目的:探讨CRL4B复合物在胰腺癌发生发展中的作用及其分子机制。方法:将胰腺癌细胞分为对照组(转染阴性对照慢病毒)、shCUL4B组(转染CUL4B慢病毒)、shDDB1组[转染DNA损伤结合蛋白1(DDB1)慢病毒]和shCUL4B+siSFRP1组[转染CUL4B慢病毒+分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)-siRNA]。对敲低CUL4B和DDB1的胰腺癌细胞系进行RNA测序(RNA-seq)，寻找CRL4B复合物调控的靶基因，采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测靶基因mRNA的表达，染色质免疫共沉淀(ChIP)-PCR实验鉴定CRL4B复合物直接调控的靶基因，Western blot法检测上皮-间充质转化(EMT)标志物蛋白的表达水平，EdU细胞增殖实验检测细胞增殖能力，划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用GEO、TCGA和GTEx数据库中胰腺癌相关肿瘤样本和正常组织样本的测序数据，分析CUL4B、DDB1和其下游靶基因的表达相关性。结果:RNA-seq结果显示，CRL4B复合物调控的靶基因涉及多种恶性肿瘤相关信号通路。qRT-PCR检测结果显示，shCUL4B和shDDB1组待验证靶基因的mRNA表达水平均高于对照组，差异有统计学意义(均 P<0.05)。ChIP-PCR实验结果显示，CRL4B复合物直接结合在NME1和SFRP1靶基因启动子区，敲低CUL4B的表达后，靶基因启动子区域组蛋白H2A第119位赖氨酸单泛素化富集减少。对照组PANC-1细胞增殖率为(32.10±3.58)%，高于shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(13.95±1.66)%和(22.38±0.77)%，均 P<0.05]；对照组AsPC-1细胞增殖率为(35.47±7.80)%，高于shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(19.60±3.58)%和(30.09±0.81)%，均 P<0.05]。细胞划痕实验显示，对照组PANC-1细胞迁移率为(53.18±3.70)%，高于shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(17.46±2.62)%和(44.99±9.18)%，均 P<0.05]。Western blot结果显示，对照组细胞上皮标志物α-catenin和γ-catenin的表达分别为1.00±0.03和1.01±0.11)，低于shCUL4B组(分别为1.44±0.01和1.21±0.06，均 P<0.05)，对照组细胞间充质标志物Fibronectin和Vimentin表达水平分别为1.01±0.14和1.02±0.18，高于shCUL4B+siSFRP1组(分别为1.53±0.13和1.22±0.07，均 P<0.05)。对照组细胞的迁移率为(100.00±3.96)%，与shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(35.49±0.34)%和(107.06±2.77)%]比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。CUL4B和DDB1在胰腺癌中表达升高，且与SFRP1的表达呈负相关( r分别为-0.342和-0.264)。 结论:胰腺癌中CRL4B复合物转录抑制靶基因SFRP1进而促进胰腺癌的发生发展，且CRL4B复合物在胰腺癌中的高表达支持了其作为胰腺癌治疗的潜在靶点。

目的:分析3M综合征的临床特征及用生长激素治疗的效果。方法:回顾性分析2014年1月至2022年2月在湖南省儿童医院经全外显子组测序确诊的3M综合征患儿的临床表现、基因测序结果及生长激素治疗情况，并系统回顾相关文献。结果:4例患儿均存在严重的生长落后、特殊面容和骨骼异常。基因检测提示2例患儿存在 CUL7基因纯合变异，分别为c.4717C>T(p.R1573*)和c.967_993delins CAGCTGG(p.S323Qfs*33)，2例患儿携带 OBSL1基因杂合变异，分别为c.1118G>A(p.W373*)、c.458dupG(p.L154Pfs*1002)和c.690dupC(p.E231Rfs*23)，其中c.967_993delinsCAGCTGG和c.1118G>A既往未见报道。文献复习共纳入18例中国3M综合征患儿，其中 CUL7基因变异者11例(11/18，61.1%)， OBSL1基因变异者7例(7/18，38.9%)，未发现 CDCC8基因变异者。患儿的男女比例为1∶ 1，主要临床表现与文献报道一致。4例患者接受了生长激素治疗，其中3人治疗后有明显生长加速，均未发生不良反应。 结论:3M综合征具有典型的外貌特征，同时伴有显著的身材矮小。临床对于身高在-3 s以下且伴有特殊面容的儿童应进行基因检测。生长激素治疗对3M综合征患者的远期有效性尚待进一步的观察。

