目的:探究WNT1诱导信号通路蛋白1（WISP1）在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的功能定位及治疗作用机制。方法:60只雄性C57BL/6J小鼠购于北京维通利华公司，采取简单随机抽样法分为5组，每组10只，正常组喂养普通饲料，通过喂养高脂高胆固醇饲料14周制备NASH小鼠模型，在造模过程中分别腹腔注射IgG单克隆抗体，0.1 g/kg WISP1高亲和力单克隆抗体，0.2 g/kg WISP-1高亲和力单克隆抗体为IgG、低剂量WISP1抗体组和高剂量WISP1抗体组，每周2次，连续给药14周。检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、血糖水平。苏木精-伊红（HE）、糖原（PAS）染色、油红O染色观察肝组织病理变化。实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测小鼠肝组织中白细胞介素（IL）-10、IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达水平。检测肝组织总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）水平，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活性水平，活性氧（ROS）荧光染色检测肝组织中活性氧含量；免疫组织化学（IHC）检测肝组织WISP-1、乙酰辅酶a合成酶（ACS）蛋白表达，蛋白质印迹法（Western blot）检测肝组织肝组织腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、肉碱棕榈酰转移酶-1（CPT1）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1（PCG-1α）蛋白表达水平。结果:模型组小鼠血清AST、ALT、血糖水平高于正常组[（245.01±57.57） U/L比（37.28±4.23） U/L、（218.96±55.27） U/L比（49.81±10.57） U/L、（25.73±2.29） mmol/L比（8.06±0.51） mmol/L， P<0.01]；模型组病理表现为肝细胞脂肪变性、炎性细胞浸润、多处坏死灶；模型组小鼠肝组织炎症因子（IL-10、IL-6、IL-1β、TNF-α）mRNA水平高于正常组（7.49±059比1.00±0.38、5.57±3.22比1.00±0.59、4.86±3.86比1.00±0.34、10.18±3.24比1.00±0.17， P<0.01）；MDA含量高于正常组[（3.75±0.40） nmol/ml比（2.22±0.24） nmol/ml， P<0.01]，GSH、SOD活性低于正常组[（0.22±0.06） ng/ml比（0.49±0.15） ng/ml、（2.19±0.23） pg/ml比（4.59±0.22） pg/ml， P<0.01]，ROS含量高于正常组（4.91±0.31比1.00±0.12， P<0.01）；同时PGC-1α、ACS蛋白表达高于正常组[（2.19±0.084比1.00±0.09、（62.97±2.38）%比（26.72±0.73）%， P<0.01]，CPT1表达低于正常组（0.55±0.01比1.00±0.13， P<0.01）。低、高剂量WISP1抗体组小鼠血清AST、ALT、血糖水平低于模型组[（65.53±25.85）、（53.49±12.22） U/L比（245.01±57.57） U/L，（73.93±23.670）、（60.88±23.38） U/L比（218.96±55.27） U/L，（20.07±2.03）、（16.46±3.71） mmol/L比（25.73±2.29） mmol/L， P<0.01]，低、高剂量WISP1抗体组小鼠肝脏脂肪变性、炎症细胞浸润、坏死程度降低，低、高剂量WISP1抗体组小鼠肝组织IL-10、IL-6、IL-1β、TNF-α mRNA低于模型组（2.98±0.31、2.579±0.22比7.49±1.57，1.83±0.35、2.53±0.32比5.57±1.03, 1.62±0.24、1.52±0.34比4.86±1.33，2.63±0.56、2.12±0.37比10.18±2.31， P<0.05），高剂量WISP1抗体组小鼠MDA含量低于模型组[（1.83±0.694） nmol/ml比（3.70±0.50） nmol/ml， P<0.01]，GSH、SOD活性高于模型组[（0.45±0.12） ng/ml比（0.22±0.06） ng/ml、（5.50±0.98） pg/ml比（2.19±0.40） pg/ml， P<0.01]，活性氧含量低于模型组（0.51±0.06比4.91±0.31， P<0.01）。低、高剂量WISP1抗体组PGC-1α、ACS蛋白表达低于模型组（1.22±0.16、1.07±0.05比2.19±0.08，（33.50±3.45）%、（35.38±3.65）%比（62.97±2.38）%， P<0.01），p-AMPK、CPT1表达高于模型组（2.61±0.363、2.47±0.36比1.04±0.14，1.23±0.23、1.27±0.03比0.55±0.01， P<0.01）。 结论:抗WISP1治疗能通过激活AMPK通路，介导PGC-1α/CPT1通路改善NASH小鼠肝脏脂质代谢，减少炎症和脂质过氧化，促进肝细胞修复。

