目的:探讨星状神经节阻滞(stellate ganglion block，SGB)对创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder，PTSD)模型小鼠条件性恐惧记忆的调控作用及其机制。方法:选取8～9周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠，根据随机数字表法分组，并完成以下实验：(1)32只小鼠分为PTSD组、PTSD＋七氟烷组(Sev组)、PTSD＋生理盐水组(NS组)、PTSD＋SGB组(SGB组)，每组8只。采用条件性恐惧实验建立PTSD模型，检测4组小鼠的恐惧记忆；(2)取3只小鼠，采用伪狂犬病病毒(pseudorabies virus，PRV)逆行示踪观察星状神经节(stellate ganglion，SG)到脑内的神经投射；(3)取24只小鼠，分为空白对照(negative control，NC组)、Sev组、NS组、SGB组，每组6只，采用免疫荧光染色观察蓝斑核(locus coeruleus，LC)去甲肾上腺素(norepinephrine，NE)能神经元(LC NE)中c-Fos的表达；(4)取3只小鼠，采用霍乱毒素B亚基(cholera toxin subunit B，CTB)逆行示踪LC到基底外侧杏仁核(basolateral amygdala，BLA)的神经投射；(5)使用化学遗传学和光遗传学方法，借助病毒载体增强神经元活性，观察LC NE-BLA神经环路的化学或光遗传学激活对小鼠恐惧记忆的影响。采用GraphPad Prism 8.0对数据进行单因素方差分析。 结果:(1)造模后，NS组小鼠在测试阶段僵立时间百分比[(59.83±6.31)%]与PTSD组[(62.21±7.90)%]和Sev组[(63.61±8.48)%]相比均差异无统计学意义(均 P>0.05)，SGB组小鼠僵立时间百分比[(47.78±7.02)%]低于NS组( P<0.05)。(2)SG注射PRV病毒示踪结合免疫荧光结果显示，LC NE神经元投射至SG。(3)免疫荧光染色检测小鼠LC NE神经元活动性，结果显示与NC组[(5.52±2.70)%]相比，NS组[(16.75±3.44)%]和Sev组[(14.90±2.73)%]小鼠LC NE神经元中c-Fos表达均明显较高(均 P<0.01)，SGB组小鼠c-Fos表达[(10.90±3.29)%]较NS组低( P<0.05)。(4)CTB逆行追踪结果显示，LC神经元投射到BLA。(5)SGB小鼠经化学遗传激活后，其僵立时间百分比高于激活前[(67.02±9.49)%，(45.97±7.15)%] ( P<0.01)；SGB组小鼠经光遗传学激活后，小鼠的僵立时间百分比也明显高于激活前[(77.37±11.66)%，(47.76±9.63)%] ( P<0.001)。 结论:SGB可以有效降低PTSD模型小鼠的恐惧记忆，并降低了小鼠LC NE神经元活动性，这可能是通过抑制LC NE-BLA神经环路机制实现的。

