目的:观察微小RNA(miRNA，miR)-185在骨肉瘤患者中的表达，探讨其在骨肉瘤诊断及预后中的价值。方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测54对骨肉瘤患者和健康对照者(性别和年龄匹配)的miR-185表达。根据miR-185的中位数(2.381)，将所有患者分为两组：高miR-185表达组(21)和低miR-185表达组(33)。然后分析miR-185表达与患者临床病理因素的相关性。血清样本在郑州大学第一附属医院2012年1月1日至2014年12月份从接受手术但未接受化学疗法或放射疗法的患者中收集，并分析miR-185表达与骨肉瘤患者的临床病理特征和总体生存率的关系。使用Manne Whitney U检验比较骨肉瘤患者和正常对照组血清miR-185水平的差异。对数秩检验和Kaplan-Meier方法评估骨肉瘤患者的总体生存率。采用Cox回归和多因素分析评估预后价值。 结果:与正常对照组比较，骨肉瘤患者血清中的miR-185表达显著降低( U＝373.000, P<0.05)，差异有统计学意义。miR-185的低表达与较大的肿瘤体积(直径<5 cm比直径≥5 cm的miR-185：3.100±0.359比1.806±0.226， P<0.01)，较高的TNM分期(一、二期比三、四期的miR-185：2.986±1.562比1.566±1.305， P<0.01)和远处转移(未转移比转移的miR-185：3.014±1.660比1.590±1.148， P<0.01)密切相关，差异有统计学意义。Kaplan-Meier曲线生存分析和对数秩检验显示，miR-185的低表达与骨肉瘤患者的总生存率降低有关。此外，多变量分析表明，miR-185表达降低是骨肉瘤患者总体生存的独立预后生物标志物( P<0.01)，差异有统计学意义。 结论:血清miR-185可作为一种肿瘤抑制因子，有助于骨肉瘤患者的诊断、预后。

目的:通过生物信息学方法分析骨关节炎(OA)患者与正常人血清微小RNAs(miRNAs)表达差异。方法:从基因表达数据库(GEO)和ArrayExpress数据库中查找OA血清相关的芯片数据，并下载GSE105027数据集。筛选样本包括8例OA患者血清和12例正常(NC)人样本，其中女性患者5例，健康女性7例。用R语言Limma包分别筛选出男/女性OA和男/女性NC之间的差异表达miRNAs(DEMs)，设定阈值为 P<0.05和|log2FC|>1，用ggplot2包绘制火山图和韦恩图，得到2个DEMs：hsa-miR-33b-3p和hsa-miR-4284。用STRING和Cytoscape软件构件蛋白互作网络图(PPI)网络，依据LncBase和MNDR数据库筛选相关的长链非编码RNA(lncRNAs)，绘制内源竞争RNA(ceRNA网络互作图，Cytohubba筛选出关键基因，结合NONCODE和lncRNA SNP2数据库筛选与骨关节炎相关的lncRNAs，得出关键调控轴。 结果:共筛选出男、女性共有的DEMs 2个：hsa-miR-33b-3p和hsa-miR-4284，均为下调。结合ceRNA网络及数据库综合分析出lncRNA KCNQ1OT1-miR-33b-3p-PIK3CA轴。结论:通过生物信息学分析结果显示OA和NC的血清miRNAs表达差异集中在细胞凋亡、炎症和代谢，而lncRNA KCNQ1OT1-miR-33b-3p-PIK3CA轴在OA发病机制中尤为很重要。

