目的:检测诱导痰DKK3基因甲基化并探讨其在非小细胞肺癌（NSCLC）病情及预后评估中的临床价值。方法:选择山东省临沭县人民医院2015年1月至2017年12月诊治的80例NSCLC患者作为观察组，另选择同期50例肺部良性疾病患者（肺炎、支气管扩张及慢性阻塞性肺疾病）作为对照组，MSP法检测肺癌细胞和肺正常上皮细胞DKK3基因甲基化，分析DKK3基因甲基化与临床影响因素的关系，比较DKK3基因甲基化与未甲基化NSCLC患者预后的差异。结果:观察组诱导痰DKK3基因甲基化率显著高于对照组[81.3%（65/80）比2.0%（1/50）]，差异有统计学意义（ P<0.05）。肺癌细胞系中DKK3基因处于甲基化状态，而正常人肺上皮细胞BEAS-2B细胞中DKK3基因处于未甲基化状态。观察组患者诱导痰DKK3基因甲基化与胸腔积液、分化程度、肿瘤最大径、淋巴结转移、远处转移和TNM分期存在相关性（ P<0.05）。观察组DKK3基因甲基化患者R0切除率、3年生存率及总生有期（OS）均显著低于DKK3基因未甲基化患者[53.8%（35/65）比15/15、28.1%比37.9%、（1.8 ± 0.3）年比（2.1 ± 0.6）年]，差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:NSCLC患者诱导痰DKK3基因甲基化率显著升高，且与患者预后相关。诱导痰DKK3基因甲基化检测可为NSCLC病情及预后评估提供客观科学证据。

目的:探讨Dickkopf相关蛋白3(DKK3)基因高甲基化对直肠癌增殖、迁移及侵袭的影响及其临床价值。方法:SW480、LOVO、HT29及HCT116等直肠癌细胞购自中国科学院细胞库。选择2016年1月至2016年12月直肠癌患者(直肠癌组)及直肠良性疾病患者(对照组)为研究对象。设计合成寡核苷酸序列(MON、UMON和CON)并转染至LOVO直肠癌细胞。采用甲基特异性PCR检测直肠癌患者(肿瘤组织、癌旁组织)、对照组直肠组织及直肠癌细胞系中DKK3基因甲基化状态；分析DKK3基因甲基化与临床病理因素、无进展生存期(PFS)及总生存期的关系；Transwell小室检测MON组、UMON组及CON组LOVO直肠癌细胞迁移及侵袭。两组间均数比较用独立样本 t检验；多组间均数比较用单因素方差分析(组间比较用LSD- t检验)。Kaplan-Meier生存分析并采用Log-rank比较。 结果:直肠癌组患者肿瘤组织DKK3基因甲基化率显著高于癌旁组织及对照组直肠组织(甲基化率分别72.2%、11.1%比12.0%)，差异有统计学意义( χ2＝88.756， P<0.05)。SW480、HT29及HCT116等直肠癌细胞系中DKK3基因呈甲基化状态，而在LOVO直肠癌细胞中呈未甲基化状态。低+中分化、N2淋巴结转移、肿瘤最大径≥3 cm、T3+T4及Ⅲ+Ⅳ期患者DKK3基因甲基化率显著高于高分化、N0+N1淋巴结转移、肿瘤最大径<3 cm、T1+T2及Ⅰ+Ⅱ期患者(甲基化率分别79.31%比59.38%、86.11%比62.96%、83.67%比58.54%、83.33%比59.52%、82.76%比53.13%)，差异有统计学意义( χ2＝5.922、4.673、5.833、5.198、7.610，均 P<0.05)。DKK3基因甲基化患者PFS及中位生存期显著低于DKK3基因未甲基化患者[PFS为(24.4±3.8)个月比(33.7±4.1)个月，中位生存期为(31.5±4.2)个月比(42.8±5.4)个月]，差异有统计学意义(Log-rank＝21.135、30.876， P<0.05)。MON组LOVO直肠癌细胞1~6 d细胞活力、细胞迁移数及侵袭数均显著高于UMON组及CON组LOVO直肠癌细胞[1 d的吸光度( A)值分别为0.21±0.03、0.14±0.03比0.15±0.04、2 d的 A值分别为0.31±0.04、0.21±0.04比0.23±0.05、3 d的 A值分别为0.42±0.05、0.29±0.05比0.28±0.06、4 d的 A值分别为0.57±0.05、0.33±0.06比0.35±0.05、5 d的 A值分别为0.71±0.08、0.45±0.06比0.44±0.07、6 d的 A值分别为0.89±0.09、0.53±0.08比0.54±0.09，细胞迁移数分别为(687.1±23.5)、(287.5±15.4)个比(285.9±15.1)个；细胞侵袭数分别为(419.6±34.2)、(151.7±14.9)个比(152.6±15.5)个]，差异有统计学意义( F＝11.382、13.263、14.651、16.128、19.877、21.235、44.981、37.247， P<0.05)。 结论:DKK3基因高甲基化可促进直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭，有助于直肠癌病情及预后评估。