目的:比较伴或不伴椎体旋转半脱位（rotatory subluxation，RS）的脊柱畸形患者矫形术中神经并发症的发生率，分析RS与术中神经损害的相关性。方法:回顾性分析2012年1月至2017年8月术前合并RS的脊柱畸形接受矫形内固定手术且术前未行牵引及术中三柱截骨手术37例患者（RS组）的病历资料，另选取37例不伴RS的脊柱畸形患者作为对照（对照组）。测量的影像学参数包括主弯侧凸Cobb角、冠状面平衡（coronal trunk balance，CTB）、最大后凸Cobb角（global kyphosis，GK）、矢状面偏移(sagittal vertical axis，SVA)、冠状位椎体半脱位距离（coronal rotatory subluxation，CRS）、矢状位椎体半脱位距离（sagittal rotatory subluxation，SRS）、RS椎体轴面旋转角度（axial rotation，AR）等。记录患者术中出现神经电生理监测不良事件及唤醒试验阳性的发生率。结果:RS组患者年龄为（42.4±17.9）岁（12~74岁），对照组患者年龄为（42.7±18.3）岁（12~74岁），差异无统计学意义（ t=0.0713， P=0.943）。RS组术前主弯Cobb角、CTB、GK、SVA分别为75.4°±29.7°、（38.4±28.4）mm、52.8°±25.2°、（40.3±36.8）mm，对照组分别为75.1°±27.6°（ t=0.045， P=0.964）、（34.8±24.4）mm（ t=0.584， P=0.560）、49.8°±22.5°（ t=0.540， P=0.591）、（38.7±25.3）mm（ t=0.219， P=0.828），两组患者的差异均无统计学意义。RS组和对照组患者术后主弯侧凸Cobb角、CTB、GK、SVA、CRS、SRS和AR均得到明显矫正（ P值均<0.05），末次随访时无明显矫正丢失（ P值均>0.05）。术前合并下肢神经功能损害，RS组6例（16.2%）、对照组4例（10.8%）（ F=0.463， P=0.496），Frankel分级均为D级。术中神经电生理监测不良事件，RS组5例（13.5%）、对照组1例（2.7%）（ F=2.902， P=0.088）。2例RS组患者（5.4%）术中唤醒试验阳性（ F=2.056， P=0.493）。 结论:伴RS的脊柱畸形患者具有较高的术前神经损害发生率，术中出现神经电生理监测不良事件及神经损害加重的风险高于对照组，术前合并RS是脊柱矫形手术中发生神经损害的可能危险因素。

目的:原核表达淋病奈瑟球菌MetQ蛋白，采用鼻腔免疫途径初步评估MetQ蛋白的免疫保护效果。方法:利用基因重组技术构建pCold TF-metQ- E.coli BL21表达菌株，并进行MetQ蛋白的表达纯化。将6 ~ 8周龄BALB/c雌性小鼠随机分两组，每组6只，MetQ组：MetQ蛋白+霍乱毒素B亚单位（CTB）佐剂等比例混匀后对小鼠进行鼻腔滴注，10 μg/只；磷酸盐缓冲液（PBS）组：鼻腔滴注等比例、等剂量的PBS + CTB佐剂。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测MetQ组末次免疫后3只小鼠的血清及阴道分泌物中的抗体效价。免疫印迹分析MetQ在不同淋病奈瑟球菌中的表达情况。间接ELISA分析MetQ抗血清与全菌抗原的结合能力。评估MetQ抗血清对淋病奈瑟球菌的杀菌活性以及对ME-180细胞的黏附抑制作用。计量资料以 ± s表示，不同处理组间比较采用 t检验。 结果:成功表达去除信号肽的MetQ蛋白。MetQ组小鼠经鼻腔免疫后血清能检测到特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgA抗体，抗体滴度分别达1 × 10 7、1 × 10 5、2 × 10 4、1 × 10 2，阴道分泌物能检测到特异性IgG、IgA抗体，抗体滴度分别达1 × 10 3和1 × 10 2。免疫印迹结果显示，MetQ蛋白在8株淋病奈瑟球菌中均有表达。间接ELISA结果显示，MetQ抗血清与淋病奈瑟球菌全菌抗原结合能力为20。血清杀菌力实验结果显示，与无血清对照组（100%）相比，MetQ抗血清的有效杀菌滴度可达1∶320（淋病奈瑟球菌存活率：46.33% ± 6.67%， t = 8.05， P = 0.001），MetQ抗血清稀释1∶160、1∶640时，淋病奈瑟球菌存活率分别为22.01% ± 6.80%（ t = 11.47， P <0.001）、84.55% ± 6.99%（ t = 2.21， P > 0.05）。黏附抑制实验结果显示，与无血清对照组（100%）相比，MetQ抗血清稀释1∶20、1∶40、1∶80能抑制淋病奈瑟球菌对ME-180细胞的黏附作用（淋病奈瑟球菌黏附率= 17.25%、28.23%、54.51%， t = 48.44、31.88、7.29，均 P<0.05）。 结论:MetQ蛋白在不同淋病奈瑟球菌中均有表达，经鼻腔免疫小鼠后能在血清及阴道分泌物中检测到高效价的特异性抗体。MetQ抗血清与淋病奈瑟球菌有较好的亲和性，并具有较好的血清杀菌活性及抗体黏附抑制作用，是一种有潜力的淋病奈瑟球菌疫苗候选蛋白。

