目的 本研究旨在探讨血必净注射液(简称血必净)对脓毒症相关急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的保护作用机制.方法 ①动物实验:将100只小鼠随机(随机数字法)分为4组,包括假手术(Sham)组、盲肠结扎穿孔术(CLP)组、CLP+低剂量血必净(L-XBJ)组、CLP+高剂量血必净(H-XBJ)组,测定小鼠的存活率、肺组织学改变、肺湿/干(W/D)比、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluids,BALF)的细胞计数和蛋白浓度、血清中炎症因子水平、氧化应激指标、细胞凋亡、HIF-1α/p38 MAPK/NF-κB信号通路关键蛋白;②细胞实验:体外培养小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S),分为6组,包括对照(Con)组、脂多糖(LPS)组、LPS+L-XBJ 组、LPS+H-XBJ 组、LPS+H-XBJ+二甲基草酰甘氨酸(DMOG,HIF-1 α激动剂)组、LPS+H-XBJ+二甲氧基雌二醇(2ME2,H1F-1 α抑制剂)组,检测血必净对炎症因子、氧化应激、细胞凋亡的影响及其与HIF-1α/p38 MAPK/NF-κB信号通路的关系.结果 血必净能够提高脓毒症相关ARDS小鼠的存活率,减轻肺组织损伤[肺损伤评分:CLP组(8.778±0.588)、CLP+L-XBJ 组(5.833±0.310)、CLP+H-XBJ 组(4.750±0.246)],降低肺 W/D 比,减少肺炎细胞浸润与蛋白渗出(均P＜0.05).此外,血必净还可以减少LPS诱导的MH-S细胞和CLP诱导的脓毒症相关ARDS小鼠炎症因子(TNF-α,IL-1 β和IL-6)的表达,降低体内外细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的积累,丙二醛(malondialdehyde,MDA)的形成,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的消耗和细胞凋亡(均P＜0.05).机制研究进一步阐明了血必净通过HIF-1α/p38 MAPK/NF-κB信号通路对炎症、氧化应激和细胞凋亡的影响.结论 血必净可通过抑制HIF-1α/p38 MAPK/NF-κB信号通路,发挥抗炎、抗氧化和抗凋亡作用,从而对脓毒症相关ARDS产生保护作用.

目的:探讨食管癌肿瘤细胞中Per2、HDAC1、E－钙黏蛋白mRNA表达及其意义。方法:采用实验研究方法。体外培养人食管癌细胞系KYSE－150细胞至对数生长期设为实验组，体外培养人正常食管上皮细胞至对数生长期设为对照组。观察指标：(1)细胞增殖活力。(2)细胞迁移和侵袭能力情况。(3)初始生理状态下Per2、HDAC1、E－钙黏蛋白mRNA表达情况。(4)Per2激动剂和抑制剂处理后Per2、HDAC1、E－钙黏蛋白mRNA表达情况。(5)HDAC1抑制剂处理后Per2、E－钙黏蛋白mRNA表达情况。正态分布的计量资料以 ± s表示，组内比较采用 t检验；组间比较采用 t检验或协方差分析。 结果:(1)细胞增殖活力：实验组和对照组细胞增殖活力分别为0.90%±0.14%和0.52%±0.08%，两组比较，差异有统计学意义( t＝5.166， P<0.05)。(2)细胞迁移和侵袭能力情况：实验组和对照组发生迁移细胞数分别为(173±41)个和(50±15)个，两组比较，差异有统计学意义( t＝6.274， P<0.05)。实验组和对照组发生侵袭细胞数分别为(86±27)个和(21±9)个，两组比较，差异有统计学意义( t＝5.153， P<0.05)。(3)初始生理状态下Per2、HDAC1、E－钙黏蛋白mRNA表达情况：初始生理状态下，实验组细胞Per2、HDAC1、E－钙黏蛋白mRNA表达水平分别为11.7±2.7、20.4±6.6、12.4±2.5；对照组细胞上述指标分别为2.4±0.5、8.5±2.2、27.3±4.5，两组比较，差异均有统计学意义( t＝5.782，2.982，－5.034， P<0.05)。(4)Per2激动剂和抑制剂处理后Per2、HDAC1、E－钙黏蛋白mRNA表达情况：Per2激动剂处理后，实验组细胞Per2、HDAC1、E－钙黏蛋白mRNA表达水平分别为13.1±2.2、22.4±6.2、16.6±4.2；对照组细胞上述指标分别为9.9±3.1、18.4±5.6、15.3±2.3。