约50%的骨髓增生异常综合征（MDS）患者存在剪接因子突变，包括SF3B1、SRSF2、U2AF1等。不同剪接因子突变引起剪接异常的机制有所不同，但最终能导致相似的MDS表型，提示剪接因子突变可能导致不同于剪切异常的共同致病通路。近期研究发现，SF3B1、U2AF1、SRSF2突变能导致R-loop积累，引起DNA损伤及修复异常，并激活ATR-Chk1通路，最终导致细胞凋亡和肿瘤发生。文章就R-loop在MDS中的发病机制及相关靶向治疗药物的研究进展进行综述。

Background::Long non-coding RNAs (lncRNAs) plays an important role in the progression of gastric cancer (GC). Their involvement ranges from genetic regulation to cancer progression. However, the mechanistic roles of RP11-789C1.1 in GC are not fully understood.Methods::We identified the expression of lncRNA RP11-789C1.1 in GC tissues and cell lines by real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction. A series of functional experiments revealed the effect of RP11-789C1.1 on the proliferation of GC cells. In vivo experiments verified the effect of RP11-789C1.1 on the biological behavior of a GC cell line. RNA pull-down unveiled RP11-789C1.1 interacting proteins. Western blot analysis indicated the downstream pathway changes of RP11-789C1.1, and an oxaliplatin dosing experiment disclosed the influence of RP11-789C1.1 on the drug sensitivity of oxaliplatin. Results::Our results demonstrated that RP11-789C1.1 inhibited the proliferation of GC cells and promoted the apoptosis of GC cells. Mechanistically, RP11-789C1.1 inhibited checkpoint kinase 1 (CHK1) phosphorylation by binding ataxiatelangiectasia mutated and Rad3 related (ATR), a serine/threonine-specific protein kinase, promoted GC apoptosis, and mediated oxaliplatin sensitivity.Conclusion::In general, we discovered a tumor suppressor molecule RP11-789C1.1 and confirmed its mechanism of action, providing a theoretical basis for targeted GC therapy.

目的:探讨表皮生长因子受体（EGFR）和核转录因子E2相关因子2（NRF2）对人宫颈癌HeLa细胞受到电离辐射损伤后的DNA损伤响应及修复作用。方法:将人宫颈癌HeLa细胞按2种处理方式分组：（1）采用小干扰RNA敲降HeLa细胞中的EGFR，采用 137Cs γ射线照射源照射细胞。将HeLa细胞分为对照组（HeLa siCtrl）、敲降EGFR组（HeLa siEGFR）、照射组（HeLa siCtrl+8 Gy）、敲降EGFR+照射组（HeLa siEGFR+8 Gy）。采用免疫荧光实验（8 Gy照射后6、12、24 h）检测细胞中磷酸化组蛋白H2A变异体（γ-H2AX）foci的数量；采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测NRF2下游靶基因；采用流式细胞术检测EGFR对HeLa细胞周期的影响；采用核质分离实验分离HeLa细胞的胞质蛋白和胞核蛋白；采用蛋白质免疫印迹法检测NRF2、EGFR、血红素氧合酶1（HO-1）、共济失调毛细血管扩张突变基因Rad3相关激酶（ATR）Thr1989位点的磷酸化水平、检查点激酶1（CHK1）在Ser345位点的磷酸化水平。（2）采用小干扰RNA敲降HeLa细胞中的NRF2，采用 137Cs γ射线照射源照射细胞。将HeLa细胞分为对照组（HeLa siCtrl）、敲降NRF2组（HeLa siNRF2）、照射组（HeLa siCtrl+8 Gy）、敲降NRF2+照射组（HeLa siNRF2+8 Gy）。采用免疫荧光实验检测细胞中γ-H2AX foci的数量。符合正态分布的计量资料的组间比较采用两独立样本 t检验（方差齐）。 结果:（1）8 Gy照射6、12、24 h后，HeLa siEGFR+8 Gy组细胞中γ-H2AX foci的数量均多于HeLa siCtrl组[（94.00±1.00）%对（89.67±2.03）%、（72.33±1.76）%对（60.00±1.73）%、（43.00±2.31）%对（26.33±1.20）%]，且差异有统计学意义（ t=3.919、4.919、6.402，均 P<0.05）。与HeLa siCtrl组比较，HeLa siEGFR+8 Gy组的细胞G2/M期阻滞显著受损[（46.53±3.06）%对（37.90±4.61）%]，且差异有统计学意义（ t=4.384， P<0.05）。与HeLa siCtrl组比较，HeLa siEGFR+8 Gy组的HO-1表达下降66.66%（1.35±0.10对0.45±0.02），且差异有统计学意义（ t=8.782， P<0.05）。敲降EGFR后细胞核内的NRF2蛋白水平降低，辐射引起的NRF2下游ATR-CHK1信号通路活化水平及HO-1蛋白水平均降低。（2）8 Gy照射6、12、24 h后，与HeLa siCtrl组相比，HeLa siNRF2+8 Gy组细胞中γ-H2AX foci的数量均多于HeLa siCtrl组[（96.67±0.88）%对（89.67±2.03）%、（77.33±1.20）%对（60.00±1.73）%、（54.33±2.19）%对（26.33±1.20）%]，且差异均有统计学意义（ t=3.166、4.919、11.220，均 P<0.05）。 结论:电离辐射条件下，敲降EGFR可以减少NRF2蛋白入核，抑制ATR-CHK1信号通路激活及下游基因HO-1的表达，降低人宫颈癌HeLa细胞的DNA损伤修复能力。

