双特异性抗体(BsAb)是一种新型免疫疗法，能够通过主要组织相容性复合体(MHC)非限制性识别并结合肿瘤抗原，激活T细胞并靶向杀伤肿瘤细胞。目前，BsAb已成为血液肿瘤领域的研究热点。在复发/难治性多发性骨髓瘤(RRMM)患者中，针对B细胞成熟抗原(BCMA)，G蛋白偶联受体家族C组5成员D(GPRC5D)和Fc受体同源物(FcRH)5靶点BsAb的早期临床试验已显示出良好的有效性和安全性，治疗反应率达70%~83%，其主要治疗不良反应为低级别细胞因子释放综合征(CRS)、血细胞减少和感染。笔者拟就BsAb的分类和功能、BsAb治疗RRMM的靶点及应用的最新研究进展进行阐述。

目的 ATP结合盒B亚家族成员1(ATP binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)的异常表达在多种癌症的发生发展中发挥关键作用.然而,G蛋白偶联受体C家族5组A型(G protein coupled receptor family C group 5 type A,GPRC5A)调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响仍不清楚.本研究探讨了 GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响.方法我们采用RT-PCR、Western-blot或免疫组化实验,分析ABCB1在肺腺癌细胞系、人肺腺癌组织以及GPRC5A基因敲除小鼠和野生型小鼠的气管上皮细胞和肺组织中的表达.采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析GPRC5A基因敲除小鼠气管上皮细胞对化疗药物的敏感性.采用皮下肿瘤形成实验探讨下调ABCB1表达是否可抑制体内肺腺癌增殖.采用免疫荧光和免疫沉淀实验研究GPRC5A和ABCB1之间潜在的调控关系.结果ABCB1在肺腺癌细胞系和人类肺腺癌组织中表达上调.GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞及肺组织的ABCB1表达高于野生型小鼠.与GPRC5A野生型小鼠的气管上皮细胞相比,GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞对塔立奇达和多柔比星更敏感.注射移植细胞28天后,接受ABCB1基因敲除细胞移植的GPRC5A-/-C57BL/6小鼠的肺肿瘤的体积和重量均明显低于野生型细胞移植小鼠(P=0.0043,P=0.0060).此外,免疫荧光和免疫沉淀实验表明,GPRC5A通过直接结合方式调控ABCB1的表达.结论GPRC5A通过抑制ABCB1表达降低肺腺癌增殖.GPRC5A调节ABCB1表达的途径有待研究.

[目的]采用网络药理学与生物信息预测分析并结合体内与分子实验验证百合抗焦虑抗抑郁的作用机制.[方法]采用中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)检索百合抗焦虑抗抑郁的潜在活性成分;通过治疗靶点数据库(Therapeutic Target Database,TTD)检索活性成分抗焦虑抗抑郁的潜在作用靶标,构建成分与靶标网络;采用REACTOME与g:Profiler软件进行基因本体(gene ontology,GO)分析,京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、REAC 和 WikiPathways 代谢通路(WikiPathways,WP)富集分析.以行为绝望抑郁悬尾和强迫游泳实验评价百合水提液抗抑郁活性,以酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测ICR小鼠海马内神经递质含量,以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)分析抑郁小鼠脑内抑郁相关基因表达水平.[结果]百合通过β-谷甾醇、3-去甲基秋水仙碱与26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β,26-二羟基胆甾烷-16,22-二氧基-3-0-α-L-鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷等5个潜在活性成分,可通过调控hsa-miR-203和hsa-miR-206等miRNAs与特异性蛋白 1(specificity protein 1,SP1)、RE1沉默转录因子(RE1 silencing transcription factor,REST)和CCCTC 结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)等转录因子的表达,进而共同调控蛋白激酶C epsilon型(protein kinase C epsilon,PRKCE)、γ-氨基丁酸 B 型受体亚基 2(gamma-aminobutyric acid type B receptor subunit 2,GABBR2)、γ-氨基丁酸 A 型受体亚基 p2(gamma-aminobutyric acid type A receptor subunit beta 2,GABRB2)和溶质载体家族6 成员 4(solute carrier family 6 member 4,SLC6A4)等基因的表达,可能最终影响了 γ-氨基丁酸通路、5-羟色胺通路、G蛋白偶联受体通路和单胺氧化酶通路等,增加抑郁小鼠脑内神经递质含量,发挥抗焦虑抗抑郁作用.[结论]采用网络药理学、生物信息预测以及实验验证百合抗焦虑抗抑郁的活性成分、潜在靶标和信号通路,为百合抗焦虑抗抑郁研究提供参考.

