目的:了解我国是否存在耐药及耐消毒剂鼠疫菌株，为鼠疫临床治疗提供准确信息。方法:收集我国1943 - 2016年分离自10处鼠疫自然疫源地的2 753株鼠疫菌，根据美国国立生物信息中心（NCBI）公布的耐氨基糖苷类链霉素基因strA、strB，耐β-内酰胺类抗菌药物基因TEM、SHV、CTX-M，耐磺胺类药物基因sul1、sul2、sul3，耐消毒剂基因qacE△1-sul1的序列信息，分别针对每个基因设计1对引物。提取2 753株鼠疫菌基因组DNA，采用PCR法对所有DNA样本进行上述9个目的基因扩增。结果:PCR检测阴性对照和阳性对照成立，2 753株鼠疫菌DNA样本均未见耐氨基糖苷类链霉素基因strA、strB，耐β-内酰胺类抗菌药物基因TEM、SHV、CTX-M，耐磺胺类药物基因sul1、sul2、sul3及耐消毒剂基因qacE△1-sul1对应的目的条带。结论:我国鼠疫菌尚未检测到上述耐药及耐消毒剂基因，但鼠疫菌耐药性的监测工作仍需持续开展。

目的:分析致血流与腹腔共同感染大肠埃希菌（CoECO）的表型和基因型特征，为经验性抗感染治疗提供线索。方法:回顾性分析2010至2020年解放军总医院第一医学中心检验科自血液和腹腔标本中分离出的大肠埃希菌菌株。使用质谱鉴定仪鉴定菌种。使用全自动细菌鉴定药敏仪测定最小抑菌浓度。采用2×150 bp双末端测序策略对大肠埃希菌进行高通量测序。基因组序列经拼接后，使用kSNP3软件对菌株序列进行单核苷酸多态性（SNP）分析，以明确菌株间的同源关系；若分离自两部位的菌株具有较高同源关系，视为同一菌株，则该病例为CoECO感染病例。使用PubMLST网站确定多位点序列型（MLST），使用CARD网站筛选耐药基因。结果:共筛选出70例CoECO感染病例，其中男45例，女25例，年龄（59.2±16.3）岁。每例CoECO感染病例选取1株大肠埃希菌进行后续分析，共计70株，分属于35种ST型，菌株数量较多的ST型包括：ST38（ n=6）、ST405（ n=6）、ST1193（ n=6）、ST131（ n=5），其他ST型所含菌株均少于5株。菌株间同源关系比较分散，整体呈现散发趋势，仅有个别菌株引起了小规模爆发。药敏结果显示：大肠埃希菌对氨苄西林的耐药率最高（91.4%，64/70），其次为氨苄西林/舒巴坦（74.3%，52/70）、头孢曲松（72.9%，51/70）、环丙沙星（71.4%，50/70）、左氧氟沙星（71.4%，50/70）；对哌拉西林/他唑巴坦、碳青霉烯类和阿米卡星保持较高敏感性。耐药基因携带数量最多的是tet（A/B）（70.0%，49/70），其次分别为bla TEM（58.6%，41/70）、sul1（55.7%，40/70）、sul2（54.3%，38/70）、bla CTX-M-14（25.7%，18/70）、bla CTX-M-15（17.1%，13/70）、bla CTX-M-55（15.7%，11/70）、bla CTX-M-64/65（5.7%，4/70）、bla CTX-M-27（4.3%，3/70）、mcr-1（4.3%，3/70）、bla NDM-5（2.9%，2/70）。 结论:CoECO整体呈散发分布，无明显优势克隆，未发现具有明显优势的基因型；菌株虽然对部分抗菌药物耐药率较高，但携带耐药基因比例较低，对部分一线抗菌药物有较高敏感性。

