目的:探讨下调微小RNA-208a(miR-208a)对结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的影响,阐明其相关分子机制.方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测结直肠癌5-FU耐药细胞株HT-29/5-FU及其亲本HT-29细胞中miR-208a和分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)mRNA表达水平.以HT-29/5-FU细胞为研究对象,将miR-208a抑制物(miR-208a inhibitor)质粒及其阴性对照质粒(inbibitor-NC)和SFRP1小干扰质粒(si-SFRP1)及其阴性对照质粒(si-NC)分别或同时转染至HT-29/5-FU细胞中,联合5-FU处理,将细胞分为空白组、inhibitor-NC组、miR-208a inhibitor组、miR-208a inhibitor+si-NC组和 miR-208a inhibitor+si-SFRP1 组.MTT 法检测各组细胞增殖活性并计算耐药指数,Annexin V-FITC/PI双染法结合流式细胞术检测不同浓度5-FU作用后各组细胞凋亡率,W estern blotting法检测各组细胞中SFRP1、β-连环蛋白(β-catenin)、P-糖蛋白(P-gp)和ATP结合盒B亚家族成员1转运蛋白(ABCB1)蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证miR-208a与SFRP1的靶向关系.结果:与HT-29细胞比较,HT-29/5-FU细胞中miR-208a表达水平升高(P＜0.05),SFRP1 mRNA表达水平降低(P＜0.05).与 inhibitor-NC组比较,miR-208a inhibitor组细胞增殖活性降低(P＜0.05),耐药指数降低,细胞凋亡率升高(P＜0.05),细胞中β-catenin、P-gp和ABCB1蛋白表达水平降低(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验提示SFRP1是miR-208a靶基因,且miR-208a 可负向调控 SFRP1 的表达.与 miR-208a inhibitor+si-NC 组 比较,miR-208a inhibitor+si-SFRP1组细胞增殖活性升高(P＜0.05),耐药指数升高,细胞凋亡率降低(P＜0.05),细胞中β-catenin、P-gp和ABCB1蛋白表达水平升高(P＜0.05).结论:下调miR-208a可通过靶向上调SFRP1表达抑制Wnt信号通路的转导,进而改善HT-29/5-FU细胞对5-FU的耐药.

目的 ATP结合盒B亚家族成员1(ATP binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)的异常表达在多种癌症的发生发展中发挥关键作用.然而,G蛋白偶联受体C家族5组A型(G protein coupled receptor family C group 5 type A,GPRC5A)调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响仍不清楚.本研究探讨了 GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响.方法我们采用RT-PCR、Western-blot或免疫组化实验,分析ABCB1在肺腺癌细胞系、人肺腺癌组织以及GPRC5A基因敲除小鼠和野生型小鼠的气管上皮细胞和肺组织中的表达.采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析GPRC5A基因敲除小鼠气管上皮细胞对化疗药物的敏感性.采用皮下肿瘤形成实验探讨下调ABCB1表达是否可抑制体内肺腺癌增殖.采用免疫荧光和免疫沉淀实验研究GPRC5A和ABCB1之间潜在的调控关系.结果ABCB1在肺腺癌细胞系和人类肺腺癌组织中表达上调.GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞及肺组织的ABCB1表达高于野生型小鼠.与GPRC5A野生型小鼠的气管上皮细胞相比,GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞对塔立奇达和多柔比星更敏感.注射移植细胞28天后,接受ABCB1基因敲除细胞移植的GPRC5A-/-C57BL/6小鼠的肺肿瘤的体积和重量均明显低于野生型细胞移植小鼠(P=0.0043,P=0.0060).此外,免疫荧光和免疫沉淀实验表明,GPRC5A通过直接结合方式调控ABCB1的表达.结论GPRC5A通过抑制ABCB1表达降低肺腺癌增殖.GPRC5A调节ABCB1表达的途径有待研究.

ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4)基因突变疾病谱涉及进行性家族性肝内胆汁淤积3型、胆石症、妊娠期肝内胆汁淤积症、门静脉高压、肝硬化,甚至原发性肝脏、胆道恶性肿瘤等多种疾病.本院肝胆内科收治1例青年男性患者,入院初步诊断为胆囊结石,计划腹腔镜胆囊切除术,术前检查发现该患者肝功能异常、肝硬化、脾大、食管静脉轻度曲张,后进一步行二代测序明确诊断为ABCB4基因突变相关性肝硬化合并胆囊结石,给予熊去氧胆酸胶囊利胆治疗后,肝功能逐渐恢复正常.

