目的:探讨CRL4B复合物在胰腺癌发生发展中的作用及其分子机制。方法:将胰腺癌细胞分为对照组(转染阴性对照慢病毒)、shCUL4B组(转染CUL4B慢病毒)、shDDB1组[转染DNA损伤结合蛋白1(DDB1)慢病毒]和shCUL4B+siSFRP1组[转染CUL4B慢病毒+分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)-siRNA]。对敲低CUL4B和DDB1的胰腺癌细胞系进行RNA测序(RNA-seq)，寻找CRL4B复合物调控的靶基因，采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测靶基因mRNA的表达，染色质免疫共沉淀(ChIP)-PCR实验鉴定CRL4B复合物直接调控的靶基因，Western blot法检测上皮-间充质转化(EMT)标志物蛋白的表达水平，EdU细胞增殖实验检测细胞增殖能力，划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用GEO、TCGA和GTEx数据库中胰腺癌相关肿瘤样本和正常组织样本的测序数据，分析CUL4B、DDB1和其下游靶基因的表达相关性。结果:RNA-seq结果显示，CRL4B复合物调控的靶基因涉及多种恶性肿瘤相关信号通路。qRT-PCR检测结果显示，shCUL4B和shDDB1组待验证靶基因的mRNA表达水平均高于对照组，差异有统计学意义(均 P<0.05)。ChIP-PCR实验结果显示，CRL4B复合物直接结合在NME1和SFRP1靶基因启动子区，敲低CUL4B的表达后，靶基因启动子区域组蛋白H2A第119位赖氨酸单泛素化富集减少。对照组PANC-1细胞增殖率为(32.10±3.58)%，高于shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(13.95±1.66)%和(22.38±0.77)%，均 P<0.05]；对照组AsPC-1细胞增殖率为(35.47±7.80)%，高于shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(19.60±3.58)%和(30.09±0.81)%，均 P<0.05]。细胞划痕实验显示，对照组PANC-1细胞迁移率为(53.18±3.70)%，高于shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(17.46±2.62)%和(44.99±9.18)%，均 P<0.05]。Western blot结果显示，对照组细胞上皮标志物α-catenin和γ-catenin的表达分别为1.00±0.03和1.01±0.11)，低于shCUL4B组(分别为1.44±0.01和1.21±0.06，均 P<0.05)，对照组细胞间充质标志物Fibronectin和Vimentin表达水平分别为1.01±0.14和1.02±0.18，高于shCUL4B+siSFRP1组(分别为1.53±0.13和1.22±0.07，均 P<0.05)。对照组细胞的迁移率为(100.00±3.96)%，与shCUL4B组和shCUL4B+siSFRP1组[分别为(35.49±0.34)%和(107.06±2.77)%]比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。CUL4B和DDB1在胰腺癌中表达升高，且与SFRP1的表达呈负相关( r分别为-0.342和-0.264)。 结论:胰腺癌中CRL4B复合物转录抑制靶基因SFRP1进而促进胰腺癌的发生发展，且CRL4B复合物在胰腺癌中的高表达支持了其作为胰腺癌治疗的潜在靶点。

目的 探讨自噬相关基因5(ATG5)在人恶性胸膜间皮瘤(MPM)细胞和组织中的表达情况,分析ATG5与MPM患者临床病理参数和预后的相关性.方法 实时定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting检测正常人胸膜间皮细胞和MPM细胞、非MPM胸膜间皮组织和MPM组织中ATG5的表达差异.应用TCGA数据库分析ATG5与MPM患者临床病理特征和预后的相关性.构建Cox回归模型,分析影响MPM患者预后的因素.GEPIA数据库评估ATG5与MPM肿瘤标志物和新型血清标志物的相关性.TIMER数据库分析ATG5与MPM免疫细胞浸润和关键免疫调节基因的相关性.结果 ATG5在MPM细胞和组织中显著高表达,且与MPM患者的肿瘤分期呈正相关(P<0.05).生存分析显示,ATG5高表达组MPM患者的预后更差,肿瘤病理类型可能是患者预后不良的危险因素(P<0.05).ATG5与多种MPM肿瘤标志物(MTAP、SETD2、NF2、FIB3)和新型血清标志物(HMGB1、SMPR、THBS2、KRAS)显著相关(P<0.05).ATG5表达与MPM中免疫细胞浸润(B细胞、CD4+T细胞和巨噬细胞)和免疫相关基因(CD28、CUL48B、CD166、MMP14)呈显著正相关(P<0.05).结论 ATG5在MPM中表达上调,且与患者不良预后和免疫浸润水平相关,有望成为MPM早期筛查、诊断和预后评估的重要生物标志物.