目的:分析2015—2019年上海市青浦区腹泻门诊病例中5种致泻性大肠埃希菌（DEC）分离株的耐药情况和多位点序列分型。方法:于2015年1月至2019年12月，采集上海市复旦大学附属中山医院青浦分院腹泻门诊病例的肛拭子样本，将经分离培养鉴定为DEC的菌株以微量肉汤稀释法测定菌株的最小抑菌浓度。根据药敏试验结果，选取对第三代头孢菌素类或碳青霉烯类等抗生素耐药，或产超广谱β-内酰胺酶的菌株进行全基因组测序。基于测序获得的MLST分型，通过BioNumerics 7.6软件构建最小生成树，分析当地优势菌群。结果:从4 494份肛拭样本中共分离出513株DEC，检出率为11.42%；完成其中500株对4类9种抗生素的抗生素药物敏感性试验，分别为330株产毒性大肠埃希菌（ETEC）、72株黏附性大肠埃希菌（EAEC）、95株致病性大肠埃希菌（EPEC）、1株出血性大肠埃希菌（EHEC）和2株侵袭性大肠埃希菌（EIEC）。2015—2019年不同年份间对头孢噻肟-克拉维酸的耐药检出率差异有统计学意义（ P<0.05）；各毒力分型DEC对萘啶酸的耐药检出率差异有统计学意义（ P<0.05）。71株DEC的全基因组测序结果显示，共检测到77种耐药基因，并被归类为32个ST分型，优势基因型为ST-1491（29.6%，21/71）和ST-10 Complex（23.9%，17/71）。其中，ST-1491全部产ESBLs，均为 bla CTX-M耐药基因突变株，ST-10 Complex优势基因型为ST-218（35.3%，6/17）。8株EAEC、14株EPEC和49株ETEC分别被归类为7个、14个和18个ST分型。 结论:上海市青浦区腹泻门诊病例的DEC对重点药物的耐药情况较严重；EAEC和EPEC的ST分型呈高度多样性，当地优势ST型与国内东南地区的常见基因型基本一致。

目的:了解门诊疑似尿路感染患者中段尿病原菌的分布，分离的优势菌株大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶（ESBL）基因型及携带率。方法:收集2017—2019年绍兴市中心医院医共体钱清分院疑似尿路感染患者中段尿样本，并对其进行培养、分离，采用VITEK 2全自动微生物鉴定仪鉴定病原菌。纸片扩散法进行药敏试验，双纸片协同试验测定大肠埃希菌产ESBL情况，PCR检测ESBL基因型及其携率。结果:1 529例患者送检中段尿病原菌阳性392例，阳性率为25.6%。分离到病原菌424株，革兰阴性菌、阳性菌和真菌分别占70.3%、22.4%和7.3%。大肠埃希菌最常见有226株，其中44.7%（101株）产ELBL，产ESBL菌株CTX-M型和TEM型基因携带率分别为87.1%和70.3%。除亚胺培南和美罗培南，产ESBL大肠埃希菌对其余18种抗生素的耐药率明显高于非产ESBL菌株。结论:大肠埃希菌是本地区门诊尿路感染常见病原菌，其产ESBL率高、CTX-M和TEM为主要携带基因型，亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和阿米卡星对大肠埃希菌敏感。

目的:研究1株不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制。方法:回顾性研究，2016年7月临床分离的1株耐碳青霉烯类不动杆菌属，用Vitek2-compact分析仪进行细菌鉴定和药敏试验，并分别检测bla OXA-51-like基因、16S-23S rRNA基因间隔区序列和RNA聚合酶亚基基因（rpoB），以确定菌株型别。PCR扩增检测碳青霉烯酶基因（NDM、KPC、VIM、IMP、SIM、SPM、GIM、OXA-23-like、OXA-24-like、OXA-58-like）、16S rRNA甲基化酶（armA、rmtA、rmtB)、β内酰胺酶（TEM、SHV、CTX-M、VEB、PER）以及一类整合子；另用Southern杂交方法检测耐药菌株质粒情况。 结果:通过基因分析，证实此菌为 Acinetobacter baylyi，并且仅携带NDM-1型碳青霉烯酶，其他相关耐药基因均为阴性结果。质粒分析发现bla NDM-1位于约54 000~60 000 bp不可接合质粒上。 结论:应注重耐碳青霉烯类非鲍曼不动杆菌的出现及其耐药基因的传播机制。

