目的:基于永离有丝分裂基因A相关激酶9(NEK9)/转移相关肿瘤基因家族2(MTA2)信号通路泛素化修饰探讨胃癌(GC)的转移机制.方法:使用癌症基因组图谱(TCGA)和Kaplan-Meier Plotter数据库分析NEK9表达与GC分期、预后之间的关联.体外实验中,将GC细胞分为:对照组、shNC 组、shNEK9 组、shNC+NC-OE 组、shNEK9+NC-OE 组和 shNEK9+MTA2-OE 组.分别采用 MTT 和Transwell法测定细胞的增殖、迁移和侵袭,并通过 Western blot检测 NEK9、MTA2、上皮间充质转化(EMT)标记和PI3K/AKT信号通路蛋白表达.结果:TCGA数据库分析显示,NEK9 mRNA在肿瘤组织中的表达明显上调,并且与TNM分期较晚和NEK9高表达者的预后较差密切相关.此外,NEK9在7个GC细胞系中的表达明显高于正常胃上皮GES-1细胞(P＜0.05).与对照组相比,shNEK9组细胞活力、相对集落形成、EdU阳性细胞数、侵袭和迁移细胞数均显著降低(P＜0.05).此外,在shNEK9组细胞中,E-钙粘蛋白水平上调(P＜0.05),波形蛋白水平下调(P＜0.05).通过免疫共沉淀试验证明NEK9与MTA2有相互作用.NEK9敲低加速了 HGC-27细胞中MTA2的降解,并且 MTA2泛素化在NEK9沉默的细胞中增加.与shNEK9+NC-OE组组相比,shNEK9+MTA2-OE组相对集落形成、EdU阳性细胞数和迁移和侵袭数均显著增加(P＜0.05).结论:NEK9在GC中明显上调,其敲低在体外抑制GC细胞的生长和转移.NEK9可能通过去泛素化途径稳定 MTA2进而激活PI3K-AKT信号通路来对GC细胞产生促癌影响.

目的:探讨磷酸肌醇3激酶调节亚基3(PIK3R3)在生长激素型垂体神经内分泌肿瘤(GH-PitNETs)中的表达及其与细胞增殖、迁移和侵袭之间的关系。方法:利用基因表达数据库(GEO)中相关的PitNETs数据集，分析PIK3R3在GH-PitNETs中的表达情况。利用来源于不同PitNETs亚型的细胞株，通过蛋白质免疫印迹实验(WB)检测PIK3R3在GH3、MMQ和AtT-20细胞中的表达情况。体外培养GH3细胞，应用慢病毒感染的方法对PIK3R3进行敲低，并将细胞分为PIK3R3敲低2组(Sh-PIK3R3-2)、PIK3R3敲低3组(Sh-PIK3R3-3)和未转染对照组(Sh-NC)，通过CCK-8、EdU及集落形成实验检测各组细胞增殖速度，采用流式细胞术检测细胞凋亡，采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭，采用WB检测上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、神经型钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、AKT和磷酸化AKT(P-AKT)的表达。结果:GEO数据库的数据分析结果显示，相较于正常垂体或瘤旁组织，PIK3R3在GH-PitNETs中表达上调(均 P<0.05)，而在催乳素型PitNETs、促肾上腺皮质激素型PitNETs和促性腺激素型PitNETs中表达差异均无统计学意义(均 P>0.05)。WB检测结果显示，相较于MMQ和AtT-20细胞，PIK3R3在GH3细胞中表达更高(均 P<0.05)。CCK-8检测结果显示，在24 h、48 h、72 h时间点，Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的吸光度值分别为0.19±0.02、0.46±0.03、1.25±0.06和0.17±0.02、0.37±0.02、1.03±0.05，均低于对照组细胞的0.24±0.02、0.64±0.04、1.67±0.09(均 P<0.05)。EdU检测结果显示，Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的EdU阳性细胞率分别为(16.87±1.63)%和(13.45±1.33)%，均低于对照组的(34.51±2.76)%(均 P<0.05)。集落形成实验结果显示，Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的单细胞集落数分别为(84±10)个和(75±8)个，均低于对照组的(173±19)个(均 P<0.05)。流式细胞术检测结果显示，Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的细胞凋亡率分别为(25.62±2.14)%和(27.40±2.51)%，均高于对照组的(14.12±1.48)%(均 P<0.05)。