为了解花斑副沙鳅Parabotia fasciata的种质资源现状,基于cyt b基因序列比较分析了长江水系4个野生群体和5个养殖群体的遗传多样性水平.结果显示,208个样本共检测到29个单倍型,38个多态位点.群体总体单倍型多态性较高(Hd=0.711),核苷酸多态性较低(Pi=0.002 35),但野生群体(Hd=0.602,Pi=0.003 74)的遗传多样性显著大于养殖群体(Hd=0.381,Pi=0.000 91),说明养殖群体需要增加亲本资源.中性检验、错配分布和贝叶斯天际图结果表明,野生群体在历史上经历了种群扩张.赤水群体的单倍型最多,遗传多样性最高(Hd=0.836,Pi=0.008 99),与其他群体遗传距离大,说明赤水河的花斑副沙鳅资源较丰富,且已形成相对独立、稳定的地理种群,种质优良,适合用作人工繁殖和新品系创制的种源.

目的 探讨柴朴汤对哮喘小鼠支气管上皮细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)及下游炎症介质单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)的影响.方法 将小鼠支气管上皮细胞分为对照组(Con组,空白血清培养)、Model组(哮喘小鼠血清培养)和Chaipu组(柴朴汤药血清培养).采用qRT-PCR和Western blotting检测小鼠支气管上皮细胞中HMGB1、TLR4、NF-κB、MCP-1、IL-6的mRNA及蛋白表达情况,ELISA法测定细胞培养液中MCP-1和IL-6的水平.结果 与Con组相比,Model组小鼠支气管上皮细胞HMGB1、TLR4、NF-κB、MCP-1、IL-6表达均明显升高(P＜0.05);Model组细胞培养液中MCP-1、IL-6也显著升高(P＜0.05).与Model组相比,Chaipu组小鼠支气管上皮细胞HMGB1、TLR4、MCP-1、IL-6 mRNA和蛋白表达降低,NF-κB mRNA表达亦降低(P＜0.05);Chaipu组细胞培养液中MCP-1、IL-6也显著降低(P＜0.05).结论 柴朴汤可下调哮喘血清诱导的炎症因子的表达,可能与其抑制HMGB1/TLR4/NF-KB炎症通路有关.