目的:分析安徽省腹泻病例粪便及肛拭子标本中所分离沙门菌的耐药谱及耐药基因型。方法:选取分离自2017年4—10月安徽省腹泻病例粪便及肛拭子标本的149株沙门菌，采用玻片凝集法鉴定沙门菌血清型，采用微量肉汤稀释法测定所有菌株对14种抗生素药物的敏感性。选取其中耐头孢类抗生素的菌株，采用多重PCR方法对β-内酰胺酶编码基因 bla TEM、 bla SHⅤ、 blaOXA-1 、 blaOXA-2 、 bla PER、 bla CMY、 bla CTX-M，以及黏菌素耐药基因 mcr-1和 mcr-2进行检测。 结果:腹泻病例年龄 M（ P25， P75）为5.0（1.1，38.5）岁，男性为92例，≤12岁病例占54.4%（81例）。149株沙门菌中，105株对除亚胺培南以外的其他13种抗生素均具有不同程度的耐药性，其中，对氨苄西林的耐药率最高，为55.0%（82株），53.0%（79株）的菌株同时对≥3类抗生素耐药（多重耐药），主要为鼠伤寒沙门菌（83.6%，46/55）和肠炎沙门菌（71.4%，20/28）。共检出53种耐药谱，最常见耐药谱为氨苄西林-氨苄西林/舒巴坦-四环素-氯霉素-头孢唑啉-甲氧苄啶/磺胺甲噁唑，共10株。60株耐头孢类抗生素菌株中，45株携带 bla TEM- 1基因的菌株，其中6株同时携带 blaCTX-M-14 基因，3株同时携带 blaCTX-M-65 基因；32株单独携带 blaTEM-1 耐药基因，且均对氨苄西林产生耐药性，其中31株对头孢唑啉产生了耐药性；2株未检出耐药基因。检出1株携带 mcr-1基因的多重耐药菌。 结论:安徽省沙门菌对氨苄西林耐药现象较严重，且多重耐药菌株较多； blaTEM-1 型基因是检出的主要耐药基因；检出 mcr-1基因提示应关注安徽省沙门菌多黏菌素耐药情况。

探讨 ppk1基因缺失对产超广谱β-内酰胺酶尿路感染大肠埃希菌（ESBLs-UPEC）药物敏感性的影响及其作用机制。本课题为实验性研究，2021年3至4月期间从广州医科大学附属市八医院检验科临床尿路感染患者尿液标本中分离1株产超广谱β-内酰胺酶（耐药基因型为TEM合并CTX-M-14型）的大肠埃希菌，命名为UE210113，并采用自杀质粒同源重组技术构建 ppk1基因敲除株Δpk1并同时构建回补株Δpk1-C，用于开展研究 ppk1基因对ESBLs-UPEC药物敏感性的影响及作用机制。使用Vitek2 Compact和微量肉汤稀释法分别检测UE210113、Δpk1 及Δpk1-C对抗菌药物的敏感性；同时采用实时荧光定量PCR法对UE210113、Δpk1 及Δpk1-C的 ESBLs、外膜蛋白以及主动外排系统基因进行定量分析。通过两独立样本秩和检验，药物敏感性实验结果显示，与UE210113相比，Δpk1对头孢他啶、头孢吡肟、妥布霉素、米诺环素和复方新诺明的敏感性增强（ Z=-2.121， P<0.05； Z=-2.236， P<0.05； Z=-2.236， P<0.05； Z=-2.121， P<0.05），Δpk1-C的药敏性恢复与UE210113一致（ Z=0， P>0.05）；实时荧光定量PCR法检测耐药性相关基因的结果显示，Δpk1 中编码ESBLs基因 blaTEM和 blaCTX-M-14 表达量较UE210113明显下调，但在Δpk1-C未恢复表达；外膜蛋白基因 omp F在Δpk1中的表达明显上调而 omp A、omp C则表达下调，主动外排系统基因 tol C、mdt A和 mdt G在Δpk1中的表达相对下调，外膜蛋白和主动外排系统基因在Δpk1-C均能恢复表达。综上， ppk1基因的缺失影响了ESBLs-UPEC的外膜蛋白基因和主动外排系统蛋白基因的表达，使ESBLs-UPEC对多种药物的敏感性提高。

