目的:探究下调G蛋白偶联受体C家族5A（GPRC5A）表达对脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞（GFs）炎症反应的影响并探索其机制，为深入探讨G蛋白偶联受体（GPCR）在牙周炎中的调控作用及其机制奠定基础。方法:于2022年12月至2023年2月在山东大学口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科、牙周科收集3名牙周健康者（牙周健康组）和3例牙周炎患者（牙周炎组）的牙龈组织，采用免疫组化染色检测两组牙龈组织中GPRC5A的表达。收集健康牙龈组织提取GFs，健康牙龈组织来自2022年12月至2023年2月在山东大学齐鲁医学院口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科招募的6例16~20岁需拔除埋伏阻生齿的患者。应用胶原酶消化法提取并培养GFs，设置30、50和80 μmol/L浓度转染GPRC5A小干扰RNA（siGPRC5A）的实验组和阴性对照小干扰RNA（siNC），利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测siGPRC5A的沉默效率；设置阴性对照、脂多糖、siGPRC5A+脂多糖和siGPRC5A 4个组，通过RT-qPCR和蛋白质印迹法分别验证应用siGPRC5A对1 mg/L脂多糖诱导的GFs炎症状态下GPRC5A在基因和蛋白水平的表达；下调GPRC5A表达后，RT-qPCR检测脂多糖诱导的GFs白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）基因的表达；通过蛋白质印迹法、免疫荧光染色检测核因子-κB（NF-κB）信号通路的激活情况。结果:免疫组化结果显示，牙周炎组牙龈组织中GPRC5A表达（0.132±0.006）显著高于牙周健康组（0.036±0.019）（ t=8.24， P=0.001）。RT-qPCR结果显示，在脂多糖作用2、6、12和24 h时，脂多糖组GPRC5A基因水平表达量（分别为0.026±0.002、0.042±0.005、0.004±0.000、0.016±0.000）均分别显著高于阴性对照组（分别为0.004±0.000、0.004±0.000、0.002±0.000、0.007±0.000）（均 P<0.001），且6 h时达峰值。50 μmol/L siGPRC5A（31.16±3.29）与siNC组（100.00±4.88）相比能有效沉默GFs中GPRC5A的表达（ F=297.98， P<0.001）。RT-qPCR和蛋白质印迹法结果显示，脂多糖组GPRC5A在基因和蛋白水平的表达（分别为1.30±0.10、1.43±0.03）均显著高于阴性对照组（分别为1.00±0.01、1.00±0.00）（均 P<0.001），siGPRC5A组（分别为0.27±0.03、0.71±0.00）均显著低于阴性对照组（分别为1.00±0.01、1.00±0.00）（均 P<0.001），siGPRC5A+脂多糖组（分别为0.39±0.03、1.06±0.16）均显著低于脂多糖组（分别为1.30±0.10、1.43±0.03）（均 P<0.001）。RT-qPCR结果显示，脂多糖组IL-8、IL-1β、IL-6、TNF-α、PTGS2基因表达水平均显著高于阴性对照组，siGPRC5A+脂多糖组均显著低于脂多糖组（均 P<0.001）。蛋白质印迹法结果表明，脂多糖组p65和IκBα蛋白磷酸化水平均显著高于阴性对照组，而siGPRC5A+脂多糖组均显著低于脂多糖组（均 P<0.01）。免疫荧光染色结果显示，对照组NF-κB p65集中表达于胞质，在脂多糖刺激下p65部分向核内转位，应用siGPRC5A后能一定程度上抑制脂多糖诱导的p65核内转位。 结论:GPRC5A在GFs炎症状态下表达增加，下调GPRC5A的表达能抑制脂多糖诱导的炎症反应，且GPRC5A可通过NF-κB信号通路发挥炎症调控的作用。