目的:探讨Dickkopf相关蛋白1 （Dickkopf 1，DKK1）基因启动子甲基化水平与2型糖尿病（type 2 diabetes，T2DM）微血管病变合并骨质疏松（osteoporosis，OP）的相关性。方法:收集2019年1月至2022年12月于临沂市中心医院就诊的T2DM微血管病变患者作为研究对象，根据是否合并OP症将患者分为观察组（44例）和对照组（58例）。测量研究对象的腰椎（L1~4）骨密度，检测骨代谢指标，包括血钙、血磷、25-维生素D 3[25-hydroxy vitamin D 3, 25-（OH）D 3]、甲状旁腺素（parathyroid hormone，PTH）、I型胶原C-末端肽（C-terminal telopeptide of typeI collagen, CTX）、I型前胶原N-末端肽（procollagen of aminoterminal propeptide, PINP）及抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase, TRACP）水平；测定DKK1基因启动子甲基化水平。 结果:观察组的DKK1基因启动子甲基化水平为5.17%±0.73%，显著高于对照组的3.81%±0.61%，差异有统计学意义（ t=5.22， P<0.001）。观察组的25-（OH）D 3水平、PTH和腰椎骨密度显著低于对照组，CTX和TRACP水平显著高于对照组（ t=5.58、4.35、4.12、4.05、4.17， P均<0.001）。在所有患者中，DKK1基因启动子甲基化水平与CTX、TRACP呈显著正相关关系（ r=0.41、0.39， P=0.006、0.027），与PTH、腰椎骨密度呈显著负相关关系（ r=-0.38、-0.43， P=0.015、0.003）。ROC曲线分析结果显示，DKK1基因甲基化水平区分T2DM微血管病变合并和未合并OP的曲线下面积为0.841（0.762~0.921），灵敏度和特异度分别为86.4%、72.4%。 结论:DKK1基因启动子甲基化水平与T2DM微血管病变患者发生OP及骨代谢指标有关。

目的:探讨老年分化型甲状腺癌患者应用外科手术切除联合碘-131（ 131I）治疗的临床疗效及对并发症等的影响。 方法:选择河北承德市中心医院于2019年3月至2021年3月收治的老年分化型甲状腺癌患者82例，依据随机数字表法分为观察组（41例）与对照组（41例）。对照组行甲状腺全切术+颈部淋巴结清扫术，观察组在对照组基础上给予 131I治疗。对两组患者各项指标进行评价（术后观察时间节点为3个月），包括围手术期指标，术后并发症情况，治疗前后卡氏功能状态（KPS）评分、血清淋巴细胞活化基因-3（LAG-3）和重组人Dick-kopfx相关蛋白-1（DKK-1）的变化，以及疗效情况。 结果:两组患者术中出血量和手术时间比较差异均无统计学意义（ P均> 0.05）；观察组住院时间[（6.72 ± 1.39）d]短于对照组[（8.78 ± 1.43）d， P < 0.001]。观察组并发症发生率（31.71%，13/41）低于对照组（53.66%，22/41， P = 0.045）。两组患者治疗后KPS评分均高于治疗前（ P均< 0.001）；治疗后观察组KPS评分高于对照组（ P < 0.001）。两组患者治疗后血清LAG-3水平均高于治疗前，而DKK-1水平均低于治疗前（ P均< 0.001）；治疗后观察组血清LAG-3水平高于对照组，而DKK-1水平低于对照组（ P均< 0.001）。观察组总有效率（95.12%，39/41）高于对照组（80.49%，33/41， P = 0.043）。 结论:老年分化型甲状腺癌患者应用外科手术切除联合 131I治疗临床疗效良好，且可降低术后并发症，以及上调LAG-3表达、下调DKK-1表达。