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一种异质性髓系恶性肿瘤,目前化疗联合造血干细胞移植是主要治疗方法,但是总体预后较差.吉妥珠单抗(gemtuzumab ozogamicin,GO)是一种人源化抗CD33单抗与卡奇霉素结合的抗体偶联药物,主要用于治疗CD33阳性AML.虽然研究发现GO可以改善CD33阳性AML患者的预后,但是仍有部分AML患者并未获益.GO治疗AML的疗效主要与CD33表达及单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)、ATP 结合盒亚家族B成员 1(ATP-binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)基因及SNP、特异的分子生物学和细胞遗传学等因素有关.本文就GO对AML疗效影响因素的研究进展进行综述.

目的 探讨曲美他嗪(TMZ)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导泡沫细胞形成的影响及可能的作用机制.方法 应用ox-LDL刺激RAW264.7细胞建立泡沫细胞模型,分为对照组(培养基)、模型组(60 μg/mL ox-LDL刺激)、氯喹(CQ)组(60 μg/mL ox-LDL联合10 mmol/L CQ处理)、TMZ联合CQ组(60 μg/mL ox-LDL联合80 μmol/LTMZ和10 mmol/L CQ处理).油红O染色评估泡沫细胞形成情况,ELISA试剂盒检测细胞内总胆固醇(TC)及游离胆固醇(FC)含量;单丹磺酰尸胺(MDC)染色观察自噬;Picogreen荧光染色及荧光定量PCR检测巨噬细胞胞外诱捕网(MET)形成及其含量;实时定量PCR检测自噬相关指标微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)、泛素结合蛋白P62、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、含胱天蛋白酶结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)及胆固醇流出相关基因ATP结合盒亚家族A成员1(ABCA1)、ATP结合盒亚家族G成员1(ABCG1)的mRNA水平.结果 与模型组相比,TMZ联合CQ组LC3B表达增加、P62表达减少,同时TC、FC、胆固醇酯(CE)/TC含量降低,此外NLRP3、ASC及caspase-1的mRNA表达水平均显著下调,MET形成增加.CQ组结果相反.结论 曲美他嗪可以通过激活自噬、增强巨噬细胞胞外诱捕网(MET)形成并抑制炎性体形成,从而促进泡沫细胞的胆固醇流出.

目的:评价ATP结合盒B亚家族成员1转运蛋白(ABCB1)基因多态性(rs1045642)对阿片类药物术后镇痛效果及术后恶心呕吐发生情况的影响.方法:检索中英文数据库,纳入考察ABCB1 C3435T基因多态性和阿片类药物术后镇痛效果、不良反应相关性的研究.使用RevMan5.3软件进行Meta分析.结果:共纳入15篇文献,共计2 560例研究对象.结果显示,西方人群ABCB1 C3435T CC型阿片类药物消耗量与CT+ TT型相比较,差异有显著性[SMD=0.31,95％CI(0.04,0.58),P=0.02],T等位基因携带者术后阿片类药物消耗量大.亚洲人ABCB1 C3435T CC型阿片类药物消耗量与CT+ TT型相比较,差异无统计学意义[SMD=0.12,95 ％CI(-0.17,0.42),P=0.41].结论:ABCB1 C3435T基因多态性与术后阿片类药物消耗量相关,携带T基因患者阿片类镇痛药物消耗量大,需要更多的镇痛药物,需要根据患者个体情况谨慎调整镇痛药物使用量.

目的 基于液相芯片技术,建立一种可同时、快速检测细胞色素P4502C9(cytochrome P4502C9,CYP2C9)、CYP2C19、CYP4F2、维生素K环氧化物还原酶(vitamin K epoxide reductase,VKORC1)及ATP结合盒亚家族B成员1(ATP-binding cassette subfamily B member1,ABCB1)等与华法林和氯吡格雷相关药物基因多态性的方法.方法 方法学的建立.从Genbank中查找与华法林和氯吡格雷药物相关的8个靶位点附近基因序列,设计特异性引物和探针;通过多重PCR扩增,等位基因特异性引物延伸(allele specific primer extension,ASPE),MagPlex-Tag微球杂交,经液相芯片系统Luminex 200检测荧光信号,确定基因型;优化反应体系并进行方法学评价.收集2017年6月至2018年12月东莞市厚街医院抗血栓治疗患者血液样本,共260例,采用建立的方法检测其8个靶位点,并与测序结果比较.结果 本方法检测260例样本结果显示:纯合子荧光强度中位值(median fluorescence intensity,MFI)比率均>0.9或<0.1,杂合子MFI比率均在0.3～0.6之间;各基因型批内和批间变异系数分别低于6.4％和10.9％;所需DNA最低检测限为0.75 ng;260例样本的检测结果与测序结果完全一致.结论 本研究采用液相芯片技术,成功建立了快速检测华法林和氯吡格雷相关药物基因型的方法.