Transwell迁移实验结果显示，Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的穿膜细胞数分别为(182±15)个和(166±13)个，均低于对照组的(428±27)个(均 P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示，Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的穿膜细胞数分别为(31±5)个和(22±3)个，均低于对照组的(64±9)个(均 P<0.05)。WB实验检测结果显示，与对照组比较，两组PIK3R3敲低组细胞的N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9和P-AKT表达均降低(均 P<0.05)，E-cadherin表达均增加(均 P<0.05)，AKT表达无明显变化(均 P>0.05)。 结论:PIK3R在GH-PitNETs中高表达，并通过激活AKT信号传导，促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭。

目的:观察甲状腺乳头状癌(PTC)细胞中微小RNA(miR)-204对E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)表达的影响，及对上皮-间充质转化(EMT)及细胞侵袭能力的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测甲状腺乳头状癌及其癌旁组织中miR-204的表达；将miR-204 mimics转染到甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中，采用荧光定量PCR的方法检测ZEB1、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的表达水平，应用双荧光素酶报告基因分析实验观察miR-204对ZEB1基因表达的调控作用；同时，将miR-204 mimics与过表达ZEB1质粒共转染至人甲状腺乳头状癌细胞-1(TPC-1)细胞中，采用Transwell细胞侵袭实验观察miR-204和ZEB1表达变化对甲状腺乳头状癌细胞侵袭能力的影响。组间比较采用 t检验。 结果:miR-204在甲状腺癌乳头状组织中的表达水平低于癌旁正常组织中的表达水平，差异有统计学意义(1.14±0.08比3.52±0.07， t＝13.250， P<0.05)；miR-204 mimics转染组侵袭细胞数低于对照组侵袭细胞数[(149.4±20.2)个比(268.6±30.2)个， t＝3.402， P<0.05]，差异有统计学意义；miR-204 mimics转染组细胞E-cadherin表达水平高于对照组细胞(0.98±0.17比0.35±0.12， t＝2.903， P<0.05)，差异有统计学意义，N-cadherin和vimentin表达量低于对照组细胞(0.29±0.11比0.89±0.10， t＝2.974， P<0.05；0.30±0.13比0.93±0.15， t＝2.859， P<0.05)，差异有统计学意义；双荧光素酶报告基因分析结果显示，miR-204 mimics转染组ZEB1的相对荧光素酶活性低于对照组(0.23±0.06比1.12±0.04， t＝12.460， P<0.05)，差异有统计学意义；甲状腺癌乳头状癌TPC-1细胞中转染miR-204 mimics组ZEB1基因的表达水平低于对照组(0.41±0.06比1.10±0.07， t＝6.783， P<0.05)，差异有统计学意义；miR-204 mimics与ZEB1过表达质粒共转染后，甲状腺癌细胞的侵袭细胞数与对照组比较差异无统计学意义[(224.4±23.5)个比(230.0±28.5)个， t＝1.140， P>0.05]，差异有统计学意义。 结论:miR-204能够通过靶向抑制ZEB1的表达，从而抑制细胞发生上皮间质转化进而抑制甲状腺乳头状癌细胞的侵袭能力。

目的:探讨miR-195对人胃癌细胞（HGC-27）迁移、侵袭及上皮间质化（EMT）的影响及其作用机理。方法:体外培养HGC-27细胞，采用随机数字表法分为对照组、miR-195阴性对照（NC）组和miR-195模拟物（mimics）组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞miR-195及婆罗双树样基因4（SALL4）mRNA表达情况；显微镜下观察各组细胞形态学变化情况；蛋白印迹分析法检测各组HGC-27细胞SALL4蛋白及EMT相关蛋白上皮型钙粘蛋白（E-cadherin）、神经性钙粘蛋白（N-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）表达情况；噻唑蓝（MTT）法检测各组HGC-27细胞存活率变化情况；划痕实验和侵袭实验（Transwell）检测各组HGC-27细胞迁移和侵袭能力；双荧光素酶报告实验验证miR-195与SALL4的靶向关系。