目的:通过转录组学确定结核表位疫苗MP3RT在人源化动物模型上诱导的差异表达基因（DEG），为阐明MP3RT潜在的分子机制提供新思路。方法:本研究于2019年8月开始至2022年2月完成。本研究采用edgeR软件以差异倍数≥1.5且 P<0.05为筛选条件筛DEG，对筛选出的DEG进行基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析以及蛋白互作网络分析。并对上述DEG通过RT-qPCR进行实验验证，采用GraphPad Prism 8软件进行统计学分析。 结果:转录组学鉴定了367个DEG（214个上调，153个下调）。生物信息学分析发现，上述DEG的GO富集显著聚焦于细胞代谢、生长、凋亡、炎症等词条，KEGG富集显著聚焦于MAPK信号通路等炎症相关通路。蛋白互作网络分析显示，蛋白Abl1聚集度最大，聚集系数最高，连通性最好。RT-qPCR结果显示，与磷酸盐缓冲液（PBS）组相比，MP3RT疫苗组中 cpne4（ t=2.48， P=0.048 0）、 h2-q10（ t=2.95， P=0.025 6）、 mef2c（ t=2.87， P=0.028 4）、 cr2（ t=3.23， P=0.178）、 ablim1（ t=2.91， P=0.033 5）、 dll1（ t=2.70， P=0.027 3）和 ms4a2（ t=3.03， P=0.019 2）基因表达水平显著上调， cd163l1（ t=2.56， P=0.043 0）、 il1r1（ t=2.91， P=0.022 7）和 cd34（ t=2.42， P=0.046 2）基因表达水平显著下调。 结论:MP3RT表位疫苗在人源化动物模型上诱导了367个DEG，这些DEG与新陈代谢和免疫反应相关，p38 MAPK和JNK/MAPK信号通路在MP3RT疫苗分子机制中扮演着重要的角色。

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)视网膜病变(DR)患者血清肌联素、皮质抑素、Delta样配体4(DLL4)的水平及其临床意义。方法:前瞻性选取2020年5月至2022年3月北京中医医院怀柔医院收治的341例T2DM患者，对患者进行眼底检查并根据DR诊断标准分为非DR组( n＝85)与DR组( n＝256)，DR组根据我国DR临床诊疗指南中分期标准分为非增殖型与增殖型，分别为142例、114例；选取同期于本院体检的190例健康人群作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测三组血清肌联素、皮质抑素、DLL4水平，收集患者资料，并检测生化指标。采用logistic回归分析DR的影响因素，Pearson相关性分析血清肌联素、皮质抑素、DLL4与糖脂代谢、胰岛素抵抗的关系；受试者工作特征(ROC)曲线分析血清肌联素、皮质抑素、DLL4对DR的诊断价值。 结果:DR组与非DR组血清肌联素、DLL4水平高于对照组，皮质抑素水平低于对照组(均 P<0.05)；DR组肌联素、DLL4水平高于非DR组，皮质抑素水平低于非DR组(均 P<0.05)。增殖型DR患者血清肌联素、DLL4水平高于非增殖型，皮质抑素水平低于非增殖型(均 P<0.05)。DR组T2DM病程长于非DR组，吸烟与饮酒占比、收缩压、空腹血糖、糖化血红蛋白、甘油三酯、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)高于非DR组(均 P<0.05)。Logistic回归分析显示，T2DM病程、收缩压、吸烟、饮酒、糖化血红蛋白、甘油三酯、肌联素、皮质抑素、DLL4为T2DM患者DR发病的影响因素(均 P<0.05)。Pearson相关分析结果显示，血清肌联素、DLL4与空腹血糖、糖化血红蛋白、空腹胰岛素、HOMA-IR呈正相关(均 P<0.05)，皮质抑素与空腹血糖、糖化血红蛋白、HOMA-IR呈负相关(均 P<0.05)。ROC分析结果显示，肌联素、皮质抑素、DLL4单独及联合应用诊断DR的曲线下面积(AUC)分别为0.691、0.745、0.749、0.861，其中联合应用的诊断价值较高。 结论:T2DM并发DR患者血清肌联素、DLL4水平上升，皮质抑素水平下降，与糖脂代谢及胰岛素抵抗密切相关，为DR发生的影响因素，三者联合检测可提高预测DR的价值。