目的 评价ATP结合盒B亚家族成员1转运蛋白基因C3435T(ABCB1 C3435T)基因多态性对患者术后镇痛效果的影响.方法 拟行全身麻醉下胸腔镜肺叶切除术患者100例,年龄18～60岁,ASA分级Ⅱ或Ⅲ级,对基因突变型进行检测,按照基因型分为野生型纯合子组(CC组)、突变型杂合子组(CT组)和突变型纯合子组(TT组).术后采用舒芬太尼行PCIA.记录术后24、48 h时VAS评分、术后舒芬太尼用量和术后24h睡眠质量评分和状态特质焦虑量评分.结果 与CC组比较,TT组和CT组术后24 h时VAS评分和舒芬太尼用量降低,TT组状态特质焦虑量表评分降低,CT组状态特质焦虑量表评分升高(P＜0.05);与TT组比较,CT组术后24h时VAS评分、舒芬太尼用量和状态特质焦虑量表评分升高(P＜0.05);3组睡眠质量评分比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ABCB1 C3435T基因多态性可能是患者术后镇痛效果个体差异的机制之一.

目的:探讨人体胎盘上的P-糖蛋白(P-gp)转运活性是否存在个体差异,以及ATP结合盒B亚家族成员1转运蛋白基因(ABCBl)的基因多态性与胎盘上P-gp转运活性的相关性.方法:选取300例成熟的胎盘,提取胎盘微绒毛质膜囊泡(MVMVs),荧光标记法检测MVMVs的P-gp转运活性;Snapshot法检测胎盘上ABCB1基因9个单核苷酸多态性(SNPs)的基因型,并与相应MVMVs上P-gp转运活性进行相关性分析.结果:成功提取259例MVMVs,259例MVMVs的单位蛋白P-gp转运活性为0.111 ±0.047/mg.ABCB1基因rs12720464、rs28746504、rs57806198、rs1128503、rs2032582、rs1045642位点不同基因型与P-gp转运活性的个体差异无显著相关.结论:人体胎盘上的P-gp转运活性存在个体差异,但本研究探讨的ABCB1基因的9个SNPs可能不是影响人体胎盘上P-gp转运活性的关键因素.

目的:了解铂类联合第三代化疗药物治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的药物基因组学研究进展,为临床个体化用药提供参考.方法:以"非小细胞肺癌""吉西他滨联合铂""紫杉类联合铂""伊立替康联合铂""基因多态性""单核苷酸多态性""Non-small-cell lung""NSCLC""Gemcitabine double platinum""Purple double platinum""Irinotecan double platinum""Genetic poly-morphism""Single nucleotide polymorphism"等为关键词,在中国知网、维普网、万方数据、PubMed等数据库中组合检索2000年1月-2020年6月发表的相关文献,就铂类分别联合吉西他滨、紫杉醇和伊立替康治疗NSCLC患者的临床反应与DNA合成修复、转运蛋白和代谢酶相关基因多态性等方面的相关性进行分析.结果与结论:遗传多态性可导致铂类联合第三代化疗药物治疗NSCLC的临床反应的个体间差异.在吉西他滨联合铂类治疗中,参与DNA合成修复的核糖核苷酸还原酶1亚基(RRM1)基因37位点杂合突变与化疗效果相关性存在较大争议;药物代谢酶中胞苷脱氨酶(CDA)基因79位点突变可导致患者化疗无效、血液学毒性风险增高;药物转运蛋白中人类核苷酸平衡转运体(hENT1)基因706位点突变可导致患者生存期缩短.在紫杉醇联合铂类治疗中,与化疗效果密切相关的多药耐药转运蛋白ATP结合盒式跨膜转运蛋白超家族B亚群1(ABCB1)基因1236、3435位点及溶质载体有机阴离子转运体家族成员1B3基因334、699位点突变均可能增加血液学毒性;药物代谢酶细胞色素P450(CYP)2C8*31196、416位点的基因多态性与患者疗效的相关性还需进一步验证.在伊立替康单用或联合铂类治疗中,药物代谢酶尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶1A(UGT1A)1*6、*28基因多态性可能成为中性粒细胞缺乏和腹泻等相关毒性的预测指标.因此,对铂类联合吉西他滨、紫杉醇和伊立替康治疗NSCLC患者的基因组学研究,可用于优化肿瘤患者的治疗策略,提高化疗方案的有效率,为患者的个性化合理用药提供依据.