实验组细胞Per2激动剂处理后上述指标与初始生理状态下比较，差异均无统计学意义( t＝－4.300，10.087，－4.187， P>0.05)；对照组细胞Per2激动剂处理后上述指标与初始生理状态下比较，差异均有统计学意义( t＝－4.846，3.501，9.294， P<0.05)。Per2激动剂处理后，两组细胞Per2和E－钙黏蛋白mRNA表达水平比较，差异均无统计学意义( F＝1.000，7.582， P>0.05)；两组细胞HDAC1 mRNA表达水平比较，差异有统计学意义( F＝1.724， P<0.05)。Per2抑制剂处理后，实验组细胞Per2、HDAC1、E－钙黏蛋白mRNA表达水平分别为4.1±1.7、7.5±2.2、22.8±4.2；对照组细胞上述指标分别为3.1±0.9、9.3±3.2、28.4±5.8。实验组细胞Per2抑制剂处理后上述指标与初始生理状态下比较，差异均有统计学意义( t＝12.124，5.105，－10.245， P<0.05)；对照组细胞Per2抑制剂处理后上述指标与初始生理状态下比较，差异均无统计学意义( t＝－2.815，1.568，－1.439， P>0.05)。Per2抑制剂处理后，两组细胞Per2和E－钙黏蛋白mRNA表达水平比较，差异均有统计学意义( F＝22.965，82.134， P<0.05)；两组细胞HDAC1 mRNA表达水平比较，差异无统计学意义( F＝6.416， P>0.05)。(5)HDAC1抑制剂处理后Per2、E－钙黏蛋白mRNA表达情况：HDAC1抑制剂处理后，实验组细胞Per2、E－钙黏蛋白mRNA表达水平分别为13.4±3.5、24.2±3.4，对照组细胞上述指标分别为3.1±1.2、26.8±5.2。实验组细胞HDAC1抑制剂处理后Per2 mRNA表达水平与初始生理状态下比较，差异无统计学意义( t＝－3.959， P>0.05)；E－钙黏蛋白mRNA表达水平与初始生理状态下比较，差异有统计学意义( t＝－21.977， P<0.05)。对照组细胞HDAC1抑制剂处理后Per2、E－钙黏蛋白mRNA表达水平与初始生理状态下比较，差异均无统计学意义( t＝－1.440、1.058， P>0.05)。HDAC1抑制剂处理后，两组细胞Per2 mRNA表达水平比较，差异无统计学意义( F＝2.004， P>0.05)，E－钙黏蛋白mRNA表达水平比较，差异有统计学意义( F＝325.800， P<0.05)。 结论:食管肿瘤细胞中Per2和HDAC1 mRNA表达水平升高，E－钙黏蛋白mRNA表达水平降低。Per2 mRNA高表达可能会激活下游靶向蛋白HDAC1的表达升高，抑制细胞表面E－钙黏蛋白mRNA表达水平。

目的:探讨胰升糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)司美格鲁肽改善棕榈酸诱导C2C12骨骼肌细胞萎缩的机制。方法:C2C12细胞分为对照组、0.5 mmol/L棕榈酸组、0.5 mmol/L棕榈酸＋15 nmol/L司美格鲁肽组、0.5 mmol/L棕榈酸＋90 nmol/L司美格鲁肽组及0.5 mmol/L棕榈酸＋900 nmol/L司美格鲁肽组，CCK-8检测各组细胞存活率，2-NBDG荧光探针检测各组细胞葡萄糖摄取情况，免疫荧光法检测肌管直径，Western印迹法检测葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Ⅲ型纤维连接蛋白结构域5(FNDC-5)、肌球蛋白重链(MHC)、肌细胞生成素(MyoG)、肌肉萎缩盒F基因(Atrogin-1)及肌肉环状指基因1(MuRF-1)蛋白的表达水平。结果:与对照组相比，棕榈酸组细胞存活率及葡萄糖摄取均明显降低，肌管直径减小，p-Akt、GLUT4、FNDC-5、MHC及MyoG蛋白表达水平显著下降，Atrogin-1及MuRF-1表达显著升高(均 P<0.05)，15、90和900 nmol/L司美格鲁肽增加细胞存活率、葡萄糖摄取和肌管直径，以及p-Akt、GLUT4、FNDC-5、MHC和MyoG的蛋白表达水平，降低Atrogin-1及MuRF-1蛋白表达(均 P<0.05)。 结论:司美格鲁肽可改善棕榈酸诱导的C2C12细胞胰岛素抵抗，并通过促进肌细胞合成、抑制肌细胞降解，改善肌细胞萎缩，FNDC-5可能参与其中。