目的:探究信号识别颗粒14(SRP14)在肝细胞癌(HCC)中的表达及功能.方法:利用生物信息学、定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫组织化学染色和蛋白质印迹法等明确SRP14在HCC中的表达;应用Kaplan-Meier法分析SRP14 mRNA表达变化与HCC患者的总生存期、无进展生存期及疾病特异性生存期的相关性;通过5-乙基-2'-94脱氧尿苷(EdU)染色、MTS实验、Transwell小室实验及细胞划痕实验等探索SRP14对HCC细胞增殖和迁移的作用;利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体(GO)富集分析以及qRT-PCR初探SRP14在HCC中的作用机制.结果:在GSE14520数据集、TNMplot数据库和临床标本中,与配对癌旁组织、非配对癌旁组织或正常组织比较,HCC组织的SPR14 mRNA表达均有不同程度的升高(均P<0.05).在临床标本中,与配对癌旁组织比较,HCC组织的SPR14蛋白表达上调(P<0.05).SRP14表达上调的HCC患者具有更长的总生存期、无进展生存期及疾病特异性生存期(均P<0.05).细胞实验结果显示,SRP14能抑制HCC细胞的体外增殖和迁移.KEGG和GO富集分析结果显示,在HCC中,与SRP14共表达的基因主要调控蛋白质合成、加工和运输等相关细胞活动或功能;在非酒精性脂肪性肝病相关HCC中,与SRP14共表达的基因主要调控MAPK、cAMP、PI3K-Akt、Wnt等多条信号传导通路.SRP14抑制HCC细胞中已知抑癌基因GPRC5A的mRNA表达(P<0.05).结论:SRP14可能调控HCC进程并影响患者预后.

目的 ATP结合盒B亚家族成员1(ATP binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)的异常表达在多种癌症的发生发展中发挥关键作用.然而,G蛋白偶联受体C家族5组A型(G protein coupled receptor family C group 5 type A,GPRC5A)调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响仍不清楚.本研究探讨了 GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响.方法我们采用RT-PCR、Western-blot或免疫组化实验,分析ABCB1在肺腺癌细胞系、人肺腺癌组织以及GPRC5A基因敲除小鼠和野生型小鼠的气管上皮细胞和肺组织中的表达.采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析GPRC5A基因敲除小鼠气管上皮细胞对化疗药物的敏感性.采用皮下肿瘤形成实验探讨下调ABCB1表达是否可抑制体内肺腺癌增殖.采用免疫荧光和免疫沉淀实验研究GPRC5A和ABCB1之间潜在的调控关系.结果ABCB1在肺腺癌细胞系和人类肺腺癌组织中表达上调.GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞及肺组织的ABCB1表达高于野生型小鼠.与GPRC5A野生型小鼠的气管上皮细胞相比,GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞对塔立奇达和多柔比星更敏感.注射移植细胞28天后,接受ABCB1基因敲除细胞移植的GPRC5A-/-C57BL/6小鼠的肺肿瘤的体积和重量均明显低于野生型细胞移植小鼠(P=0.0043,P=0.0060).此外,免疫荧光和免疫沉淀实验表明,GPRC5A通过直接结合方式调控ABCB1的表达.结论GPRC5A通过抑制ABCB1表达降低肺腺癌增殖.GPRC5A调节ABCB1表达的途径有待研究.

本研究利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)基因表达综合数据库(GEO)下载获取甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC) mRNA表达谱芯片(7例PTC样本VS 7例正常组样本,登录号为GSM85-215～GSM85228)及miroRNA高通量测序数据(3例PTC样本VS 3例正常组样本,GSM 1388420～GSM 138-8425).通过Qlucore Omics Explorer (QOE) 3.2、DAVID 6.7、STING 9.1、miRecords等分析软件对PTC差异基因及microRNA进行综合生物信息学分析.筛选出来497个甲状腺乳头状癌相关致病基因及86个相关microRNAs;其中,致病基因中上调表达的有257个,下调表达的有240个;microRNAs中上调表达的有47个,下调表达的有39个.对其进行生物信息学分析发现,ERBB3、TNNT1、MYL1、POSTN基因及hsa-miR-183-5p (ERBB4)、hsa-miR-139-5p (SUV39H1)、hsa-miR-152 (MAML 1)、hsa-miR-1 (FOXD3)、hsa-miR-146b-5p(MEF2C)、hsa-miR-152 (DOT1L)、hsa-miR-493-5p (FBXW7)、hsa-miR-876-5p (PIK3R1)、hsa-miR-183-3p(MDM2)、hsa-miR-382-3p (CD80)、hsa-miR-18 lb-5p (SIRTl)、hsa-miR-874-5p (MTOR)、hsa-miR-876-5p(GPRC6A)等microRNAs-靶基因参与涉及ErbB信号通路、细胞凋亡信号通路、B细胞受体信号通路、磷脂酰肌醇代谢信号通路等,在PTC疾病发生发展中可能起着重要作用.从分子水平上分析甲状腺乳头状癌相关致病基因及microRNAs,为揭示PTC发病机制、药物研发及临床诊断治疗提供新的思路和依据.

