目的:探讨白藜芦醇对狂犬病病毒的体外抑制作用。方法:以狂犬病病毒动物攻毒标准株CVS-11为模式病毒，针对狂犬病病毒感染周期，建立白藜芦醇处理下的CVS-11和BHK-21细胞组成的感染模型，通过直接免疫荧光、细胞荧光灶转化等方法检测白藜芦醇对狂犬病病毒的抑制作用。结果:在不影响细胞生长的条件下，随着浓度的增加，白藜芦醇可阻滞病毒的吸附、干扰病毒进入细胞并抑制病毒的增殖，抑制率最高可达约95%。另外，白藜芦醇与病毒共孵育的结果显示，40 μmol/L的白藜芦醇可直接杀灭病毒。结论:白藜芦醇具有抑制狂犬病病毒活力的作用，且这种抑制效应具有剂量依赖性。

目的:研究核酸内切酶RNaseH-1对使用端粒的替代延长(ALT)机制来延长端粒的骨肉瘤细胞放射敏感性影响及机制。方法:通过慢病毒转染构建过表达RNaseH-1的ALT骨肉瘤细胞U2OS和端粒酶阳性骨肉瘤细胞143B。对转染后的细胞使用CCK8法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞周期。克隆形成实验检测放射敏感性，免疫荧光实验检测细胞DNA损伤(γ-H 2AX灶点)情况，蛋白印迹法实验检测相关蛋白表达水平。 结果:过表达RNaseH-1后U2OS细胞的增殖能力显著降低，且细胞周期阻滞于G 1期(均 P<0.05)。U2OS细胞中RNaseH-1的过表达使ATM和Chk2的磷酸化水平显著升高、同源重组相关蛋白RAD51和BRCA1的表达显著降低，并导致细胞中DNA损伤水平显著上升、细胞放射敏感性增强(均 P<0.05)。而过表达RNaseH-1不对端粒酶阳性的143B细胞产生抑制效应( P>0.05)。 结论:过表达RNaseH-1抑制了端粒酶阴性骨肉瘤细胞并增强了放射敏感性，其机制可能是RNaseH-1在ALT细胞中抑制同源重组修复并激活ATM信号通路。

目的:探讨序列相似性家族134成员B（FAM134B）介导的内质网自噬对内毒素/脂多糖（LPS）诱导的小鼠树突状细胞（DC）凋亡的影响，为改善创面感染等引起的脓毒症免疫抑制提供依据。方法:采用实验研究方法。取第3~10代对数生长期的小鼠DC系DC2.4进行实验。将DC分为LPS刺激0 h（不刺激）组、LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组和LPS刺激72 h组，采用1 μg/mL LPS（浓度下同）培养相应时间后，采用蛋白质印迹法检测FAM134B、微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）以及转运蛋白SEC61B蛋白表达，并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值（样本数为3）。将DC分为进行相应处理的磷酸盐缓冲液（PBS）组与LPS组，培养24 h，采用免疫荧光法检测FAM134B表达情况及其分别与溶酶体探针、LC3B共定位情况，通过透射电子显微镜观察细胞内自噬溶酶体数量。将DC分为转染含 FAM134B基因小干扰RNA序列的慢病毒的敲减FAM134B组与转染空载慢病毒的空载体组，转染后72 h，于倒置荧光相差显微镜下观察细胞荧光表达情况，另将仅常规培养的DC设为空白对照组并于相应时间点行相同观察。将DC分为单纯PBS组、单纯LPS组，将成功转染含 FAM134B基因小干扰RNA序列的慢病毒的DC分为敲减FAM134B+PBS组、敲减FAM134B+LPS组，将成功转染空载慢病毒的DC分为空载体+PBS组、空载体+LPS组，给予相应刺激并培养24 h，采用蛋白质印迹法检测FAM134B蛋白表达（样本数为3），通过流式细胞术检测细胞凋亡率（样本数为3），行Hoechst染色观测细胞凋亡情况并计算凋亡率（样本数为5），采用蛋白质印迹法检测剪切型胱天蛋白酶3（caspase-3）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达并计算Bax/Bcl-2比值（样本数为5）。对数据行单因素方差分析、LSD检验、析因设计方差分析。 结果:与LPS刺激0 h组相比，LPS刺激12 h组和LPS刺激24 h组细胞中FAM134B蛋白表达均明显升高（ P<0.05），LPS刺激6 h组、LPS刺激12 h组、LPS刺激24 h组和LPS刺激72 h组细胞中SEC61B蛋白表达均明显降低（ P<0.05），LPS刺激24 h组和LPS刺激72 h组细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值均明显升高（ P<0.05），其中LPS刺激24 h组细胞中3个蛋白的变化最显著，将24 h作为后续LPS刺激时长。培养24 h，与PBS组相比，LPS组细胞中FAM134B的表达及其与LC3B及溶酶体探针的共定位均显著增强，自噬溶酶体数量明显增多。空载体组与敲减FAM134B组细胞转染后72 h均表现出高强度荧光，而空白对照组细胞在相应时间点无荧光表现。培养24 h，敲减FAM134B+PBS组细胞中FAM134B蛋白表达较单纯PBS组和空载体+PBS组明显降低（ P值均<0.05），敲减FAM134B+LPS组细胞中FAM134B蛋白表达较单纯LPS组和空载体+LPS组显著降低（ P值均<0.05），单纯LPS组细胞中FAM134B蛋白表达较单纯PBS组明显升高（ P<0.05），空载体+LPS组细胞中FAM134B蛋白表达较空载体+PBS组明显升高（ P<0.05）。培养24 h，流式细胞术检测显示，单纯PBS组、单纯LPS组、空载体+PBS组、空载体+LPS组、敲减FAM134B+PBS组与敲减FAM134B+LPS组细胞凋亡率分别为（13.3±0.8）%、（32.6±4.3）%、（17.0±1.5）%、（51.7±3.3）%、（52.4±3.1）%与（62.3±2.6）%。培养24 h，与单纯LPS组和空载体+LPS组相比，敲减FAM134B+LPS组经流式细胞术与Hoechst染色检测的细胞凋亡率以及细胞中剪切型caspase-3蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高（ P<0.05）；与对应的PBS处理组即单纯PBS组、空载体+PBS组、敲减FAM134B+PBS组相比，单纯LPS组、空载体+LPS组、敲减FAM134B+LPS组经流式细胞术与Hoechst染色检测的细胞凋亡率以及细胞中剪切型caspase-3蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高（ P<0.05）。 结论:小鼠DC中FAM134B介导的内质网自噬在LPS刺激下活化增强并于24 h达活化高峰，且活化的内质网自噬对细胞凋亡具有显著抑制效应。

