目的:探讨CRL4B复合物在胰腺癌发生发展中的作用及其分子机制。方法:将胰腺癌细胞分为对照组(转染阴性对照慢病毒)、shCUL4B组(转染CUL4B慢病毒)、shDDB1组[转染DNA损伤结合蛋白1(DDB1)慢病毒]和shCUL4B+siSFRP1组[转染CUL4B慢病毒+分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)-siRNA]。对敲低CUL4B和DDB1的胰腺癌细胞系进行RNA测序(RNA-seq)，寻找CRL4B复合物调控的靶基因，采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测靶基因mRNA的表达，染色质免疫共沉淀(ChIP)-PCR实验鉴定CRL4B复合物直接调控的靶基因，Western blot法检测上皮-间充质转化(EMT)标志物蛋白的表达水平，EdU细胞增殖实验检测细胞增殖能力，划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用GEO、TCGA和GTEx数据库中胰腺癌相关肿瘤样本和正常组织样本的测序数据，分析CUL4B、DDB1和其下游靶基因的表达相关性。结果:RNA-seq结果显示，CRL4B复合物调控的靶基因涉及多种恶性肿瘤相关信号通路。qRT-PCR检测结果显示，shCUL4B和shDDB1组待验证靶基因的mRNA表达水平均高于对照组，差异有统计学意义(均 P<0.05)。ChIP-PCR实验结果显示，CRL4B复合物直接结合在NME1和SFRP1靶基因启动子区，敲低CUL4B的表达后，靶基因启动子区域组蛋白H2A第119位赖氨酸单泛素化富集减少。对照组PANC-1细胞增殖率为(32.10±3.58)%，高于shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(13.95±1.66)%和(22.38±0.77)%，均 P<0.05]；对照组AsPC-1细胞增殖率为(35.47±7.80)%，高于shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(19.60±3.58)%和(30.09±0.81)%，均 P<0.05]。细胞划痕实验显示，对照组PANC-1细胞迁移率为(53.18±3.70)%，高于shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(17.46±2.62)%和(44.99±9.18)%，均 P<0.05]。Western blot结果显示，对照组细胞上皮标志物α-catenin和γ-catenin的表达分别为1.00±0.03和1.01±0.11)，低于shCUL4B组(分别为1.44±0.01和1.21±0.06，均 P<0.05)，对照组细胞间充质标志物Fibronectin和Vimentin表达水平分别为1.01±0.14和1.02±0.18，高于shCUL4B+siSFRP1组(分别为1.53±0.13和1.22±0.07，均 P<0.05)。对照组细胞的迁移率为(100.00±3.96)%，与shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(35.49±0.34)%和(107.06±2.77)%]比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。CUL4B和DDB1在胰腺癌中表达升高，且与SFRP1的表达呈负相关( r分别为-0.342和-0.264)。 结论:胰腺癌中CRL4B复合物转录抑制靶基因SFRP1进而促进胰腺癌的发生发展，且CRL4B复合物在胰腺癌中的高表达支持了其作为胰腺癌治疗的潜在靶点。

目的 研究别旁茶苷对LPS诱导CRL-1790细胞释放炎症因子的影响,初步探讨其作用机制.方法 应用MTT法检测别旁茶苷对细胞活性的影响,以别旁茶苷提前干预细胞后加入LPS诱导细胞发生炎症反应,采用ELISA法检测IL-1、IL-8和TNF-α的分泌,Westem blot法检测NF-κB p65及PXR的蛋白表达水平,RT-PCR法检测代谢酶CYP3A4和CYP1A2的mRNA相对表达水平.结果 10μmol/L、20μmol/L和40 μmol/L的别旁茶苷对细胞活性无显著影响,确定为实验浓度;与正常对照组比较,LPS可显著刺激细胞分泌IL-8,但对IL-1和TNF-α的分泌无显著影响;与LPS诱导组比较,别旁茶苷显著抑制IL-8的分泌和NF-κB p65的蛋白表达水平,显著提高PXR的蛋白表达水平及CYP3A4和CYP1A2的mRNA表达水平.结论 别旁茶苷对CRL-1790细胞具有显著的抗炎作用,其可能机制是通过上调PXR的表达,抑制NF-κB p65的表达从而减少IL-8的分泌,并上调代谢酶CYP3A4、CYP1A2的表达从而保护肠黏膜.

