目的:观察脂筏特征蛋白2(FLOT2)在肝内胆管细胞癌中的表达，探讨FLOT2对肝内胆管细胞癌增殖，迁移的作用。方法:收集2021年9月至2022年12月郑州大学人民医院健康体检人员20例、肝内胆管结石(HL)＋肝炎(HA)患者20例和肝内胆管细胞癌患者10例共50例检测血液样本，行蛋白组学检测，结合GEPIA2数据库分析FLOT2在肝内胆管细胞癌中的表达。构建小干扰RNA(siRNA)沉默肝内胆管癌细胞HuCCT1中的目的基因，以NC-FLOT2为对照组，si-FLOT2为实验组，实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测肝内胆管癌细胞中FLOT2的表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力及细胞毒性，划痕愈合实验检测细胞迁移能力，流式细胞术检测细胞凋亡程度，组间比较采用 t检验。 结果:蛋白组学表明在肝内胆管细胞癌患者中，FLOT2表达较正常人群升高。qPCR实验中，HuCCT1细胞NC组表达量为(0.77±0.10)，实验组表达明显下降，分别为0.29±0.09、0.15±0.01、0.11±0.02( t＝11.634、11.725、13.432， P均<0.01)。Western blot实验表明，对照组FLOT2条带灰度值为(0.91±0.03)，实验组表达降低(0.41±0.14， t＝5.160， P<0.05)。划痕实验中下调FLOT2可降低肝内胆管癌细胞迁移能力，48 h后划痕愈合率对照组为(0.89±0.09)%，实验组分别为(0.49±0.08)%、(0.50±0.06)%、(0.60±0.07)%( t＝11.170、5.626、3.838， P均<0.01)。CCK-8增殖实验对照组为5.49±0.53，实验组(4.19±0.22， t＝7.164， P<0.05；3.33±0.25、1.83±0.28， t＝10.065、10.593， P均<0.01)。凋亡实验中，实验组凋亡率[(6.92±0.89)%]，敲低FLOT2后实验组较对照组凋亡明显增多[(10.03±0.31)%， t＝－6.828， P<0.05；(12.43±0.83)%、(13.87±0.38)%， t＝－11.709、－12.101， P均<0.01]。CCK-8毒性实验表明，RBE和HuCCT1对吉西他滨的IC 50分别为(8.90±1.28)、(34.31±7.40) μg/ml，RBE对吉西他滨的IC 50明显低于HuCCT1( t＝－7.077， P<0.05)。qPCR结果表明，HuCCT1中FLOT2表达量明显高于RBE[(0.004±0.001)、(0.019±0.005)， t＝－5.187， P<0.05]。敲低FLOT2后，HuCCT1细胞株对吉西他滨的IC 50值明显降低，实验组IC 50[(7.30±0.60)、(6.52±0.61)、(7.03±1.08) μg/ml， t＝－17.173、－15.079、－18.737， P均<0.01]。 结论:FLOT2在肝内胆管细胞癌中表达升高，并影响肝内胆管癌细胞HuCCT1的增殖、迁移、凋亡和耐药能力。

目的:探讨细胞黏着相关基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)与肾结石风险的相关性。方法:选择150例肾结石患者和150例健康人，采用高分辨熔解曲线(high resolution melting，HRM)方法对外显子组测序研究获得的细胞黏着相关候选基因( DGCR2 rs2072123、 LAMB4 rs2528693、 CDH2 rs17445840、 ABL2 rs55655202、 CX3CR1 rs3732379、 ITGAE rs2976230和 FLOT2 rs3736238)进行基因分型，分子相互作用分析多态性变异对蛋白结构的影响以及对基因功能注释。 结果:LAMB4 rs2528693风险等位基因G携带者增加罹患肾结石风险2.471倍( P＝0.009，95%CI：1.231~ 4.957)，增加男性罹患肾结石风险2.396倍( P＝0.031，95%CI：1.061~5.411)，尤其在中年年龄段增加罹患肾结石风险3.156倍( P＝0.010, 95%CI: 1.160 ~8.586)。分子相互作用分析发现 LAMB4 rs2528693变异导致分子间相互作用改变，可能影响蛋白结构的稳定性。基因相互作用分析发现风险基因 LAMB4可能与细胞基质黏附有关。 结论:LAMB4 rs2528693 G等位基因显著增加肾结石风险，且与男性肾结石发病风险显著关联，为阐明细胞黏着基因在肾结石形成中的作用提供了依据。