目的:探讨泌尿外科住院患者中耐头孢他啶大肠埃希菌的流行病学特点及危险影响因素。方法:收集2017年1月到2020年12月本院泌尿外科送检分离培养的非重复大肠埃希菌共406株。根据大肠埃希菌是否对头孢他啶耐药分为耐药组(109例)和敏感组(297例)。使用Vitek 2 Compact对菌株进行药敏测定，采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法完成细菌同源性分型分析，并使用PCR方法完成耐药基因检测，统计病例资料并进行危险影响因素分析。结果:泌尿外科住院患者中大肠埃希菌对头孢他啶的耐药率为26.8%(109/406)，主要来源于尿液标本(占89.2%)；耐药组细菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢曲松、氨曲南和环丙沙星等呈现出高的耐药率，且耐药组对所有抗生素的耐药率均高于敏感组(均 P<0.05)。PFGE同源性分析结果显示29株耐头孢他啶大肠埃希菌呈现出不同条带。PCR结果显示耐头孢他啶大肠埃希菌携带blaCTX-M有73株(占67.0%)，携带blaTEM有48株(占44.0%)，携带blaSHV有11株(占10.1%)。多因素logistic回归分析结果显示前列腺疾病( OR＝2.03， P＝0.017)、尿路感染( OR＝2.43， P＝0.001) 、导尿管( OR＝1.88， P＝0.014)和头孢菌素使用史( OR＝1.67， P＝0.035)是耐头孢他啶大肠埃希菌感染的独立危险因素。 结论:泌尿外科耐头孢他啶大肠埃希菌的检出率较高，ESBLs基因以CTX-M基因型为主要流行型别。前列腺疾病、尿路感染、导尿管和头孢菌素使用史是耐头孢他啶大肠埃希菌感染的独立危险因素。因此，临床建议结合耐头孢他啶大肠埃希菌的流行病学特征和药敏谱，合理使用抗生素，减少不必要的侵入性操作，从而预防和控制该类细菌的出现。

目的 评估基于PCR扩增荧光探针捕获技术的iCubate-iC血培养快速检测系统与血培养传统鉴定药敏结果的一致性.方法 本次评估入组了首都医科大学附属北京朝阳医院2017年11月 26 日至 2018 年 4 月 18 日的 121 例临床血液细菌培养阳性标本.以临床常规培养鉴定结果及体外药敏结果为参考方法,验证iCubate-iC系统鉴定结果及耐药位点检出的一致性.结果 对比MALDI-TOF质谱鉴定结果,iCubate-iC系统鉴定符合率达到95.9%(116/121).有4例假阴性结果,所有靶标显示"未检出".iCubate-iC系统成功检出1例金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的混合样本,而1例大肠埃希菌和铜绿假单胞菌复合样本漏检了铜绿假单胞菌.iC-GPC检出的31例葡萄球菌中,有18例检出了mecA基因,其中有1例表皮葡萄球菌检出mecA,但其体外药敏结果显示对头孢西丁敏感.肠球菌中有1例检出vanA基因,但万古霉素体外药敏检测敏感.CTX-M group1基因检测与β内酰胺类药物的吻合性不理想,但革兰氏阴性菌碳青霉烯酶基因(KPC、NDM)检测结果与碳青霉烯类药物的药敏结果能够完全吻合.结论 iCubate-iC检测系统对于临床常见引起血流感染细菌的检测结果可靠,且具有快速简便的优点,为引起血流感染细菌的快速诊断提供了有力工具.

目的 调查分析大肠埃希菌血流感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)株分子流行机制,阐明不同耐药基因介导的耐药情况.方法 收集惠州市第三人民医院2019年1月至2022年12月期间血流感染住院患者中分离的ESBLs阳性大肠埃希菌株50例,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增法检测菌株耐药基因表达情况,并选取部分扩增阳性产物外送测序,分析其基因亚型及对应耐药性.结果 50株ESBLs阳性大肠埃希菌株中有45株菌携带有blaCTX-M基因,占比90.00％(45/50),30株菌携带有blaTEM基因,占60.00％(30/50);CTX-M基因中16株为CTX-M-1亚群,占35.56％(16/45),29株为CTX-M-9亚群,占64.4％(29/45).未检出blaSHV基因.经测序,CTX-M-1亚群以CTX-M-15为主,CTX-M-9亚群以CTX-M-14亚型为主.CTX-M-9组菌株头孢他啶及头孢吡肟耐药率低于CTX-M-1组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 惠州地区ESBLss阳性大肠埃希菌株耐药基因以CTX-M型为主,且以CTX-M-9亚群为主要类型,而CTX-M-9亚群以CTX-M-14亚型为主,CTX-M-14亚型对头孢他啶和头孢吡肟耐药率低于CTX-M-1亚群及CTX-M-15亚型.