目的:探讨组织δ样配体3（DLL3）表达和着色性干皮病基因G（XPG）基因多态性对晚期肺鳞癌患者铂类化疗敏感性影响的交互作用。方法:回顾性选取2019年3月至2021年12月岳池县人民医院收治的140例晚期肺鳞癌患者，均在充分知情前提下给予卡铂+注射用紫杉醇（白蛋白结合型），每3周为1个周期，共治疗4个周期。根据化疗敏感性分为敏感组46例和非敏感组94例，比较两组基线资料、组织DLL3表达评分和XPG基因多态性，比较不同XPG基因型患者组织DLL3表达评分，采用多因素Logistic回归分析影响化疗敏感性的危险因素，采用交互作用系数γ分析组织DLL3表达和XPG基因多态性的交互作用是否存在及其作用类型。结果:敏感组组织DLL3表达评分低于非敏感组[（3.28 ± 0.93）分比（7.59 ± 1.22）分]，差异有统计学意义（ P<0.01）。敏感组CC基因型患者多于非敏感组，CT、TT基因型患者少于非敏感组（ P<0.05）。CC、CT、TT基因型患者组织DLL3表达评分分别为（3.51 ± 0.93）、（6.76 ± 1.08）和（10.09 ± 1.12）分，差异有统计学意义（ P<0.05）；进一步分析显示，组织DLL3表达评分CC

目的:分析MiR-195与DLL4蛋白在结直肠癌组织中的表达模式，探讨二者与结直肠癌患者临床病理指标及预后的关系。方法:采用实时荧光定量PCR检测miR-195在56例结直肠癌组织中microRNA相对表达量，用Western blot和免疫组化检测DLL4蛋白的表达和肿瘤微血管密度，分析二者表达模式与结直肠癌患者临床病理学指标及预后的关系。采用基因过表达miR-195处理结肠癌细胞系SW480，Western blot检测通路相关蛋白DLL4、Jagged1、Noth受体胞内段、CyclinD1、Hes1、Bcl-2及NF-kB的表达。结果:结直肠癌组织中DLL4蛋白表达水平高于正常结直肠组织，平均为正常结直肠组织中的(2.342±0.004)倍( t＝5.323， P＝0.018) ；而miR-195表达水平低于正常结直肠组织，平均为正常结直肠组织的(0.277±0.005)倍( t＝2.371， P＝0.008)。DLL4蛋白表达水平与miR-195表达呈负相关( r＝-0.881， P＝0.015)。二者表达与结直肠癌的分化程度、淋巴结转移、TNM分期密切相关。DLL4蛋白高表达患者的预后差于DLL4蛋白低表达的患者( P＝0.013)，miR-195低表达患者的预后差于miR-195高表达患者( P＝0.009)，差异均有统计学意义。miR-195可阻断Notch通路，其相关蛋白ICN 、Hes-1随作用时间延长而表达下降。 结论:miR-195与Notch拮抗性表达可能与结直肠癌发生发展密切相关，可作为结直肠癌判定预后的新的指标。

目的:观察微小RNA(microRNA，miR)-195调控结直肠癌中Notch通路配体Delta样配体4(Dll4)表达，探讨其作用靶点，明确miR-195通过Notch通路抗结直肠癌的分子机制。方法:收集北京大学人民医院胃肠外科2010年11月至2011年2月56例行结直肠癌根治术切除的标本，3、应用芯片技术筛选6例结直肠肿瘤组织和正常肠黏膜组织中micro-RNA的表达差异，用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-195在组织中相对表达量，应用固定化蛋白质印迹法(Western blot)检测56例结直肠癌组织及其邻近正常肠黏膜中Notch通路中Dll4蛋白表达；采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-195与Dll4 3’端非编码区(3’UTR)区的相互作用及活性，采用基因过表达miR-195(40 pmol/L)处理结肠癌细胞系SW480，运用流式细胞仪观察其对细胞凋亡的影响，Western blot检测通路相关蛋白Dll4、锯齿状蛋白1(Jagged1)、Notch受体胞内段(NICD)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、转录因子发状分裂相关增强子1(HES1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、核因子-κB(NF-κB)的表达。组间比较采用方差分析(ANOVA)，独立样本 t检验比较蛋白表达量差异，统计学方法分别采用独立样本 t检验、配对样本 t检验及单因素方差分析。 结果:结直肠癌组织中miR-195表达水平明显低于正常肠黏膜，而Dll4蛋白表达水平高于正常肠黏膜，分别为正常肠黏膜的0.34倍(0.341±0.008)及1.92倍(1.922±0.003) ( t＝3.116、2.374， P<0.05)，差异均有统计学意义，体外转入miR-195后，Dll4荧光素酶活性低于对照组(0.442±0.010、1.010±0.002， t＝4.305， P<0.01)，差异有统计学意义，miR-195和γ-分泌酶抑制剂(DAPT)都可阻断Notch1通路，抑制SW480细胞的增殖(3.1%比17.3%， t＝4.232， P<0.01)，差异有统计学意义，诱导其凋亡(13.7%比48.3%， t＝8.355， P<0.01)，两者具有协同作用( t＝7.474， P<0.01)，差异有统计学意义。同时Notch通路相关蛋白NICD、Hes-1随作用时间延长而表达下降。 结论:结直肠癌中miR-195及Dll4呈拮抗性表达，与其病理学特征密切相关，Dll4为miR-195调控的下游靶基因，miR-195通过负性调控Dll4/Notch信号通路抗结直肠癌。