目的:观察三氧化二砷(ATO)对急性髓系白血病细胞KG1a细胞表面NKG2D配体UL16结合蛋白1(ULBP1)表达的影响，探讨其调节ULBP1表达的分子机制。方法:常规体外培养KG1a细胞，采用细胞增殖/毒性检测试剂(CCK8)检测不同浓度ATO对KG1a细胞的增殖抑制率；应用实时荧光定量反转录(RT)－PCR方法检测KG1a细胞ULBP1 mRNA表达的影响；流式细胞术检测ATO对KG1a细胞表面ULBP1蛋白表达的影响。加入毛细血管扩张性共济失调突变和RAD3相关激酶(ATM/ATR)抑制剂咖啡因，观察其是否影响ATO对KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达。采用Western blot法观察ATO对KG1a细胞中CHK1、CHK2蛋白及其磷酸化表达的影响。结果:不同浓度(1、2、3、4、5 μmol/L)ATO均可抑制KG1a细胞的增殖，呈浓度依赖性，其对KG1a细胞的半数抑制浓度(IC 50值)为2.7 μmol/L。荧光定量RT－PCR法检测结果示ATO可使KG1a细胞ULBP1 mRNA的相对表达水平升高，ATO在浓度分别为1、2、3、4、5 μmol/L时，与未加药组比较，ULBP1 mRNA相对表达水平分别升高至(1.86±0.30)倍、(3.02±0.71)倍、(3.16±0.75)倍、(4.80±0.70)倍、(3.70±0.89)倍，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与未加药组相比，当ATO浓度分别为1、2、3、4、5 μmol/L时，ULBP1蛋白相对表达水平均显著升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。咖啡因预先处理KG1a细胞2 h再联合ATO共同孵育KG1a细胞24 h，ULBP1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低。在咖啡因浓度为8 mmol/L时，ULBP1 mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(9.55±0.38)倍降为(6.36±0.93)倍，差异有统计学意义( P<0.05)；流式细胞术检测结果发现，当咖啡因浓度分别为2、4、8 mmol/L时，ULBP1蛋白相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.50±0.08)倍分别降为(2.17±0.07)倍、(2.02±0.06)倍、(1.75±0.06)倍，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。CHK1和CHK2蛋白相对表达水平均随ATO浓度的升高而降低，而CHK1和CHK2磷酸化蛋白的相对表达水平均随ATO浓度的升高而升高。 结论:ATO诱导上调KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达，ATM/ATR－CHK1/CHK2通路可能参与这一过程。

