目的:探讨超活化血小板裂解液(sPL)对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的影响。方法:选取哈尔滨医科大学附属第一医院2018年1月—2019年3月6例类风湿关节炎患者作为研究对象，其中男3例、女3例，年龄26~49岁、中位年龄33岁，受累关节功能分级均为Ⅱ级。收集患者静脉血标本，先进行两次离心分离获得富血小板血浆(PRP)；再加入0.08 mmol/L CaCl 2, 37 ℃孵育激活血小板；然后经过冷冻、融化、离心、过滤除菌、去除纤维蛋白原，获得sPL。培养RA-FLS，分为对照组和2.5%、5%、10% sPL组，分别与含有0、2.5%、5%、10% sPL的培养液培养48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β的浓度；细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定各组细胞增殖活性；流式细胞术测定各组细胞的凋亡率；体外小管生成实验检测各组细胞血管生成能力；Transwell实验检测各组细胞迁移能力和侵袭能力；Western blot法测定各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体-2 (VEGFR2)的表达情况。 结果:(1)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组细胞培养基中IL-6浓度分别为(80.18±11.67)、(59.94±9.50)、(46.60±8.04)、(60.67±9.24)pg/mL，TNF-α浓度分别为(70.75±9.14)、(54.56±7.81)、(43.27±6.30)、(53.99±8.60)pg/mL，IL-1β浓度分别为(64.18±9.90)、(46.97±8.79)、(36.28±7.44)、(47.66±8.15)pg/mL，组间比较差异均有统计学意义( F＝12.186、11.934、10.709， P值均<0.01)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的表达水平均明显低于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组炎症因子表达水平低于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(2)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS增殖率分别为87.33%±10.98%、76.17%±8.18%、60.83%±7.99%、75.83%±8.45%，细胞凋亡率分别为6.51%±1.16%、16.23%±2.75%、29.69%±3.80%、16.37%±2.29%，小管形成数分别为(41.00±7.55)、(26.67±4.16)、(11.67±3.51)、(26.00±6.56)个，迁移细胞数目分别为(443.00±54.06)、(282.33±31.66)、(154.64±23.18)、(292.00±35.03)个，侵袭细胞数目分别为(243.30±27.39)、(67.00±12.53)、(22.33±8.74)、(79.33±14.98)个，组间比较差异均有统计学意义( F＝8.795、38.095、34.278、29.352、94.772, P值均<0.05)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组RA-FLS细胞增殖率、血管管腔形成数量、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均低于对照组，细胞凋亡率均高于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组中细胞增殖率、小管形成数、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均明显低于2.5% sPL组和10% sPL组，细胞凋亡率则高于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(3)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS PCNA、CyclinD1、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量比较，差异均有统计学意义( P值均<0.01)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于对照组，Bax蛋白相对表达量均高于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于2.5% sPL组和10% sPL组，而Bax蛋白相对表达量则高于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:sPL对RA-FLS的增殖、迁移、侵袭、血管生成以及炎症因子的产生具有抑制作用，对RA-FLS凋亡具有促进作用，且SPL对RA-FLS的生长抑制效果与SPL浓度有关。

