目的:通过组织学、RT-PCR及功能评估等实验方法，探讨二甲双胍对脊髓损伤大鼠抗凋亡的调控机制。方法:建立大鼠脊髓损伤模型，通过Basso-Beattie -Bresnahan locomotor rating scale（BBB）评分和斜板试验评估大鼠后肢运动功能的恢复。通过TTC染色比较脊髓组织坏死面积的改变。分离提取大鼠脊髓组织，通过Dot-blot分析、免疫组化检测DNA的羟甲基化水平。通过qPCR、Western Blot检测TET2mRNA及蛋白表达水平，并通过抑制TET2的表达来检测脊髓损伤范围的改变。通过免疫印迹及免疫共沉淀检测TET2与Foxo3a的相互作用。通过RT-PCR分析检测Foxo3a下游相关基因表达水平的变化。结果:与SCI+NS组相比，SCI+MET组使用二甲双胍治疗后脊髓组织的坏死面积明显减少，BBB评分及斜板试验评分更高（ P<0.05）。同时我们发现与对照组相比，SCI大鼠24h后TET2mRNA和蛋白水平升高，DNA的5-hmC水平升高。而SCI后使用二甲双胍治疗，TET2mRNA和蛋白水平、5-hmC水平进一步升高。与SCI+MET组相比，使用了SC-1后DNA的5-hmC水平降低，坏死的面积较前增加。SCI后Bim，P27kip，Bax的mRNA水平显着增加。二甲双胍治疗后，Bim，Bax的mRNA水平较SCI+NS组降低（ P<0.05）。SCI损伤后Bim，P27kip，Bax的相对5-hmC水平显着增加。二甲双胍治疗后Bim和Bax的相对5-hmC水平降低（ P<0.05）。 结论:二甲双胍能促进TET2和Foxo3a的相互作用，提升整体DNA的5-hmC水平，抑制相关凋亡基因的表达，从而改善脊髓损伤后的组织损伤及神经功能恢复。

目的:探讨缺氧条件下，中介素(IMD)和肾小球系膜细胞(HMC)对内皮细胞的影响。方法:内皮细胞分为4组：(1)内皮细胞与系膜细胞共培养，加IMD处理作为HEMI组；(2)内皮细胞与系膜细胞共培养，无处理作为HEM组；(3)内皮细胞加IMD处理作为HEI组；(4)内皮细胞无处理作为HE组；将各组细胞在1%O 2、94%N 2、5%CO 2条件下缺氧培养12 h后，蛋白质印迹法(Western blot)、免疫细胞化学技术检测相关蛋白表达，实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测相关基因mRNA相对表达量，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管内皮生长因子A(VEGFA)含量，体外血管形成实验检测内皮细胞的成管分支数。实验结果两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:上皮型钙黏分子(VE-cadherin)表达量HEMI(1.629±0.197、1.557±0.066、10.552±0.523)高于HEM(1.116±0.118、1.340±0.161、8.128±0.542)、HEI(1.278±0.096、1.078±0.088、7.523±1.211)、HE组(1.000±0.000， F＝0.734、1.244、6.134， P<0.05)，差异有统计学意义；血小板内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)表达量HEMI(1.309±0.234、1.203±0.105、1.654±0.462)高于HEM(1.067±0.379、1.038±0.035、1.601±0.397)、HEI(1.225±0.091、1.101±0.038、1.605±0.207)、HE组(1.000±0.000)，差异无统计学意义( F＝5.083、5.434、6.428， P>0.05)；VEGF表达量HEMI(0.904±0.005、1.922±0.457)高于HEM组(0.690±0.071、1.000±0.000， F＝8.307、10.896， P<0.01)，ELISA中加入IMD组(1.018±0.319)VEGFA浓度比值高于对照组(0.921±0.294， F＝0.132， P<0.05)，差异有统计学意义；体外血管形成中HEMI(22.289±0.131)、HEM(21.318±0.594)、HEI(21.533±0.867)、HE(20.755±1.798)高于NE组(18.731±0.525， F＝5.926、0.030、1.033， P<0.05； F＝6.753， P>0.05)。 结论:缺氧条件下，IMD可以直接或通过系膜细胞间接双重影响内皮细胞，促进血管形成。