目的:探讨长链非编码RNA肿瘤蛋白53靶基因1(lncRNA TP53TG1)在人皮肤基底癌细胞中的表达及其与增殖的关系。方法:人正常皮肤细胞(HaCaT)和人皮肤基底细胞癌TE 354.T和A431细胞系采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术分析lncRNA TP53TG1表达水平。选取高表达的皮肤基底细胞癌TE 354.T细胞作为研究对象，采用慢病毒感染TE 354.T细胞，建立lncRNA TP53TG1过表达细胞系和对照细胞，分别命名为对照组和TP53TG1组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验分析对照组和TP53TG1组细胞的增殖能力；采用蛋白质免疫印迹分析两组细胞增殖指标细胞核增殖抗原(Ki-67)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平；采用7-氨基放线菌素D(7-AAD)试剂盒测定两组细胞的增殖活性；在裸鼠建立体外移植瘤模型，分析两组细胞形成肿瘤的体积和重量；采用实时荧光定量PCR分析lncRNA TP53TG1下游与细胞增殖相关的基因水平。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:人正常皮肤细胞(HaCaT) lncRNA TP53TG1表达水平(0.83±0.34)明显低于人皮肤基底细胞癌TE 354.T和A431细胞系表达水平(1.65±0.20、1.58±0.13)，差异统计学意义( t＝5.579、5.503， P<0.05)。TP53TG1组细胞24 h吸光度值(2.06±0.12)明显高于对照组细胞(1.50±0.08)，差异有统计学意义( t＝10.070， P<0.05)。TP53TG1组细胞14 d克隆形成率[(81.86±8.71)%]明显高于对照组细胞[(54.85±6.79)%]，差异有统计学意义( t＝6.469， P<0.05)。TP53TG1组细胞7-AAD阳性率[(65.57±5.62)%]明显高于对照组细胞[(37.43±4.50)%]，差异有统计学意义( t＝10.340， P<0.05)。TP53TG1组细胞Ki-67和PCNA蛋白表达水平(1.31±0.14、1.38±0.15)明显高于对照组细胞(0.70±0.08、0.72±0.08)，差异有统计学意义( t＝10.240、10.150， P<0.05)。TP53TG1组细胞小鼠皮下形成肿瘤的体积和质量[(986.71±81.64) mm 3、(3.45±0.36) g]明显高于对照组细胞[(699.29±53.62) mm 3、(2.15±0.26) g]，差异有统计学意义( t＝7.786、7.709， P<0.05)。TP53TG1组细胞微小RNA(miR)-33a-5p和miR-33b(0.72±0.10、0.65±0.06)明显高于对照组细胞(0.99±0.30、1.03±0.12)，差异有统计学意义( t＝2.227、7.589， P<0.05)。 结论:lncRNA TP53TG1在人皮肤基底癌细胞中的表达显著下降。过表达lncRNA TP53TG1可显著抑制人皮肤基质癌细胞的增殖，可能与miR-33a-5p和miR-33b表达有关。

目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)与大鼠小胶质(RM)细胞活化的关系.方法 体外培养RM细胞,并随机分为正常组和氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)组,RT-qPCR检测各组细胞内circHIPK3表达水平.构建具有嘌呤霉素抗性的circHIPK3慢病毒载体,设置过表达(OE)组和阴性对照(NC)组,根据荧光表达强度选择RM细胞最佳感染复数(MOI),采用嘌呤霉素筛选稳定表达circHIPK3的RM细胞.将OE组和NC组细胞置于OGD/R条件下培养,Western blot检测各组细胞中小胶质细胞活化标志蛋白钙结合衔接分子1(Iba-1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员5(CD40)表达水平.通过circRNAdb数据库分析circHIPK3翻译蛋白潜能,利用circBank和Starbase数据库预测circHIPK3潜在结合的微小RNA(miRNA).结果 与正常组相比,OGD/R组RM细胞中circHIPK3的表达水平显著下调(P<0.0001).测序比对结果正确,成功构建cir-cHIPK3过表达慢病毒载体.感染RM细胞最佳MOI=80,以2μg/ml嘌呤霉素筛选得到稳定过表达circHIPK3的RM细胞.RT-qPCR结果显示,OE组细胞中circHIPK3表达水平较NC组显著增高(P<0.01).Western blot结果显示,在OGD/R培养条件下,OE组细胞中Iba-1和CD40蛋白表达水平较NC组显著降低(P<0.05).蛋白翻译分析显示,cir-cHIPK3具有2个内部核糖体进入位点(IRES)和1个开放阅读框(ORF),可编码由404个氨基酸组成的多肽.miRNA结合分析显示,circHIPK3可能与8个靶向miRNAs结合:hsa-miR-3529-5p、hsa-miR-379-5p、hsa-miR-506-3p、hsa-miR-33、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-551b-3p、hsa-miR-193、hsa-miR-508-3p.结论 过表达circHIPK3显著抑制OGD/R诱导的RM细胞活化、circHIPK3有编码多肽潜能,可能通过海绵miRNA发挥功能.

目的 探讨调强放射(IMRT)联合高强度聚焦超声(HIFU)治疗中晚期宫颈癌对患者血清微小RNA(miR)-155-5p、miR-21表达的影响.方法 选取承德市中医院2020年6月至2022年6月收治的104例中晚期宫颈癌患者作为研究对象,按照随机数字表法分为观察组(n=52)及对照组(n=52),对照组予以IMRT治疗,观察组予以IMRT联合HIFU治疗.比较两组临床疗效、治疗前后免疫功能、血清miR-155-5p及miR-21表达水平、不良反应.结果 观察组有效率、疾病控制率分别为63.46％(33/52)、88.46％(46/52),高于对照组的 42.31％(22/52)、73.08％(38/52)(P＜0.05);观察组治疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+高于对照组(P＜0.05);观察组治疗后血清miR-155-5p及miR-21表达水平低于对照组(P＜0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IMRT联合HIFU治疗中晚期宫颈癌的疗效确切,能改善患者免疫功能,降低血清miR-155-5p、miR-21表达水平.