[目的]总结原因不明矮身材儿童的临床特征并探讨其致病基因,为临床精准诊疗提供依据.[方法]收集我院儿科内分泌专科2018年1月至2022年8月就诊的未能明确诊断的矮身材儿童临床表现、实验室检查及全外显子组测序(WES)结果进行回顾性分析,根据不同作用机制对致病基因进行归纳总结.[结果]纳入患儿48例(男性30例,女性18例),年龄(7.73±3.97)岁,身高标准差分值为-3.63±1.67;临床表现:特殊面容33例(68.8%),体型或骨骼系统异常31例(64.6%),围产期异常26例(54.2%,其中61.5%为小于胎龄儿),内分泌系统异常24例(50.0%,其中87.5%生长激素(GH)峰值低于正常),矮身材家族史21例(43.8%);实验室检查:GH激发试验峰值(9.72±7.25)ng/mL,IGF-1 标准差分值为-0.82±1.42,骨龄与年龄差值(-0.93±1.39)岁;WES共发现相关基因变异者25例,其中14例(56.0%)为致病变异,6例(24.0%)为可能致病变异,5例(20.0%)为意义未明变异;评价为致病及可能致病变异的基因共14个,其中影响细胞内信号通路10个(PTPN11、RAF1、RIT1、ARID1B、ANKRD11、CSNK2A1、SRCAP、CUL7、SMAD4和FAM111A),影响细胞外基质(ECM)4个(ACAN、FBN1、COL10A1和COMP).[结论]临床上表现为严重矮身材伴特殊面容、非匀称体型、骨骼系统异常、小于胎龄儿、GH峰值低于正常和矮身材家族史等特征的儿童,其病因需考虑罕见单基因疾病的可能,WES是提高单基因性矮小症诊断效能的重要手段.本组患儿致病基因中,主要致病机制是影响细胞内信号通路和ECM组分或功能,进一步研究有助于发现和研究新的矮小症致病变异和基因功能.

背景与目的 肺癌是对人类健康的一大威胁,有关肺癌发生发展的分子机制复杂且知之尚少,探索与肺癌发展相关的分子标志物有利于提高早期诊断和治疗的效果.长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)THAP7-AS1已知在胃癌中高表达,但在其他癌症中研究较少.本研究旨在探究甲基转移酶样3(methyltransferase-like 3,METTL3)介导N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰lncRNA THAP7-AS1表达上调促进肺癌发生的作用及机制.方法 收集120例肺癌与对应癌旁组织样本,lncRNA微阵列分析差异表达的lncRNA,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测肺癌、癌旁组织、肺癌细胞系THAP7-AS1表达,分析THAP7-AS1对肺癌的诊断价值以及其表达水平与肺癌患者生存率、临床病理特征的关系.通过生物信息学分析、甲基化RNA免疫共沉淀(methylated RNA immunoprecipitation,meRIP)、RNA pull-down实验、RIP实验探究THAP7-AS1的分子调节机制;通过MTS、克隆形成、划痕、Transwell、体内异种移植实验测定各组SPC-A-1、NCI-H1299细胞增殖、迁移、侵袭、成瘤能力,Western blot检测磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kenase B,PI3K/AKT)信号通路蛋白表达.结果 肺癌组织、细胞系THAP7-AS1表达升高(P<0.05),对肺癌具有一定的诊断价值[曲线下面积(area under the curve,AUC)=0.737],其表达水平与患者总生存率、肿瘤大小、肿瘤原发灶-淋巴结-转移(tumor-node-metastasis,TNM)分期、淋巴结转移相关(P<0.05).METTL3介导的m6A修饰能够增强THAP7-AS1表达.与SPC-A-1、NCI-H1299细胞NC组、sh-NC组相比,THAP7-AS1组增殖、迁移、侵袭能力提高(P<0.05),移植瘤体积、质量增大(P<0.05),sh-THAP7-AS1组增殖、迁移、侵袭能力下降(P<0.05).THAP7-AS1与Cullin蛋白4B(Cullin 4B,CUL4B)存在特异结合.与SPC-A-1、NCI-H1299细胞Vector组相比,THAP7-AS1组增殖、迁移、侵袭能力、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha,PI3KCA)、磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ(phosphoinositide-3 kinase-catalytic subunit delta,PI3KCD)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phospho-phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)、磷酸蛋白激酶B(phospho-protein kinase B,p-AKT)、磷酸哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phospho-mammalian target of rapamycin,p-mTOR)表达水平升高(P<0.05).结论 LncRNA THAP7-AS1通过METTL3介导的m6A修饰稳定表达,与CUL4B结合激活PI3K/AKT信号通路,促进肺癌发生发展.