目的:观察白藜芦醇通过Wnt信号通路对乳腺癌他莫昔芬疗效的影响。方法:使用含有二甲基苯蒽的芝麻油成功构建60只SD乳腺癌大鼠模型(所有大鼠均购自中国医学科学院医学实验动物研究所)，随机数字表法分为6组，每组各10只。A组为溶栓剂对照组，给予10 mg/kg二甲基亚砜；B组为白藜芦醇组，给予10 mg/kg白藜芦醇；C组为他莫昔芬组，给予0.1 ml的5 mg/ml他莫昔芬；D组为联合用药组，给予10 mg/kg白藜芦醇联合0.1 ml的5 mg/ml他莫昔芬；E组为Wnt信号通路抑制剂组，给予10 mg/kg白藜芦醇、0.1 ml的5 mg/ml他莫昔芬联合15 mg/kg的端锚聚合酶抑制剂(IWR)腹腔注射；F组为Wnt信号通路激动剂组，给予10 mg/kg白藜芦醇、0.1 ml的5 mg/ml他莫昔芬联合2 mg/kg氯化锂。对各组大鼠进行28 d的观察，比较不同时刻各组大鼠的肿瘤体积、造模后第28天各组大鼠的肿瘤细胞凋亡率及Wnt通路相关蛋白水平。多组间比较采用单因素方差分析。结果:成功造模后对各组大鼠进行4周观察，无1例死亡。造模后第14、21、28天时各组大鼠的肿瘤体积间比较差异有统计学意义( F＝6.389、5.182、7.276， P<0.05)；E组大鼠的肿瘤体积最小，A组大鼠的肿瘤体积最大，其中D组和E组大鼠造模后第14、21、28天时的肿瘤体积均小于C组，且E组小于D组，差异有统计学意义( F＝8.427、6.791、7.921， P<0.05)；且F组大鼠造模后第14、21、28天时的肿瘤体积均大于E组，差异有统计学意义( F＝5.182、8.531、8.676， P<0.05)。各组大鼠的标本中均存在原位缺口末端标记法(TUNEL)阳性细胞，细胞核表现为深浅不同的棕黄色，且分布不均。A组[(1.32±0.16)%]和B组[(2.24±0.41)%]仅能够观察到少数散落的凋亡肿瘤细胞，两组间比较差异无统计学意义( F＝1.759， P>0.05)；C组[(19.09±4.53)%]和F组的肿瘤细胞凋亡率[(21.42±3.68)%]高于A组和B组( F＝7.743、5.536， P<0.05)，两组间比较差异无统计学意义( F＝2.987、2.051， P>0.05)；D组[(27.93±6.69)%]和E组的肿瘤细胞凋亡率[(39.69±6.89)%]明显高于其余4组，且E组高于D组，差异有统计学意义( F＝6.883、7.037， P<0.05)。A组大鼠的β-连环蛋白(1.25±0.14)、Wnt2水平(1.10±0.30)均高于其他各组，糖原合成酶激酶3β(GSK3β，0.20±0.05)、磷酸化GSK3β(p-GSK3β，0.25±0.07)、Lef1水平(0.17±0.03)均低于其他各组；E组大鼠的β-连环蛋白(0.40±0.06)、Wnt2水平(0.30±0.11)均低于其他各组，GSK3β(0.89±0.04)、p-GSK3β(0.97±0.06)、Lef1水平(0.82±0.06)均高于其他各组；且E组大鼠的β-连环蛋白、Wnt2水平均低于D组和F组，且D组低于F组，GSK3β、p-GSK3β、Lef1水平均高于D组和F组，且D组高于F组，差异有统计学意义( F＝7.627， P<0.05)。 结论:白藜芦醇可降低β-连环蛋白、Wnt2的表达，提升GSK3β、p-GSK3β、Lef1的表达，抑制Wnt信号通路，提高他莫昔芬的抗肿瘤效果。

目的:探讨α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor，α7nAchR)在迷走神经电刺激治疗缺血性脑卒中模型小鼠神经炎症损伤中的作用及机制。方法:90只SPF级小鼠按照随机数字表法分为假手术+迷走神经电刺激组(sham+VNS组)、模型组(永久性大脑中动脉闭塞组pMCAO组)、模型+迷走神经电刺激组(pMCAO+VNS组)、模型+α7nAchR激动剂组(pMCAO+P组)、模型+迷走神经电刺激+α7nAchR拮抗剂(pMCAO+VNS+A组)、模型+迷走神经电刺激+α7nAchR拮抗剂安慰剂组(pMCAO+VNS+AC组)。