目的:观察祛痰化瘀中药复方对心房颤动大鼠心房肌超微结构的影响，探讨其作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白组10只和造模组50只，造模组连续7 d尾静脉注射氯化乙酰胆碱（ACh）-无水氯化钙（CaCl 2）混合液建立房颤模型，将造模成功大鼠按随机数字表法分为模型组、维拉帕米组及中药高、中、低剂量组，每组10只。中药高、中、低剂量组分别灌胃祛痰化瘀中药复方汤剂41.25、20.63、10.31 g/（kg?d），维拉帕米组灌胃盐酸维拉帕米片溶液25 g/（kg?d），空白组及模型组灌胃等体积生理盐水，连续灌胃14 d。采用电生理记录仪测量各组大鼠房颤持续时间；透射电镜观察各组大鼠心房肌细胞超微结构；ELISA法检测各组大鼠血清活性氧自由基（ROS）、SOD、GSH-Px水平。 结果:与模型组比较，中药高、中、低剂量组及维拉帕米组大鼠房颤持续时间缩短（ P<0.05）；心房肌细胞超微结构受损改善；中药高、中剂量组及维拉帕米组血清ROS［（139.20±3.34）ng/ml、（139.00±3.28）ng/ml、（139.25±3.82）ng/ml比（155.60±7.32）ng/ml］水平降低，SOD［（2.41±0.26）ng/ml、（2.40±0.12）ng/ml、（2.37±0.06）ng/ml比（2.12±0.21）ng/ml］水平升高（ P<0.05）；中药高、中、低剂量组及维拉帕米组GSH-Px［（3.61±0.06）ng/ml、（3.60±0.08）ng/ml、（3.47±0.15）ng/ml、（3.51±0.19）ng/ml比（3.27±0.12）ng/ml］水平升高（ P<0.05）。 结论:祛痰化瘀中药复方可缩短大鼠房颤持续时间，减轻房颤大鼠心房肌细胞超微结构的损伤，调节房颤大鼠血清ROS、SOD、GSH-Px水平，抑制氧化应激反应，这可能是其治疗房颤的作用机制之一。

目的:探讨负压对多晶颗粒表面改性氧化锆陶瓷与树脂粘接强度的影响。方法:制备120个预烧结氧化锆圆片，用随机数字表法随机分成对照组和喷砂组以及30、50、70 s酸蚀组（每组24个）。对照组、喷砂组试件致密烧结前无额外处理；30、50、70 s酸蚀组分别浸入氢氟酸溶液30、50、70 s，再置于CaCl 2溶液中90 s，80 ℃ NaOH溶液中浸泡2 h。5组试件致密烧结后，喷砂组喷砂，用扫描电镜观察5组试件表面形态，测试表面粗糙度。根据涂布粘接剂后是否施加负压，每组用随机数字表法随机分成两个亚组，负压亚组和常压亚组（每亚组12个）。将预制树脂柱粘接至氧化锆试件上，扫描电镜观察粘接试件纵断面（每亚组1个试件），测试剪切强度（每亚组11个试件），即粘接强度，并分析其破坏模式。 结果:对照组试件表面光滑，粗糙度为（0.24±0.11） μm，喷砂组试件喷砂处理后形成粗糙表面，粗糙度为（0.95±0.12） μm，30、50、70 s酸蚀组试件氧化锆表面产生多晶颗粒，随着酸蚀时间延长，试件表面多晶颗粒增加，粗糙度分别为（0.60±0.15）、（1.04±0.11）和（1.57±0.16） μm，各组粗糙度差异均有统计学意义（ P<0.05）。对照组、喷砂组、30、50、70 s酸蚀组各负压亚组粘接强度分别为（13.56±1.19）、（20.98±2.11）、（17.37±2.44）、（24.19±2.97）和（21.36±2.16） MPa，分别比相应常压亚组［分别为（10.74±0.93）、（18.47±2.14）、（14.81±1.54）、（20.74±2.56）、（17.75±2.54） MPa］显著增加（ P<0.05）。负压亚组粘接剂界面未见明显裂隙与气泡。各负压亚组粘接试件混合断裂模式比例比相应常压亚组显著提高（ P<0.05）。 结论:负压可有效增强树脂与多晶颗粒改性的氧化锆陶瓷之间的粘接强度，改善粘接效果。

