阿尔茨海默病(AD)是一种常发于老年人的神经退行性疾病,发病机制复杂,且治疗药物有限,给社会造成了巨大负担.钩藤碱是从中药钩藤中分离得到的一种吲哚类生物碱,具有显著的神经药理作用,可通过多种机制发挥抗AD治疗作用.本文首先对AD可能的发病机制进行总结,深化对AD发病机制的认识,为AD药物开发提供潜在的治疗靶点;同时,也对钩藤碱的神经药理作用进行综述,为以钩藤碱为先导化合物的抗AD药物开发提供新思路.

目的 观察钩藤总生物碱对大鼠腹腔粘连形成、炎性介质和腹腔粘连组织羟脯氨酸(OHP)、可溶性细胞间黏附分子-1 (sICAM-1)及转化生长因子-β1 (TGF-β1)表达的影响.方法 按随机数字表法将60只清洁级Wistar大鼠分为6组:假手术组、模型组、钩藤总生物碱低、中、高剂量组及对照组.假手术组仅开腹,其余组大鼠开腹并建立腹腔粘连模型.造模后,钩藤总生物碱各剂量组腹腔注射钩藤总生物碱(低剂量:25 mg/kg,中剂量:50 mg/kg,高剂量:100 mg/kg),对照组给予腹腔注射10 mg/kg地塞米松磷酸钠注射液,假手术组与模型组给予腹腔注射同体积的生理盐水,均为一日1次.各组均持续治疗4周.观察大鼠腹腔粘连程度,并对比纤维蛋白原(FIB)、纤维蛋白降解产物(FDP)、OHP、sICAM-1、TGF-β1及其他相关指标的变化.结果 ①腹腔粘连率和粘连程度分级:与假手术组对比,模型组的腹腔粘连等级评分升高(P＜0.01);与模型组对比,钩藤总生物碱各剂量组的腹腔粘连等级评分均降低(P＜ 0.05或P＜ 0.01);②血象:与假手术组对比,模型组的白细胞计数(WBC)、FIB、OHP均明显升高,FDP降低(P＜0.01);与模型组对比,钩藤总生物碱各剂量组的WBC、FIB、OHP均有所降低,FDP升高(P＜0.05或P＜0.01);③腹腔粘连组织sICAM-1、TGF-β1:与假手术组对比,模型组的sICAM-1、TGF-β1均明显升高(P＜0.01);与模型组对比,钩藤总生物碱各剂量组的sICAM-1、TGF-β1均有所降低(P＜0.05或P＜0.01);④炎性介质:与假手术组对比,模型组的血清超氧化物歧化酶(SOD)降低,丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、白介素(IL)-1β、基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)、基质金属蛋白-9(MMP-9)均明显升高(P＜0.01):与模型组对比,钩藤总生物碱各剂量组的血清SOD升高,MDA、TNF-α、NO、IL-1β、TIMP-1、MMP-9均有所降低(P＜0.05或P＜ 0.01);⑤内皮功能:与假手术组对比,模型组的血清血管内皮生长因子(VEGF)、CD34均明显升高(P＜0.01);与模型组对比,钩藤总生物碱各剂量组的血清VEGF、CD34均有所降低(P＜ 0.05或P＜0.01).结论 钩藤总生物碱能够改善腹腔粘连大鼠的腹腔粘连程度,可能与调控FIB、sICAM-1、TGF-β1的水平,改善内皮功能及抑制炎性反应密切相关.