目的:观察HIF-2α在增生型糖尿病视网膜病变（PDR）纤维血管膜中的表达，初步探讨HIF-2α在PDR新生血管形成中的作用。方法:回顾性临床研究。2014年7月至2015年7月于青岛大学附属医院眼科行玻璃体切割手术的PDR患者57例60只眼纳入研究。根据手术前是否行玻璃体腔注射抗VEGF药物治疗将患眼分为PDR未注药组和PDR注药组，分别为30例32只眼、27例28只眼。PDR注药组患眼手术前2~7 d玻璃体腔注射10 mg/ml雷珠单抗0.05 ml（含雷珠单抗0.5 mg ）。选取同期特发性黄斑前膜患者18例18只眼作为对照组。于玻璃体切割手术中获得PDR纤维血管膜、黄斑前膜病理标本。免疫组织化学染色法及荧光定量PCR （RT-PCR ）检测各组病理标本中HIF-2α、Delta样配体4 （Dll4）、VEGF的表达。多组间相关因子表达差异比较采用Kruskal-Wallis检验。两变量间关系行Spearman相关性分析。结果:免疫组织化学染色结果显示，PDR未注药组、PDR注药组纤维血管膜中HIF-2α、Dll4、VEGF蛋白表达均呈阳性。PDR未注药组HIF-2α、Dll4、VEGF蛋白相对表达量均高于PDR注药组，差异均有统计学意义（ t=4.36、6.01、4.82， P=0.000、0.008、0.016）。RT-PCR检测结果显示，PDR未注药组、PDR注药组、对照组纤维血管膜、黄斑前膜中HIF-2α、Dll4、VEGF mRNA相对表达量比较，差异均有统计学意义（ H=18.81、19.60、20.50 ， P=0.000、0.000、0.000 ）。其中，PDR未注药组、PDR注药组HIF-2α、Dll4、VEGF mRNA相对表达量均显著高于对照组；与PDR未注药组比较，PDR注药组HIF-2α、Dll4、VEGF mRNA相对表达量均降低。Spearman相关性分析结果显示，HIF-2α与Dll4、VEGF mRNA相对表达量呈显著正相关（ r=0.95、0.87， P<0.05 ）。 结论:PDR患眼纤维血管膜中HIF-2α表达高于对照组，且与DLL4、VEGF的表达均呈显著正相关。