人类乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是最常见的性传播病毒，全球范围内正常人群的HPV感染率平均为10%，HPV感染人类皮肤和黏膜上皮细胞后可引起多种良恶性疾病。磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylin-ositol-3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，Akt/PKB）信号通路是人体散发性肿瘤中最常见的信号通路，与细胞增殖密切相关，HPV感染后导致基因突变、细胞周围环境改变以及产生的各种癌蛋白对该信号通路中的关键调节因子产生激活或抑制效应，从而使细胞的生长不再受养分等环境条件的限制；信号通路下游分子的改变也能对HPV基因的复制、转录和表达产生影响，二者相互作用共同导致HPV相关疾病的发生和发展。本文综合国内外文献，简述PI3K/Akt信号途径在HPV感染相关疾病中的作用以及与通路相关的药物治疗进展，为此类疾病提供更为广阔的治疗前景。

目的:探讨应激诱导蛋白Sestrin2（SESN2）对脂多糖（LPS）联合泛天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（caspase）抑制剂zVAD诱导小鼠树突状细胞（DC）坏死性凋亡的影响。方法:将培养至第3～10代小鼠骨髓来源树突状细胞系DC2.4给予LPS刺激0、6、12、24 h，并按照刺激时间点进行分组，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测各组细胞SESN2蛋白表达水平。将过表达空载慢病毒（NC）、SESN2基因过表达RNA序列慢病毒（SESN2 LV-RNA）、小干扰空载慢病毒（NS）以及SESN2基因小干扰RNA序列慢病毒（SESN2 siRNA）分别转染至DC2.4细胞中，转染后72 h，于倒置荧光显微镜下观察细胞荧光表达改变。各转染组细胞给予LPS刺激24 h，同时设立空白对照组给予磷酸盐缓冲液（PBS）并培养24 h，采用Western blotting检测SESN2蛋白表达水平；给予LPS+zVAD刺激24 h，同时设立空白对照组给予PBS并培养24 h，采用Western blotting检测混合谱系激酶结构域样蛋白（MLKL）、磷酸化MLKL（p-MLKL）蛋白表达水平，使用激光共聚焦显微镜观察p-MLKL变化及阳性细胞数量，采用流式细胞术和Hoechst染色检测坏死性凋亡细胞比例。结果:与LPS刺激0 h组相比，LPS刺激24 h组细胞SESN2蛋白表达明显升高，故将24 h作为后续实验LPS刺激时间点。成功转染慢病毒后培养24 h，SESN2 siRNA+LPS+zVAD组细胞MLKL磷酸化水平明显高于NS+LPS+zVAD组；SESN2 LV-RNA+LPS+zVAD组细胞MLKL磷酸化水平明显低于NC+LPS+zVAD组；且NS+LPS+zVAD组和NC+LPS+zVAD组MLKL磷酸化水平分别高于NS+PBS组、NC+PBS组。激光共聚焦显微镜下显示，各组细胞p-MLKL蛋白荧光表达数量及荧光强度变化趋势与上述结果一致。流式细胞术和Hoechst染色检测结果均显示，SESN2 siRNA+LPS+zVAD组坏死性凋亡细胞比例明显高于NS+LPS+zVAD组〔流式细胞术：（30.800±1.153）%比（20.800±1.114）%，Hoechst染色：（75.267±0.451）%比（46.267±3.371）%，均 P<0.05〕，提示敲减SESN2表达可以进一步加剧细胞坏死性凋亡发生；SESN2 LV-RNA+LPS+zVAD组坏死性凋亡细胞比例明显低于NC+LPS+zVAD组〔流式细胞术：（7.160±0.669）%比（19.240±2.322）%，Hoechst染色：（32.433±3.113）%比（48.567±4.128）%，均 P<0.05〕，提示过表达SESN2可以逆转上述改变。 结论:SESN2对于脓毒症状态下DC坏死性凋亡具有明显抑制效应，干预SESN2有助于调节脓毒症时DC介导免疫反应进程。