结果:与对照组和miR-195 NC组相比，miR-195 mimics组HGC-27细胞miR-195表达水平[（0.97±0.05）vs（1.01±0.03）vs（2.68±0.07）]、细胞凋亡率[（0.21±0.03）% vs（0.17±0.05）vs（65.14±0.19）%]、E-cadherin蛋白表达水平[（0.23±0.02）vs（0.25±0.03）vs（0.97±0.04）]显著升高（ P<0.05），细胞存活率[（98.46±1.27）% vs（97.17±2.04）% vs（57.09±2.95）%]、划痕愈合率[（51.07±2.08）% vs（48.39±3.24）% vs（7.56±2.30）%]、侵袭数量[（108.53±20.54）vs（115.07±26.66）vs（28.37±10.44）]、SALL4 mRNA及SALL4、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低（ P<0.05），HGC-27细胞形态恢复正常，上皮间质化行为明显减轻；miR-195与SALL4 mRNA 3'UTR区有结合位点，与SALL4-3'UTR-WT+miR-195 NC组比较，SALL4-3'UTR-WT+miR-195 mimics组荧光素酶活性降低（ P<0.05）。 结论:miR-195可能通过靶向抑制SALL4表达，抑制人胃癌细胞的迁移、侵袭及上皮间质化行为。

目的:探讨盐酸戊乙奎醚(PHC)对Eca-109食管癌细胞生物学行为的影响。方法:分别给予0.01、0.05、1.00 μmol/L剂量的PHC处理人Eca-109食管癌细胞，采用细胞计数试剂8(CCK-8)法、平板克隆形成实验和流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成及细胞凋亡率；使用划痕实验和Transwell迁移分析实验分别检测细胞迁移和侵袭能力；采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测长基因间非蛋白编码RNA 00982(LINC00982)表达量。pcDNA、pcDNA-LINC00982分别转染至Eca-109细胞，si-NC、si-LINC00982分别转染至Eca-109细胞后分别加入0.01、0.05、1.00 μmol/L PHC处理24 h，采用上述方法分别检测细胞增殖、克隆形成数目、细胞凋亡率、迁移及侵袭能力；蛋白质印迹法(Western blot)检测E-钙黏素、B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和N-钙黏素蛋白表达量。采用独立样本 t检验和单因素方差分析。 结果:PHC低、中和高剂量组Eca-109细胞增殖抑制率[(12.37±0.86)%、(24.88±1.68)%、(42.35±1.76)%比(0.00±0.00)%， F＝1769.000， P<0.05]、细胞凋亡率[(11.82±0.57)%、(17.27±0.75)%、(23.16±1.22)%比(7.71±0.41)%， F＝636.800， P<0.05]、bax蛋白表达(0.34±0.06、0.46±0.07、0.63±0.09比0.19±0.04， F＝68.640， P<0.05)和E-钙粘素蛋白水平(0.20±0.04、0.32±0.05、0.53±0.07比0.11±0.03， F＝120.000， P<0.05)高于对照组。PHC低、中和高剂量组LINC00982表达量(1.62±0.08、2.24±0.09、3.43±0.13比1.00±0.00， F＝1233.000， P<0.05)高于对照组，细胞克隆形成数目[(86.96±3.52)、(64.52±2.45)、(43.52±2.34)个比(112.87±6.59)， F＝474.800， P<0.05]、迁移[(190.88±7.76)、(155.71±5.83)、(116.32±3.58)个比(217.55±6.89)个， F＝449.200， P<0.05]及侵袭能力[(127.62±3.65)、(95.83±4.32)、(73.32±2.51)个比(157.51±6.21)个， F＝634.400， P<0.05]低于对照组，划痕愈合率[(50.73±1.29)%、(38.60±1.78)%、(29.93±1.13)比(63.76±2.48)%， F＝636.800， P<0.05]、bcl-2蛋白表达量(0.56±0.08、0.37±0.05、(0.21±0.04比0.72±0.03， F＝155.900， P<0.05)和N钙粘素蛋白水平(0.56±0.07、0.44±0.06、0.20±0.03比0.73±0.05， F＝150.100， P<0.05)低于对照组，且呈剂量依赖性。