目的:探讨先天性结核病（congenital tuberculosis，CTB）的临床特点，提高对该病的认识。方法:回顾性分析2016年6月至2021年2月山西省儿童医院新生儿内科收治的CTB患儿临床资料，分析其临床特点、诊疗情况及预后。结果:共纳入7例CTB患儿，其中4例母亲因输卵管阻塞经体外受精胚胎移植术受孕，2例母亲确诊为输卵管结核。7例患儿中男1例，女6例；早产儿6例，足月儿1例；发病日龄中位数18 d（7~30 d）。发热7例，呼吸急促、反应差6例，呼吸暂停5例，咳嗽3例，面色苍白、双肺湿啰音各1例，肝肿大6例，脾肿大3例，淋巴结肿大1例。胸部X线检查有斑片状渗出影3例，粟粒影并渗出影2例，斑片影、双肺纹理增多模糊各1例。痰抗酸杆菌涂片声门部和深部痰标本阳性率高于口咽部标本；7例痰结核分枝杆菌DNA测定均阳性。1例经有创呼吸支持治疗1 d自动出院后死亡；2例治疗后明显好转，携氧出院后抗结核治疗1~2个月，因肺部病变重呼吸衰竭死亡；存活4例中1例治愈，3例明显好转。结论:输卵管结核不孕症妇女经体外受精胚胎移植术受孕可能是新生儿患CTB的主要原因；特异性检查首选痰抗酸杆菌涂片、痰聚合酶链反应结核分枝杆菌DNA测定；痰结核分枝杆菌及耐药基因检查可指导临床用药；声门部或深部痰标本可提高检查阳性率。

目的 探讨低频超声联合微泡(LUSMB)介导曲安奈德(TA)靶向释放在大鼠外伤性视神经病变中对视网膜神经节细胞(RGCs)的保护和再生作用.方法 选取20只SD大鼠,建立视神经钳夹损伤模型,随机均分为4组,分别标记为单纯损伤组(Control组)、药物组(TA组)、超声微泡组(MU组)、超声联合TA微泡组(TAMU组),大鼠以右眼为实验眼,左眼为空白对照组(NC组).药物及微泡混悬后通过 Tenon's囊注射,术后第1天对MU组及TAMU组实施低频超声处理.术后第14天,利用视网膜免疫荧光铺片染色计数并统计存活率,苏木精-伊红染色观察视神经病理改变,CTB标记评估视神经轴突再生情况.结果 视网膜免疫荧光铺片显示与Control组对比,所有治疗组RGCs存活率更高(P＜0.01);其中TAMU组的存活率较TA组、MU组更高(P＜0.05).HE染色病理提示TAMU组能相对减轻病理改变,减少炎症细胞向损伤部位的浸润.但CTB顺行标记显示治疗组与Control组之间再生轴突数量无明显统计学意义(P＞0.05).结论 LUSMB能促进TA在眼后段组织的靶向释放,减轻视神经损伤的炎症反应,延缓RGCs凋亡.

目的 构建口服幽门螺杆菌多价表位疫苗CTB-HapA-UreA-UreB-CagA(CTB-HUUC),并初步研究其在BABL/c小鼠体内的免疫治疗效果.方法 文献查找幽门螺杆菌相关抗原的显性表位序列 HpaA88-100、HpaA132-141、UreA27-53、UreA183-203、UreB229-251、UreB317-329、UreB321-339、UreB373-385、UreB438-452、UreB546-561、CagA149-164、CagA196-217,通过 Linker 将其串联,并在 N 端引入分子内佐剂 CTB序列,构建重组质粒 pET28a(+)/ctB-hpaA-ureA-ureB-cagA〔pET28a(+)/ctB-HUUC〕.再将重组质粒转化大肠杆菌 BL21 (DE3)中,IPTG进行诱导表达、层析纯化,获得高纯度的 CTB-HUUC 重组蛋白,并采用 Western Blot 对其进行鉴定.GM1-ELISA检测重组蛋白CTB-HUUC体外结合 GM1的能力.6周龄BABL/c小鼠,感染幽门螺杆菌1次/d,连续感染4次;末次感染后4周,灌胃CTB-HUUC重组蛋白200 μg/次,1次/周,连续免疫4次.末次免疫后2周,处死小鼠,取小鼠胃组织进行幽门螺杆菌培养计数.结果 成功获得高纯度的CTB-HUUC重组蛋白,Western blot检测CTB-HUUC可与抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)小鼠血清及鼠抗 CTB 单抗产生特异性反应.GM1-ELISA检测重组蛋白CTB-HUUC体外可结合 GM1,具有良好的佐剂活性.CTB-HUUC组小鼠胃组织进行幽门螺杆菌培养计数结果为6.14×103CFU/g、CTB组为5.72×106CFU/g、PBS组为6.70×106CFU/g.结论 口服幽门螺杆菌多价表位疫苗CTB-HUUC对感染幽门螺杆菌的BABL/c小鼠具有显著的治疗效果.