目的:探讨表皮生长因子受体（EGFR）基因敏感突变的非小细胞肺癌（NSCLC）患者吉非替尼耐药前后血浆中长链非编码RNA（lncRNA）和mRNA表达谱的变化，筛选耐药相关RNA分子。方法:选择2015年3月至2019年4月陕西省咸阳市中心医院及重庆医科大学附属永川医院收治的经吉非替尼治疗的EGFR基因敏感突变NSCLC患者12例，收集出现耐药前后的血浆，选取敏感阶段和耐药阶段各6份样本。运用基因芯片检测筛查出差异表达的lncRNA和mRNA，采用基因本体（GO）功能注释和京都基因与基因组数据库（KEGG）通路富集分析，得到差异表达mRNA参与的生物学途径。结果:芯片检测结果显示，NSCLC患者血浆lncRNA和mRNA表达谱在吉非替尼耐药前后存在差异。以差异倍数≥2、 P<0.05作为差异基因筛选标准，存在38个差异表达的lncRNA和53个差异表达的mRNA。相对于药物敏感阶段，耐药阶段患者血浆中表达上调的lncRNA 18个，上调倍数最大的lncRNA为RP1-102K2.6（差异倍数为47.31）；表达下调的lncRNA 20个，下调倍数最大者为RP11-149I2.4（差异倍数为24.34）。在mRNA表达谱芯片中，相对于药物敏感阶段，耐药阶段患者血浆中表达上调的mRNA 29个，上调倍数最大的mRNA为CUL2（差异倍数为58.49）；表达下调的mRNA有24个，下调倍数最大者为CHEK2（差异倍数为23.29）。GO功能分析显示吉非替尼发生耐药后血浆中差异表达的mRNA的作用富集在凋亡和蛋白结合过程调控等，KEGG分析显示差异表达的mRNA的作用靶点多集中于癌症通路、NSCLC通路等。 结论:EGFR基因敏感突变的NSCLC患者吉非替尼耐药前后血浆中存在多个差异表达的lncRNA和mRNA，其差异表达可能在吉非替尼耐药机制中发挥重要作用。

目的 旨在探讨PRDX1对脂多糖诱导的小胶质细胞BV2神经炎症损伤的作用及潜在机制.方法 对于PRDX1 shRNA慢病毒感染实验,BV2细胞分为:对照组(BV2细胞进行正常培养),脂多糖处理组,NC shRNA慢病毒感染组(细胞经NC shRNA慢病毒感染48h后,用脂多糖处理24h组),PRDX1 shRNA慢病毒感染组(细胞经PRDX1 shRNA慢病毒感染48h后,用脂多糖处理24h组).对于TLR4过表达实验,在慢病毒感染实验的基础上增加TLR4过表达组(细胞经PRDX1 shR-NA慢病毒感染及TLR4过表达慢病毒感染48h后,用脂多糖处理24 h).RT-qPCR和Western blot分别用于检测mRNA和蛋白表达水平;采用ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子TNF-α和IL-6的分泌水平;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 ELISA检测结果显示,与脂多糖处理的BV2细胞相比,PRDX1 shRNA慢病毒感染组TNF-α和IL-6的含量均显著减少(P<0.01).RT-qPCR结果表明,TNF-α和IL-6的mRNA表达水平和ELISA检测结果趋势一致.MTT法检测结果表明,与对照组相比,脂多糖处理组BV2细胞活力显著降低;而与脂多糖处理组相比,PRDX1 shRNA慢病毒感染组细胞活力明显升高.流式细胞术检测结果表明,与对照组相比,脂多糖处理组BV2细胞凋亡率明显增加,而与脂多糖处理组相比,PRDX1 shRNA慢病毒感染组细胞凋亡率明显减少.Western blot结果显示,与对照组细胞相比,脂多糖处理组BV2细胞中TLR4表达显著上调(P<0.05);而与脂多糖处理组BV2细胞相比,PRDX1 shRNA慢病毒感染显著抑制脂多糖诱导的TLR4表达(P<0.05).与PRDX1 shRNA慢病毒感染组相比,TLR4过表达组BV2细胞中炎症因子TNF-α及IL-6水平显著升高(P<0.05),细胞活力水平降低(P<0.05),且细胞凋亡水平显著升高(P<0.05).结论 沉默PRDX1明显促进脂多糖刺激BV2细胞活力,抑制脂多糖诱导的凋亡及炎症应答反应,其可能是通过正向调控TLR4来实现的.阐明PRDX1/TLR4信号轴在脂多糖诱导的BV2细胞损伤的重要作用,可能成为一个有前景的SCI潜在治疗靶点.