目的:分析先天性色素痣（CMN）恶变的临床及组织病理特点。方法:回顾性分析空军军医大学西京皮肤医院2010年1月至2020年9月98例经临床及病理确诊的CMN恶变患者的临床表现、组织病理表现、免疫组化及基因检测结果。结果:98例CMN恶变患者中，男45例（45.9%），女53例（54.1%），就诊时年龄为4个月至85岁，中位就诊年龄47岁。皮损位于躯干34例（34.7%），四肢（不含肢端）25例（25.5%），肢端24例（24.5%），头面颈部13例（13.3%），黏膜2例（2.0%）。98例中95例（96.9%）有皮损突然明显变化史，如突然增大、新发丘疹、溃疡、瘙痒或疼痛，发生明显变化至就诊的时长为2周至5年。95例中，皮损明显变化的平均年龄为46岁，4例（4.1%）发生于18岁以前，35例（35.7%）发生于18 ~ 40岁，56例（57.1%）发生于40岁以后，55例（57.9%）原皮损突然增大，52例（54.7%）表现为溃疡，21例（22.1%）原皮损表面出现红色或黑色的丘疹或结节，4例（4.2%）表现为皮下包块，2例（2.1%）仅表现为瘙痒，1例（1.1%）仅表现为疼痛。98例中仅3例（3.1%）皮损表现为缓慢增大。85例（86.7%）发生于小型CMN，11例（11.2%）为中型CMN，2例（2.0%）为大型CMN。组织病理检查显示，98例中86例（87.8%）皮损中无残留的痣细胞，显示典型黑素瘤的特点；12例（12.2%）可见残留的痣细胞，且这12例黑素瘤细胞均表达HMB45，11例残留痣细胞不表达HMB45。7例行5-羟甲基胞嘧啶（5hmC）免疫组化染色，6例瘤细胞区域5hmC呈阴性表达，而残留痣细胞区域呈阳性表达。22例患者皮损组织标本行BRAF基因检测，其中1例为大型CMN恶变，BRAF基因检测为阴性；21例小型CMN恶变中，11例（52.4%）BRAF基因检测为阳性，10例（47.6%）为阴性。结论:CMN恶变好发于躯干，多见于大于40岁者，多有皮损突然明显变化史（如增大、丘疹、溃疡），个别皮损仅有瘙痒、疼痛；HMB45、5hmC免疫组化染色有助于鉴别黑素瘤细胞与真皮痣细胞；CMN恶变的诊断需要密切结合临床及组织病理表现。