pcDNA-LINC00982组细胞增殖抑制率[(34.53±1.09)%比(0.00±0.00)%， t＝95.040， P<0.05]、细胞凋亡率[(21.14±0.87)%比(7.59±0.43)%， t＝41.890， P<0.05]、bax蛋白表达(0.52±0.06比0.17±0.03， t＝15.560， P<0.05)和E-钙粘素蛋白水平(0.44±0.05比0.15±0.03， t＝14.920， P<0.05)高于pcDNA组，细胞克隆形成数目[(57.58±2.83)个比(110.56±7.27)个， t＝20.370， P<0.05]、迁移[(135.67±6.72)个比(220.81±5.73)个， t＝28.920， P<0.05]及侵袭能力[(88.52±3.76)个比(161.72±5.27)个， t＝33.920， P<0.05]低于pcDNA组，划痕愈合率[(34.63±2.75)%比(63.87±3.89)%， t＝18.140， P<0.05]、bcl-2蛋白表达(0.27±0.04比0.73±0.07， t＝17.120， P<0.05)和N-钙粘素蛋白水平(0.24±0.05比0.71±0.08， t＝14.950， P<0.05)低于pcDNA组，而转染si-LINC00982可减弱PHC对Eca-109细胞生物学行为的作用。 结论:PHC可通过上调LINC00982的表达而减弱食管癌Eca-109细胞的增殖、克隆、迁移及侵袭能力，促进细胞凋亡。

目的 探讨磷酸肌醇3激酶调节亚基3(PIK3R3)在生长激素型垂体神经内分泌肿瘤(GH-PitNETs)中的表达及其与细胞增殖、迁移和侵袭之间的关系.方法 利用基因表达数据库(GEO)中相关的PitNETs数据集,分析PIK3R3在GH-PitNETs中的表达情况.利用来源于不同PitNETs亚型的细胞株,通过蛋白质免疫印迹实验(WB)检测PIK3R3在GH3、MMQ和AtT-20细胞中的表达情况.体外培养GH3细胞,应用慢病毒感染的方法对PIK3R3进行敲低,并将细胞分为PIK3R3 敲低 2 组(Sh-PIK3R3-2)、PIK3R3 敲低 3 组(Sh-PIK3R3-3)和未转染对照组(Sh-NC),通过CCK-8、EdU及集落形成实验检测各组细胞增殖速度,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,采用WB检测上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、神经型钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、AKT和磷酸化AKT(P-AKT)的表达.结果 GEO数据库的数据分析结果显示,相较于正常垂体或瘤旁组织,PIK3R3在GH-PitNETs中表达上调(均P＜0.05),而在催乳素型PitNETs、促肾上腺皮质激素型PitNETs和促性腺激素型PitNETs中表达差异均无统计学意义(均P＞0.05). WB检测结果显示,相较于MMQ和AtT-20细胞,PIK3R3在GH3细胞中表达更高(均P＜0.05).CCK-8检测结果显示,在24 h、48 h、72 h时间点,Sh-PIK3R3-2 组和 Sh-PIK3R3-3 组细胞的吸光度值分别为 0.19±0.02、0.46±0.03、1.25±0.06 和0.17±0.02、0.37±0.02、1.03±0.05,均低于对照组细胞的 0.24±0.02、0.64±0.04、1.67±0.09(均P＜0.05).EdU 检测结果显示,Sh-PIK3R3-2 组和 Sh-PIK3R3-3 组细胞的 EdU 阳性细胞率分别为(16.87±1.63)％和(13.45±1.33)％,均低于对照组的(34.51±2.76)％(均P＜0.05).集落形成实验结果显示,Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的单细胞集落数分别为(84±10)个和(75±8)个,均低于对照组的(173±19)个(均P＜0.05).流式细胞术检测结果显示,Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的细胞凋亡率分别为(25.62±2.14)％和(27.40±2.51)％,均高于对照组的(14.12±1.48)％(均P＜0.05).Transwell迁移实验结果显示,Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的穿膜细胞数分别为(182±15)个和(166±13)个,均低于对照组的(428±27)个(均P＜0.05).Transwell侵袭实验结果显示,Sh-PIK3R3-2组和Sh-PIK3R3-3组细胞的穿膜细胞数分别为(31±5)个和(22±3)个,均低于对照组的(64±9)个(均P＜0.05). WB实验检测结果显示,与对照组比较,两组PIK3R3敲低组细胞的N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9和P-AKT表达均降低(均P＜0.05),E-cadherin表达均增加(均P＜0.05),AKT表达无明显变化(均P＞0.05).结论 PIK3R在GH-PitNETs中高表达,并通过激活AKT信号传导,促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭.