外泌体又被称为胞外体，含有多种细胞膜分子以及相关蛋白，是细胞间传递信息的重要信使，可携带功能性RNA、蛋白质和脂质至受体细胞，诱导受体细胞表型发生变化，促进其活化或抑制效应产生。近年来，一些研究表明外泌体在病毒感染后既能发挥免疫激活作用，促进机体产生抗病毒免疫应答；同时又能帮助病毒在细胞间传播、扩散，产生免疫逃逸。它的双重作用直接决定于其感染病原体及来源细胞特征，可作为后期药物及疫苗研发的重要靶点。本文将综述外泌体在不同病毒感染后的表现机制及其在疾病发生中扮演的角色。

目的:探讨携带人抑瘤素M(OSM)重组腺病毒表达载体对A549人肺癌细胞生长的影响和抗肿瘤机制。方法:用最佳感染复数的病毒感染A549细胞，用荧光显微镜、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)法检测OSM在人肺癌细胞中的转录和表达；荧光显微镜观察A549细胞的形态学改变；噻唑蓝(MTT)法和FCM检测Ad-OSM对A549细胞的生长抑制和细胞凋亡的影响；半定量RT-PCR法检测OSM基因的表达对A549细胞中的B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、p53基因表达的影响。多组间均数比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，两两比较采用 q检验。 结果:Ad-OSM组与Ad组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组比较，Ad-OSM对A549人肺癌细胞有明显生长抑制作用(-0.250±0.021， t＝12.012， P<0.05；-0.220±0.016， t＝13.470， P<0.05)，Ad组和PBS对照组差异无统计学意义(2.333±2.097， t ＝1.113， P>0.05)。用流式细胞仪检测细胞凋亡，Ad-OSM能明显诱导A549细胞凋亡，其中凋亡率可达20.6%，与Ad(2.5%)组和PBS组比较差异有统计学意义(17.800±0.627， t＝28.380， P<0.05；17.530±0.667， t＝26.335， P<0.05)。RT-PCR和Western blot法检测到OSM基因在A549细胞成功转录和表达；OSM基因表达对A549细胞增殖有明显抑制作用，并可诱导人肺癌细胞凋亡，OSM基因可通过上调细胞中bax、p53和下调bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。 结论:OSM基因可明显抑制A549人肺癌细胞生长，诱导其凋亡，该现象可能是通过改变bax、bcl-2、p53基因表达水平来发挥抗肿瘤作用。