OBJECTIVE:To investigate a possible mechanism for protective effects of a decoction of the Qinggan Lishui formula (QF) on retinal ganglion cells (RGCs) in a rat model of microbead-induced chronic intraocular hypertension (COH).METHODS:The COH model was generated by injecting microbeads (superparamagnetic iron oxide) into the anterior chamber of rat eyes.QF was given by intragastric administration (gavage) once daily at a dose of 6.2 g/kg until day 28,following microbead injection.Cholera toxin B subunit (CTB) retrograde labeling and immunohistochemistry were used to evaluate changes in the number of RGCs in the retina.Terminal dUTP nick end labeling (TUNEL) staining was used to assess apoptotic changes in RGCs.RESULTS:Microbead injection induced a steady increase in intraocular pressure (lOP) of rats.Elevated lOP resulted in a progressive reduction in the number of CTB-labeled RGCs,2-4 weeks after microbead injection.QF administration may moderately reduce IOP in the rat COH model and attenuate reduction of the number of CTB-labeled RGCs in COH rats.Furthermore,elevated IOP resulted in a progressive increase in the number of TUNEL-positive RGCs,2-4 weeks after microbead injection,suggestive of an increase in the extent of RGC apoptosis.There was a significant reduction in the number of TUNEL-positive signals in QF-treated COH retinas,compared with untreated COH retinas.CONCLUSION:QF decoction may provide a protective effect for RGCs in COH retinas by reducing RGC loss;these effects may be mediated by inhibition of RGC apoptosis.

目的 构建口服重组幽门螺杆菌(H.pylori)多价疫苗CTB-HpaA-UreA-UreB-CagL(CTB-HUUL),并探究其在BABL/c小鼠体内抗H.pylori SS1感染的免疫治疗效果.方法 根据文献资料查找H.pylori相关黏附分子(HpaA、UreA、UreB)抗原的显性表位序列HpaA88-100、HpaA132-141、UreA27-53、UreA183-203、UreB229-251、UreB317-329、UreB321-339、UreB373-385、UreB438-452、UreB546-561,在其C端引入H.pylori黏附分子抗原CagL,再在其N端引入分子内黏膜佐剂CTB,通过Linker(EFM、GS、KK)将其串联,构建重组质粒pET28a(+)/CTB-HapA-UreA-UreB-CagL[pET28a(+)/CTB-HUUL].将pET28a(+)/CTB-HUUL转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达后进行蛋白层析纯化,获得疫苗靶抗原CTB-HUUL,并采用Western Blot和ELISA对其进行免疫反应性和免疫原性鉴定.6周龄BABL/c小鼠,108 CFU,1次/d,进行灌胃,连续感染4次;末次灌胃后4周,灌胃CTB-HUUL重组蛋白200 μg·次-1·周-1,连续免疫治疗4次.末次免疫治疗后2周,脱颈处死小鼠,取小鼠胃组织进行H.pylori SS1计数和病理切片HE染色.结果 获得了高纯度的CTB-HUUL蛋白,Western Blot结果显示,CTB-HUUL可以与鼠抗H.pylori SS1血清及鼠抗CTB抗体发生特异性反应;ELISA检测结果显示,CTB-HUUL体外可以与重组蛋白rHpaA、rUreA、rUreB、rCagL发生特异性反应.CTB-HUUL组小鼠胃组织H.pylori SS1培养计数结果较CTB组和PBS组低(P＜0.01),CTB-HUUL组小鼠胃组织炎症损伤程度及炎症细胞浸润程度较CTB组和PBS组轻微.结论 口服重组H.pylori多价疫苗CTB-HUUL对感染H.pylori SS1的BABL/c小鼠具有免疫治疗效果.