目的 探讨微小RNA-411(miR-411)对滋养层细胞增殖、迁移及侵袭的影响及机制.方法 选取2019年2月-2021年4月于上海市闵行区中心医院诊治的34例子痫前期患者为研究对象,另选取同时期住院正常的22例孕妇为对照组.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测22例正常孕妇胎盘组织和34例子痫前期患者胎盘组织中miR-411和围脂滴蛋白2(PLIN2)基因mRNA表达水平.转染miR-411抑制剂或PLIN2过表达载体至人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo),构建miR-411表达抑制或过表达PLIN2的HTR-8/SVneo细胞.四甲基噻唑蓝染色法(MTT)、克隆形成实验、Transwell及蛋白印迹法分别检测抑制miR-411表达或过表达PLIN2对HTR-8/SVneo细胞存活率、克隆形成、迁移和侵袭及P21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、E-钙粘附素(E-cadherin)及PLIN2蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-411与PLIN2调控关系.结果 子痫前期患者胎盘组织中miR-411(0.32±0.03)表达显著低于正常孕妇胎盘组织(1.01±0.10),而PLIN2基因mRNA(2.15± 0.20 vs.0.93±0.09)表达显著升高,差异均有统计学意义(1=37.850、26.841,均P＜0.05).抑制miR-411表达或过表达PLIN2后,HTR-8/SVneo细胞存活率、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数及MMP-2蛋白表达降低(均P＜0.05),PLIN2、P21和E-cadherin蛋白表达升高(均P＜0.05).miR-411在HTR-8/SVneo细胞中负调控PLIN2表达.抑制PLIN2表达降低了抑制miR-411表达对HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移及侵袭的影响.结论 抑制miR-411表达可能通过靶向上调PLIN2表达抑制滋养层细胞的增殖、迁移及侵袭.

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)HAGLR互补链LncRNA(HAGLROS)调控微小RNA((miRNA,miR)-26b/非受体型酪氨酸蛋白激酶(janus kinase 2,JAK2)/信号传导和转录激活因子 3(signal trans-ducer and activator of transcription3,STAT3)通路对肝癌细胞上皮间质转化的影响.方法 获取正常肝细胞系及肝癌细胞系,依据转染情况分组,即si-NC组、si-HAGLROS组、miR-26 inhibitor组、si-HAGLROS + miR-26 inhibitor组.MTT实验检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移情况,细胞侵袭实验检测各组细胞侵袭能力,qPCR法检测HA-GLROS、miR-26b、上皮钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)、N-钙黏素(N-cadherin)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)、抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达,双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA-HAGLROS与miR-26b的靶向关系.结果 肝癌细胞系Hep3B、MHCC-LM3、Huh7、SMMC-7721 中HAGLROS表达均显著高于LO2 细胞(P<0.05),miR-26b表达与之相反.生物信息学软件显示,HAGLROS可与miR-26b靶向结合.肝癌细胞功能实验显示,与si-NC组比较,si-HAGLROS组细胞增殖活性、细胞划痕愈合率、细胞穿膜数目、N-cadherin、FN、Bcl-2、p-JAK2、p-STAT3 表达均更低,E-Cadherin表达更高;而miR-26b inhibitor组细胞增殖活性、细胞划痕愈合率、细胞穿膜数目、N-cadherin、FN、Bcl-2、p-JAK2、p-STAT3 表达均更高,E-Cadher-in表达更低;si-NC组与si-HAGLROS +miR-26b inhibitor组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 LncRNA-HA-GLROS可通过靶向下调miR-26b促进肝癌细胞生物行为,如迁移、侵袭及EMT过程,同时可调控JAK2/STAT3 通路活性,LncRNA-HAGLROS可作为肝癌治疗靶点.