目的 探究血清微小RNA-128-3p(miR-128-3p)和微小RNA-624-5p(miR-624-5p)水平与青少年首发抑郁患者病情严重程度的关系分析.方法 选取我院2022年1月～2023年1月收治的102例青少年首发抑郁患者为研究对象(抑郁发作组),依据汉密尔顿抑郁量表将青少年首发抑郁患者分为轻度组(n=44)、中度组(n=33)和重度组(n=25).另选取102例来我院进行体检的健康青少年为对照组,采用实时荧光定量PCR法对所有受试者血清miR-128-3p、miR-624-5p水平进行测定.比较各组间的基本资料及血清miR-128-3p、miR-624-5p水平;Spearman相关性分析青少年首发抑郁患者血清miR-128-3p、miR-624-5p水平与病情程度之间的关系;Logistic回归分析青少年首发抑郁的影响因素.结果 两组在性别、年龄及受教育年限上差异无统计学意义(P＞0.05);在性格特征、血清miR-128-3p、miR-624-5p水平有显著性差异,且抑郁发作组患者血清miR-128-3p、miR-624-5p水平显著高于对照组(P＜0.05);Spearman相关性分析结果显示,血清miR-128-3p、miR-624-5p水平与青少年首发抑郁患者病情程度均呈显著正相关(r1=0.632,r2=0.697,P＜0.05);Logistic回归分析结果显示,血清miR-128-3p、miR-624-5p是影响青少年首发抑郁的危险因素(P＜0.05).结论 青少年首发抑郁患者血清miR-128-3p、miR-624-5p显著升高,且与患者病情程度呈显著正相关,通过检测上述两种因子可有效评估患者病情程度.

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)血清微小RNA(miR)-33a表达及其与微血管并发症的关系.方法 选取本院2019年5月～2022年2月收治的T2DM患者120例,根据糖化血红蛋白(HbA1c)水平将其分为低水平组(HbA1c≤7％)37例、中水平组(7％＜HbA1c＜9％)51例和高水平组(HbA1c≥9％)32例;根据是否合并微血管并发症将其分为并发症组(56例)和无并发症组(64例).另选取109例同期健康体检者作为对照组.收集T2DM患者一般临床资料和实验室检查指标及所有受试者血清miR-33a水平并分组进行比较.采用多因素logistic回归分析探讨T2DM患者发生微血管并发症的影响因素;采用Pearson相关分析评估血清miR-33a表达水平与微血管并发症的相关性.结果 高水平组、中水平组、低水平组和对照组受试者血清miR-33a表达水平均依次降低(P＜0.05);120例T2DM患者中合并微血管并发症56例,发生率为46.67％;多因素logistic回归分析结果显示,校正因素前、后血清miR-33a高表达均是T2DM患者发生微血管并发症的独立危险因素(P＜0.001);Pearson相关分析结果显示,血清miR-33a表达水平与微血管并发症的发生呈正相关(P＜0.001).结论 血清miR-33a是T2DM患者发生微血管并发症的危险因素,且与微血管并发症的发生呈正相关.