目的:了解不同类型氟骨症大鼠骨组织5-甲基胞嘧啶（5-mC）、5-羟甲基胞嘧啶（5-hmC）水平，并分析其相关性。方法:选取4周龄SPF级健康SD大鼠30只，适应性喂养1周后，采用随机数字表法将大鼠按体重（100 ~ 120 g）分为对照组（4 ml·kg -1·bw去离子水灌胃+标准维持饲料）、骨硬化组[20 mg·kg -1·bw氟化钠（NaF）灌胃+标准维持饲料]、骨质疏松/骨软化组（20 mg·kg -1·bw NaF灌胃+低钙低蛋白偏食饲料），每组10只，雌雄各半；每周灌胃6 d，实验周期为5个月。实验结束后采集大鼠心脏血、下肢股骨样本。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清甲基供体S-腺苷甲硫氨酸（SAM）及其代谢产物S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）含量，骨组织5-mC、5-hmC水平；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测大鼠骨组织DNA甲基转移酶（DNMTs），DNA羟甲基化酶（TETs）蛋白表达情况；并分析各组大鼠血清SAM含量、SAM/SAH比值与骨组织5-mC水平以及骨组织5-mC与5-hmC水平的相关性。 结果:对照组、骨硬化组、骨质疏松/骨软化组大鼠血清SAM[11.03（7.06，18.63）、3.96（2.32，9.09）、3.91（2.35，4.46）nmol/L]、SAH含量[（4.69 ± 0.55）、（5.41 ± 1.13）、（13.90 ± 1.09）ng/L]，SAM/SAH比值[2.58（1.54，4.12）、0.62（0.52，1.69）、0.14（0.13，0.15）]及骨组织5-mC[103.39（97.37，109.35）、52.50（50.19，68.13）、55.03（49.97，59.57）ng/L]、5-hmC水平[（32.61 ± 8.84）、（56.96 ± 8.48）、（20.34 ± 6.22）ng/L]比较，差异均有统计学意义（ H/ F = 12.81、284.24、21.85、19.37、55.23，均 P < 0.01）。与对照组比较，骨硬化组、骨质疏松/骨软化组血清SAM含量、SAM/SAH比值、骨组织5-mC水平及骨质疏松/骨软化组骨组织5-hmC水平均较低，而骨质疏松/骨软化组血清SAH含量和骨硬化组骨组织5-hmC水平均较高（均 P < 0.05）；与骨硬化组比较，骨质疏松/骨软化组血清SAH含量较高，而SAM/SAH比值、骨组织5-hmC水平均较低（均 P < 0.05）。Western blot检测结果显示，对照组、骨硬化组、骨质疏松/骨软化组大鼠骨组织DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、TET1、TET2蛋白表达比较，差异均有统计学意义（ F = 285.45、345.58、239.83、311.52、318.24，均 P < 0.001）；其中，骨硬化组、骨质疏松/骨软化组骨组织DNMT1、DNMT3A、DNMT3B蛋白表达均低于对照组，且骨质疏松/骨软化组均低于骨硬化组（均 P < 0.05）；骨硬化组骨组织TET1、TET2蛋白表达均高于对照组和骨质疏松/骨软化组，且骨质疏松/骨软化组均低于对照组（均 P < 0.05）。Spearman秩相关分析结果显示，对照组、骨硬化组、骨质疏松/骨软化组大鼠血清SAM含量、SAM/SAH比值与骨组织5-mC水平均呈正相关（ rs = 0.89、0.92、0.81，0.73、0.87、0.73，均 P < 0.05）；而各组大鼠骨组织5-mC水平与5-hmC水平均呈负相关（ rs = - 0.69、- 0.68、- 0.72，均 P < 0.05）。 结论:骨硬化型氟骨症大鼠骨组织5-mC水平较低、5-hmC水平较高，骨质疏松/骨软化型氟骨症大鼠骨组织5-mC、5-hmC水平均较低；不同类型氟骨症大鼠骨组织5-mC水平差异不显著，这可能与骨组织5-hmC水平存在差异有关。

目的:探讨十-十一易位蛋白(TETs)和5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)在食管鳞癌组织的表达及临床意义。方法:随机选取2020年1月至2022年8月于郑州大学第一附属医院进行手术治疗的食管鳞癌患者癌组织和癌旁组织(距离癌组织2～3 cm)各10例，采用高效液相-质谱联用法(LC-MS/MS)检测5hmC在食管鳞癌中的修饰水平；采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测TETs mRNA在食管鳞癌中的表达；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测TETs在食管鳞癌中的蛋白表达水平，组间比较采用 t检验。 结果:食管鳞癌组织中5hmC修饰水平显著高于食管癌癌旁组织[(0.21±0.03)%比(0.05±0.01)%， t＝3.095， P<0.01]。TCGA数据库分析，食管癌组织中TET1表达水平显著高于食管癌癌旁组织(1.48±0.08比0.22±0.05， t＝5.032， P<0.01)；TET2表达水平显著高于食管癌癌旁组织(6.12±0.32比2.86±0.45， t＝11.035， P<0.05)；TET3表达水平显著高于食管癌癌旁组织(3.69±0.46比2.46±0.55， t＝15.339， P<0.05)。RT-qPCR结果表明，食管癌组织中TET1 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(5.93±0.28比2.58±0.15， t＝15.854， P<0.05)；TET2 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(5.08±0.12比2.82±0.25， t＝14.012， P<0.05)；TET3 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(4.88±0.28比3.05±0.17， t＝12.715， P<0.05)。Western blot结果表明，TET2蛋白表达水平显著高于食管癌癌旁组织(2.86±0.45比1.00±0.00， t＝7.895， P<0.01)；TET3 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(2.57±0.26比1.00±0.00， t＝8.331， P<0.01)。 结论:食管鳞癌组织中5hmC表达水平高于癌旁组织，癌组织中TET2及TET3 mRNA及蛋白水平均呈高表达。

