目的:探讨顺铂对胃癌SGC-7901细胞程序性死亡因子配体1（PD-L1）表达及淋巴细胞调控胃癌细胞增殖功能的影响。方法:将胃癌SGC-7901细胞用不同浓度顺铂（0、0.5、1.0、2.0和4.0 mg/L）处理，MTT检测SGC-7901细胞的增殖情况；流式细胞术检测SGC-7901细胞表面PD-L1的表达情况。将顺铂预处理前后的SGC-7901细胞与活化的淋巴细胞进行共孵育，共分为三组：A组为单独淋巴细胞；B组为未经顺铂处理的SGC-7901与淋巴细胞共孵育；C组为经顺铂处理的SGC-7901与淋巴细胞共孵育。流式细胞术检测各分组中CD 4+和CD 8+T细胞的凋亡情况；抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用（ADCC）法计算SGC-7901细胞的溶解率。 结果:MTT检测结果显示，不同浓度顺铂处理SGC-7901细胞48 h后，顺铂抑制SGC-7901细胞的增殖效应呈浓度依赖性（ F=128.35， P<0.05）；SGC-7901细胞分别经0、0.5、1.0、2.0和4.0 mg/L顺铂处理后，细胞表面PD-L1的表达均上调，且超过1.0 mg/L顺铂处理又开始下降（ F=477.79， P<0.05）；顺铂处理SGC-7901细胞后与淋巴细胞共孵育，可增加CD 4+和CD 8+ T细胞的凋亡率（ F=524.98、122.47， P<0.05）；效应细胞外周血单个核细胞与靶SGC-7901细胞共孵育时，顺铂可介导外周血单个核细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性，即有ADCC效应，且顺铂可减弱该杀伤活性（ t=15.961， P<0.05）。 结论:顺铂可能通过诱导胃癌SGC-7901细胞PD-L1的表达，抑制外周血单个核细胞对胃癌SGC-7901细胞的杀伤活性，减弱胃癌细胞的死亡。

目的:探讨人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)蛋白的哪种结构域更适合激发赫赛汀抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)效应。方法:真核表达五种包含HER2胞外段不同结构域的蛋白，即HER2-Fc、HER2-His、T23-561-Fc、T276-T652-Fc、T276-T652-His。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)对蛋白相对分子质量及纯度进行检测。酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测这些蛋白与赫赛汀的结合能力。自然杀伤(natural killer，NK)细胞活化实验比较这五种蛋白增强赫塞汀ADCC效应的能力差异。结果:成功获得纯度较高的蛋白。ELISA结果显示HER2-Fc，HER2-His和T276-T652-His都表现出较好的结合能力，T276-T652-Fc结合较差，T23-561-Fc则完全不结合。此外，HER2-Fc、HER2-His、T276-T652-Fc、T276-T652-His、T23-561-Fc的EC50值分别为0.16、0.17、0.16、0.15、1.12。NK细胞活化实验结果显示HER2-Fc和T276-T652-His能显著增强赫赛汀刺激NK细胞脱颗粒和分泌干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)的效应，HER2-Fc组CD107a表达量最高可达61.50%，IFN-γ的分泌可达38.10%。T276-T652-His组CD107a的表达最高可达63.00%，IFN-γ的分泌可达43.10%，与HER2-Fc作用相当。该效应呈浓度梯度依赖性，蛋白低浓度0.5 μg/mL时，赫赛汀的ADCC效应降低，且组间差异有统计学意义( t值分别为4.21、4.24、6.51、3.17、3.44、3.05、3.34、2.82、8.55、11.52、4.50、2.96、5.58、6.03、3.77、4.42， P值均<0.05)。 结论:验证了T276-T652-His具有增强赫赛汀ADCC功能的作用，且与HER2-Fc相当，为后续将HER2蛋白用于肿瘤免疫治疗研究打下了基础。

目的:探讨乳腺腺样囊性癌（AdCC）的临床病理学特征、基因突变情况及预后。方法:收集2008年1月至2021年12月临沂市肿瘤医院存档的12例乳腺AdCC标本，其中经典型腺样囊性癌（C-AdCC）8例，实性-基底细胞样腺样囊性癌（SB-AdCC）4例，行组织形态学观察、免疫组织化学及分子遗传学检测，分析其临床病理学特征和预后。结果:组织形态学检查示，C-AdCC呈梁-管状、筛状生长，并见特征性的真腺腔和假腺腔结构；SB-AdCC呈巢团状、实性生长，细胞中-重度异型性，可见坏死及较多核分裂象。免疫组织化学检测示，8例C-AdCC明显表达CK7、CK5/6、p63、S-100，4例SB-AdCC弥漫表达CD117、CD10。荧光原位杂交结果示3例C-AdCC具有MYB基因断裂；二代测序检测示2例SB-AdCC具有NOTCH1基因突变。8例C-AdCC患者术后均未见淋巴结转移，4例SB-AdCC中2例术后淋巴结转移。结论:C-AdCC组织细胞形态以梁-管状、筛状生长为主，细胞轻度异型性，预后较好，部分患者有MYB-NFIB融合基因改变；SB-AdCC以巢团状、实性生长为主，细胞中-重度异型性，可见坏死及较多的核分裂象（>5/10个高倍镜视野），患者预后较差，部分患者有NOTCH1基因突变。