目的 探究枸杞多糖(LBP)通过调控细胞铁死亡对胆囊癌细胞(NOZ和SGC-996)增殖和转移的影响.方法 不同剂量的LBP处理体外培养NOZ和SGC-996细胞;将细胞分为对照组(Control)、20 μmol/L LBP组、40 μmol/L LBP组、60 μmol/L LBP组、80 μmol/L LBP组、LBP+Fer-1组.用MTT法检测细胞活力;EdU法检测细胞增殖能力;Tran-swell检测细胞侵袭能力;比色法检测Fe2+的水平,BODIPYTM 581/591 C11分子探针测定活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的水平;Western blot检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)酰基辅酶a合成酶长链家族成员4(ACSL4)、β-catenin和Wnt3A蛋白表达.结果 与对照组比较,40 μmol/L LBP组、60 μmol/L LBP组细胞活力、增殖、侵袭能力显著降低(均P＜0.05),Fe2+水平、ROS、MDA活性明显增加(均P＜0.05),GPX4、β-catenin和Wnt3A蛋白表达显著减少,ACSL4蛋白表达明显增加(均P＜0.05).与LBP组比较,LBP+Fer-1组细胞活力、增殖、侵袭能力显著提高(均P＜0.05).结论 LBP通过诱导胆囊癌细胞铁死亡进而抑制其细胞的增殖和转移.

目的 研究Cullin 4A(CUL4A)在脑胶质瘤的表达情况与临床意义,并探讨其与β-catenin表达的相关性.方法 收集78例脑胶质瘤标本,其中星形细胞瘤Ⅱ级27例、Ⅲ级29例和胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)22例,均为原发性脑胶质瘤,术前均未接受放化疗等相关性治疗.5例高血压脑出血患者术中减压时正常脑组织作为对照标本.运用免疫组化法检测CUL4A和β-catenin两种蛋白的表达,并运用统计学方法分析二者相关性.结果 在78例脑胶质瘤标本中,CUL4A蛋白阳性表达50例(64.1%),β-catenin蛋白阳性表达61例(78.2%).CUL4A和β-catenin阳性表达与脑胶质瘤恶性程度具有相关性,而在正常脑组织标本中不表达.CUL4A表达与β-catenin表达呈正相关.结论 CUL4A蛋白在脑胶质瘤组织出现高表达,与β-catenin蛋白表达呈正相关,这为了解胶质瘤的疾病发展提供依据.

目的 探讨自噬相关基因5(ATG5)在人恶性胸膜间皮瘤(MPM)细胞和组织中的表达情况,分析ATG5与MPM患者临床病理参数和预后的相关性.方法 实时定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting检测正常人胸膜间皮细胞和MPM细胞、非MPM胸膜间皮组织和MPM组织中ATG5的表达差异.应用TCGA数据库分析ATG5与MPM患者临床病理特征和预后的相关性.构建Cox回归模型,分析影响MPM患者预后的因素.GEPIA数据库评估ATG5与MPM肿瘤标志物和新型血清标志物的相关性.TIMER数据库分析ATG5与MPM免疫细胞浸润和关键免疫调节基因的相关性.结果 ATG5在MPM细胞和组织中显著高表达,且与MPM患者的肿瘤分期呈正相关(P<0.05).生存分析显示,ATG5高表达组MPM患者的预后更差,肿瘤病理类型可能是患者预后不良的危险因素(P<0.05).ATG5与多种MPM肿瘤标志物(MTAP、SETD2、NF2、FIB3)和新型血清标志物(HMGB1、SMPR、THBS2、KRAS)显著相关(P<0.05).ATG5表达与MPM中免疫细胞浸润(B细胞、CD4+T细胞和巨噬细胞)和免疫相关基因(CD28、CUL48B、CD166、MMP14)呈显著正相关(P<0.05).结论 ATG5在MPM中表达上调,且与患者不良预后和免疫浸润水平相关,有望成为MPM早期筛查、诊断和预后评估的重要生物标志物.