Dysregulated lineage commitment of mesenchymal stem cells (MSCs) contributes to impaired bone formation and an imbalance between adipogenesis and osteogenesis during skeletal aging and osteoporosis. The intrinsic cellular mechanism that regulates MSC commitment remains unclear. Here, we identified Cullin 4B (CUL4B) as a critical regulator of MSC commitment. CUL4B is expressed in bone marrow MSCs (BMSCs) and downregulated with aging in mice and humans. Conditional knockout of Cul4b in MSCs resulted in impaired postnatal skeletal development with low bone mass and reduced bone formation. Moreover, depletion of CUL4B in MSCs aggravated bone loss and marrow adipose accumulation during natural aging or after ovariectomy. In addition, CUL4B deficiency in MSCs reduced bone strength. Mechanistically, CUL4B promoted osteogenesis and inhibited adipogenesis of MSCs by repressing KLF4 and C/EBPδ expression, respectively. The CUL4B complex directly bound to Klf4 and Cebpd and epigenetically repressed their transcription. Collectively, this study reveals CUL4B-mediated epigenetic regulation of the osteogenic or adipogenic commitment of MSCs, which has therapeutic implications in osteoporosis.

目的 观察去甲肾上腺素(NE)对体外培养的原代新生大鼠心肌细胞凋亡率及相关凋亡蛋白的影响.方法 选用出生1-3 d的SD大鼠建立原代培养新生大鼠心肌细胞模型.将培养72 h的心肌细胞随机分为对照组(未使用任何药物)与不同浓度NE组(分别采用10-8,10-7,10-6,10-5,10-4 mol/L NE),每组3孔(n=3).加药后3 h采用流式细胞术测定心肌细胞凋亡率;采用Western blot检测CryAB及Bcl-2、Bax及Bcl-2/Bax比值的变化.结果 与对照组比较,10-8,10-7,10-6,10-5,10-4 mol/L NE作用下心肌细胞凋亡率均出现显著升高(均P<0.05);CryAB表达下降(均P<0.05),Bcl-2表达下降(除10-8 mol/L组外均P<0.05)、Bax表达升高(除10-7 mol/L组外均P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(均P<0.05).结论 去甲肾上腺素可能通过降低CryAB、Bcl-2表达,升高Bax表达,降低Bcl-2/Bax比值,诱导体外原代培养大鼠心肌细胞的凋亡率增加.