目的 建立同时测定细胞色素P450(CYP450)亚型CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的Cocktail探针药物溶液的高效液相色谱(HPLC)检测方法,并利用该方法研究口服钩藤总生物碱(TAU)对上述4种亚酶活性的影响.方法 以咖啡因、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和氨苯砜分别作为CYP1 A2、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4的探针底物,以卡马西平作为内标物质,建立了乙腈-0.5％甲酸的梯度洗脱法同时测定4种探针药物的血药浓度,并对该方法进行方法学考察.雄性SD大鼠随机分为3组,分别给予空白溶剂(0.5％羧甲基纤维素)以及40、80 mg/kg的TAU,连续灌胃给药10 d,在第11天给予Cocktail探针药液后于不同的时间点采集大鼠血样.利用HPLC测定大鼠血浆中该4种探针药物浓度,血药浓度-时间数据采用DAS2.0软件进行药动学分析.结果 与空白对照组比较,80 mg/kg的TAU给药组灌胃10 d后,咖啡因的AUC0-t、AUC0-∞、MRT0-t、MRT0-∞和t1/2z均显著减小,CLz/F均显著增大;甲苯磺丁脲的AUC0-t和AUC0-∞均显著减小,CLz/F显著增大;氯唑沙宗的AUC0t、AUC0-∞、MRT0-tMRT0-∞和t1/2z减小,CLz/F增大,但差异无统计学意义;氨苯砜的药代学参数基本无变化.40 mg/kg的TAU给药组与空白组比较,该4种探针底物的药动学参数基本无变化.结论 本方法准确,灵敏度较高,适用于同时评价药物对CYP1A2、CYP2C9/11、CYP2E1和CYP3A4该4种亚酶的影响.80 mg/kg的TAU给药组给药10 d后对大鼠肝药酶CYP1 A2、CYP2C9和CYP2E1均存在不同程度的诱导作用,对CYP3A4的活性基本无影响,而40 mg/kg的TAU给药组对以上4种亚酶基本无影响.提示TAU在临床使用过程中,尤其是与其他药物联用时,应注意调整用药剂量,防止药物相互作用可能造成的不良反应;本文为临床合理配伍使用该药提供参考.

钩吻Gelsemium elegans,马钱科Loganiaceae钩吻属Gelsemium常绿木质藤本植物,为中国传统药用植物,其味辛、苦,性温,有剧毒,常用来祛风、攻毒、消肿和止痛.该文检索并查阅了近些年来钩吻在化学成分和药理作用方面的文献,并对其进行总结和归纳.目前的研究表明,已从钩吻中分离出生物碱、环烯醚萜、三萜类、酚酸类、甾体类、香豆素、木脂素、四甲基环己烯型单萜苷类化合物、黄酮类等多种成分,其中,钩吻生物碱多为吲哚类生物碱,是其主要的活性成分,能显著抑制中枢神经活动.现代药理学研究表明钩吻生物碱具有多种药理活性,可通过调控细胞周期来达到抗肿瘤的目的;增强巨噬细胞吞噬能力,保护白细胞,促进机体免疫调节;治疗癌性疼痛和长期疼痛;使心肌收缩力减弱,血管舒张以达到降压效果;另外还对焦虑症和皮肤病的治疗起到一定作用.在今后的研究中,仍需对钩吻的化学成分进行深入研究,开发有前景的先导化合物,并进一步明确毒理和药理临床价值,探明作用机制,使其得到更充分合理的利用,为钩吻扩大应用和安全使用奠定基础.

本品系从中药钩藤Uncaria rhynchophylla（Miq.）Jacks.提取的总生物碱。

为研究不同海拔对钩藤生长及药用成分含量的影响,选取二年生钩藤幼苗为研究对象,将同一批钩藤幼苗分别种植于不同海拔高度(780、1 080、1 380 m),测定钩藤的形态指标、生物量、光合色素含量、光合特性、生物碱含量和产量,以期筛选钩藤最佳种植海拔.结果表明:在海拔780 m处钩藤生长良好,其形态指标、生物量、光合色素含量增加,光合作用增强,且茎中生物碱含量及产量高;在海拔1 080 m环境下,钩藤各形态指标、生物量及光合作用水平下降,但叶中生物碱含量增加,较780 m处增加48.28％;在1 380 m处钩藤各形态指标、生物量、叶绿素含量、光合作用水平、茎生物碱含量及产量显著下降,钩中生物碱含量及产量显著增加.综上,研究认为海拔780 m处有利于钩藤生长,茎中生物碱含量及产量增加,使钩藤植株总的生物碱含量及产量提高.

目的 建立体内、体外钩吻生物碱成分测定方法,并测定抵当汤减毒前后钩吻生物碱成分含量,探讨抵当汤减缓钩吻毒性的可能作用机制.方法 采用UPLC-QDa体外检测钩吻与抵当汤混合前后6种生物碱成分变化,采用UPLC-MS/MS检测抵当汤联合钩吻灌胃对小鼠血浆中钩吻生物碱成分含量的影响.结果 与抵当汤混合后,钩吻中钩吻素子、钩吻素甲、钩吻绿碱、胡蔓藤碱乙含量明显降低(P＜0.01);抵当汤十钩吻组小鼠血清钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素己、钩吻绿碱、胡蔓藤碱乙、胡蔓藤碱丙含量均较钩吻组明显降低(P＜0.01).结论 降低钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素己、钩吻绿碱及胡蔓藤碱乙含量可能是抵当汤减缓钩吻毒性的作用机制之一.