目的:探讨共济失调毛细血管扩张突变基因Rad3相关激酶（ATR）/沉默细胞周期检测点激酶1（CHK1）信号通路在卵巢上皮癌发生、发展过程中的作用。方法:体外培养人卵巢上皮癌细胞OVCAR3，分为空白对照组（NC组）、siRNAsc组（转染siRNAsc的OVCAR3细胞）、siRNAATR组（转染siRNAATR的OVCAR3细胞）、VE822组（加入1μmol/L的ATR抑制剂VE822）、和siRNAATR+VE822组。采用siRNA技术和VE822干扰OVCAR3细胞中的ATR，通过实时荧光定量PCR（qRTPCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中ATR的表达确定干扰有效后，CCK8法检测各组细胞增殖抑制情况，流式细胞术（FCM）检测细胞周期和凋亡情况，qRTPCR检测卵巢上皮癌细胞中凋亡相关基因半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）、B细胞淋巴瘤2（Bcl2）、Bcl2相关X蛋白（Bax）mRNA的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测ATR/CHK1通路相关蛋白的表达。结果:siRNA-ATR转染和VE-822干预后，与NC组和siRNA-sc组相比，siRNA-ATR组、VE-822组、siRNA-ATR+VE-822组OVCAR3细胞中ATR的mRNA[（1.55±0.12）、（1.51±0.13）、（0.71±0.11）、（0.73±0.12）、（0.49±0.09）]表达水平显著降低（ P<0.05），细胞增殖抑制率[（0.00±0.00）%、（0.00±0.00）%、（32.84±1.08）%、（30.75±1.44）%、（43.90±1.57）%]、细胞G0/G1期的比例[（40.08±2.57）、（36.35±3.44）、（53.28±4.34）、（56.37±5.03）、（70.63±3.81）]、细胞凋亡率[（4.28±0.67）%、（5.35±0.94）%、（23.63±1.13）%、（24.57±1.20）%、（35.86±1.09）%]、Caspase-3、Bax mRNA表达明显升高（ P<0.05），S期[（32.93±3.02）、（35.35±2.82）、（25.79±3.61）、（23.74±3.54）、（18.04±2.37）]和G2/M期[（26.99±2.84）、（28.30±2.72）、（20.93±3.01）、（19.98±2.87）、（11.33±2.11）]的细胞比例、Bcl-2 mRNA、ATR、p-CHK1/CHK1、细胞分裂周期蛋白25C（CDC25C）、细胞周期蛋白B1（cyclin B1）蛋白表达显著降低（ P<0.05）；与siRNA-ATR组相比，siRNA-ATR+VE-822组细胞中ATR的mRNA表达水平进一步降低（ P<0.05），细胞增殖抑制率、细胞凋亡、Caspase-3、Bax mRNA表达进一步增加（ P<0.05），Bcl-2 mRNA、ATR、p-CHK1/CHK1、CDC25C、cyclin B1蛋白表达持续降低（ P<0.05）。 结论:ATR/CHK1信号通路在卵巢上皮癌OVCAR3细胞增殖过程中被激活，抑制ATR/CHK1信号通路，可抑制卵巢上皮癌细胞增殖，诱导其G1/S细胞周期阻滞和细胞凋亡。

随着新的免疫治疗和靶向治疗的发展,其他肿瘤的预后明显得到改善.但胰腺癌的5年生存率一直维持在10％以下,是极具挑战性的恶性肿瘤,亟待寻找新的治疗策略.DNA损伤修复通路形成复杂的调控网络,其功能缺陷将导致肿瘤的发生,但同时增加对基因毒性药物及放射治疗的敏感性.DNA损伤修复通路的异常与恶性肿瘤的发展和肿瘤的耐药密切相关,而PARP抑制剂在BRCA1/2缺陷肿瘤中的成功应用,极大地促进了针对DNA损伤修复缺陷肿瘤的分子靶向治疗研究.除PARP抑制剂外,针对ATR、CHK1、WEE1、DNA-PK等DNA损伤修复的抑制剂均已进入临床试验.在转移性胰腺导管癌中发现,15％～20％的患者存在DNA损伤修复基因的体细胞突变或种系突变,然而其中的部分突变并不影响基因的功能.DNA损伤修复基因在胰腺癌等肿瘤中频繁发生表观遗传异常改变,深入研究其对DNA修复调控网络的影响,有望获得新的"协同致死"治疗策略.

DNA损伤引发细胞启动一系列DNA损伤应答(DNA damage response,DDR),包括DNA损伤修复、细胞周期检查点激活、细胞周期阻滞、各种细胞内信号转导途径的活化和细胞凋亡等.DNA损伤修复(DNA damage repair)是细胞维持基因组稳定性的重要机制,于2015年获得诺贝尔化学奖.DNA损伤修复途径主要包括:碱基切除修复(base-excision repair,BER)、核苷酸切除修复(nucleotide excision repair,NER)、错配修复(mismatch repair,MMR)、同源重组(homologous recombi-nation,HR)和非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)等,分别在DNA单链断裂(sin-gle-strand break,SSB)或双链断裂(double-strand break,DSB)等损伤修复中发挥重要作用.DNA损伤修复缺陷与肿瘤发生发展密切相关,同时也是肿瘤治疗的重要靶点.DNA损伤修复通路的多聚ADP核糖聚合酶(poly-ADP-ribose polymerase,PARP)与乳腺癌易感基因BRCA1/2等存在合成致死(synthetic lethality)作用,使PARP抑制剂(PARP inhibitor,PARPi)成为第一个也是目前唯一上市的肿瘤治疗合成致死靶药.PARPi在卵巢癌及多种实体瘤治疗中疗效良好,使DNA损伤修复及相关DDR通路的合成致死靶药研发成为热点,其他在研靶点主要包括:共济失调毛细血管扩张突变蛋白(ataxia telangiectasia-mutated protein,ATM)、共济失调毛细血管扩张与 RAD3 相关蛋白(ataxia telangiectasia and Rad3 related protein,ATR)、DNA 依赖性蛋白质激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)、细胞周期检测点激酶 1(checkpoint kinase1,CHK1)、细胞周期检测点激酶2(checkpoint kinase 2,CHK2)、阻止有丝分裂的蛋白质激酶WEE1等.PARPi与其他DDR靶药、抗血管生成药物及免疫检查点抑制剂的联用,有可能成为克服PARPi耐药、提高疗效的有效手段和发展前景.本文针对DNA损伤修复及相关DDR通路的关键分子和潜在肿瘤治疗靶点进行综述,阐述了 DNA损伤修复相关通路的合成致死靶点研究及在卵巢癌的应用和前景,为基础研究及临床应用提供指导.