通过基因工程方法,将含霍乱毒素B亚单位(CTB)和前列腺特异性膜抗原(PSMA)表位肽的重组质粒pET28a-CTB-PSMA624-632,转化表达宿主菌BL21 (DE3).CTB蛋白的表达有利于开发粘膜佐剂和霍乱弧菌基因工程疫苗,同时抗原肽疫苗也是肿瘤免疫治疗的理想候选.本研究采用正交实验法,优化条件以增加大肠杆菌中CTB-PSMA624-632蛋白的表达量.选取了5个单因素作为考察因子,分别为:预诱导时间、诱导时间、诱导温度、IPTG浓度、诱导转速.先做了4水平的实验L16(45).根据极差分析的数据对影响较大的3个因素又做了细调型的3水平实验L9(33).结果表明,在早期指数生长期的诱导能得到相对高水平的包涵体形式的CTB-PSMA624-632蛋白,并且此蛋白的表达随着诱导温度升高到37℃而逐渐增加;相比于使用正常浓度的IPTG诱导得到的蛋白表达量,用100 μmol/L诱导足以诱导蛋白的表达,这比通常使用的IPTG浓度小10倍;此外,诱导时间5h与7h对蛋白的表达量差距甚微,因此选定较短时间的5h,240 r/min的诱导转速也被认为是能诱导目的蛋白CTB-PSMA624-632具有高表达量的最优条件.

目的 比较电刺激大鼠耳廓不同部位对心脏迷走神经的调节作用,并探讨电刺激耳廓引起心脏效应的初级神经机制.方法 对24只SD雄性大鼠的耳屏、耳甲、耳轮分别以不同强度(0～16 mA)和不同时间(0～15 min)进行电刺激,观察大鼠心电图中心率变化.完成电刺激后1周,将24只大鼠按随机数字表法分为耳屏注射组(n=6)、耳甲注射组(n=6)、耳轮注射组(n=6)和对照组(n=6),前3个实验组均在大鼠右侧耳廓相应部位注射2μL的Alexa Fluor 555共轭结合的霍乱毒素B亚单位(CTB-AF555),对照组在右侧耳屏处注射2μL无菌磷酸盐缓冲液(PBS).术后5 d,处死大鼠取右侧迷走神经上下神经节及整个延髓,观察CTB-AF555标记情况.结果 大鼠心率可随刺激耳屏或耳甲的强度和时间增加而下降,但不随刺激耳轮的强度和时间增加而变化.一定刺激时间下,与相同电流强度刺激耳轮比较,以12、14和16 mA刺激耳屏和10、12、14和16 mA刺激耳甲时心率明显减慢(P<0.05);与相同电流强度刺激耳屏比较,以12 mA刺激耳甲时心率明显减慢(P<0.05).一定刺激强度下,与刺激耳轮同时间点比较,在刺激耳屏6～15 min和刺激耳甲4～15 min时心率明显减慢(P<0.05);与刺激耳屏同时间点比较,刺激耳甲6～10 min时心率明显减慢(P<0.05).耳屏注射组和耳甲注射组的所有大鼠均可在迷走神经上下神经节观察到CTB-AF555示踪剂;耳屏注射组6只大鼠中3只(3/6)可在孤束核(NTS)观察到示踪剂;耳甲注射组6只大鼠中4只(4/6)可在NTS观察到示踪剂;耳轮注射组6只大鼠中5只(5/6)在脊束核观察到示踪剂,但未在NTS及上下神经节找到神经示踪剂.结论 电刺激耳甲和耳屏均可调节心脏迷走神经功能,但刺激耳轮没有此调节功能,其机制与刺激耳屏或耳甲的神经信号及心脏感觉神经信号在迷走神经下神经节整合后再进入延髓中枢分析处理有关.