目的:观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)是否促进角质形成细胞(KCs)中血管内皮细胞因子CD34的表达。方法:2020年10月至2021年7月，15只C57BL/6小鼠背部制作全皮层缺损创面，给予及时护理，分别取正常组织及第1、3、5、7天创面组织进行蛋白免疫印迹法(Western blot)检测VEGF表达。细胞实验分为KCs组和KCs+VEGF组，采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测CD34信使RNA(mRNA)水平，Western blot检测CD34、Delta样配体4(DLL4)、肝配蛋白B2 (Ephrin B2)蛋白水平的表达；加入VEGF组和VEGF+VEGF抑制剂L-685458组采用Western blot检测CD34蛋白表达。应用图像处理软件Image J和统计软件GraphPad Prism6分析，两组间比较采用 t检验，多组间采用单因素方差分析。 结果:随着时间的推移，创面组织中VEGF蛋白表达水平呈动态升高(N＝0.344±0.037，d1＝0.158±0.019，d3＝0.298±0.006，d5＝0.509±0.066，d7＝1.056±0.172， F＝172.8， P<0.01)。加入VEGF后，角质形成细胞CD34 mRNA表达增加(KCs＝1.33±0.36，KCs+VEGF＝5.04±0.51， t＝10.25， P<0.01)，CD34、DLL4、Ephrin B2蛋白表达水平升高(KCs＝0.268±0.026，KCs+VEGF＝0.693±0.005， tCD34＝27.78， PCD34<0.01；KCs＝0.172±0.063，KCs+VEGF＝0.609±0.171， tDLL4＝4.785， PDLL4<0.05；KCs＝0.293±0.031，KCs+VEGF＝0.835±0.049， tEphrin B2＝16.26， PEphrin B2<0.05)，而加入VEGF抑制剂L-685458后，角质形成细胞中CD34表达低于VEGF组(VEGF＝0.777±0.053，VEGF+L-685458＝0.263±0.053， t＝11.83， P<0.01)。 结论:VEGF促进角质形成细胞中血管内皮细胞相关因子CD34、DLL4、Ephrin B2的表达。

目的:研究CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞促进肝癌肿瘤血管生成的作用。 方法:磁珠分选法分离得到人脾脏CD68 ＋M0巨噬细胞，体外采用IL-4和IL-13诱导为CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞。将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分别与CD68 ＋M0和CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞体外共培养。CCK-8法检测HUVEC的细胞活力，划痕试验检测细胞的迁移能力，体外成管试验检测血管形成的能力，Western blot检测HUVEC中血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Notch1、Dll4的表达水平，酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养基中血管内皮生长因子(VEGF)和IL-8的表达水平。采用BALB/c裸鼠构建HepG2移植瘤肝癌模型，分别注射CD68 ＋M0和CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞，免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD105的表达，Western blot检测VEGF、VEGFR2、Notch1、Dll4的表达水平。 结果:(1)IL-4和IL-13可以诱导CD68 ＋M0巨噬细胞向CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞分化。(2)细胞实验中，CD68 ＋M0型巨噬细胞对HUVEC的成管能力无明显促进作用，细胞中VEGF、VEGFR2、Notch1、Dll4、IL-8水平的变化无统计学意义。CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞可以促进HUVEC的体外成管，其作用与VEGF-VEGFR2-Notch1/Dll4信号激活有关。(3)动物实验中，CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞可以促进CD105的表达和肿瘤血管的生成，同时可以提高VEGF-VEGFR2-Notch1/Dll4信号的表达。 结论:CD68 ＋CD163 ＋M2型巨噬细胞可以通过分泌VEGF等促血管生成因子，激活VEGF-VEGFR2-Notch1/Dll4信号促进肝癌中肿瘤血管的生成。