目的:探索人软骨细胞Wnt通路如何调控RUNX家族转录因子2(RUNX2)基因的表达从而诱导细胞表型改变。方法:使用人膝关节软骨样本，按Outerbridge分级选取损伤轻微区、交界区和严重区软骨，检测Ⅱ型胶原、Ⅰ型胶原、RUNX2基因的表达。使用抑制剂Dickkopf-1、PD98059、干扰RNA沉默丝裂原活化蛋白1/3、Dishevelled(DVL)1/2/3，检测人软骨细胞Wnt-3a诱导Ⅱ型胶原、Ⅰ型胶原、RUNX2基因表达改变作用变化。采用单因素方差分析和独立样本 t检验分析结果。 结果:软骨破坏严重区域Ⅱ型胶原表达低于轻微区域(0.3±0.08, t＝11.008， P<0.05)，Ⅰ型胶原RUNX2表达高于轻微区域(3.51±0.17，3.53±0.10， t＝19.845、31.180， P<0.05)。Wnt-3a处理后人软骨细胞Ⅱ型胶原表达低于对照组(0.51±0.04， t＝11.529， P<0.05)，Ⅰ型胶原RUNX2表达高于对照组(1.47±0.12，2.10±0.14， t＝4.907、20.976， P<0.05)。PD98059阻断了Wnt-3a诱导的Ⅱ型胶原、Ⅰ型胶原和RUNX2表达变化，而Dickkopf-1并没有阻断这一过程。DVL-2或MAPK1表达沉默后，Wnt-3a对RUNX2表达诱导作用失效。 结论:Wnt-3a通过DVL-2/MAPK1非经典通路上调RUNX2的表达从而促进软骨终末分化。

目的:探讨生长分化因子15（GDF-15）在甲状腺乳头状癌（PTC）中的表达及临床意义。方法:收集2019年1月至2月在湖南中医药大学第一附属医院行甲状腺癌根治术的3例PTC患者的肿瘤组织及淋巴结转移灶组织，使用高通量测序筛选差异表达基因；收集20例PTC患者肿瘤原发灶及淋巴结转移灶，用于验证测序结果；另收集20例PTC原发灶及癌旁组织（距肿瘤边缘>2 cm），用于验证目的基因在肿瘤组织及癌旁组织的表达情况；同时收集湖南中医药大学第一附属医院2014年1月至12月行甲状腺癌根治术PTC患者病理标本64例，其中31例患者伴淋巴结转移。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测GDF-15的表达情况，验证测序结果；采用免疫组织化学法检测GDF-15蛋白在PTC原发灶、癌旁组织以及淋巴结转移灶组织中表达水平。根据GDF-15蛋白在PTC患者原发灶组织中的表达，将其分为高表达组（35例）与低表达组（29例），分析GDF-15表达水平与患者临床病理特征的关系；Kaplan-Meier法分析两组患者5年无瘤生存率。结果:3例PTC原发灶与转移灶组织mRNA高通量测序结果显示，前10位差异表达基因为CDH2、CDF15、DKK1、GLIPR1、PCDH7、ID3、FBN1、MYPN、UBASH3B、CCDC80。20例PTC原发灶组织及癌旁组织中GDF-15 mRNA表达量分别为4.1±0.5、2.8±0.3，差异有统计学意义（ t=2.220， P=0.032）。另20例PTC原发灶及淋巴结转移灶组织中GDF-15 mRNA表达量分别为3.1±0.4、5.8±0.7，差异有统计学意义（ t=3.556， P=0.001）。免疫组织化学结果显示，GDF-15在癌旁组织、PTC原发灶及转移灶中免疫组织化学评分分别为（4.0±0.3）分、（6.1±0.3）分和（9.0±0.4）分，PTC原发灶与癌旁组织、转移灶与癌旁组织、转移灶与原发灶组织GDF-15蛋白表达比较，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。GDF-15高表达组与低表达组患者肿瘤长径、肿瘤T分期、肿瘤N分期构成比比较，差异均有统计学意义（均 P<0.05）；GDF-15高表达组患者5年无瘤生存率为60%，低表达组为83%，差异有统计学意义（ P=0.033）。 结论:GDF-15在癌旁组织、PTC组织及淋巴结转移灶组织中表达逐渐增高，且其表达水平与患者肿瘤进展、复发、转移相关，可作为潜在的临床判断预后的预警分子及治疗靶点。