造模时监测各组小鼠生命体征变化，并于造模成功后7 d、14 d和21 d通过神经系统严重程度评分(neurologic severity score，NSS)和胶布撕脱实验进行神经功能缺损评估；采用免疫荧光法和Western blot法检测小鼠脑组织α7nAchR的表达及其神经细胞定位，ELISA法检测炎性因子TNF-α和IL-6含量。采用Prism 8.0软件进行统计分析，采用单因素方差分析对造模期间生理参数进行统计，使用重复测量方差分析比较神经行为学评分结果， t检验比较蛋白质水平以及荧光强度。 结果:(1)重复测量方差分析结果显示，NSS评分中组别与时间的交互作用不显著( F＝0.91， P>0.05)，各组小鼠的组别主效应( F＝46.68， P<0.05)与时间主效应( F＝25.56， P<0.05)均显著。Tukey's检验结果显示，在第21天的NSS评分中，pMCAO+VNS组和pMCAO+P组小鼠的NSS评分均明显低于pMCAO组( P<0.05)；pMCAO+P组与pMCAO+VNS组比较则差异无统计学意义( P>0.05)；pMCAO+VNS+A组小鼠的NSS评分均高于pMCAO+VNS组( P<0.05)，同时又明显低于pMCAO+VNS+AC组( P<0.05)。胶布撕脱实验中，小鼠的胶布接触时间和撕脱时间中组别与时间的交互作用不显著( F＝0.67，0.71，均 P>0.05)，各组小鼠的组别主效应( F＝30.12，42.46，均 P<0.05)与时间主效应( F＝52.18，47.34，均 P<0.05)均显著。Tukey's检验结果显示，在第21天的胶布撕脱实验中，pMCAO+VNS组小鼠的胶布接触时间和撕脱时间均明显短于pMCAO组(均 P<0.05)；pMCAO+P组与pMCAO+VNS组比较则差异没有统计学意义(均 P>0.05)。(2)免疫印迹实验表明，与pMCAO组(0.36±0.01)相比，pMCAO+VNS组和pMCAO+P组α7nAchR表达均增加[(0.83±0.03)、(0.67±0.02)， t＝13.53，16.08，均 P<0.01]，pMCAO+VNS+A组(0.37±0.01)较pMCAO+VNS组较显著降低( t＝12.88， P<0.01)。免疫荧光结果也显示，与pMCAO组(3.75±0.19)相比，pMCAO+VNS组和pMCAO+P组小鼠脑组织α7nAchR蛋白表达均增加[(8.96±0.48)、(8.17±0.64)， t＝10.04，6.67，均 P<0.05]。(3)ELISA结果表明，与pMCAO组比较，pMCAO+VNS组及pMCAO+P组小鼠血清和组织上清液中TNF-α水平和IL-6水平均明显降低于pMCAO组( t＝23.28，15.30，12.26，11.08，均 P<0.05)。pMCAO+VNS+A组小鼠血清和组织上清液中TNF-α水平以及血清和组织上清液中IL-6水平均高于pMCAO+VNS组( t＝12.70，11.01，11.69，17.37；均 P<0.05)和pMCAO+VNS+AC组( t＝12.29，11.07，14.61，29.27；均 P<0.05)。 结论:VNS能够减少pMACO小鼠脑组织炎症反应，改善神经运动评分，这一保护作用可能与VNS诱导的α7nAchR在缺血性脑卒中缺血半影区神经细胞中表达有关。

目的:探讨含三方基序54(TRIM54)在胰腺癌中的调控机制。方法:胰腺癌细胞株(ASPC-1、BXPC-3、MIA-PaCa-2、PANC-1、SW1990)和正常胰腺上皮导管细胞(HPDE)株购自美国模式培养物集存库(ATCC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测TRIM54在人胰腺导管上皮细胞(HPDE)和胰腺导管腺癌(PDAC)细胞中的表达。通过转染质粒(shRNA)敲低TRIM54的表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的增殖能力。Transwell和细胞划痕实验检测细胞侵袭迁移能力的变化。两组之间的比较采用独立样本 t检验，多组样本之间的比较采用方差分析。 结果:通过RT-PCR检测，HPDE中TRIM54信使RNA(mRNA)表达水平明显低于胰腺癌细胞(ASPC-1、BXPC-3、MIA-PaCa-2、PANC-1、SW1990)(1.00±0.02比2.05±0.04比1.37±0.03比1.62±0.02比3.18±0.10比3.59±0.07， F＝1 042.04， P<0.05)。