目的 探讨妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)患者血清长链非编码核糖核酸分化拮抗非蛋白编码 RNA(long noncoding RNA differentiation antagonizing nonprotein coding RNA,LncRNA DANCR)、微小 RNA-33a-5p(miR-33a-5p)水平表达对妊娠结局的预测价值.方法 选取2021年8月～2023年2月于衡水市第四人民医院产检和分娩的154例GDM患者为GDM组,并根据妊娠结局分为良好结局组(n=115)和不良结局组(n=39);同期收集24周葡萄糖耐量试验正常的149例健康孕产妇作为对照组.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清LncRNA DANCR 和 miR-33a-5p 水平;采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清 LncRNA DANCR和miR-33a-5p预测GDM患者不良妊娠结局的价值;采用Pearson相关性分析GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR,miR-33a-5p与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、稳态模式评估法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的相关性;Logistic回归分析GDM患者不良妊娠结局的影响因素.结果 GDM组血清LncRNA DANCR水平(0.69±0.15)显著低于对照组(1.01±0.22),miR-33a-5p(1.59±0.40)及不良妊娠结局总发生率(25.34％)显著高于对照组(1.02±0.23,5.36％),差异具有统计学意义(t/x2=14.835,15.140,23.011,均P＜0.05).不良妊娠结局组血清 LncRNADANCR 水平(0.50±0.14)显著低于良好结局组(0.75±0.18),miR-33a-5p(2.00±0.58),FBG(8.97±0.66mmol/L),FINS(18.63±1.31pmol/ml)和 HOMAIR(7.42±0.98)显著高于良好结局组(1.45±0.26,8.01±0.59mmol/L,14.32±1.29pmol/ml,5.10±0.86),差异具有统计学意义(t=7.895～17.961,均P＜0.05).LncRNA DANCR,miR-33a-5p单独及二者联合预测GDM患者不良妊娠结局的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.820,0.819和0.897.GDM不良妊娠结局患者血清LncRNA DANCR与FBG,FINS,HOMA-IR呈负相关(r=-0.498,-0.513,-0.509,均P＜0.05),miR-33a-5p 与 FBG,FINS,HOMA-IR 呈正相关(r=0.517,0.494,0.507,均 P＜0.05).LncRNA DANCR 是影响 GDM 患者不良妊娠结局的保护因素(OR=0.804,95％CI:0.693～0.933,P=0.004),miR-33a-5p是影响GDM患者不良妊娠结局的危险因素(OR=2.747,95％CI:1.444～5.225,P=0.002).结论 GDM不良妊娠结局患者LncRNADANCR降低,miR-33a-5p升高,二者均是不良妊娠结局的影响因素.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)GHRLOS2在结直肠癌组织和细胞中的表达及作用机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌组织或细胞中GHRLOS2、微小RNA-33b-5p(miR-33b-5p)表达水平.构建过表达GHRLOS2的结直肠癌细胞系HCT116、SW480,通过划痕实验、Transwell实验检测过表达GHRLOS2对HCT116、SW480细胞迁移和侵袭能力的影响;使用葡萄糖检测试剂盒检测过表达GHRLOS2细胞及对照细胞内的葡萄糖含量;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中PCK1蛋白表达水平;基于生物信息学方法预测miR-33b-5p与PCK1的靶向结合关系.结果 qRT-PCR检测结果显示,结直肠癌组织样本中的GHRLOS2表达水平低于癌旁组织,结直肠癌细胞中的GHRLOS2表达水平低于正常结肠上皮细胞,差异有统计学意义(P＜0.05);GHRL0S2表达与Grade分级、Stage分期、淋巴结转移均相关(P＜0.05).结直肠癌组织的miR-33b-5p表达水平高于对应癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.001).划痕实验、Transwell实验、葡萄糖含量检测结果显示,过表达GHRLOS2可显著抑制结直肠癌细胞的侵袭、迁移和葡萄糖代谢.过表达GHRLOS2可抑制miR-33b-5p表达水平;GHRLOS2是miR-33b-5p的分子海绵,PCK1是miR-33b-5p的靶标;过表达GHRLOS2可竞争性结合miR-33b-5p,促进PCK1表达增加.结论 GHRLOS2在结直肠癌组织和细胞中表达下调,其可能通过miR-33b-5p/PCK1途径调节结直肠癌细胞的侵袭、迁移及葡萄糖代谢能力,GHRLOS2有望成为结直肠癌靶向治疗的潜在生物靶点.

目的 探究血清微小RNA-30a-3p(miR-30a-3p)联合幽门螺杆菌(H.pylori)抗体检测对老年人群早期胃癌的诊断价值.方法 选取 2020 年 5 月至 2022 年 12 月进行胃镜检查的 87 例老年人群胃部疾病患者作为研究对象,根据病理学检查结果将患者分为慢性萎缩性胃炎(CAG)组(n=39)、早期胃癌组(n=27)和进展期胃癌组(n=21);同期选取 33 例健康体检者作为正常对照组.采用荧光定量 PCR法(qRT-PCR)和化学发光法分别检测血清miR-30a-3p表达水平和H.pylori抗体;比较 4 组血清miR-30a-3p水平及H.pylori抗体阳性率;比较H.pylori抗体阳性与阴性者血清miR-30a-3p水平;Logistic回归分析影响老年人群早期胃癌的相关因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-30a-3p、H.pylori 抗体对老年人群早期胃癌的诊断价值.结果 早期胃癌组和进展期胃癌组血清miR-30a-3p表达水平均显著低于CAG组、对照组,早期胃癌组、进展期胃癌组和CAG组H.pylori抗体阳性率均显著高于对照组(P＜0.05);纳入的 87 例胃部疾病患者和 33 例健康体检者中,H.pylori抗体阳性者血清miR-30a-3p显著低于H.pylori抗体阴性者(P＜0.05);行Logistic回归分析结果显示,血清miR-30a-3p、H.pylori抗体阳性为影响老年人群发生早期胃癌的相关因素(P＜0.05);血清miR-30a-3p联合H.pylori抗体诊断老年人群早期胃癌的曲线下面积(AUC)为 0.957,优于血清 miR-30a-3p、H.pylori 抗体各自单独诊断(Z 二者联合-miR-30a-3P=2.680、Z 二者联合-H.pylori抗体=4.577,P=0.007、P＜0.001),联合诊断的灵敏度和特异度分别为 85.19%、96.67%.结论 血清miR-30a-3p在老年人群早期胃癌患者中呈低表达,H.pylori抗体阳性率较高,二者联合检测对老年人群早期胃癌具有较高的诊断价值.