目的 筛选基于肺腺癌(LUAD)预后相关的炎症反应关键基因,并基于该基因构建预后预测模型.方法 在TCGA数据库中下载肺腺癌组织数据作为训练集,在GTEx数据库中下载正常肺组织数据作为训练集的正常对照,筛选差异表达基因(DEG);在分子特征数据库中下载炎症反应相关基因列表,采用单变量COX回归分析其中与预后相关的炎症反应相关基因,与DEG取交集得到与LUAD预后相关的炎症反应相关基因,应用LASSO回归和随机生存森林(RSF)算法筛选与LUAD预后相关的炎症反应关键基因,并建立预后风险评分公式.使用训练集进行内部验证,从GEO数据库中下载LUAD数据作为验证集进行外部验证,绘制该预后风险评分预测患者1年、3年和5年生存率的受试者工作特征(ROC)曲线,根据cut-off值分为高、低风险组,比较其总生存期(OS).单因素及多因素COX回归分析风险评分与训练集和验证集OS的关系,整合所有独立的预后相关因素,构建预测训练集患者1年、3年和5年生存率的列线图.结果 LUAD组织和正常肺组织的DEG共48个,与预后相关的炎症反应相关基因共50个,取交集后获得与LUAD预后相关的炎症反应相关基因共11个,LASSO回归和RSF算法筛选得到9个关键基因,即肾上腺髓质素(ADM)、LCCL结构域蛋白2(DCBLD2)、白细胞介素7受体(IL-7R)、MAX二聚化蛋白1(MXD1)、神经介素U受体1(NMUR1)、原钙粘蛋白(PCDH7)、磷酸肌醇3激酶调节亚基5(PIK3R5)、清道夫受体F类成员1(SCARF1)、人纤溶酶原激活物抑制剂1(SERPINE1).内外部验证结果显示,该预后风险评分预测训练集患者1年、3年和5年生存率的曲线下面积(AUC)分别为0.73、0.64和0.68,预测验证集患者1年、3年和5年生存率的AUC分别为0.578、0.602和0.581,高风险组OS均短于低风险组(P均＜0.01).单因素及多因素COX回归分析结果显示,预后风险评分是训练集和验证集患者OS的独立影响因素(训练集HR=2.99、P＜0.01,验证集HR=2.47、P＜0.01).构建包含所有独立预后相关因素(年龄、性别、肿瘤分期、预后风险评分)的列线图,其总体的一致性指数为0.710,模型预测精度高,校准曲线和标准曲线的重合度较好.结论 筛选出LUAD预后相关的炎症反应关键基因9个,即ADM、DCBLD2、IL-7R、MXD1、NMUR1、PCDH7、PIK3R5、SCARF1、SERPINE1,基于上述炎症反应关键基因的预后风险模型有助于判断LUAD患者的预后.

目的 探讨白介素22(IL22)在小鼠葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium salt,DSS)诱导的急性结肠炎中的作用及其机制.方法 选取8周龄雄性同窝IL22敲除小鼠(IL22-/-)及对照基因型小鼠(IL22+/+)各3只,给予2组小鼠2.5％DSS自由饮水6 d、正常饮水2 d构建小鼠急性结肠炎模型,记录小鼠体质量变化及疾病活动指数(disease activity index,DAI),干预8 d后行小鼠肠道内窥镜检查,测量2组小鼠结肠长度以及主要免疫器官脏器指数,采用Western blot检测白介素1α(IL1α)、白介素1β(IL1β)、白介素6(IL6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)等促炎细胞因子蛋白水平表达;选取8周龄雄性C57BL/6小鼠建立腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)转染模型,给予DSS诱导结肠炎模型,设置PBS组(n=5)、AAV-mock+DSS组(n=5)、AAV-IL22+DSS组(n=5),采用免疫荧光检测各组结肠闭合小环蛋白1(ZO-1)、钙粘附蛋白(E-claudin)表达,采用Western blot检测IL22、闭合蛋白(Occludin)、信号传导及转录激活蛋白3(Stat3)、p-Stat3蛋白表达水平.结果 与IL22+/+组比较,IL22-/-组小鼠在DSS诱导后第8天体质量显著降低(P＜0.05),DAI评分(P＜0.01)和肠镜评分显著升高(P＜0.05),组织损伤加重,病理评分显著升高(P＜0.01),促炎细胞因子IL1α、IL1β、cleaved-IL1β、IL6、TNFα表达上调(P＜0.05).与AAV-mock+DSS组相比,AAV-IL22+DSS组可逆转DSS诱导结肠炎,结肠组织炎症水平显著降低(P＜0.05),免疫荧光结果示E-claudin表达显著升高(P＜0.05),Western blot结果显示Occludin、p-Stat3表达水平显著增高(P＜0.01).结论 IL22缺乏加重小鼠DSS诱导结肠炎,而通过AAV过表达IL22能增强结肠紧密连接蛋白表达,减少炎症浸润,缓解DSS肠炎,其机制可能与Jak/Stat3通路激活有关.