目的:研究积雪草酸(AA)对糖尿病大鼠血—视网膜屏障(BRB)的保护作用及其可能机制。方法:取健康8周龄雄性SD大鼠96只，按照随机数字表法分为正常对照组、糖尿病模型组、低剂量AA组和高剂量AA组，每组24只。取糖尿病模型组、低剂量AA组、高剂量AA组大鼠采用腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型，正常对照组注射等量枸橼酸盐缓冲液，模型建立后1个月，低剂量AA组和高剂量AA组分别给予37.5 mg/kg、75.0 mg/kg AA灌胃；正常对照组及糖尿病模型组给予等量0.5%羧甲基纤维素钠灌胃，每日1次。在给药第0、1、2、3、4周称量大鼠体质量并检测鼠尾静脉血糖值。给药后1个月取大鼠视网膜组织进行实验。采用苏木精—伊红染色法观察大鼠视网膜组织的病理变化；采用伊文思蓝定量法检测BRB的破坏情况；采用免疫荧光染色法检测视网膜组织中Occludin、Notch1、Jagged典型Notch配体1(JAG1)、Delta样典型Notch配体4(DLL4)蛋白的表达分布；采用实时荧光定量PCR法及Western blot法检测Occludin、Notch1、JAG1、DLL4 mRNA及蛋白的表达。结果:给药第4周，高剂量AA组体质量明显高于糖尿病模型组，低剂量AA组和高剂量AA组血糖浓度均低于糖尿病模型组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。正常对照组大鼠视网膜细胞排列整齐，结构层次清晰。糖尿病模型组大鼠视网膜明显增厚，外核层增厚，细胞排列紊乱，结构层次不清晰。低剂量AA组和高剂量AA组大鼠视网膜厚度和结构均较糖尿病模型组明显改善。正常对照组、糖尿病模型组、低剂量AA组和高剂量AA组视网膜中伊文思蓝含量依次为(3.07±1.30)、(13.73±3.88)、(9.57±2.69)和(6.55±1.61)ng/mg，总体差异有统计学意义( F＝18.50， P<0.01)，其中高剂量AA组视网膜中伊文思蓝含量明显低于糖尿病模型组，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。糖尿病模型组Occludin蛋白相对表达量明显低于其余3个组，Notch1、JAG1和DLL4蛋白相对表达量明显高于其余3个组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；高剂量AA组Occludin蛋白相对表达量明显高于低剂量AA组，Notch1、JAG1和DLL4蛋白相对表达量明显低于低剂量AA组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与正常对照组比较，糖尿病模型组及低剂量AA组Occludin mRNA相对表达量明显下调，Notch1、JAG1和DLL4 mRNA相对表达量明显上调，差异均有统计学意义(均 P<0.01)；高剂量AA组Occludin mRNA相对表达量明显高于糖尿病模型组和低剂量AA组，Notch1 mRNA相对表达量明显低于糖尿病模型组和低剂量AA组，JAG1和DLL4 mRNA相对表达量明显低于糖尿病模型组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:AA可能通过抑制Notch1信号通路发挥对糖尿病大鼠BRB的保护作用。

目的:观察Notch配体Jagged1在增生性糖尿病视网膜病变(PDR)纤维血管膜中的表达及其意义。方法:于2014年7月至2015年7月在青岛大学附属医院眼科收集PDR患者57例60眼玻璃体切割术中纤维血管膜标本。根据术前是否行抗血管内皮生长因子药物玻璃体内注射将患眼分为未注药组30例32眼和注药组27例28眼，其中注药组患眼于手术前2~7 d行雷珠单抗玻璃体内注射。收集同期非糖尿病伴特发性黄斑前膜患者18例18眼黄斑前膜标本为对照组。采用苏木精-伊红染色观察各组标本结构特征；采用免疫组织化学染色法检测未注药组与注药组病理标本中Jagged1、Delta样配体4(Dll4)和Notch1蛋白的表达；采用实时荧光定量PCR测定各组标本中Jagged1、Dll4和Notch1 mRNA相对表达量。采用Pearson线性相关分析评估PDR纤维血管膜标本中Jagged1 mRNA相对表达量与Dll4 mRNA和Notch1 mRNA相对表达量关系。结果:光学显微镜下可见PDR纤维血管膜中新生血管生成，且注药组血管管腔狭窄，未注药组血管管腔相对扩张，黄斑前膜中未见新生血管。未注药组和注药组病理标本中均有Jagged1、Dll4和Notch1蛋白表达，主要位于新生血管内皮组织中。未注药组病理标本中Jagged1、Dll4和Notch1蛋白阳性染色吸光度( A)值分别为6.25±1.82、6.87±1.89和5.12±2.14，高于注药组的1.46±0.37、1.55±0.24和1.32±0.53，差异均有统计学意义( t＝5.168， P＝0.014； t＝6.012， P＝0.008； t＝3.453， P＝0.030)。未注药组、注药组和对照组病理标本中Jagged1、Dll4和Notch1 mRNA相对表达量总体比较，差异均有统计学意义( F＝77.337、62.305、51.869，均 P<0.01)；其中，未注药组和注药组病理标本中Jagged1、Dll4和Notch1 mRNA相对表达量均显著高于对照组，注药组病理标本中Jagged1、Dll4和Notch1 mRNA相对表达量均较未注药组明显降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。Jagged1 mRNA相对表达量与Dll4和Notch1 mRNA相对表达量均呈显著正相关( r＝0.925、0.950，均 P<0.05)。 结论:Jagged1在PDR纤维血管膜血管内皮中呈高表达，且与Dll4和Notch1的表达均呈正相关，Jagged1参与新生血管形成的作用途径可能与Dll4及Notch1相关。