Western blot结果显示，HPDE中TRIM54蛋白表达水平明显低于胰腺癌细胞(ASPC-1、BXPC-3、MIA-PaCa-2、PANC-1、SW1990)(1.00±0.02比2.04±0.05比1.18±0.01比2.06±0.02比2.42±0.02比2.90±0.06， F＝1 360.92， P<0.05)。质粒成功敲低TRIM54的表达，实验结果表明敲低TRIM54的PANC-1和SW1990增殖、侵袭、迁移能力减低。Western blot实验表明敲低TRIM54后PANC-1细胞NC组N-钙黏蛋白(N-cadherin)高于sh-TRIM54组(1.00±0.03比0.58±0.03比0.74±0.02， F＝233.26， P<0.05)，SW1990细胞NC组N-cadherin高于sh-TRIM54组(0.95±0.02比0.66±0.02比0.77±0.02， F＝127.64， P<0.05)，PANC-1细胞NC组Vimentin高于sh-TRIM54组(1.00±0.03比0.71±0.02比0.79±0.03， F＝130.09， P<0.05)，SW1990细胞NC组Vimentin高于sh-TRIM54组(0.94±0.02比0.69±0.03比0.66±0.02， F＝167.04， P<0.05)。而PANC-1细胞NC组E-cadherin低于sh-TRIM54组(1.00±0.02比1.08±0.04比1.20±0.03， F＝34.21， P<0.05)，SW1990细胞NC组E-cadherin低于sh-TRIM54组(0.95±0.03比1.36±0.03比1.28±0.03， F＝218.35， P<0.05)。回复实验表明WNT激动剂增强了敲低TRIM54的PANC-1和SW1990增殖、侵袭、迁移能力。此外，添加WNT激动剂后PANC-1细胞中sh-TRIM54组N-cadherin和Vimentin低于sh-TRIM54＋SKL2001组(N-cadherin：0.67±0.02比0.93±0.01， t＝18.02， P<0.05；Vimentin：0.59±0.02比0.91±0.03， t＝15.99， P<0.05)，SW1990细胞中sh-TRIM54组N-cadherin和Vimentin低于sh-TRIM54＋SKL2001组(N-cadherin：0.76±0.01比0.88±0.02， t＝10.77， P<0.05；Vimentin：0.68±0.02比1.07±0.03， t＝19.78， P<0.05)。而PANC-1细胞中sh-TRIM54组E-cadherin高于sh-TRIM54＋SKL2001组(1.31±0.03比1.15±0.02， t＝7.32， P<0.05)，SW1990细胞中sh-TRIM54组E-cadherin高于sh-TRIM54＋SKL2001组(1.20±0.06比1.01±0.06， t＝4.20， P<0.05)。 结论:TRIM54在胰腺癌中高表达且通过调控WNT通路来促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭和转移。

目的:探索腺苷受体2A(A 2AR)调控神经肽Y(NPY)的机制及其在椎间盘退行性病变中对髓核细胞凋亡和细胞外基质的影响。 方法:采用随机数字表分组法将30只雄性SD大鼠分为5组，每组6只。S组为对照组，即穿刺大鼠L5～6椎间盘后注射生理盐水；M组为模型组，即通过椎间盘穿刺联合椎间盘内注射肿瘤坏死因子α构建大鼠椎间盘退变模型；A 2AR-小干扰RNA(siRNA)组、NC-siRNA组和CGS-21680组则为构建椎间盘退变模型基础上分别向椎间盘内注射A 2AR的siRNA、阴性对照(NC) siRNA和A 2AR激动剂CGS-21680。采用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应检测A 2AR、NPY、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、蛋白激酶A(PKA)和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)等蛋白在椎间盘中的表达。组间比较采用单因素方差分析。 