性粒细胞介导的炎性反应与鼻息肉复发密切相关。鼻内镜术后鼻息肉的复发可能与保护性微生物丰度的减少和致病微生物数量的增加有关。
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编辑人员丨1周前
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眼表微生物群及其与眼表疾病的关系
编辑人员丨1周前
眼表直接暴露在外部环境中,容易受到各种抗原和病原体的影响,眼表微生物群参与免疫耐受、代谢和上皮屏障功能的调节。微生物组成在维持健康和疾病发生中都起着重要作用,微生物分布失衡可能导致某些疾病的发生。体内微生物的组成主要是细菌。在微生物组学研究中,最初主要集中在胃肠道、口腔、鼻腔、皮肤和泌尿生殖道5个部位。随着16S核糖体核糖核酸基因(16SrRNA)高通量测序及宏基因测序分子生物学检测技术的发展,眼表细菌群落与疾病的关系成为研究热点。眼表不同部位细菌群落的分布有一定差异,菌群存在也具有垂直分布的特点。年龄、性别、地理环境等因素对眼表菌群的组成和功能有一定影响,眼局部重复使用抗生素可增加眼表的耐药菌群。不同类型的干眼、角膜炎、睑缘炎等眼表疾病与眼表菌群的改变有一定关系。本文主要就正常眼表菌群的组成、分布、影响因素及眼表菌群与干眼、角膜炎、睑缘炎等眼表疾病的关系进行综述,以期为眼表疾病发生机制的研究提供新的认识,同时为眼表疾病的治疗提供指导依据。
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编辑人员丨1周前
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肠道菌群对脓毒症心肌损伤作用的研究进展
编辑人员丨1周前
心肌损伤是脓毒症的重要并发症,也是导致脓毒症患者死亡的重要原因。脓毒症已被证明通过多个分子途径介导心肌损伤。随着16SrRNA和鸟枪测序等技术的应用以及相关病理生理机制理解的深入,研究者发现肠道菌群和脓毒症存在复杂的相互作用。不仅是脓毒症改变了肠道菌群分布,肠道菌群也广泛影响着脓毒症的发生和发展。一些基于肠道菌群的治疗方法也被认为有良好的应用前景。此外,肠道微生态已被大量研究证明与多种心血管疾病相关。然而,目前对脓毒症介导的心肌损伤中肠道菌群发挥作用的机制的了解仍然十分有限。该文综述了脓毒症、肠道菌群和心肌损伤相互影响的病理生理机制,有助于加深相关领域研究者的认识和思考。
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编辑人员丨1周前
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哮喘合并支气管扩张气道微生物组特征分析
编辑人员丨1周前
目的:比较单纯哮喘患者和哮喘合并支气管扩张患者气道微生物组的特征。方法:根据标准入组30例单纯哮喘和25例哮喘合并支气管扩张患者,分别进行肺功能检测和痰诱导试验,挑取有效痰组织,进行细菌16SrRNA测序,下机数据与GreenGenes物种分类数据库进行比对和物种注释,比较单纯哮喘组与哮喘合并支气管扩张组诱导痰样本细菌的多样性、丰度和菌群特征。结果:与单纯哮喘患者相比,哮喘合并支气管扩张患者其病程较长、BMI较低、肺功能和日常症状控制更差( P<0.05或 P<0.01)。哮喘合并支气管扩张患者诱导痰中的细菌多样性呈现下降趋势( P=0.192或 P=0.203),变形菌门的相对丰度升高( P<0.05),而肠杆菌科、莫拉菌科和假单胞菌科相对丰度显著升高( P<0.05或 P<0.01)。 结论:与单纯支气管哮喘患者相比,哮喘合并支气管扩张患者其诱导痰中以肠杆菌科、莫拉菌科和假单胞菌科为主的潜在致病菌增多。
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编辑人员丨1周前
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基于16SrRNA测序分析肾结石患者结石及尿液微生态结构
编辑人员丨1周前
目的:基于16SrRNA测序分析肾结石患者结石及尿液微生态结构。方法:选取2016年3月至2020年3月本院收治的肾结石患者102例为研究对象,均行经皮肾镜取石术。采用16SrRNA测序技术检测结石标本和尿液标本中的微生物信息,根据结石成分将标本分为碳酸磷灰石组、草酸钙组、磷酸铵镁组、尿酸组,分析各组样本菌群的多样性和丰富度。结果:结石标本中菌群门水平以变形菌门、厚壁菌门、放线菌门为主,科水平以肠杆菌科、黄单胞菌科、假单胞菌科为主,属水平以寡养单胞菌属、假单胞菌属、短波单胞菌属为主;变形菌门是四组结石标本中的优势菌门(>55%),磷酸铵镁组中放线菌门和无壁菌门是仅次于变形菌门的优势菌(>8%),碳酸磷灰石组、草酸钙组中厚壁菌门和放线菌门是仅次于变形菌门的优势菌(>8%),尿酸组中拟杆菌门和放线菌门是仅次于变形菌门的优势菌(>5%);在属水平中,磷酸铵镁组中的优势菌是奇异变形杆菌、寡养单胞菌属、棒状杆菌属,碳酸磷灰石组是假单胞菌属、寡养单胞菌属、金黄杆菌属,草酸钙组是假单胞菌属、寡养单胞菌属、短波单胞菌属,尿酸组是寡养单胞菌属、假单胞菌属、金黄杆菌属。尿液标本中菌群门水平以变形菌门、厚壁菌门、无壁菌门为优势菌(>13%),属水平以假单胞菌属、支原体属、克雷伯氏菌属为优势菌(>8%);结石标本和尿液标本α多样性指标比较,差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:肾结石患者结石标本中寡养单胞菌、金黄杆菌和短波单胞菌含量较高,而尿液中则以假单胞菌属、支原体菌属、乳酸杆菌属为优势菌。
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编辑人员丨1周前