目的 从基因水平上探讨G蛋白耦联受体(GPCRs)在银屑病发病机制中的作用,讨论通过抑制GPCRs的方法治疗银屑病的可能性,为后期寻找银屑病的新的治疗靶点提供依据.方法 利用基因芯片检测技术和实时定量PCR的方法找出3例斑块型银屑病患者受累皮肤组织和非受累皮肤组织与GPCRs相关的大于2倍差异基因.结果 通过基因芯片技术和实时定量PCR验证得出6个上调基因(CXCR6,GPR 110,GPR171,CXCR2,PTARF,LPHN2)和11个下调基因(GPR12,CHRM1,ADRB2,CHAM3,NPY1R,ADRA1B,GPR182,ADAR2A,LGR6,GPRC5C,F2R).其中,CXCR6已被证实与银屑病的发病相关.结论 银屑病患者受累皮肤组织和非受累皮肤组织与GPCRs相关的差异表达基因与银屑病的发病机制密切相关,值得进一步深入探讨.

目的·探究炎症信号通路对G蛋白偶联受体C型家族5A(G protein-coupled receptor class C group 5 memberA,GPRC5A)表达的调控作用.方法·给予核因子κB(NF-κB)启动子驱动荧光酶转基因小鼠腹腔注射细菌内毒素脂多糖(LPS),诱导肺组织炎症,活体动物可见光成像系统下观察小鼠肺部NF-κB信号通路激活情况.在C57BL/6J小鼠,腹腔注射LPS,Western blotting检测肺组织GPRC5A表达情况.体外实验中,对人肺癌细胞Calu-1、H322,人胚胎肾细胞HEK293T给予肿瘤坏死因子α(TNF-α)或转染p65表达质粒,而后用Western blotting、RT-PCR、荧光素酶报告基因实验、免疫荧光等方法检测分析炎症对GPRC5A表达的影响.结果·小鼠腹腔注射LPS可以诱导NF-κB炎症信号通路激活,并抑制肺组织中GPRC5A的表达.炎症因子TNF-α可明显抑制Calu-1细胞GPRC5A的蛋白和mRNA表达.在HEK293T细胞,转染p65表达质粒后,可以抑制GPRC5A启动子驱动的荧光素酶报告质粒的表达.被转染并表达绿色荧光蛋白-p65的H322细胞中几乎没有GPRC5A的表达.结论·NF-κB信号通路可以抑制GPRC5A启动子的转录活性,抑制其mRNA和蛋白的表达.

目的:应用生物信息学方法筛选胰腺导管腺癌的预后风险长链非编码RNA(lncRNA).方法:从癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库下载胰腺导管腺癌患者的RNA-seq Level 2数据及其临床信息.根据NCBI Gene数据库及GENCODE v7数据库的基因注释信息,将下载的mRNA和lncRNA测序数据进行重新注释.然后应用R软件的edgeR包和limma包筛选差异表达的mRNA和lncRNA,并对它们进行相关性分析,进而获得lncRNA-mRNA有统计学意义的共表达关系对,并将其中的mRNA定义为lncRNA的靶基因.通过R软件clusterProfiler包对lncRNA的靶基因进行功能富集分析,以推测lncRNA的生物学功能.最后,绘制差异表达lncRNA的Kaplan-Meier曲线,筛选出与胰腺导管腺癌预后风险相关的lncRNA.结果:经过基因重新注释,共得到19791个mRNA和1623个lncRNA的测序数据,随后共筛选得到260个差异表达的mRNA和15个差异表达的lncRNA.经过相关性分析,共得到包括5个lncRNA和24个mRNA在内的24个有统计学意义的共表达关系对.其中lncRNA LINC00857有6个靶基因,分别为C1orf116、ESRP1、GPRC5A、LIPH、MAL2和PLS1.根据lncRNA靶基因的功能富集分析,推测LINC00857主要富集于磷脂酶活性、细胞骨架结构组成和脂肪酶活性.生存分析发现,CASC8和LINC00857与胰腺导管腺癌的预后风险明显有关(P=0.0052、P=0.027).结论:CASC8和LINC00857可能是胰腺导管腺癌的预后风险lncRNA,有望在今后的研究中成为胰腺导管腺癌新的预后监测指标.