白内障是世界上主要的致盲眼病，其发生和发展的主要机制为晶状体的氧化应激损伤。大量抗氧化基因的表达受核因子E2相关因子2(Nrf2)调控，Nrf2氧化防御系统是机体抗氧化损伤的主要防御系统之一。Nrf2信号通路的活性受Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)调控，Keap1介导Nrf2蛋白降解使其通路的激活受到抑制——依赖Keap1的调控方式。不少研究提示Nrf2信号通路还受其他方式调控——非依赖Keap1的调控方式，例如Nrf2的磷酸化、乙酰化等蛋白修饰(PKC、PI3K/Akt、JNK和P300/CBP)以及表观遗传(启动子的甲基化、组蛋白修饰和微小RNA-144、－28和－34)。Nrf2及其下游抗氧化基因表达的减少在白内障的发生和发展中起重要作用。许多化合物，如桑色素、金丝桃苷、萝卜硫素、金樱子提取物、丁苯酞和乙酰左旋肉碱被证实可以通过激活Nrf2信号通路、上调其下游抗氧化基因的表达、抑制氧化应激反应，减轻晶状体上皮细胞的氧化损伤，从而达到抑制、减轻白内障的作用。本文就近年来关于Nrf2信号通路以及Nrf2激活剂与白内障的关系研究进行综述，以期为白内障的防治提供理论依据。

Objective::To investigate the relationship between the concentration of L-carnitine in semen and sperm parameters and investigate the epigenetic profile in sperm cell after L-carnitine usage.Methods::From February 2017 to February 2018, 46 semen samples from asthenospermic males and 41 semen samples from healthy donors were acquired. Motility parameters were assessed using computer-assisted sperm analysis (CASA, n = 78) and the DNA fragmentation index (DFI) was evaluated through flow cytometry ( n = 86), %DFI = % cells outside main population. Other oxidative stress markers, such as reactive oxygen species (ROS) levels ( n = 86) and the mitochondria DNA copy numbers, were detected ( n = 78). The concentration of L-carnitine and acetyl-L-carnitine was detected ( n = 82), and methylation was analyzed ( n = 30). After that, we collected 13 fresh semen samples from asthenospermic males and 23 fresh semen samples from healthy donors. These samples were used in a freeze-thaw model that was used to determine whether adding L-carnitine could change sperm progressive motility ( n = 23), apoptosis index ( n = 9), and methylation analysis ( n = 7). In total, we have done 13 asthenospermia samples for Western blot, and except for the poor Western result, we analyzed 6 samples for H3K9ac detection, 7 samples for H3K9m3 and H3K27m3 detection, and immunofluorescence ( n = 3). Finally, we had recruited 30 volunteers, and they were given oral administration of L-carnitine for 3 months and then collected semen samples at different time points for methylation analysis. Results::The concentration of acetyl-L-carnitine is negatively correlated with the %DFI value ( r2 = 0.1090; P = 0.0026), and the concentration of acetyl-L-carnitine is positively correlated with sperm forward motility ( r2 = 0.0543; P = 0.0458) and ROS ( r2 = 0.1854; P < 0.0001), and the acetyl-L-carnitine level is negatively correlated with %DFI in asthenospermia ( r2 = 0.1701; P = 0.0066), and the level of acetyl-L-carnitine in asthenospermic semen is significantly lower than the normal group ( P = 0.0419). In addition, this study indicates that adding L-carnitine significantly improved sperm motility ( P = 0.0325) and reduced sperm apoptosis ( P = 0.0032). Importantly, Western blotting ( P = 0.0429) and immunofluorescence staining results showed that the addition of L-carnitine reduced H3K9Me3 methylation level in sperm, respectively. Furthermore, semen samples from asthenospermic patients had reduced methylation levels in a specific region (16 thP= 0.0003; 17 thP= 0.0016) of the brain-derived neurotrophic factor ( BDNF) promoter. The 16 th methylation decreased with age ( r2 = 0.1564; P = 0.0306), and the 17 th methylation was decreased after treatment with L-carnitine for 28 days ( P = 0.0341). Conclusion::L-carnitine can reduce the %DFI and also affect the methylation of the histone modification marker in sperm as a possible epigenetic regulator.