目的 研究FGFR2C342Y基因突变引起的Crouzon综合征患者与正常人血清来源外泌体的蛋白组分的差异.方法 筛选出Crouzon综合征FGFR2C342Y突变患者的血清作为实验组,健康献血者的血清作为对照组,并使用超速离心法从中提取外泌体,展示了同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)蛋白组学分析结果,利用IPA通路分析软件分析其差异蛋白,以探讨exosome差异蛋白在颅缝早闭中的作用.结果 通过质谱分析共检测到62个蛋白,其中22个蛋白与骨相关数据库重合,其功能主要关于发育异常、遗传性异常、肌肉骨骼系统发育和功能、组织形态、视觉系统发育和功能等,均与Crouzon综合征的临床表现相关.网络分析发现“组织损伤和异常、血液系统的发育和功能、细胞信号转导和相互影响”相关的网络.结论 我们的研究显示了FGFR2C342Y Crouzon综合征患者的蛋白组学特点,展示了差异蛋白参与的功能和网络,并找到了关键蛋白FN1,FN1促进成骨细胞黏附增殖和矿化,这个蛋白可能对于Crouzon综合征的进一步研究提供新思路.

目的 探讨FLOT1基因小干扰RNA(siRNA)联合姜黄素对肾癌细胞凋亡的影响及其机制.方法 以LipofectamineTM 2000为载体,将FLOTl-siRNA转染人肾癌786-0细胞,Western blot检测转染siRNA后的细胞中FLOT1的蛋白表达.后续研究分FLOT1-siRNA组、姜黄素组和FLOT1-siRNA+姜黄素组进行细胞干预,并设置空白对照组,细胞计数试剂盒(CCK-8)及流式细胞仪分别检测4组细胞活力及凋亡率;H2 DCFHDA探针检测4组细胞ROS含量;Western blot检测4组细胞磷酸化信号转导与转录激活因子-3(p-STAT3)及信号转导与转录激活因子-3(STAT3)信号通路下游增殖细胞核抗原(PCNA)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的蛋白表达.结果 FLOT1-siRNA转染786-0细胞后FLOT1的表达(0.087±0.010)明显受到抑制,与空白对照组(0.454±0.038)比较差异有统计学意义(t=16.177,P=0.000).si-FLOT1 (0.491±0.053)或姜黄素(0.542±0.058)均可抑制786-0细胞活力,诱导786-0细胞凋亡(18.22±1.07)％、(12.39±0.86)％及ROS产生(189.5±8.2)、(147.7±7.1),下调p-STAT3(0.118±0.014)、(0.110±0.012)和PCNA(0.229±0.025)、(0.302±0.034)表达,上调bax(0.206±0.021)、(0.123±0.014)表达,与NC组比较差异均有统计学意义(0.792±0.065)、(1.62±0.25)％、(57.7±3.5)、(0.202±0.023)、(0.577±0.049)、(0.069±0.010)(t=6.736、7.378、12.796、10.112、7.186、2.832,P=0.000、0.000、0.000、0.000、0.000、0.022),联合使用si-FLOT1和姜黄素对786-0细胞活力(0.378±0.044)抑制、细胞凋亡(24.18±1.22)％及ROS产生(249.3±9.4)诱导、p-STAT3(0.054±0.008)和PCNA表达(0.135±0.016)下调及bax表达(0.411±0.038)上调作用更明显,且与单一的si-FLOT1或姜黄素比较差异均有统计学意义(t=5.132、4.491、3.456、6.140、10.752、15.106,P=0.001、0.002、0.009、0.000、0.000、0.000).结论 FLOT1 siRNA或姜黄素均可抑制肾癌细胞活力,诱导细胞凋亡,两者合用对细胞活力及凋亡作用更明显,机制可能与细胞内ROS提高及抑制STAT3信号有关.