Ovarian cancer (OC) poses a significant challenge in modern gynecologic oncology, both diagnostically and therapeuti-cally. According to the American Cancer Society, an estimated 21,000 new cases of OC were reported in the United States alone in 20211. The most prevalent subtype of OC87, high-grade serous (HGS), is characterized by heightened genomic instability and defects in DNA damage response (DDR) path-ways, which contribute to disease development and progres-sion2. Notably, approximately 50％ of HGS ovarian cancer (HGSOC) patients exhibit homologous recombination repair (HRR) defects (HRDs)3.

目的 观察ATM/ATR阻滞剂(KU55933)对化疗后胶质母细胞瘤(GBM)细胞株U87增殖、凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将对数生长期U87细胞分为KU55933组、替莫唑胺组、空白组,KU55933组加入10 μmol/L的KU55933,1h后加入50 mg/mL的替莫唑胺(TMZ);替莫唑胺组加入50 mg/mL的TMZ;空白组不干预.置于37℃、5％ C02细胞培养箱中常规培养.比较各组细胞OD值、凋亡率及细胞周期检测点激酶1(Chk1)、细胞周期检测点激酶2(Chk2)、磷酸化Chk1(pChk1)、磷酸化Chk2(pChk2)、细胞周期蛋白B(Cyclin B)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleave-Caspase-3)蛋白相对表达量.结果 与空白组比较,其余2组24、48、72 h的OD值减少(P均＜0.05);与替莫唑胺组比较,KU55933组24、48、72 h的OD值减少(P均＜0.05).与空白组比较,KU55933组、替莫唑胺组细胞凋亡率增加(P均＜0.05);与替莫唑胺组比较,KU55933组细胞凋亡率增加(P均＜0.05).与空白组比较,其余2组pChk1、pChk2、Cleave-Caspase-3相对表达量升高,Cyclin B、Cyclin D1相对表达量降低(P均＜0.05);与替莫唑胺组比较,KU55933组pChk1、pChk2、Cyclin B、Cyclin D1相对表达量降低,Cleave-Caspase-3相对表达量升高(P均＜0.05).结论 KU55933可抑制化疗后U87细胞的增殖,促进其凋亡,机制可能为其可下调pChk,进一步下调Cyclin B及Cyclin D1表达,从两逆转细胞周期阻滞.

探讨齐墩果酸(Oleanolic Acid,OA)对自然衰老大鼠睾丸DNA损伤的保护作用及其可能机制.将30只SPF级18月龄SD大鼠随机分为三组:自然衰老组、OA低、高剂量组,每组10只,另取10只3月龄大鼠作为青年对照组.OA低、高剂量组分别灌胃给予OA 5、25 mg/kg,自然衰老组和青年对照组给予生理盐水,每周灌胃6天,周日不给药,连续给药6个月.末次给药后禁食不禁水12 h,称重,麻醉后处死大鼠,快速取出睾丸组织.HE染色观察睾丸组织形态变化,免疫组织化学法检测DNA损伤相关蛋白53BP1、ATR的表达,Western Blot检测睾丸组织中衰老相关蛋白p21和DNA损伤相关蛋白γ-H2AX、Chk1、p-p53的表达水平.HE结果表明,OA能显著改善增龄所致的睾丸组织形态变化;与青年对照组相比,自然衰老组睾丸组织DNA损伤标志蛋白γ-H2AX表达水平明显升高,而给予OA干预后其表达显著降低;此外,与青年对照组比较,自然衰老组睾丸组织中衰老相关蛋白p21的表达显著增高,DNA损伤相关蛋白53BP1、ATR的阳性灶点数及其下游Chk1、p-p53的蛋白表达明显升高,OA低、高剂量组均能显著降低上述蛋白的表达.以上结果表明OA对自然衰老大鼠睾丸组织DNA损伤有较好的保护作用,机制与调节ATR/Chk1/P53信号通路有关.