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尘肺病患者下呼吸道菌群结构特征研究
编辑人员丨1周前
目的:探索尘肺病患者及接尘者下呼吸道菌群组成,进一步比较分析两者菌群差异及菌群间的关联。方法:于2020年5月至2021年1月,通过前瞻性多中心横断面研究,选取同期就诊于联勤保障部队第九二〇医院呼吸与危重症医学科和昆明市同仁医院呼吸内科,行支气管肺泡灌洗治疗的尘肺病患者及接尘者人群。共纳入24例尘肺病患者(尘肺病组),以16例接尘者(接尘组)为对照,收集2组患者肺泡灌洗液,利用16SrRNA基因V3-V4测序技术及生物信息分析平台,测定并分析其微生物结构组成差异及菌群间的关联。结果:与接尘组比较,尘肺病组患者肺泡灌洗液门水平菌群丰度排名前5的菌门相同,依次为:变形菌门、厚壁菌门、拟杆菌门、梭杆菌门、放线菌门。与接尘组比较,尘肺病组患者属水平菌群丰度排名前5的菌属不同,接尘组分别为:假单胞菌属、普氏菌属、链球菌属、无色杆菌属、奈瑟氏菌属,尘肺病组分别为:假单胞菌属、无色杆菌属、链球菌属、罗尔斯通菌属、普氏菌属。Alpha多样性分析结果显示,与接尘组比较,尘肺病组患者菌群多样性有差异( P<0.05),菌群均匀度差异无统计学意义( P>0.05);β多样性显示,两组间菌群结构差异有统计学意义( P<0.05)。单因素菌群关联网络分析示,在尘肺病组及接尘组厚壁菌门和拟杆菌门与其他物种之间相关性较高,呈正相关;变形菌门与其他物种之间相关性较高,呈负相关。 结论:尘肺病患者及接尘者下呼吸道菌群结构及相对丰度不同,尘肺病患者下呼吸道菌群多样性增加,差异可能与疾病状态有关。
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编辑人员丨1周前
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老年与中青年食管鳞癌患者食管菌群的宏基因组学对比研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨老年与中青年食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)患者食管组织的菌群特征及差异,以助于研究老年ESCC患者潜在的生物标志物。方法:采用回顾性研究,选取2018年7月至2019年7月在湖北省十堰市太和医院确诊的72例ESCC患者,其中老年组49例(≥60岁,男性40例,女性9例),中青年组23例(<60岁,男性21例,女性2例),以同期消化内镜中心20名胃镜检查无异常的健康体检者作为对照组(年龄范围35~78岁,中位年龄57岁,男性16名,女性4名)。收集ESCC患者病变食管组织和健康对照组中段食管组织、提取基因组DNA,对细菌16SrRNA基因序列V4高变区扩增,采用Illumina HiSeq测序技术,对比分析老年和中青年ESCC患者菌群特点。采用QIIME和Rstudio软件分析序列数据,统计学方法采用非参数Kruskal-Wallis检验或Wilcoxon秩和检验。结果:两组患者菌群Shannon指数[5.17(4.53,5.95)比4.79(3.74,5.97)]、Simpson指数[0.94(0.91,0.96)比0.92(0.83,0.96)]和Chao1 [343.55(259.76,570.59)比329.16(268.88,648.00)]指数相似,差异无统计学意义( Z=-0.791、-1.057、-0.380,均 P>0.05);Beta多样性老年组与中青年组亦无明显差异(PC1=19.14%、PC2=6.95%, PPC1=0.67、 PPC2=0.42)。在门水平,中青年组丰度前五的菌门依次为厚壁菌门( Firmicutes)、拟杆菌门( Bacteroidetes)、变形菌门( Proteobacteria)、放线菌门( Actinobacteria)和梭杆菌门( Fusobacteria),老年组患者丰度最高的五个门分别是厚壁菌门( Firmicutes)、拟杆菌门( Bacteroidetes)、变形菌门( Proteobacteria)、梭杆菌门( Fusobacteria)和放线菌门( Actinobacteria);两组差异显著的是梭杆菌门( Fusobacteria)( Q=0.596, P<0.05)。在属水平,中青年组丰度前五的菌属依次为:普雷沃菌属( Prevotella)、拟杆菌属( Bacteroides)、链球菌属( Streptococcus)、月形单胞菌属( Selenomonas)和韦荣球菌属( Veillonella);而老年组丰度前五的分别是普雷沃菌属( Prevotella)、拟杆菌属( Bacteroides)、链球菌属( Streptococcus)、月形单胞菌属( Selenomonas)和嗜血杆菌属( Haemophilus),两组有显著差异的为梭杆菌属( Fusobacterium)( Q=0.938, P<0.05)。基于未观测状态重建的群落系统发育研究(PICRUSt)功能预测,老年组患者氨酰tRNA生物合成( Aminoacyl.tRNA.biosynthesis)、核苷酸切除修复( Nucleotide.excision.repair)、核糖核酸聚合酶( RNA.polymerase)、核糖体( Ribosome)、克拉维酸生物合成( Clavulanic.acid.biosynthesis)、光合作用( Photosynthesis)和光合作用蛋白( Photosynthesis.proteins)丰度较中青年组降低(均 Q=0.734, P<0.05)。 结论:老年ESCC患者食管菌群与中青年患者的Alpha多样性和Beta多样性无明显差异,但老年患者梭菌属菌群丰度增高。
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编辑人员丨1周前