对葫蔓藤根茎总生物碱进行化学成分及肿瘤细胞毒活性研究.采用硅胶柱色谱、MCI-gel、Sephadex LH-20、HPLC等方法进行分离纯化,从葫蔓藤根茎的总生物碱中分离得到9个吲哚类生物碱,通过核磁共振、质谱等波谱分析技术将它们的结构鉴定为钩吻碱甲(1)、钩吻素子(2)、葫蔓藤碱乙(3)、钩吻氯碱(4)、19-(S)-羟基二氢钩吻氯碱(5)、钩吻碱戊(6)、19-(S)-钩吻醇碱(7)、19-(R)-钩吻醇碱(8)、钩吻素己(9).并对分离得到的化合物通过MTT法进行抗肿瘤活性检测,发现化合物1～3对肝癌细胞HepG2显示了很好的肿瘤细胞毒活性,IC50值分别为10.02±0.16、3.98 ±0.11、9.87±0.18 μM.

目的 研究钩枝藤总生物碱对非小细胞肺癌细胞系表达谱的影响,筛选出差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)并对功能基因进行分析和挖掘,以期为钩枝藤抗肺癌的分子机制提供理论依据.方法 将非小细胞肺癌NCI-H1975细胞分为对照组和钩枝藤总生物碱处理组,使用RNA-Seq技术开展全转录组测序,获取DEGs;对DEGs进行基因本体(gene ontology,GO)功能及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析;筛选差异基因核心模块并分析其影响功能,进一步分析关键基因对非小细胞肺癌生存期的影响;通过分析钩枝藤总生物碱对非小细胞肺癌免疫细胞肿瘤浸润的情况,确定关键基因表达与免疫浸润水平的相关性.结果 对照组和药物组共检测到2976个DEGs,其中药物组664个DEGs上调,2312个DEGs下调.钩枝藤总生物碱对铁死亡、氧化磷酸化、线粒体、溶酶体、细胞间隙连接、核苷酸结合寡聚化结构域(nucleotide binding oligomerization domain,NOD)样受体等介导的信号通路产生重要影响.在DEGs核心模块中,白细胞介素11(interleukin 11,IL11)的高表达可显著影响非小细胞肺癌患者的生存期,是非小细胞肺癌患者不良预后的关键因素之一;角形四肽重复干扰素诱导蛋白3(interferon induced protein with tetratricopeptide repeats 3,IFIT3)、白细胞介素 7 受体(interleukin 7receptor,IL7R)、2',5'-寡腺苷酸合成酶 2(2';5'-oligoadenylate synthetase 2,OAS2)、S-腺苷甲硫氨酸基结构域蛋白 2(radical S-adenosyl methionine domain containing 2,RSAD2)、受体转运蛋白 4(receptor transporter protein 4,RTP4)、不育 a 基序结构域 9 样(sterile alpha motif domain containing 9-like gene,SAMD9L)、X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(X-linked inhibitor of apoptosis associated factor 1,XAF1)的表达水平影响了非小细胞肺癌组织的纯度和免疫细胞浸润的类型,可能改变非小细胞肺癌的免疫微环境.结论 钩枝藤总生物碱能够影响非小细胞肺癌细胞的转录谱,具有潜在的抗非小细胞肺癌活性作用.

[目的]旨在筛选最适合钩藤幼苗生长发育及生物碱积累的培养基.[方法]以6种培养基(WPM、1/2MS、MS、White、B5、N6)培育的钩藤幼苗为研究对象,统计各个培养基中钩藤种子的萌发率并记录钩藤幼苗的表型;利用丙酮乙酰混合液法测定钩藤幼苗叶片的叶绿素a、叶绿素b和叶绿素总含量;运用HPLC分别测定钩藤幼苗叶片的钩藤碱和异钩藤碱含量.[结果]WPM培养基培育的钩藤种子萌发率最高,达42％,其余5种培养基的萌发率均低于30％,WPM培养基培育的钩藤幼苗的表型、鲜重和干重均为最优;1/2MS培养基培育的钩藤幼苗积累的光合色素含量最多,除叶绿素b含量与WPM有显著差异外,叶绿素a和叶绿素总量与WPM培养基均无显著差异;WPM培养基培育的钩藤幼苗叶片的钩藤碱和异钩藤碱含量均最高,是White培养基1.57和1.31倍.[结论]WPM培养基为钩藤种子萌发、生长发育以及生物碱积累的最适培养基,为钩藤优质微繁殖种苗的培育和药用成分的代谢合成的研究奠定了基础.