The cerebral cortex is a pivotal structure integral to advanced brain functions within the mammalian central nervous system.DNA methylation and hydroxymethylation play important roles in regulating cerebral cortex development.However,it remains unclear whether abnormal cerebral cortex development,such as microcephaly,could rescale the epigenetic landscape,potentially contributing to dysregulated gene expression during brain development.In this study,we characterize and compare the DNA methylome/hydroxymethylome and transcriptome profiles of the cerebral cortex across several developmental stages in wild-type(WT)mice and Mcph1 knockout(Mcph1-del)mice with severe microcephaly.Intriguingly,we discover a global reduction of 5'-hydroxymethylcytosine(5hmC)level,primarily in TET1-binding regions,in Mcph1-del mice compared to WT mice during juvenile and adult stages.Notably,genes exhibiting diminished 5hmC levels and concurrently decreased expression are essential for neurodevelopment and brain functions.Additionally,genes displaying a delayed accumulation of 5hmC in Mcph 1-del mice are significantly associated with the establishment and maintenance of the nervous system during the adult stage.These findings reveal that aberrant cerebral cortex development in the early stages profoundly alters the epigenetic regulation program,which provides unique insights into the molecular mechanisms under-pinning diseases related to cerebral cortex development.

砷是一种天然类金属化学元素,是世界卫生组织公布的引起重大公共关注的 10种危害环境与健康的化学品之一,可以通过呼吸、食物、饮水、皮肤等途径进入人体,长期接触砷会导致多器官癌症和多系统功能受损.表观遗传学机制在砷健康效应中发挥重要作用,研究表明,砷的致癌性可能是由表观遗传变化引起的.之前的研究主要集中在砷对DNA甲基化修饰的影响.近年来,研究表明DNA主动去甲基化的中间产物——5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC),可作为一种敏感的表观遗传标记,在砷暴露与健康效应之间发挥至关重要的"桥梁"作用.本文基于DNA羟甲基化在砷暴露所致健康效应中作用的最新研究进展,简述了砷暴露的健康效应与DNA羟甲基化的关系,总结了DNA羟甲基化在砷暴露所致健康效应中的可能作用机制,为防治砷暴露所致健康效应提供科学依据.

目的 探讨十-十一易位蛋白(TETs)和5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)在食管鳞癌组织的表达及临床意义.方法 随机选取2020年1月至2022年8月于郑州大学第一附属医院进行手术治疗的食管鳞癌患者癌组织和癌旁组织(距离癌组织2～3 cm)各10例,采用高效液相-质谱联用法(LC-MS/MS)检测5hmC在食管鳞癌中的修饰水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测TETs mRNA在食管鳞癌中的表达;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测TETs在食管鳞癌中的蛋白表达水平,组间比较采用t检验.结果 食管鳞癌组织中5hmC修饰水平显著高于食管癌癌旁组织[(0.21±0.03)％比(0.05±0.01)％,t=3.095,P＜0.01].TCGA 数据库分析,食管癌组织中TET1表达水平显著高于食管癌癌旁组织(1.48±0.08比0.22±0.05,t=5.032,P＜0.01);TET2表达水平显著高于食管癌癌旁组织(6.12±0.32比2.86±0.45,t=11.035,P＜0.05);TET3表达水平显著高于食管癌癌旁组织(3.69±0.46比2.46±0.55,t=15.339,P＜0.05).RT-qPCR结果表明,食管癌组织中TET1 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(5.93±0.28比2.58± 0.15,t=15.854,P＜0.05);TET2 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(5.08±0.12比2.82± 0.25,t=14.012,P＜0.05);TET3 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(4.88±0.28比3.05± 0.17,t=12.715,P＜0.05).Western blot结果表明,TET2蛋白表达水平显著高于食管癌癌旁组织(2.86±0.45比1.00±0.00,t=7.895,P＜0.01);TET3 mRNA表达水平显著高于食管癌癌旁组织(2.57±0.26比1.00±0.00,t=8.331,P＜0.01).结论 食管鳞癌组织中5hmC表达水平高于癌旁组织,癌组织中TET2及TET3 mRNA及蛋白水平均呈高表达.