目的 探讨Cullin 4B (CUL4B)蛋白表达水平对肝癌肝移植术后预后的影响.方法 采用回顾性病例对照研究方法.收集2014年1月1日至2015年6月30日中山大学附属第一医院收治的79例肝癌行肝移植患者的临床病理资料.收集患者的肝癌组织病理学标本,石蜡包埋切片,并行HE染色和免疫组织化学染色检测.观察指标:(1)肝癌组织中CUL4B蛋白的表达情况.(2)随访和生存情况.(3)肝癌肝移植术后预后因素分析.(4) CUL4B蛋白表达水平与肝癌肝移植术后肿瘤复发转移的相关性分析.采用电话和门诊方式进行随访,了解患者肿瘤复发、转移及生存情况.随访时间截至2018年6月.正态分布的计量资料以(x)±s表示;计数资料组间比较采用x2检验.采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线并计算生存率,Log-rank检验进行生存分析.单因素和多因素分析采用COX回归模型.相关性分析采用Pearson检验.结果 (1)肝癌组织中CUL4B蛋白的表达情况.免疫组织化学染色检测显示:肝癌组织中CUL4B蛋白主要表达于细胞质内,呈现为强棕黄色染色.79例患者CUL4B蛋白在肝癌组织中的表达情况:64例呈高表达,15例呈低表达.(2)随访和生存情况:79例患者术后均获得随访,随访时间为38～ 56个月,平均随访时间为46个月.79例患者随访期间,37例肿瘤无复发,42例肿瘤复发(肿瘤肝外转移32例、肿瘤肝内转移10例);36例生存,43例死亡;术后1、3年总体生存率分别为86.84％、63.25％,无瘤生存率分别为62.31％、51.27％.(3)肝癌肝移植术后预后因素分析.①单因素分析结果显示:术前AFP、术前Child-Pugh评分、肿瘤最大径、包膜浸润、脉管内癌栓、肿瘤Edmonson病理学分级及CUL4B蛋白表达水平均是影响肝癌患者肝移植术后3年总体生存率的相关因素(风险比=2.17,3.36,3.66,2.43,2.19,3.36,2.84,95％可信区间:1.17～4.04,1.53～7.42,2.10～6.42,1.33～4.17,1.08～9.04,1.58～7.59,1.17～6.32,P＜0.05).术前AFP、术前Child-Pugh评分、肿瘤最大径、包膜浸润、脉管内癌栓、肿瘤Edmonson病理学分级及CUL4B蛋白表达水平均是影响肝癌患者肝移植术后3年无瘤生存率的相关因素(风险比=2.06,3.72,3.16,2.36,2.83,3.21,1.69,95％可信区间:1.34～4.85,1.72～8.63,1.79～7.31,1.46～4.86,1.19～8.63,1.19～ 7.92,1.06～4.87,P＜0.05).②多因素分析结果显示:肿瘤最大径、脉管内癌栓、CUL4B蛋白表达水平是影响肝癌患者肝移植术后3年总体生存率的独立影响因素(比值比=3.43,3.69,2.81,95％可信区间:1.16～6.02,1.96～9.38,1.04～9.63,P＜0.05).肿瘤最大径、脉管内癌栓、CUL4B蛋白表达水平是影响肝癌患者肝移植术后3年无瘤生存率的独立影响因素(比值比=2.25,4.72,2.74,95％可信区间:1.16～4.02,1.98 ～9.47,1.03～7.10,P＜0.05).CUL4B蛋白高表达和低表达肝癌患者肝移植术后3年总体生存率分别为66.7％和32.8％,两者比较,差异有统计学意义(x2=5.69,P＜0.05);CUL4B蛋白高表达和低表达肝癌患者肝移植术后3年无瘤生存率分别为73.3％和18.6％,两者比较,差异有统计学意义(x2=4.63,P＜0.05).(4) CUL4B蛋白表达水平与肝癌肝移植术后肿瘤复发转移的相关性分析.Pearson检验相关性分析结果显示:CUL4B蛋白表达水平与肝移植术后肝癌复发转移明显相关(r=0.62,P＜0.05).进一步分析显示:CUL4B蛋白表达水平与肝移植术后肿瘤肝外远处转移明显相关(r=0.84,P＜0.05).结论 肝癌组织中CUL4B蛋白表达水平与肝癌肝移植术后肝癌复发相关,可作为肝癌肝移植患者肿瘤复发和远处转移的预测指标.

目的 统计分析2013—2017年南京医科大学第一附属医院血液科血培养主要病原菌分布及药物敏感性情况.方法 血培养采用BACTEC FX全自动血培养仪,细菌鉴定、药物敏感和真菌鉴定试验采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定及药敏系统,链球菌药敏为纸片扩散法( K-B法),真菌药敏试验采用ATB FUNGUS 3方法,WHONET5. 6软件进行统计分析.结果 2013—2017年南京医科大学第一附属医院血液科血培养阳性率为7. 6% ,分离前5 位的病原菌是大肠埃希菌(20. 9% )、肺炎克雷伯菌(18. 0% )、凝固酶阴性葡萄球菌(12. 4% )、铜绿假单胞菌(11. 5% )和阴沟肠杆菌(3. 6% ).肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物最敏感(94. 4% ),铜绿假单胞菌对除氨曲南之外的抗菌药物均有较好的敏感性,而鲍曼不动杆菌对常见抗菌药物敏感性均较低,革兰阳性球菌对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁敏感性较好.结论 血液科患者易并发医院感染,应引起临床和微生物室的高度重视,合理选用抗菌药物是治疗和预防细菌耐药的关键.