目的 探讨脂筏结构蛋白(FLOT)1基因在乳腺癌细胞中的表达及靶向抑制其表达对癌细胞凋亡的影响及机制.方法 Western印迹法检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A及MCF7、MDA-MB-231和HCC1569乳腺癌细胞FLOT1的蛋白表达.将设计合成的针对FLOT1的特异性siRNA序列(si-FLOT1组)及阴性对照siRNA序列(NC组)转染至MDA-MB-231细胞,仅仅加入脂质体的为空白对照组,AG490作为信号转导与转录因子(STAT)3信号通路抑制剂,转染48 h,Western印迹法检测FLOT1、磷酸化蛋白酪氨酸激酶(p-JAK)2、p-STAT3、细胞增殖核抗原(PCNA)和B细胞淋巴瘤(Bcl)-2的蛋白表达.流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 FLOT1在MCF7、MDA-MB-231和HCC1569乳腺癌细胞中的蛋白表达均显著高于正常乳腺上皮细胞MCF-10A(P<0.05).与空白对照组比较,si-FLOT1组FLOT1表达受到抑制(P<0.05);与NC组比较,si-FLOT1组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),p-JAK2、p-STAT3、PCNA和Bcl-2的蛋白表达显著下调(P<0.05).与si-FLOT1组比较,si-FLOT+AG490组细胞凋亡率显著升高(P<0.05).结论 FLOT1在乳腺癌细胞中呈高表达,通过RNA干扰抑制其表达可诱导癌细胞凋亡,机制与下调STAT3信号通路有关.

目的 探讨RNA干扰FLOT2基因表达对胃癌细胞凋亡及NF-κB信号的影响.方法 Western blotting检测人胃癌BGC823、SGC7901和MKN28细胞中FLOT2蛋白表达.BGC823细胞分为空白组、阴性组和si-FLOT2组,参照脂质体LipofectamineTM2000将siRNA转染细胞,细胞转染48 h,Western blotting检测FLOT2、NF-κB p65、IKK-β、p-IKK-β3和Bax的蛋白表达.流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 BGC823、SGC7901和MKN28胃癌细胞中FLOT2蛋白表达均显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES1(P＜0.05).转染si-FLOT2的BGC823细胞FLOT2蛋白表达显著低于空白组(P＜0.05).与空白组比较,si-FLOT2组细胞凋亡率显著升高,NF-κB p65、IKK-β和p-IKK-β蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P＜0.05).结论 RNA干扰FLOT2基因表达可诱导胃癌细胞凋亡,机制可能与下调NF-κB信号通路有关.

目的 探讨抑制FLOT1基因表达对胃癌细胞侵袭、凋亡的影响及机制.方法 将设计合成的FLOT1siRNA慢病毒载体(si-FLOT1组)转染人胃癌MKN-45细胞,同时转染阴性对照慢病毒载体(阴性组),并设置空白组.Western blotting检测转染48 h后细胞FLOT1、E-cadherin、α-SMA、cleaved caspase 3、Bcl-2和Bax蛋白表达.CCK-8法检测转染24、48、72和96 h的细胞活力.Transwell小室、流式细胞术及DCFH-DA法分别检测转染48 h的细胞侵袭能力、凋亡率及活性氧(ROS)含量.结果 FLOT1 siRNA慢病毒载体可明显抑制MKN45细胞FLOT1表达,与空白组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).si-FLOT1组与空白组比较,细胞活力降低,细胞侵袭能力降低,细胞凋亡率升高,E-cadherin、cleaved caspase 3和Bax蛋白表达升高,α-SMA和Bcl-2蛋白表达降低,ROS含量升高,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 下调FLOT1基因表达可通过抑制EMT降低胃癌细胞侵袭能力,通过调控凋亡相关蛋白表达及提高细胞ROS含量促进细胞凋亡.