目的 基于Janus激酶2(JAK2)/转录激活子3(STAT3)通路探讨杜鹃素对高盐诱导的小鼠脑基底动脉炎症和肌张力异常的抑制作用及其分子机制.方法 用喂养高盐饲料的方法建立高盐模型.将50只C57BL/6J小鼠随机分成正常组(正常饲养)、模型组(高盐饲料)、低剂量实验组(高盐饲料+灌胃12.5 mg·kg-1·d-1杜鹃素)、中剂量实验组(高盐饲料+灌胃25 mg·kg-1d-1杜鹃素)、高剂量实验组(高盐饲料+灌胃50 mg·kg-1d-1杜鹃素),每组10只,干预12周.用微血管张力测定仪检测小鼠脑基底动脉对血管收缩剂的收缩反应;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测炎性细胞因子水平;用蛋白质印迹法检测基底动脉组织JAK2/STAT3通路的相关蛋白表达.结果 正常组、模型组和低、中、高剂量实验组脑基底动脉对60 mmol·L-1氯化钾(KCl)的收缩幅度分别为(2.19±0.13)、(2.66±0.11)、(2.52±0.09)、(2.41±0.08)和(2.25±0.10)mN;对10-5 mol·L-1血管加压素(AVP)的收缩幅度分别为(1.98±0.09)、(2.46±0.08)、(2.33±0.12)、(2.11±0.10)和(2.05±0.06)mN;对2.5 mmol·L-1 氯化钙(CaCl2)的收缩幅度分别为(1.77±0.08)、(2.09±0.09)、(2.03±0.08)、(1.94±0.05)和(1.86±0.06)mN;血清中白细胞介素(IL)-1β水平分别为(10.10±3.21)、(47.28±4.78)、(40.16±3.98)、(35.87±4.12)和(20.32±3.17)pg·mL-1;肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平分别为(60.26±5.43)、(134.32±4.15)、(110.65±3.56)、(90.79±5.25)和(81.54±6.23)pg·mL-1;趋化因子配体 3(CCL3)水平分别为(68.93±4.16)、(146.37±5.73)、(128.29±4.38)、(100.25±6.82)和(84.16±3.89)pg·mL-1;脑基底动脉组织JAK2表达水平分别为 0.52±0.05、1.28±0.07、1.11±0.06、0.88±0.09 和0.75±0.04;STAT3 表达水平分别为 0.58±0.07、1.93±0.10、1.62±0.04、1.34±0.06和 0.88±0.09.模型组上述指标与正常组比较,均显著增高,差异均有统计学意义(均P＜0.01).中、高剂量实验组上述指标与模型组比较,均显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 杜鹃素可能通过下调JAK2/STAT3通路改善高盐致小鼠脑基底动脉炎症和肌张力异常.

通过树种选择与配置优化提高土壤磷有效性进而促进树木生长是值得关注的问题.本研究在南亚热带人工林树种多样性平台开展研究,采用随机区组的试验设计方法,选取马尾松、米老排、格木、红椎、火力楠、灰木莲、土沉香、降香黄檀8个乡土树种,建立了 1、2、4和6个树种丰富度梯度的混交造林试验,测定了根际土壤生物有效磷组分(氯化钙磷、柠檬酸磷、酶磷和盐酸磷),探究不同树种配置对根际土壤生物有效磷组分的影响.结果表明:对比非固氮树种,固氮树种(格木和降香黄檀)的混交有效增加了土壤含水率、全氮含量、全磷含量和微生物生物量磷,树种合理配置有利于土壤生物有效磷的生成积累.固氮树种混交条件下,土壤氯化钙磷含量显著增加了 46.2％～160.3％,微生物矿化产生的酶磷提高了 69.3％～688.2％,盐酸磷增加了 31.5％～81.3％;土壤微生物生物量磷提高了 81.8％～149.4％,土壤微生物量氮增加了 88.1％～160.6％.冗余和相关分析显示,土壤微生物生物量磷、速效磷、全磷、蛋白酶、纤维二糖水解酶、酸性磷酸酶、微生物生物量氮和有机碳是驱动根际土壤生物磷组分差异的关键因子;固氮树种混交提高了酶磷和柠檬酸磷含量,这两种生物有效磷组分含量与林分树木胸高断面积呈显著正相关.固氮树种(格木)混交有效提升了根际土壤生物有效磷含量,有利于促进林分树木生长.