结果:在M组中，A 2AR(1.72±0.50比0.95±0.18， F＝11.49， P>0.05)、NPY(0.40±0.03比0.20±0.04， F＝22.08， P<0.05)和bax(0.62±0.52比0.40±0.04， F＝30.97， P<0.01)蛋白表达水平高于S组，而Col-Ⅱ(0.39±0.03比0.75±0.08， F＝16.24， P<0.01)低于S组；在CGS-21680组中，A 2AR(2.70±0.45比1.72±0.50， F＝11.49， P<0.05)，NPY(0.55±0.05比0.40±0.03， F＝22.08， P<0.05)和Col-Ⅱ(0.53±0.11比0.39±0.03， F＝16.24， P>0.05)表达高于M组，而bax表达低于M组(0.48±0.08比0.62±0.52， F＝30.97， P>0.05)；在A 2AR-siRNA组中，各分子表达变化与CGS-21680组相比与M组相反：A 2AR(0.95±0.29比1.72±0.50， F＝11.49， P>0.05)，NPY表达(0.20±0.06比0.40±0.03， F＝22.08， P<0.01)，bax(0.72±0.09比0.85±0.04， F＝28.01， P>0.05)和Col-Ⅱ(0.42±0.14比0.59±0.19， F＝21.62， P>0.05)。 结论:A 2AR可能通过PKA/CREB信号通路上调NPY及其受体起到减少髓核细胞凋亡和保护细胞外基质的作用。

目的:观察腺苷受体2a(A2aR)通过环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)调控髓核细胞凋亡的作用。方法:培养原代大鼠髓核细胞，白细胞介素-1β(IL-1β)刺激细胞构建实验组，无菌磷酸盐缓冲液(PBS)刺激作为阴性对照组，IL-1β刺激后加入A2aR激动剂CGS-21680作用为干预组。利用酶联免疫吸附测定(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中A2aR、腺苷酸环化酶(adenylate cyclase，AC)、cAMP和PKA表达，流式细胞术检测细胞凋亡发生率。组间比较采用单因素方差分析。结果:不同浓度的CGS-21680刺激细胞24 h后，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖，结果表明CGS-21680浓度为10 μmol/L时，细胞增殖率上升为(123.67±7.09)%，此为最佳浓度。IL-1β刺激髓核细胞，腺苷受体A2aR表达低于对照组(0.24±0.01比1.24±0.23， F＝0.036， P<0.05)，这时AC表达显著低于对照组(13.21±1.01比45.68±1.55， F＝0.379， P<0.05)，cAMP和PKA表达低于对照组(1.28±0.44比19.3±1.75， F＝0.471， P<0.05；2.23±1.28比29.26±2.71， F＝0.359， P<0.05)，髓核细胞凋亡率高于对照组(30.50±3.80比14.07±1.26， F＝0.342， P<0.05)；在IL-1β刺激同时给予腺苷受体激动剂CGS-21680干预，结果显示A2aR表达高于实验组(0.61±0.05比0.24±0.01， F＝0.036， P<0.05)，AC表达显著高于实验组(32.47±0.92比13.21±1.01， F＝0.379， P<0.05)，cAMP和PKA高于实验组(5.65±0.98比1.28±0.44， F＝0.471， P<0.05；15.75±2.87比2.23±1.28， F＝0.359， P<0.05)，髓核细胞凋亡发生低于实验组(20.30±5.05比30.50±3.80， F＝0.342， P<0.05)。 结论:腺苷受体A2aR是髓核细胞受到炎症刺激后调控细胞凋亡发生的关键受体，可通过激活cAMP/PKA信号减轻髓核细胞损伤。