目的:研究miR-103a-3p对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法:运用RT-qPCR法检测甲状腺癌细胞SW579,FTC-133及人甲状腺上皮细胞TEC中miR-103a-3p、脂筏结构蛋白2(FLOT2)的表达.将miR-NC(miR-NC组)、miR-103a-3p mimics(miR-103a-3p组)、anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、anti-miR-103a-3p(anti-miR-103a-3p组)、si-NC(si-NC组)、si-FLOT2(si-FLOT2组)、miR-103a-3p+pcDNA mimics(miR-103a-3p+pcDNA组)、miR-103a-3p mimics+pcDNA-FLOT2(miR-103a-3p+pcDNA-FLOT2组)用脂质体法转染至SW579细胞.蛋白质印迹法检测细胞中FLOT2、多肿瘤抑制基因(P16)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶[poly-(ADP-ribose)polymerase,PARP]、裂解的PARP(cleaved-PARP)、半胱天冬酶-3的前体(pro-caspase-3)、裂解的半胱天冬酶3(cleaved-caspase-3)的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性.结果:与人甲状腺上皮细胞TEC相比,甲状腺癌细胞中miR-103a-3p的表达明显下调,FLOT2的表达明显上调(P<0.05);过表达miR-103a-3p、敲减FLOT2均可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡;miR-103a-3p明显抑制野生型FLOT2细胞的荧光活性,且负向调控FLOT2的表达;过表达FLOT2逆转miR-103a-3p对甲状腺癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用.结论:miR-103a-3p可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向FLOT2相关,可为甲状腺癌的治疗提供参考.

目的 探讨微小RNA-485-5p(miR-485-5p)靶向脂筏标记蛋白(FLOT)2对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 采用qRT-PCR与Western印迹分别检测不同甲状腺癌细胞及正常甲状腺上皮细胞中miR-485-5p与FLOT2 mRNA及蛋白表达.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测甲状腺癌SW579细胞转染miR-485-5p mimic、miR-NC、si-FLOT2、si-NC后的细胞增殖活性,并采用流式细胞术检测细胞凋亡率.采用双荧光素酶活性检测鉴定miR-485-5p与FLOT2的靶向关系.Western印迹检测SW579细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p27、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-caspase)-3蛋白表达.结果 与TEC细胞相比,甲状腺癌细胞SW579、FTC-133、KAT-18中miR-485-5p的相对表达量显著降低(P<0.05),而FLOT2 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05);miR-485-5p过表达或抑制FLOT2表达后SW579细胞OD值、CyclinD1及Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、p21、p27及Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.05);双荧光素酶活性检测鉴定FLOT2是miR-485-5p的靶基因,miR-485-5p可负向调控FLOT2表达;FLOT2过表达可逆转miR-485-5p过表达对甲状腺癌SW579细胞增殖及凋亡的作用.结论 miR-485-5p通过负向调控靶基因FLOT2抑制甲状腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.

目的 观察脂筏结构蛋白1 (FLOT1)在乳腺腺病患者乳腺腺体组织中的表达,以及康复新液对其表达的影响.方法 采用干预观察性研究方法,选取病理科标本库中96例正常乳腺标本作为空白对照组,收集乳腺腺病患者96例为乳腺腺病组,经康复新液口服治疗1年,每次10 ml,每天3次.治疗前后采用放射免疫沉淀法、免疫印迹法检测乳腺腺病组患者及空白对照组乳腺腺体组织中FLOT1蛋白表达;比较乳腺腺病组患者治疗前后FLOT1基因检测阳性率,并行治疗前后乳腺彩超评分.结果 乳腺腺病组患者治疗1年后乳腺彩超评分明显低于治疗前(P＜0.05).乳腺腺病组患者治疗前乳腺腺体组织中FLOT1蛋白表达量、基因强度评分均高于空白对照组(P ＜0.05或P＜0.01),乳腺腺病组患者治疗后FLOT1蛋白表达量与空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05).乳腺腺病组患者治疗后FLOT1基因检测阳性率为43.75％,明显低于治疗前的97.92％ (P ＜0.01).结论 口服康复新液可以改善乳腺腺病患者乳腺彩超评分,并且抑制腺体中FLOT1的高表达.