目的 探讨胚胎移植14 d β-HCG值结合胚胎移植30d阴道彩超测量孕囊平均直径(MSD)与胚胎头臀长(CRL)的比值对早期流产的预测价值.方法 分析2015年12月～2016年12月IVF/ICSI单胎妊娠共1 134周期,按胚胎移植14 d血β-HCG值分为:①≤610 IU/L(174个周期);②610～1 340 IU/L(249个周期);③1 340 ～2 200 IU/L(262个周期);④＞2 200 IU/L(449个周期)4组,并将各组中满足MSD/CRL≥5为A组,MSD/CRL＜5为B组,对不同β-HCG组段中A组和B组孕妇胚胎存活和流产的情况进行分析.结果 1 134个周期中A组总的早期胚胎流产率(84.92％)高于B组(12.00％),差异有统计学意义(P＜0.001);4组组内分别对A组和B组孕妇早期流产的情况进行比较,差异均有统计学意义(P ＜0.001).结论 胚胎移植14 dβ-HCG值结合胚胎移植30 d阴道超声测MSD/CRL对IVF/ICSI-ET孕早期结局有预测价值,可以作为识别胚胎早期流产的临界指标.此结果对临床是否需要继续保胎治疗有较高价值.

目的 探讨氧化应激诱导的内皮细胞钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)激活在动脉粥样硬化中的作用及机制.方法 体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)CRL-1730,实验分4组:对照组、H2O2组、H2O2+KN93组和H2O2+KN92组,测定各组ROS水平、细胞活力、迁移能力、黏附能力,评价内皮细胞功能;RT-PCR测定notch-1、NF-κB、血管黏附分子1(VCAM-1)表达水平;Western Blotting测定CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、ox-CaMKⅡ、notch-1、NF-κB-p65、VCAM-1蛋白表达水平.取30只8周龄雄性ApoE(-/-)小鼠,随机分成3组:高脂组(n=10),高脂饮食且腹腔注射DMSO;高脂+KN93组(n=10),高脂饮食且腹腔注射KN93(10 mg-1·kg-1·d-1);高脂+KN92组(n=10),高脂饮食且腹腔注射KN92(10 mg-1·kg-1·d-1).记录各组体质量及血脂水平,进行主动脉根部HE染色,主动脉大体油红O染色,比较各组主动脉根部的斑块面积及主动脉脂质沉积.结果 与H2O2组、H2O2+KN92组比较,H2O2+KN93组内皮细胞活力、迁移能力、黏附能力均有改善(P<0.05);RT-qRCR结果显示,H2O2+KN93组notch-1和VCAM-1 mRNA水平下调(P<0.05);Western Blotting结果显示,KN93处理明显降低了ox-CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、notch-1、NF-κB-p65、VCAM-1蛋白表达水平(P<0.05).DAPT抑制notch-1未影响CaMKⅡ、ox-CaMKⅡ、p-CaMKⅡ蛋白表达.KN93处理后的ApoE-/-小鼠主动脉根部的斑块面积(25.15±1.04)%及主动脉脂质沉积(12.70±0.89)%较对照组[(41.60±1.05)%、(25.28±1.77)%]和KN92组[(41.83±1.17)%、(25.57±0.78)%]明显减少,而各组之间小鼠体质量及血脂水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 KN93能通过CaMKⅡ/notch-1/NF-κB-p65/VCAM-1减弱内皮细胞功能紊乱,延缓动脉粥样硬化的发生发展.