目的:通过代谢组学技术分析脑外伤致意识障碍患者经高压氧联合清开灵治疗前、后其代谢标志物的变化，筛选出诊断标志物并用于指导临床诊疗及预后评估。方法:选取36例脑外伤致意识障碍患者纳入观察组，同时选取性别、年龄、族别与患者匹配的40例健康体检者纳入对照组。入选后观察组患者在常规支持性治疗基础上辅以高压氧及清开灵药物干预，于治疗前、治疗14 d后采用格拉斯哥昏迷量表(GCS)评估患者意识障碍程度；同时采集观察组治疗前、后及对照组静脉血，采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术对各组对象血清样本进行代谢组学分析，筛选出观察组与对照组间有显著差异的特异代谢标志物。通过绘制受试者工作曲线(ROC)，找出与疾病相关且具有诊断意义的代谢标志物，并观察上述诊断标志物在治疗前、后的变化情况。结果:治疗后观察组患者GCS评分[(11.08±1.89)分]较治疗前[(9.83±1.89)分]显著升高( P<0.05)，昏迷程度明显改善。治疗前与对照组比较，发现观察组共有21个潜在代谢标志物有显著差异，其中ROC曲线下面积(AUC)>0.85且具有较高诊断价值的代谢标志物共有8个(分别是肌酸、脯氨酸、尿酸、乙酰-L-肉碱、组氨酸、脯氨酸亮氨酸、色氨酸及9E-十八碳烯酸)，经治疗后上述代谢标志物均发生明显回调并趋于健康对照组水平。AUC更接近于1的诊断标志物共有4个(分别是脯氨酸亮氨酸、9E-十八碳烯酸、尿酸及乙酰-L-肉碱)，可用于脑外伤致意识障碍患者的辅助诊断及疗效评估。 结论:高压氧联合清开灵治疗能改善脑外伤致意识障碍患者的昏迷程度，纠正患者体内代谢紊乱，加速患者促醒。代谢组学筛选技术为识别脑外伤后意识障碍患者内源性代谢异常、指导临床诊疗及预后评估提供了一种新的手段。

目的 探讨肉碱(L-carn itine)和乙酰肉碱(acetyl-carnitine,ACar 2∶0)对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)的诊断价值.方法 收集2022年4月至2022年10月在广西医科大学附属肿瘤医院收治的31例ESCC患者以及同期就诊的30名健康志愿者的血清样本.采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱(UHPLC-QTOF-MS/MS)技术靶向分析血清中肉碱和乙酰肉碱的代谢变化,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价诊断效能.结果 与健康对照者相比,ESCC患者血清中的肉碱水平差异无统计学意义(P=0.149),两种乙酰肉碱同分异构体(ACar 2∶0同分异构体1和ACar 2∶0同分异构体2)的水平升高(均P＜0.001).多因素分析结果显示,ACar 2∶0同分异构体1含量高于0.0163 μmol/L(OR=19.456,95％CI:1.971～192.104,P=0.011)和 ACar 2∶0 同分异构体2含量高于0.0148 μmol/L(OR=7.720,95％CI:1.047～56.915,P=0.045)是 ESCC 发生的危险因素,而肉碱(OR=1.310,95％CI:0.051～33.951,P=0.871)则与ESCC发生无明显关系.ACar 2∶0同分异构体1诊断ESCC的ROC曲线下面积(area under curve,AUC)及敏感度和特异度分别为0.957、0.900、0.862,ACar 2∶0同分异构体2诊断ESCC的AUC及敏感度和特异度分别为0.901、0.867、0.821,两者联合诊断ESCC的AUC及敏感度和特异度分别为0.952、0.867、0.889.结论 ESCC血清中乙酰肉碱水平升高,且其在诊断ESCC中具有良好的效能,可能是潜在的诊断标志物.