目的:探讨SARS-CoV-2感染者血浆样本抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)及其与抗体滴度和中和活性的相关性。方法:采用表达SARS-CoV-2刺突(spike, S)蛋白的HEK293T细胞为靶细胞，表达FcγRⅢa-V158的Jurkat细胞为效应细胞，建立一种简便的抗体ADCC检测方法。对效应细胞和靶细胞比例进行优化后，分析38份血浆样本的ADCC活性进行。血浆特异性抗体采用捕获ELISA法检测，即用抗标签抗体捕获C-端带标签的重组SARS-CoV-2 S蛋白。血浆抗体中和活性采用假病毒中和试验测定。统计学分析使用Mann-Whitney U检验进行组间比较，非参数Spearman相关检验计算相关性。 结果:特异性抗体检测结果显示，38份血浆样本S、S1和受体结合结构域(receptor-binding domain，RBD)抗体阳转率均为97.4%(37/38)；动态观察抗体滴度随康复时间的变化趋势，结果显示抗体滴度在3~4周达到峰值。抗体滴度>1∶320的血浆样本的中和活性高于抗体滴度<1∶320的血浆样本[IC 50值：749.6(396.5~3 772.0) vs 81.4(11.6~228.4)， P<0.01]。对同样的样本进行抗体ADCC活性检测，86.8%(33/38)的血浆样本可检测出ADCC活性，其随康复时间的变化趋势与特异性抗体滴度是一致的，同样在3~4周达到峰值。进一步分析抗体ADCC活性与抗体滴度和中和活性相关性，结果显示均呈正相关，针对S、S1和RBD三个不同靶向区域的抗体，其相关系数分别为0.686、0.535、0.471( P均<0.01)，与中和活性的相关系数为0.573( P<0.01)。 结论:本研究提供了一种简便的抗体ADCC检测方法，检测结果表明SARS-CoV-2可诱导特异性血浆抗体ADCC活性，且ADCC活性可能来自非中和抗体。同时，ADCC活性在3~4周达到峰值，这些发现为临床血浆救治提供了参考。

目的:探讨胰腺癌双特异性抗体诱导特异性T淋巴细胞的效应及其对KIF20A阳性表达的胰腺癌PANC1细胞系的杀伤作用。方法:采用化学交联的方法，经凝胶分子排阻Sephrose-G25层析纯化，制备CD 3/KIF20A双特异性抗体(双抗)并浓缩。采集健康志愿者外周血，采用淋巴细胞分离液分离出单核细胞，再分别培养为树突样细胞(DC)及T细胞，并联合培养为DC-T细胞，同时应用维生素C干预DC-T细胞(vcDC-T细胞)。采用流式细胞仪检测各组T细胞亚群及培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-12水平。将10、50、100、300 ng双抗装载的1×10 5个T细胞、DC-T细胞、vcDC-T细胞与PANC1细胞(20∶1)共培养2、6、10 h后，明确杀伤率最高的双抗装载剂量；将DC-T细胞及装载杀伤率最高的双抗剂量的DC-T细胞、vcDC-T细胞与PANC1细胞(20∶1)共培养2、4、6、8、10、12 h，倒置显微镜下观察效应细胞对靶细胞的聚集效应，乳酸脱氢酶(LDH)法检测肿瘤细胞杀伤率。 结果:CD 3/KIF20A双抗经SDS凝胶电泳鉴定，其分子质量为130 000。与DC-T细胞比较，vcDC-T细胞的CD 8＋CD 28＋及CD40L亚群比例增加[(47.6±15.8)%比(38.2±7.6)%，(52.1±4.9)%比(44.7±3.2)%]，负性调节细胞Treg比例降低[(4.3±0.8)%比(8.3±1.1)%]，分泌的IL-2、IFN-γ、IL-12增加[(201.2±17.3)ng/L比(163.4±13.1)ng/L，(303.3±22.6)ng/L比(221.8±17.6)ng/L，(190.4±11.7)ng/L比(80.3±8.6)ng/L]，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；显微镜下可观察到100 ng CD 3/KIF20A双抗装载T细胞对KIF20A ＋胰腺癌PANC1细胞有明显的靶向性，有最强的杀伤力。效靶细胞比20∶1、共培养4 h时，双抗vcDC-T细胞对PANC1细胞的杀伤率为(88.6±2.6)%，显著高于双抗DC-T组的(68.4±3.4)%及DC-T组的(39.2±2.1)%，杀伤率分别提高20%及45%以上。 结论:CD 3/KIF20A双特异性抗体装载的DC-T细胞能显著提高对KIF20A阳性表达的胰腺癌PANC1细胞的杀伤率，维生素C干预后更进一步增强对双抗装载T细胞的细胞杀伤能力。

由于间皮素(MSLN)在多种实体瘤中广泛表达而在正常间皮细胞上表达较低,可作为实体瘤治疗的重要靶点.研究旨在通过将具有较高亲和力的重组抗人MSLN IgG1型单克隆抗体(rhMSLN mAb)序列构建到哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.4中,采用Expi293F细胞系高效表达重组单克隆抗体rhMSLN mAb,并采用表面等离子体共振和流式细胞术对其结合活性进行初步探究,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法鉴定其介导的抗体依赖的细胞毒作用(ADCC).研究结果表明,rhMSLN mAb在Expi293F细胞中以特定条件进行瞬时表达的产量可达70.2 mg/L,与MSLN重组蛋白的亲和力为7.02 nmol/L,对人胃癌细胞(NCI-N87细胞)ADCC作用的EC50为2.48×10-3 μg/mL,为靶向MSLN生物技术药物开发及生产提供了前期探索性支持.