目的 探讨经阴道超声(TVS)对体外受精—胚胎移植(IVF-ET)及冻融胚胎移植(FET)后早期妊娠的诊断价值,探讨孕早期准确评价胚胎发育状况的最佳检查时机和检查方法.方法 回顾性分析2015年4月行IVF-ET后妊娠的71例患者及FET后妊娠的99例患者的临床资料,前者根据妊娠结局分为IVF-ET活产组(A组)、IVF-ET早期流产组(B组)和IVF-ET中晚孕不良妊娠组(C组),后者根据妊娠结局分为FET活产组(D组)、FET早期流产组(E组)和FET中晚孕不良妊娠组(F组),分析各组患者胚胎移植(ET)后4～6周的TVS检查资料,分别比较IVF-ET各组、FET各组的卵黄囊显示率、原始心管搏动显示率、妊娠囊平均内径(GSD)、头臀长(CRL)及绒毛膜下血肿(绒毛膜下血肿)情况.结果 B组ET后4周卵黄囊显示率、原始心管搏动显示率均低于A组及C组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).E组ET后4周卵黄囊显示率、原始心管搏动显示率均低于D组及F组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).B组ET后4周、6周的GSD、CRL均小于A组及C组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).E组ET后4周GSD、CRL均小于D组及F组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),E组ET后6周GSD、CRL均小于D组及F组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).IVF-ET后妊娠各组、FET后妊娠各组孕早期绒毛膜下血肿情况比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 TVS可以准确评估IVF-ET、FET后早期妊娠,建议以ET后4周为确诊宫内妊娠的最佳检查时机,以ET后4周、6周为超声常规检查时间,多胎妊娠、可疑孕早期不良妊娠可适当增加检查次数,提高诊断准确性.IVF-ET或FET助孕后4～6周卵黄囊未显示、原始心管搏动未显示、孕囊偏小、头臀长偏小与孕早期不良妊娠密切相关,绒毛膜下血肿与不良妊娠结局无明显相关.

目的 探讨补体成分(3b/4b)受体1基因[the complement component (3b/4b) receptor lgene,CRl]多态性与脑脊液相关蛋白的关系.方法 从美国国立老年研究所组织建立的阿尔茨海默病(AD)神经影像学研究数据库中选择812例受试者,其中48例AD患者为AD组,483例轻度认知障碍(MCI)患者为MCI组,281例正常对照(NC)者为NC组.用免疫分析试剂盒和xMAP Luminex试剂盒检测入选者脑脊液中β淀粉样蛋白(Aβ)、总tau(t-tau)蛋白和磷酸化tau(p-tau)蛋白水平.结果 AD组rs61522287位点基因突变后,GA基因型较GG基因型脑脊液Aβ42水平增加[(193.20±79.05)ng/L vs (137.90±37.28)ng/L,P=0.03762].8个CR1的单核苷酸多态性(SNP)位点可以调节AD患者脑脊液中t-tau蛋白和p-tau蛋白水平.11个CR1的SNP突变位点参与调节MCI组患者tau蛋白水平.3个CR1的SNP位点基因突变增加MCI组脑脊液中Aβ42水平.rs41274776和rs12567945位点突变同时增加NC组脑脊液中p-tau和Aβ42水平.结论 本研究率先明确了CR1的SNP位点与脑脊液蛋白(Aβ42,t-tau和p-tau)之间的关系,这对未来寻找AD的早期诊断,早期筛查提供了新思路.

本文报告4例急性白血病用未净化的自身骨髓移植（ABMT）治疗的结果。2例在复发早期接受ABMT者均取得苐2次完全缓解（CR2），其中1例AUL的CR2长达5个月（其CR 1只有2个月）；另1例AML(M 5）在ABMT后已不化疗CR持续9个月未复发，超过了CR 18.5月。1例ALL于移植后5个月复发，另1例AML(M 2b〉移植后不化疗已5个月，尚无复发迹象。

Objective: The E3 ligase, CRL4, plays diverse roles in different cellular processes, such as DNA damage, transcriptional regulation,cell cycle progression, and cell apoptosis. Our previous study showed that CUL4A and CUL4B had a strong association with tobacco smoking risk in lung squamous cell carcinoma (SCC) and small cell lung carcinoma (SCLC). This study aimed to define the potential mechanism underlying the roles of CUL4A and CUL4B in the development of SCC and SCLC.Methods: We determined the role of CUL4A and CUL4B in the cell cycle and apoptosis of SCC and SCLC, and identified the key apoptosis-related gene involved in the oncogenic activity of CUL4B by Western blot, immunohistochemical staining, flow cytometry,and enzyme inhibition experiments.Results: We found that depletion of CUL4A and CUL4B reduced the proliferation of SCC and SCLC cells. CUL4Aknockdown but not CUL4Bknockdown arrested cells in G1 phase while upregulating P21 and CUL4Bknockdown promoted cell apoptosis through upregulation of FOXO3A. Accordingly, CUL4B decreased FOXO3A expression by activating the ERK signaling pathway and mediating FOXO3A degradation via the ubiquitin-proteasome pathway.Conclusions: These results identified the function of E3 ligase CRL4 in regulating SCC and SCLC cell proliferation, which provides a potential strategy for cancer therapy by targeting FOXO3A and the E3 ligase, CRL4.