合理的大豆-玉米间作模式可有效促进土壤磷周转与作物磷吸收,减少磷肥投入.为优化大豆与玉米间作系统对磷素的利用效率,本研究选用两种不同基因型大豆与玉米间作,探究其影响土壤磷组分及作物磷吸收的关键根际过程及机制.结果表明:间作显著消耗了大豆'粤春03-3'根际可溶性无机磷(CaCl2-P),而对大豆'Essex'根际磷组分无显著影响.间作显著增加了大豆'粤春03-3'的生物量和磷吸收量,比单作分别显著增加42.2％和46.9％,而对大豆'Essex'和玉米磷吸收量和生物量无显著影响.间作显著增加了'粤春03-3'总根长和根系分泌物总量,比单作分别增加了 19.7％和138.1％,且粤春'03-3'磷吸收量与总根长呈显著正相关,与可溶性无机磷含量呈显著负相关.综上,大豆-玉米间作对土壤磷组分与作物磷吸收的影响存在基因型差异,间作通过增加磷高效大豆根长与根系分泌物等促进磷吸收及根际土壤磷周转,从而提高其磷利用效率.本研究明确了大豆-玉米间作体系磷素利用的基因型差异及潜在机制,为优化大豆-玉米间作体系品种搭配、实现磷素高效利用与化肥减施增效提供了科学依据.

以伊藤杂种'和谐'(Itoh hybrids'He Xie')的鳞芽为材料建立离体快繁技术体系,可克服传统方法繁育较慢的缺点,加速伊藤杂种优良品种的繁育推广.采用单因子试验设计,分别探究不同灭菌时间、不同植物生长调节剂浓度、不同根诱导时间以及不同生根苗等级对'和谐'组培苗启动、增殖、生根和驯化效果的影响.结果表明,用2％次氯酸钠溶液的最佳灭菌时间为12分钟,鳞芽污染率为9.09％;最佳初始培养基配方为MS+1.5 mg·L-1 6-BA+0.2 mg·L-1 GA3+0.5 mg·L-1 AgNO3;最佳增殖培养基配方为MS+450 mg·L-1 CaCl2+0.5 mg·L-1 6-BA+0.2 mg·L-1 IBA+0.2 mg·L-1 GA3+0.5 mg·L-1 AgNO3,增殖系数为3.3;无根苗在根诱导培养基1/2MS+1.0 mg·L-1腐胺+2.0 mg·L-1 IBA上,经4℃低温暗培养8天后常温光照培养30天,再转入根形成培养基1/2MS+1.0 g·L-1 AC,培养20天生根率达66.7％;苗移栽的基质为珍珠岩:蛭石:草炭土=1∶1∶1(v/v/v),移栽60天后,一级苗成活率最高为52.0％,二级苗和三级苗则大部分死亡,表明生根质量对移栽成活至关重要.

目的 探讨内皮素-1(ET-1)对心房颤动(AF)大鼠心房纤维化的作用和机制.方法 14 只成年雄性SD大鼠随机分配为对照(NC)组、房颤(AF)组;采用连续 1 周每日尾静脉注射1 次氯化钙-乙酰胆碱混合液 0.1 ml/100 g的方法建立AF大鼠模型,NC组同等方式注射等量生理盐水;各组均在第1 天及第8 天记录窦性或AF心电图,超声心动图监测心房大小和心功能;采用HE染色及Masson染色观察心房组织纤维化情况;采用Western blot 法检测心房组织中内皮素-1(ET-1)、Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、转化生长因子(TGF)-β、钙库操纵性钙通道(SOCC)蛋白Orai1 和基质相互作用分子1(STIM1)的表达;培养小鼠心房肌细胞HL-1 细胞,以梯度浓度的ET-1 处理 24h后,采用Western blot法观察HL-1细胞ET-1/SOCC/TGF-β信号通路中TGF-β、Orai1 及STIM1蛋白表达变化;利用siRNA转染方法敲低HL-1 细胞中Orai1表达,以合适浓度的ET-1 处理细胞 24 h,Western blot检测HL-1 细胞中 TGF-β 蛋白的表达情况.结果 与 NC 组相比,超声心动图显示AF大鼠心脏左房内径(LAD)增加(P<0.05);HE和Masson染色结果显示AF组大鼠心房组织纤维化(P<0.05),Western blot 检测结果提示AF组心房组织中ET-1、Orai1、STIM1、TGF-β、COL-Ⅰ蛋白表达较NC组增加(P<0.05).ET-1 处理HL-1 细胞后,HL-1 细胞Orai1、STIM1、TGF-β蛋白表达增多(P<0.05).敲低 HL-1 细胞中 Orai1表达后,ET-1 的处理不再使TGF-β的表达上调.结论 AF大鼠心房组织ET-1 表达增多,并通过ET-1/SOCC/TGF-β信号通路促进心房纤维化.