目的 制备靶向蛋白酪氨酸磷酸酶受体Z 1型(protein tyrosine phosphatase receptor-type Z polypeptide 1,PTPRZ 1)单克隆抗体,明确其能否阻断多效生长因子(pleiotrophin,PTN)-PTPRZ 1旁分泌轴,阐明其对胶质瘤干细胞自我更新、迁移和侵袭的抑制效应.方法 以PTPRZ 1胞外段(26～300 aa)结构域作为抗原,对8～10周龄雌性BALB/c小鼠进行免疫,2周后通过尾静脉采血、离心收集上清并用ELISA检测血清效价,再进行B细胞融合及阳性杂交瘤细胞筛选,从而获得小鼠源性PTPRZ 1单克隆抗体;通过抗体亲和力检测实验,筛选亲和力最强的抗体株.用sg-PTPRZ1慢病毒感染胶质瘤干细胞进行PTPRZ 1基因沉默,RT-qPCR检测PTPRZ1基因敲除效率.通过Western blot检测抗体对PTPRZ 1抗原的特异性识别能力和胶质瘤干细胞内PTPRZ 1下游通路表达.胶质瘤干细胞功能和机制实验共分为4组:对照组、人重组PTN蛋白处理组、鼠抗PTPRZ 1抗体处理组、人重组PTN蛋白+鼠抗PTPRZ 1抗体处理组.通过克隆形成实验、迁移和侵袭实验检测胶质瘤干细胞自我更新、迁移和侵袭能力的影响.结果 制备并成功获得5株小鼠抗人PTPRZ 1单克隆抗体,其中克隆株2F10的抗体亲和力最强,该株抗体能用于检测PTPRZ 1蛋白表达.与对照组比较,人重组PTN蛋白刺激能显著促进胶质瘤干细胞内PTPRZ 1下游ERK磷酸化激活,促进胶质瘤干细胞自我更新(P＜0.01)、迁移(P＜0.01)和侵袭(P＜0.05).鼠抗PTPRZ 1抗体处理能阻断PTN介导的ERK磷酸化激活,抑制胶质瘤干细胞自我更新(P＜0.01)、迁移(P＜0.01)和侵袭(P＜0.05)能力.结论 克隆株2F10的鼠抗PTPRZ 1单克隆抗体能高效识别胶质瘤干细胞PTPRZ 1蛋白,并阻断PTN介导的胶质瘤干细胞自我更新、迁移和侵袭.

目的 观察温经通络汤对IL-1β诱导关节软骨细胞炎症的影响并探讨其作用机制.方法 从小鼠膝关节软骨中提取原代软骨细胞,并用甲苯胺蓝染色法鉴定;IL-1β诱导软骨细胞炎症模型,采用慢病毒RNAi-HMGB1 转染软骨细胞,干扰HMGB1的表达;后用不同浓度的温经通络汤含药血清干预细胞;Western blot分析各组细胞中HMGB1、NF-κB信号通路蛋白的表达水平;qPCR检测HMGB1、NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平;ELISA检测细胞上清中炎症因子IL-6、PGE-2 和TNF-α的表达水平.结果 与正常培养的细胞相比,IL-1β诱导软骨细胞炎症模型中HMGB1 的表达水平显著上升(P＜0.01),且p-IκBα/IκBα和p-P65/P65 蛋白的相对表达量与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平均有所提高(P＜0.01);与模型组比较,RNAi-HMGB1慢病毒转染可显著下调HMGB1 的表达水平(P＜0.01),并抑制p-IκBα/IκBα和p-P65/P65 蛋白的相对表达量(P＜0.01)与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平(P＜0.05);与模型组相比,不同浓度的温经通络汤含药血清均表现出对HMGB1 和NF-κB信号通路的抑制效应,表现为HMGB1 与p-IκBα/IκBα和p-P65/P65 的蛋白表达水平下降(P＜0.05).结论 温经通络汤能够改善IL-1β诱导软骨细胞炎症,其作用机制可能与抑制HMGB1 介导NF-κB信号通路的活化相关.

目的 探讨微环DNA载体介导的shRNA对HBV转基因小鼠体内乙肝病毒复制及表达的抑制效应.方法 采用分子克隆技术制备靶向HBV基因的shRNA通用质粒pU6-shRNA HBV和微环shRNA质粒pMC-U6-shRNA HBV.将HBV转基因小鼠随机分为微环shRNA组、通用质粒shRNA组和无关质粒对照组,利用水动力转染技术分别导入pMC-U6-shRNA HBV、pU6-shRNA HBV及对照载体pU6-control.于转染后第1、7、14、21、28、35天,分别采用Real-time PCR及化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)检测转基因小鼠血清HBV DNA及HBsAg水平,免疫组化染色观察转基因小鼠肝脏HBcAg的表达.结果 质粒注射后第7～21天,pU6-shRNA HBV及pMC-U6-shRNA HBV对转基因小鼠血清HBsAg 的表达及HBV DNA的复制均有明显抑制作用,与pU6-control相比差异有统计学意义(P＜0.05);21d后pU6-shRNA HBV组血清HBsAg及HBV DNA均有所回升,至第35天基本回复至对照水平;至注射后35d,pMC-U6-shRNA HBV依然保持较强的体内抑制作用,与其他两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组化结果显示,与pU6-shRNA HBV组相比,pMC-U6-shRNA HBV组小鼠肝组织内HBcAg阳性细胞数明显减少.结论 与pU6-shRNA HBV质粒相比,微环shRNA质粒pMC-U6-shRNA HBV对HBV转基因小鼠体内乙肝病毒的抑制作用持续时间更长久.采用微环DNA作为shRNA的体内递送载体与普通的质粒载体相比具有一定优势.