目的:探讨溴结构域和超末端结构域(bromodomain and extra terminal domain,BET)抑制剂对弥漫性大B细胞淋巴瘤CRL-2630细胞生长的影响,以及对弥漫性大B细胞淋巴瘤BALB/c-nu裸鼠外周血中辅助性T细胞17(helper T cells,Th17)数量和相关细胞因子表达的影响.方法:培养弥漫性大B细胞淋巴瘤株CRL-2630,使用不同浓度BET抑制剂(2、4、8、16、32 nmol/L)处理48 h,32 nmol/L BET抑制剂处理不同时间(12、24、36、48 h),CCK-8法检测各处理细胞活性;集落形成实验检测不同BET抑制剂浓度处理后细胞集落形成能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测不同BET抑制剂浓度处理后细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR与Western blot检测32 nmol/L BET抑制剂处理CRL-2630细胞48 h后HMGA1 mRNA与蛋白的表达水平;构建HMGA1过表达载体并通过脂质体介导法转染CRL-2630细胞,并用32 nmol/L BET抑制剂处理48 h,检测细胞活性与凋亡情况;构建裸鼠弥漫性大B细胞淋巴瘤模型并采集外周血,流式细胞术检测Th17细胞比例,ELISA法检测相关细胞因子的含量.结果:在一定范围内,BET抑制剂呈剂量依赖性地抑制CRL-2630细胞的活性,32 nmol/L BET抑制剂以时间依赖性地抑制CRL-2630细胞的活性.随着BET抑制剂处理浓度的增高,CRL-2630细胞集落形成能力逐渐下降,凋亡率逐渐升高.32 nmol/L BET抑制剂处理CRL-2630细胞48 h后,细胞中HMGA1的mRNA和蛋白水平均明显下降.pcDNA3.4-HMGA1转染CRL-2630细胞再使用BET抑制剂处理后,细胞的活性升高而凋亡率明显下降.弥漫性大B细胞淋巴瘤裸鼠经BET抑制剂作用后,外周血Th17细胞比例和IL-6、IL-17、IL-23含量较生理盐水组明显下降.结论:BET抑制剂能有效抑制CRL-2630细胞活性,并诱导其凋亡,在一定范围内呈时效和量效关系.BET抑制剂还可以抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤裸鼠外周血Th17细胞数量和相关细胞炎性因子的分泌,其作用机制可能与HMGA1的表达下调有关.

Objective: Hepatitis B virus (HBV) infection is a major public health problem worldwide. However, the regulatory mechanisms underlying HBV replication remain unclear. Cullin 4B-RING ubiquitin E3 ligase (CRL4B) is involved in regulating diverse physiological and pathophysiological processes. In our study, we aimed to explain the role of CUL4B in HBV infection. Methods: Cul4b transgenic mice or conditional knockout mice, as well as liver cell lines with CUL4B overexpression or knockdown, were used to assess the role of CUL4B in HBV replication. Immunoprecipitation assays and immunofluorescence staining were performed to study the interaction between CUL4B and HBx. Cycloheximide chase assays and in vivo ubiquitination assays were performed to evaluate the half-life and the ubiquitination status of HBx. Results: The hydrodynamics-based hepatitis B model in Cul4b transgenic or conditional knockout mice indicated that CUL4B promoted HBV replication (P < 0.05). Moreover, the overexpression or knockdown system in human liver cell lines validated that CUL4B increased HBV replication in an HBx-dependent manner. Importantly, immunoprecipitation assays and immunofluorescence staining showed an interaction between CUL4B and HBx. Furthermore, CUL4B upregulated HBx protein levels by inhibiting HBx ubiquitination and proteasomal degradation (P < 0.05). Finally, a positive correlation between CUL4B expression and HBV pgRNA level was observed in liver tissues from HBV-positive patients and HBV transgenic mice. Conclusions: CUL4B enhances HBV replication by interacting with HBx and disrupting its ubiquitin-dependent proteasomal degradation. CUL4B may therefore be a potential target for anti-HBV therapy.