目的:探讨腹腔脱落细胞Dickkopf-3(DKK3)基因甲基化在Ⅳ期胃癌病情及预后评估中的临床意义。方法:选择2014年1月至2017年12月湖北医药学院附属随州医院诊治的原发性Ⅳ期胃癌患者为研究对象(胃癌组)，检测Ⅳ期胃癌患者(胃癌组， n＝120)腹腔脱落细胞、外周血和胃良性疾病患者(对照组， n＝60)腹腔脱落细胞DKK3基因甲基化并比较其差异，分析胃癌组患者不同临床病理因素中腹腔脱落细胞DKK3基因甲基化的差异，Kaplan-Meier法对胃癌患者腹腔脱落细胞DKK3基因甲基化和未甲基化患者行生存分析。受试者工作特征(ROC)曲线比较腹腔脱落细胞及外周血DKK3诊断胃癌腹膜种植转移敏感度及特异性。胃癌组和对照组患者对比采用 t或 χ2检验。 结果:胃癌组患者腹腔脱落细胞DKK3基因甲基化率(73.3%)均显著高于胃癌组患者外周血(60.0%)及对照组患者腹腔脱落细胞(8.3%， χ2＝70.303， P<0.05)；胃癌组患者腹腔脱落细胞DKK3基因甲基化率在分化程度、肿瘤最大径和淋巴结转移数目的差异均有统计学意义( χ2＝4.096、5.507、6.525， P值均<0.05)。胃癌患者中腹腔脱落细胞DKK3基因甲基化的患者中位生存期显著低于未甲基化患者[(13.2±1.4)个月比(16.4±1.7)个月，Log-rank＝7.817， P<0.01]，差异有统计学意义。腹腔脱落细胞DKK3基因甲基化诊断腹膜种植转移敏感度(0.753)及特异性(0.811)均显著高于外周血DKK3基因甲基化敏感度(0.536)及特异性(0.609， P值均<0.05)，差异有统计学意义。 结论:Ⅳ期胃癌患者腹腔脱落细胞DKK3基因甲基化率显著高于外周血，腹腔脱落细胞DKK3基因甲基化诊断胃癌腹膜种植转移的灵敏度及特异性均显著高于外周血。

目的:研究子宫内膜癌组织微小核糖核酸(miR)-139-5p、miR-379-5p表达水平与侵袭相关基因和预后的关系.方法:选取2018年12月-2019年12月于西安交通大学第二附属医院行手术治疗的105例子宫内膜癌患者.收集术后癌组织与癌旁组织标本,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测癌组织与癌旁组织miR-139-5p、miR-379-5p及侵袭基因[高迁徙率蛋白1(HMGB1)、分泌型蛋白Dikkopf-1(DKK1)]的表达水平.Pearson法分析癌组织miR-139-5p、miR-379-5p表达水平与侵袭基因表达水平的相关性.根据癌组织miR-139-5p、miR-379-5p不同表达水平将患者分为miR-139-5p高表达组(n=62)与低表达组(n=43)、miR-379-5p高表达组(n=69)与低表达组(n=36),分析miR-139-5p、miR-379-5p高低表达与患者临床病理特征关系.随访3年,统计患者死亡情况.采用Kaplan-Meier法分析miR-139-5p、miR-379-5p表达水平与子宫内膜癌患者预后的关系.结果:癌组织中的miR-139-5p、miR-379-5p表达水平低于癌旁组织(P＜0.05).癌组织中DKK1表达量低于癌旁组织,HMGB1表达量高于癌旁组织(P＜0.05).miR-139-5p、miR-379-5p表达水平与DKK1表达量呈正相关,与HMBG1表达量呈负相关(P＜0.05).miR-139-5p、miR-379-5p高、低表达组在国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移、脉管浸润、肌层浸润方面比较,差异有统计学意义(P＜0.05).105例患者随访3年,期间失访3例、死亡21例,3年生存率为79.41％(81/102).miR-139-5p低表达组3年总生存率为61.90％(26/42),低于 miR-139-5p 高表达组的 91.67％(55/60);miR-379-5p 低表达组 3 年总生存率为 62.86％(22/35),低于miR-379-5p高表达组的88.06％(59/67).结论:子宫内膜癌组织中miR-139-5p、miR-379-5p表达水平下调,可能与侵袭基因表达量异常以及患者的预后不良有关.