目的:研究角膜上皮细胞是否存在腺嘌呤核糖核苷酸活化的蛋白激酶(AMPK)磷酸化及真菌对角膜上皮细胞AMPK磷酸化和白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法:取人永生化角膜上皮细胞系，采用实时无标记细胞多功能分析仪筛选AMPK激动剂5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)(100、300、500和1 000 μmol/L)和抑制剂化合物C(10.0、12.5、15.0、17.5和20.0 μmol/L)对角膜上皮细胞作用的安全浓度范围。以单纯角膜上皮细胞作为正常对照组，角膜上皮细胞与孢子共培养作为孢子对照组，在孢子对照组基础上分别加入AICAR和化合物C作为AICAR组和化合物C组，分别培养4 h。采用Western blot法检测角膜上皮细胞磷酸化AMPK(p-AMPK)和AMPK的表达，采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定角膜上皮细胞培养上清液中IL-6质量浓度。结果:不同浓度AICAR作用于角膜上皮细胞不同时间后，细胞指数总体比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。10.0 μmol/L和12.5 μmol/L化合物C作用于角膜上皮细胞后细胞指数较未处理细胞升高。正常对照组、孢子对照组、AICAR组和化合物C组p-AMPK水平分别为0.67±0.15、2.57±0.12、3.67±0.58和1.50±0.50，各组间总体比较差异有统计学意义( F＝32.820， P<0.001)。孢子对照组p-AMPK水平较正常对照组升高，差异有统计学意义( P<0.001)；AICAR组较孢子对照组p-AMPK水平升高，化合物C组较孢子对照组p-AMPK水平降低，差异均有统计学意义(均 P＝0.010)。正常对照组、孢子对照组、AICAR组和化合物C组AMPK相对表达量总体比较差异无统计学意义( F＝0.120， P＝0.950)。正常对照组、孢子对照组、AICAR组和化合物C组IL-6质量浓度分别为(107.81±17.15)、(156.32±9.94)、(167.96±14.16)和(127.42±19.75)pg/ml，各组间总体比较差异有统计学意义( F＝15.210， P<0.001)，其中孢子对照组IL-6质量浓度较正常对照组升高，差异有统计学意义( P<0.001)；AICAR组IL-6质量浓度较孢子对照组略升高，差异无统计学意义( P＝0.260)，化合物C组IL-6质量浓度较孢子对照组降低，差异有统计学意义( P＝0.010)。 结论:角膜上皮细胞有AMPK磷酸化表达，且真菌孢子刺激角膜上皮细胞后AMPK磷酸化增强，IL-6分泌增多。

目的:探讨TRPV4调控骨髓基质干细胞(MSC)成骨分化过程中与F-激动蛋白(F-actin)的定位关系及钙离子内流机制。方法:使用购买的大鼠MSC，分为对照组和拉伸力学组，体外进行成骨诱导培养7、14、21 d，进行茜素红染色和聚合酶链反应(PCR)检测成骨基因骨形成蛋白-2(BMP-2)和Runx2活性，同时通过蛋白质印迹法(Western blot)检测碱性磷酸酶(ALP)及TRPV4蛋白表达。使用钙离子荧光探针(Fura-4)检测对照组和拉伸力学组的细胞内钙离子内流，并通过免疫荧光染色TRPV4及F-actin蛋白，观察细胞内定位关系。初步确定TRPV4影响后，使用TRPV4激动剂GSK101处理MSC，分为对照组和GSK101组，检测成骨基因BMP-2及Runx2变化。两组间比较行配对 t检验。 结果:大鼠MSC行成骨诱导培养后，拉伸力学刺激显著促进MSC成骨分化，茜素红染色增强，且力学刺激于术后7 d显著促进BMP-2基因和Runx2基因转录活性增加( t＝5.252、2.851， P<0.05)，变化倍数分别为(3.97±0.82)倍和(3.47±0.42)倍。ALP蛋白表达增多( t＝4.069， P<0.05)，变化倍数为(2.42±0.86)倍。此时，TRPV4蛋白表达量维持不变( t＝1.115， P>0.05)，变化倍数为(1.21±0.78)倍。免疫荧光染色结果证实力学刺激后TRPV4及力学反应性F-actin蛋白表达定位增强，Fura-4探针结果显示，拉伸力学刺激促进了MSC体内钙离子内流( t＝7.048， P<0.01)，变化倍数为(4.29±0.72)倍。使用TRPV4激动剂GSK101处理MSC后，成骨基因BMP-2及ALP的转录活性显著增强( t＝3.762、3.977， P<0.05)，变化倍数分别为(3.68±1.05)倍和(4.33±0.63)倍。 结论:拉伸力学刺激可激活MSC的TRPV4蛋白，于F-actin共定位，介导钙离子内流，从而提高成骨分化活性。