目的 探讨G蛋白偶联受体C家族5A(GPRC5A)基因对肺癌细胞A549增殖和迁移能力的影响及其与表皮生长因子受体(EGFR)的相关性.方法 构建GPRC5A基因真核表达质粒pLenti6.3-MCS-GPRC5A,通过脂质体法转染A549细胞,经过新霉素筛选获得阳性单克隆细胞.用qRT-PCR和Western blot检测转染前后GPRC5A、EGFR基因的mRNA和蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力的变化,Transwell法检测细胞迁移能力的变化.结果 真核表达质粒转染A549细胞后,GPRC5AmRNA表达上调,蛋白表达水平升高,EGFR mRNA表达下降,蛋白表达水平降低.高表达GPRC5A后,细胞增殖和迁移能力显著减弱.结论 GPRC5A可能与EGFR结合,抑制EGFR通路的过度激活,从而影响了A549细胞的增殖和迁移能力.

目的:基于生物信息数据挖掘阐明G蛋白偶联受体C家族5A基因(G protein-coupled receptor family C,member 5,group A,GPRC5A)在胰腺癌中的表达及临床意义.方法:检索Oncomine,TCGA,Human Protein Atlas等基因数据库,分析GPRC5A在胰腺癌中的表达差异,并分析其在不同肿瘤中的表达.采用Western印迹技术在武汉大学人民医院小样本队列中验证GPRC5A在胰腺癌及癌旁组织中的蛋白表达水平,采用Kaplan-Meier进行患者生存分析,并对GPRC5A与靶向药物敏感性关系进行分析.结果:对Oncomine数据库中有差异表达的295项研究数据进行差异性分析,发现胰腺癌组织GPRC5A基因的表达明显高于正常胰腺组织.对GPRC5A在不同肿瘤组织中表达的4184项研究进行荟萃分析,发现GPRC5A在胰腺癌组织中显著表达增高.通过生存分析发现高表达GPRC5A胰腺癌患者生存期明显低于低表达者,高表达患者预后更差.此外,GPRC5A表达与靶向药物厄洛替尼的药物敏感性有一定关联.结论:GPRC5A在胰腺癌组织中呈现高表达,与患者预后显著相关,其有可能成为胰腺癌诊断及药物治疗的新靶点.

目的 探讨G蛋白偶联受体C型家族5A基因(GPRC5A)在胰腺癌组织中的表达情况及对患者预后的预测作用,探究GPRC5A对胰腺癌有氧糖酵解的影响.方法 利用Gene Expression Omnibus(GEO)、The Cancer Genome Atlas(TCGA)及The Genotype-Tissue Expression(GTEx)公共数据库及仁济医院胆胰外科课题组表达谱芯片检测胰腺癌及癌旁组织中GPRC5A在mRNA水平上的表达情况,并利用TCGA公共数据库验证GPRC5A表达对患者的预后影响,进一步通过Seahorse检测仪检测GPRC5A对胰腺癌细胞系糖酵解能力的影响.结果 GPRC5A在胰腺癌组织中的mRNA表达水平在3个GEO数据库GSE15471(P<0.0001)、GSE16515(P=0.0157)、GSE28735(P<0.0001)及仁济表达谱芯片数据(P<0.0001)中均显著高于癌旁组织,将TCGA数据库中的肿瘤组织测序结果同GTEx数据库中的正常组织测序结果比对也得出同样结论(P=0.0311).同时,在TCGA数据库中GPRC5A mRNA高表达组患者预后更差(P=0.0069);对仁济表达谱芯片进行的基因富集分析提示GPRC5A mRNA高表达组在糖酵解通路(Glycolysis pathway)存在富集.细胞实验发现干扰GPRC5A表达后胰腺癌细胞的细胞外酸化率出现下调.结论 GPRC5A在胰腺癌组织中高表达,其高表达与较差预后相关,并能影响胰腺癌细胞的糖酵解能力.