目的 探究过表达瞬时受体电位阳离子通道M8(TRPM8)在心脏钠通道基因(SCN5A)错义突变后对肥大细胞功能的影响.方法 构建TRPM8基因过表达载体及SCN5A干扰载体并分别转染入人肥大细胞HMC-1中,转染成功后用CCK8检测细胞增殖能力,qPCR、Western blot法检测TRPM8与SCN5A的表达情况,中性红染色计算肥大细胞脱颗粒百分率,比色法测定β-氨基己糖苷酶释放率.结果 TRPM8基因过表达及SCN5A干扰载体成功构建;与空白对照组相比,过表达TRPM8与干扰SCN5A后均抑制了 HMC-1细胞的增殖能力,过表达TRPM8对HMC-1细胞增殖能力的抑制作用低于干扰SCN5A组(P＜0.05);与干扰SCN5A组相比,干扰SCN5A的同时过表达TRPM8后对HMC-1细胞增殖能力的抑制作用有所降低(P＜0.05);与空白对照组相比,过表达TRPM8降低HMC-1细胞脱颗粒反应和β-氨基己糖苷酶释放率,干扰SCN5A后增强了 HMC-1细胞脱颗粒反应和β-氨基己糖苷酶释放率(P＜0.05);与干扰SCN5A后相比,在干扰SCN5A的同时过表达TRPM8可降低HMC-1细胞脱颗粒反应和β-氨基己糖苷酶释放率(P＜0.05);干扰SCN5A后可下调HMC-1细胞中TRPM8的表达(P＜0.05).结论 TRPM8可以抑制SCN5A错义突变后对肥大细胞的激活作用,并可能通过调控SCN5A来减缓肠易激综合征患者疼痛等不适症状.

目的 研究麻黄碱对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞功能损伤的修复作用及机制.方法 以人小胶质细胞HMC3为研究对象,考察不同质量浓度麻黄碱(75、150、300、600 μg/mL)对HMC3细胞活力和凋亡的影响.然后将HMC3细胞分为对照组(不受药物干预)、LPS组(1 μg/mL)、麻黄碱组(1 μg/mL LPS+300 μg/mL麻黄碱)、BAY11-7082组[1 μg/mL LPS+5 μmol/L核因子κB(NF-κB)信号通路抑制剂BAY11-7082]、抑制剂组(1 μg/mL LPS+300 μg/mL麻黄碱+5 μmol/L BAY11-7082)和激活剂组(1 μg/mL LPS+300 μg/mL麻黄碱+1 μmol/L NF-κB信号通路激活剂Prostratin),加入相应药物作用24 h后,检测细胞迁移能力和细胞中可溶性白细胞介素6(sIL-6)、白细胞介素10(IL-10)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平以及NF-κB信号通路相关蛋白表达水平.结果 300 μg/mL的麻黄碱可使HMC3细胞活力显著升高、凋亡率显著降低(P＜0.05).与对照组相比,LPS组迁移细胞数显著增多,细胞中sIL-6、MDA水平和NF-κB蛋白磷酸化水平均显著升高,IL-10、SOD水平均显著降低(P＜0.05).与LPS组相比,麻黄碱组和BAY11-7082组上述指标水平均显著逆转(P＜0.05).与麻黄碱组相比,抑制剂组迁移细胞数显著减少,细胞中sIL-6、MDA水平和NF-κB蛋白磷酸化水平均显著降低,IL-10、SOD水平均显著升高(P＜0.05);而激活剂组上述指标水平均显著逆转(P＜0.05).结论 麻黄碱可通过抑制LPS诱导的HMC3细胞凋亡、迁移、炎症和氧化应激,修复细胞功能损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路活性有关.