为了比较高盐和低盐胁迫对大黄鱼(Larimichthys crocea)肝脏能量代谢和线粒体自噬的影响差异及其作用机制,将体质量为(53.46±1.47)g大黄鱼放入盐度为12、25或40的水体暴露1d、3d和7d,取其肝脏样本检测氧化损伤、能量代谢和线粒体自噬相关指标.结果显示,胁迫1d时,高盐组的大黄鱼肝脏三羧酸循环酶活力和线粒体自噬基因表达水平显著高于低盐组,表明鱼类在盐度胁迫初期需要消耗更多的能量,并提高线粒体自噬来应对高盐胁迫.胁迫7d时,高盐组的大黄鱼肝脏ATP合成酶活力和微管相关蛋白轻链3基因表达水平低于低盐组,活性氧簇和乳酸含量,乙酰辅酶A羧化酶活力高于低盐组,表明高盐组的大黄鱼在胁迫末期降低了有氧代谢和线粒体自噬,提高了无氧代谢,导致机体能量供应不足,线粒体自噬受到抑制,从而加重了鱼类氧化损伤.在盐度胁迫过程中,腺苷酸活化蛋白激酶和叉头框转录因子O亚型3分别在调控能量代谢酶活力和线粒体自噬基因表达方面发挥重要作用.研究结果揭示了高盐和低盐胁迫对大黄鱼能量代谢与线粒体自噬的影响差异及其初步机制,可为大黄鱼养殖水体的盐度调节方案制定及养殖水域选择提供基础资料.

目的 观察化瘀祛痰方含药血清对HepG2细胞脂质沉积的影响,并探究其作用机制.方法 采用1 mmol/L油酸棕榈酸混合液诱导HepG2细胞24 h构建脂质沉积模型,分别给予化瘀祛痰方含药血清、AMP依赖的蛋白激酶[Aden-osine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]抑制剂及抑制剂+中药联合干预,油红O染色观察脂质沉积情况,试剂盒检测细胞中甘油三酯(triglyceride,TG)含量,蛋白印迹法检测AMPK、p-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(A-cetyl CoA Carboxylase,ACC)、p-ACC、肉碱棕榈酰基转移酶-1(Carnitine Palmitoyltransferase-1,CPT1)蛋白相对表达量,以及实时荧光定量法检测细胞中AMPK、ACC、CPT1 mRNA相对表达水平.结果 与模型组相比,化瘀祛痰方含药血清组细胞中脂滴数目减少、TG水平降低,细胞中p-AMPK、CPT1蛋白及CPT1 mRNA相对表达量升高,ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量显著降低(P＜0.01),AMPK蛋白及基因相对表达水平无明显差别(P＞0.05);AMPK抑制剂组细胞中脂滴及TG含量升高,AMPK、CPT1蛋白及mRNA相对表达量降低,ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量升高(P＜0.05或P＜0.01);与AMPK抑制剂相比,抑制剂+中药含药血清组细胞中脂滴数目减少、TG水平降低,AMPK、p-AMPK蛋白及AMPK mRNA相对表达水平无显著差异(P＞0.05),ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量降低、CPT1则相对表达升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 化瘀祛痰方含药血清可能通过激活AMPK使其磷酸化,并调控ACC/CPT1信号通路,抑制脂肪酸合成,促进脂肪酸氧化,从而降低HepG2细胞内的甘油三酯水平及脂质沉积.