目的 比较低温乙醇法和硫酸铵盐析法制备的抗人T细胞猪免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immu-noglobulin,P-ATG)与市售的抗人胸腺细胞及抗人T细胞兔免疫球蛋白的体外活性,以评价两种工艺制备的P-ATG的性能.方法 采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测4种制品杀伤靶细胞的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)效应;CCK-8法检测4种制品杀伤靶细胞的补体依赖性细胞毒作用(complement dependent cytotoxicity,CDC)效应;细胞双重免疫荧光标记法检测4种制品与不同T细胞抗原(CD3、CD4、CD8)的共定位情况.结果 4种制品中,仅抗人胸腺细胞兔免疫球蛋白在高浓度(1mg/mL)下对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)有较弱的ADCC效应;4种制品均可介导人PBMC产生CDC效应,且呈剂量依赖性,其中抗人胸腺细胞兔免疫球蛋白的活性较高,为两种工艺制备的P-ATG或抗人T细胞兔免疫球蛋白的3～4倍,抗人T细胞兔免疫球蛋白的活性与P-ATG相当;4种制品与T细胞表面抗原CD3、CD4的共定位细胞比例相近,抗人胸腺细胞及抗人T细胞兔免疫球蛋白与CD8抗原共定位的细胞比例略低于两种工艺制备的P-ATG.结论 低温乙醇法与硫酸铵盐析法制备的P-ATG体外活性具有良好的一致性,且在临床剂量下不低于进口同类型制品.

目的 制备抗髓系细胞触发受体 2(TREM2)抗体并初步探究其生物学活性.方法 采用杂交瘤筛选的方法,获得稳定分泌抗TREM2 抗体的杂交瘤细胞株,并对杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行筛选,选择结合效果最佳的单克隆抗体进行人源化改造得到嵌合抗体;对嵌合抗体进行进一步的人源化改造,采用酶联免疫吸附法(ELISA)及流式细胞术(FACS)检测人源化抗体的抗原抗体结合活性;采用生物膜干涉技术(BLI)检测人源化抗体与人TREM2结合动力学;通过基于报告基因的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)生物学活性测定方法,检测人源化抗体的依赖细胞介导的细胞毒效应;使用免疫缺陷小鼠对人源化抗体进行体内药效实验.结果 利用杂交瘤技术成功筛选到稳定表达抗TREM2 抗体的杂交瘤细胞株,对杂交瘤细胞株进行进一步人源化改造,获得纯度高于 95%的人源化抗体h7B6-11,抗体h7B6-11 与TREM2-His蛋白具有高度亲和性,且对 293T-TREM2 细胞的ADCC活性明显强于对照抗体.体内药效实验结果显示,h7B6-11 与程序性死亡受体 1(PD1)抗体联合用药抑制肿瘤生长效果明显.结论 抗体h7B6-11具有高度亲和力和良好的生物学活性,有望开发成为新一代肿瘤免疫治疗的抗体药物.

在过去40年里,单克隆抗体作为治疗性生物制品已在肿瘤学、血液学、自身免疫性疾病以及感染性疾病中发挥了重大作用.目前上市的治疗性单克隆抗体基本是免疫球蛋白G(IgG)类抗体,而近年来人们发现免疫球蛋白A(IgA)似乎也能发挥等同的作用,其独特的结构和体内分布、介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)时招募不同于IgG的效应细胞以及参与免疫系统调节都表明了IgA抗体有望成为新型治疗性抗体.本文就IgA的生物学特性、在疾病中的应用以及作为治疗性抗体现阶段存在的一些技术限制进行综述.

自然杀伤(Natural kill,NK)细胞是一种固有免疫淋巴样细胞(Innate lymphoid cell,ILP),是除T细胞、B细胞之外的第三大类淋巴细胞,其特征是无需抗原预先致敏即可快速反应产生非特异性杀伤效果.NK细胞通过分泌穿孔素、颗粒酶、细胞因子和趋化因子等使靶细胞凋亡,还可表达Fc受体(CD16),介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(Antibody-dependent cell-medicated cytotoxicity,ADCC).随着年龄增长免疫系统出现功能减退,NK细胞启动适应性免疫应答障碍,不能调动有效免疫反应等生理现象,导致与衰老有关疾病如感染和肿瘤等发生.本文就NK细胞亚群在整个生命周期中的生物学变化来探讨NK细胞与机体衰老的关系,为NK细胞的临床应用打下基础.