目的 精子发生过程复杂,需要睾丸内细胞之间复杂的相互作用,但是支持细胞参与精子发生的机制仍有待探讨.方法 从高通量基因表达数据库(GEO:GSE113293),收集了正常精子发生的野生型C57BL/6J雄性小鼠和4 种不同突变小鼠(敲除Mlh3、Hormad1、Cul4a;Cnp转基因)的单细胞RNA测序数据,进而对支持细胞差异基因进行基因功能富集分析(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集通路分析、蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络分析、转录因子调控分析(SCENIC)及基因集变异分析(GSVA).结果 本研究鉴定出 9 种生精细胞亚群(未分化精原细胞、分化精原细胞、细线期/偶线期、粗线期、双线期、圆形精子细胞、长形精子细胞及精子)、2 种体细胞群(间质细胞和支持细胞)和1 种未知类型的细胞群.与正常精子发生模型相比,小鼠精子发生缺陷模型的支持细胞有276 个基因表达上调,234 个基因表达下调.GO功能富集分析显示,支持细胞的差异基因在精子发生及能量代谢等过程中显著富集.KEGG富集分析显示,支持细胞在核糖体、糖酵解、氧化磷酸化等途径显著富集.PPI网络分析鉴定出20 个hub基因,均属于核糖体基因.GSVA分析显示支持细胞中上调的基因与Notch信号通路密切相关.结论 支持细胞相关的的hub基因及Notch信号通路参与精子发生的过程,本研究为精子发生障碍导致不育症提供新的视角.

为了解花斑副沙鳅Parabotia fasciata的种质资源现状,基于cyt b基因序列比较分析了长江水系4个野生群体和5个养殖群体的遗传多样性水平.结果显示,208个样本共检测到29个单倍型,38个多态位点.群体总体单倍型多态性较高(Hd=0.711),核苷酸多态性较低(Pi=0.002 35),但野生群体(Hd=0.602,Pi=0.003 74)的遗传多样性显著大于养殖群体(Hd=0.381,Pi=0.000 91),说明养殖群体需要增加亲本资源.中性检验、错配分布和贝叶斯天际图结果表明,野生群体在历史上经历了种群扩张.赤水群体的单倍型最多,遗传多样性最高(Hd=0.836,Pi=0.008 99),与其他群体遗传距离大,说明赤水河的花斑副沙鳅资源较丰富,且已形成相对独立、稳定的地理种群,种质优良,适合用作人工繁殖和新品系创制的种源.

目的 探讨柴朴汤对哮喘小鼠支气管上皮细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)及下游炎症介质单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)的影响.方法 将小鼠支气管上皮细胞分为对照组(Con组,空白血清培养)、Model组(哮喘小鼠血清培养)和Chaipu组(柴朴汤药血清培养).采用qRT-PCR和Western blotting检测小鼠支气管上皮细胞中HMGB1、TLR4、NF-κB、MCP-1、IL-6的mRNA及蛋白表达情况,ELISA法测定细胞培养液中MCP-1和IL-6的水平.结果 与Con组相比,Model组小鼠支气管上皮细胞HMGB1、TLR4、NF-κB、MCP-1、IL-6表达均明显升高(P＜0.05);Model组细胞培养液中MCP-1、IL-6也显著升高(P＜0.05).与Model组相比,Chaipu组小鼠支气管上皮细胞HMGB1、TLR4、MCP-1、IL-6 mRNA和蛋白表达降低,NF-κB mRNA表达亦降低(P＜0.05);Chaipu组细胞培养液中MCP-1、IL-6也显著降低(P＜0.05).结论 柴朴汤可下调哮喘血清诱导的炎症因子的表达,可能与其抑制HMGB1/TLR4/NF-KB炎症通路有关.