[背景]邻苯二甲酸二异壬酯(DINP)是一种与代谢性疾病有关的内分泌干扰物,广泛应用于塑料制品中.暴露于DINP与包括非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)在内的几种肝脏不良健康结局的发展有关.[目的]探讨DINP暴露对人肝癌细胞(HepG2细胞)脂质代谢的影响及其可能的分子机制.[方法]首先,对HepG2细胞进行不同时间(24、48和 72 h)、不同剂量(0、0.003、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、10、30和 100 mmol·L-1)的DINP处理,采用细胞计数试剂盒 8(CCK8)检测细胞活力;通过油红O染色及脂质含量测定细胞内的脂质沉积情况,并进一步检测甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)含量;最后通过荧光定量PCR检测脂肪酸合成相关基因乙酰辅酶A羧化酶α(Accα)、脂肪酸合成酶(Fasn)、丙二酰辅酶A脱羧酶(Mlycd)、固醇调节元件结合蛋白1(Srebp1),以及β-氧化相关基因过氧化物酶体增殖活化受体α(Pparα)、腺苷酸活化蛋白激酶(Ampk)、肉毒碱棕榈酰基转移酶 1A(Cpt-1a)、线粒体转录因子A(Tfam)、核呼吸因子1(Nrf1)、过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子1α(Pgc1-α)的mRNA表达水平.[结果]与对照组(0 mmol·L-1)相比,DINP暴露 24、48和 72 h后,HepG2细胞活力的未观察到有害作用水平(NOAEL)分别为 0.3、0.1和 0.1 mmol·L-1,观察到有害作用最低水平(LOAEL)分别为 1、0.3和 0.3 mmol·L-1(P<0.05).30 mmol·L-1 和 100 mmol·L-1 DINP染毒 24 h后,与对照组相比,细胞内脂质含量增加且出现明显的脂质沉积,TG和TC水平也明显上升(P<0.01).与对照组相比,100 mmol·L-1 DINP染毒 24 h可使细胞内脂肪酸合成相关基因Mlycd、Srebp1、Fasn、Accα的mRNA表达水平下降,而 30 mmol·L-1 剂量组Mlycd mRNA表达上调;β-氧化相关基因Ampk、Pparα、Tfam在100 mmol·L-1 DINP暴露后mRNA表达水平均出现上调,而Cpt-1a mRNA表达下降(P<0.05).[结论]30 mmol·L-1 和 100 mmol·L-1 DINP暴露 24 h后可干扰HepG2细胞脂质代谢过程中的脂肪酸合成和β-氧化过程,导致脂质沉积.

A variety of natural and artificial cryoprotectant extenders have been explored to enhance sperm recovery following cryopreservation-thawing process.The current investigation is aimed at evaluating the effect of acetyl-L-carnitine on human spermatozoa and reactive species oxygen (ROS) level after freezing-thawing process.The spermatozoa were collected from 35 male patients diagnosed as having asthenospermia.The cryopreservation of human spermatozoa treated with acetyl-L-camitine at different concentrations (group B:2.5 mmol/L,group C:7.5 mmol/L,group D:15 mmol/L) was compared with control (group A:no acetyl-L-carnitine given).For the frozen-thawed spermatozoa,the viability,motility and DNA integrity were measured by comet assay,acrosome integrity by FITC-PNA staining and ROS level was determined in each group.The results showed that there were no significant differences in motility and viability between group A and group B,while the motility and viability of spermatozoa in group C and group D were significantly increased as compared with those in group A.As compared with group A,the values for DNA integrity parameters including comet rate (CR),tail DNA percentage (TD),tail length (TL) and Oliver tail moment (OTM) were significantly reduced in group C and group D.Group C and group D also displayed a higher proportion of intact acrosome than group A.No significant difference in ROS level was found between group A and group B,while with the increase in acetyl-L-camitine concentration,the ROS level in groups C and D was significantly reduced as compared with that in group A.In conclusion,acetyl-L-camitine at a concentration of 7.5 mmol/L is an effective antioxidant against cryo-damage on post-thawed human spermatozoa.

目的 探讨线粒体靶向七甲川花菁类荧光小分子IR-61对小鼠非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型的治疗效果.方法 通过喂养高脂饲料建立NAFLD小鼠模型,腹腔注射磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)或IR-61,治疗18周后,取肝脏组织切片HE常规染色,显微镜下观察,采用酶比色法检测肝脏和血清甘油三酯(triglyceride,TG)含量,Real-time PCR和Western blot法检测固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element binding protein 1c,SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl-CoA carboxylase-1,ACC1)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor-α,PPARα)和肉毒碱棕榈酰转移酶-1(carnitine palmitoyltransferase-1,CPT1)的mRNA及蛋白表达水平.结果 IR-61可降低高脂诱导的小鼠肝脏TG含量增加,抑制SREBP-1c、ACC1过度表达;同时增加肝脏PPARα、CPT1的表达(P ＜0.05);IR-61可明显改善小鼠肝脏的脂肪沉积.结论 IR-61通过抑制高脂诱导的脂肪合成代谢过度增强,促进肝脏脂肪酸氧化,减少肝脏甘油三酯沉积,从而改善非酒精性脂肪肝.