目的:探讨miR-25靶向调控Dickkopf相关蛋白3(DKK3)基因对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其作用机制.方法:选取确诊并进行前列腺癌根治手术治疗的前列腺癌病人组织标本24例为研究对象,选择同期因良性前列腺增生行电切手术病人组织标本24例为对照组,采用HE染色观察2组前列腺组织形态学变化,实时定量PCR检测组织中miR-25的相对表达水平,免疫组织化学法检测组织中DKK3表达情况.体外培养人前列腺癌PC-3细胞,通过Lipofectamine 2000法将miR-25 NC(NC组)、miR-25 inhibitors(miR-25 inhibitors组)转染入PC-3细胞中,通过MTT实验检测miR-25对细胞增殖的影响,通过Transwell实验检测miR-25对PC-3细胞迁移能力的影响,通过流式细胞术检测miR-25对PC-3细胞凋亡的影响,Western blotting法检测转染后PC-3细胞中DKK3的蛋白表达水平.结果:前列腺癌组织较前列腺增生组织中miR-25表达水平显著升高(P<0.05),DKK3基因表达明显降低(P<0.05).与NC组相比,miR-25 inhibitors组细胞增殖率显著降低(P<0.05),细胞迁移能力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),DKK3的蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05).结论:miR-25通过靶向调控DKK3基因促进前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移,抑制细胞凋亡.

目的 探究补益营卫方对衰老小鼠表皮干细胞经Dickkopf-1(DKK1)阻断后Wnt/β-catenin信号通路中的原癌基因转录因子(C-myc)、轴抑制因子2(axis inhibitor2,Axin2)、基质金属蛋白酶-7(matrix metallopro-teinase-7,MMP-7)、散乱蛋白 1(dishevelled 1,Dsh1)、淋巴增强因子-1(lymphoid enhancer factor-1,LEF-1)蛋白和mRNA表达水平的影响及其延缓皮肤衰老的作用.方法 选取3月龄SPF级SAMR1雄性小鼠3只,作为年轻常规组;8月龄SPF级SAMP8雄性小鼠9只,随机分成衰老常规组、衰老阻断剂组和衰老药物干预组,每组3只,剪取各组小鼠的背部皮肤,分离得到表皮干细胞,并传代培养至融合.年轻常规组小鼠表皮干细胞用常规培养基培养,衰老常规组用常规培养基培养,衰老阻断剂组用含160 ng·mL-1 DKK1的完全培养基培养,衰老药物干预组用含160 ng·mL-1 DKK1+2.5％药物血清浓度的完全培养基培养(药物为补益营卫方,其组成为人参5 g、生黄芪15 g和炙甘草7 g,其浓度为0.5 g·mL-1).使用Western blot法检测小鼠表皮干细胞中C-myc、Axin2、MMP-7、Dsh1、LEF-1蛋白的表达水平,RT-qPCR法检测小鼠表皮干细胞中C-myc、Axin2、MMP-7、Dsh1、LEF-1 mRNA的表达水平.结果 与年轻常规组相比,衰老常规组小鼠表皮干细胞中的C-myc、Axin2、MMP-7、Dsh1、LEF-1蛋白表达水平均升高(P均＜0.01);与衰老常规组相比,衰老阻断剂组小鼠表皮干细胞中的上述5种蛋白的表达水平均降低(P均＜0.01);与衰老常规组和衰老阻断剂组相比,衰老药物干预组5种蛋白表达水平均降低(P均＜0.01).与年轻常规组相比,衰老常规组小鼠表皮干细胞中的C-myc、Axin2、MMP-7、Dsh1、LEF-1的mRNA表达水平均升高(P＜0.05或P＜0.01);与衰老常规组相比,衰老阻断剂组小鼠表皮干细胞中的C-myc、Axin2、LEF-1 mRNA表达水平均降低(P＜0.05或P＜0.01),但MMP-7、Dsh1 mR-NA 表达差异均无统计学意义(P均＞0.05);与衰老常规组相比,衰老药物干预组小鼠表皮干细胞中的C-myc、Axin2、MMP-7、Dsh1、LEF-1 mRNA的表达水平均降低(P＜0.05或P＜0.01);与衰老阻断剂组相比,衰老药物干预组表皮干细胞中C-myc、Axin2、Dsh1、LEF-1 mRNA水平均降低(P＜0.05或P＜0.01),但MMP-7 mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 补益营卫方能降低衰老小鼠表皮干细胞Wnt/β-catenin信号通路中C-myc、Axin2、MMP-7、Dsh1、LEF-1 蛋白和 C-myc、Axin2、Dsh1、LEF-1 mRNA 的表达,并与其阻断剂 DKK1 协同降低衰老小鼠表皮干细胞Wnt/β-catenin信号通路的活性,以延缓皮肤的衰老.