[目的]干旱严重影响药材的产量和品质.揭示外源钙缓解桔梗干旱胁迫伤害的潜在生理机制,可为利用外源钙提高干旱、半干旱地区桔梗耐旱性和药用品质提供理论依据.[方法]以桔梗幼苗为材料,采用盆栽试验在干旱条件下叶面喷施10 mmol/L CaCl2,研究外源钙对桔梗幼苗生长、光合气体交换参数、抗氧化酶活性及药用部位品质等的影响.[结果](1)外源钙能促进干旱胁迫下桔梗根长和干鲜生物量增加,同时促使其叶片气孔开度、叶绿素a含量、总叶绿素含量、类胡萝卜素含量、净光合速率、气孔导度和蒸腾速率分别显著增加30.28％、57.67％、44.44％、100.33％、89.53％、60.00％和83.11％.(2)外源钙使干旱胁迫下桔梗叶片丙二醛、过氧化氢含量分别显著降低13.82％和18.66％,同时使其叶片过氧化物酶、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性分别增加了25.43％、7.90％和33.92％,也显著提高其根中可溶性蛋白含量.(3)外源钙促进桔梗根中皂苷D、多糖、总黄酮、游离氨基酸在正常条件下分别显著增加35.34％、34.87％、4.19％和6.52％,在干旱胁迫分别显著增加10.94％、7.53％、6.07％和5.78％.(4)桔梗地上部和地下部N、P、K、Ca、Cu、Mn含量在干旱胁迫下显著降低,而在外源钙处理下能不同程度地提高.[结论]喷施10 mmol/L CaCl2能增强干旱环境中桔梗叶片抗氧化系统活性和渗透调节能力,提高光合色素含量和光合性能,协同促进次生代谢产物和矿质元素累积,改善药用部位品质,缓解干旱对桔梗幼苗的伤害.

为明晰生淀粉水解α-淀粉酶Amy486 独特的催化特征,将克隆自Exiguobacterium sp.J84 菌株的amy486 进行重组表达,并研究重组酶的酶学性质、嗜盐特性和钙离子依赖性.Amy486 最适催化pH为7.5,在pH 6.5～8.5 范围内酶活力保持 40%以上,最适温度为35℃,30℃半衰期为100 h.1.5 mol/L Na2 SO4 处理可将Amy486 的比酶活由 1.53 U/mg提升至 2209 U/mg.添加 1.0 mol/L Na2 SO4,Amy486 在 35℃放置 500 h,酶活力可保持 60%以上.2.5 mmol/L CaCl2 可提升酶活力至 110%,添加超过 5 mmol/L CaCl2,Amy486 的相对酶活力降至 100%以下,EDTA孵育对Amy486 蛋白的酶活力和稳定性影响较小.Amy486 与钙离子结合的关键位点为K302,K302E与钙离子的结合能力增强,从而降低该酶对外源钙离子的依赖性.α-淀粉酶Amy486 及其突变体酶K302E是具有较高比酶活的生淀粉水解酶,对外源钙离子的依赖性较低,其活力的发挥依赖于适合的盐浓度,可应用于某些高盐环境下的淀粉水解.