目的·探究炎症信号通路对G蛋白偶联受体C型家族5A(G protein-coupled receptor class C group 5 memberA,GPRC5A)表达的调控作用.方法·给予核因子κB(NF-κB)启动子驱动荧光酶转基因小鼠腹腔注射细菌内毒素脂多糖(LPS),诱导肺组织炎症,活体动物可见光成像系统下观察小鼠肺部NF-κB信号通路激活情况.在C57BL/6J小鼠,腹腔注射LPS,Western blotting检测肺组织GPRC5A表达情况.体外实验中,对人肺癌细胞Calu-1、H322,人胚胎肾细胞HEK293T给予肿瘤坏死因子α(TNF-α)或转染p65表达质粒,而后用Western blotting、RT-PCR、荧光素酶报告基因实验、免疫荧光等方法检测分析炎症对GPRC5A表达的影响.结果·小鼠腹腔注射LPS可以诱导NF-κB炎症信号通路激活,并抑制肺组织中GPRC5A的表达.炎症因子TNF-α可明显抑制Calu-1细胞GPRC5A的蛋白和mRNA表达.在HEK293T细胞,转染p65表达质粒后,可以抑制GPRC5A启动子驱动的荧光素酶报告质粒的表达.被转染并表达绿色荧光蛋白-p65的H322细胞中几乎没有GPRC5A的表达.结论·NF-κB信号通路可以抑制GPRC5A启动子的转录活性,抑制其mRNA和蛋白的表达.

流行病学研究结果显示,大肠癌的发病率达334/10万～783/10万[1].临床上大肠癌的总体治疗有效率不足35％[2].在探讨大肠癌的发病机制过程中,越来越多的研究揭示出基础生物学领域相关因子对于恶性肿瘤发生的影响.核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是重要的转录因子,其能够促进肿瘤信号通路的激活,导致肿瘤细胞的增殖及分化障碍[3];G蛋白偶联受体C型家族5A(G protein coupled receptor C type group 5 member A,GPRC5A)和细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的表达,能够维持细胞周期的正常调控,稳定细胞的生理过程,延缓肿瘤细胞过度增殖导致的病情进展[4-5].为进一步揭示NF-κB、GPRC5A和SOCS3在大肠癌患者病灶组织中的表达情况,本研究选取2015年1月至2017年1月我院保存的大肠癌组织120例,探讨相关因子的蛋白表达水平,现报道如下.

目的 探讨G蛋白偶联受体C型家族5A基因(GPRC5A)在胰腺癌组织中的表达情况及对患者预后的预测作用,探究GPRC5A对胰腺癌有氧糖酵解的影响.方法 利用Gene Expression Omnibus(GEO)、The Cancer Genome Atlas(TCGA)及The Genotype-Tissue Expression(GTEx)公共数据库及仁济医院胆胰外科课题组表达谱芯片检测胰腺癌及癌旁组织中GPRC5A在mRNA水平上的表达情况,并利用TCGA公共数据库验证GPRC5A表达对患者的预后影响,进一步通过Seahorse检测仪检测GPRC5A对胰腺癌细胞系糖酵解能力的影响.结果 GPRC5A在胰腺癌组织中的mRNA表达水平在3个GEO数据库GSE15471(P<0.0001)、GSE16515(P=0.0157)、GSE28735(P<0.0001)及仁济表达谱芯片数据(P<0.0001)中均显著高于癌旁组织,将TCGA数据库中的肿瘤组织测序结果同GTEx数据库中的正常组织测序结果比对也得出同样结论(P=0.0311).同时,在TCGA数据库中GPRC5A mRNA高表达组患者预后更差(P=0.0069);对仁济表达谱芯片进行的基因富集分析提示GPRC5A mRNA高表达组在糖酵解通路(Glycolysis pathway)存在富集.细胞实验发现干扰GPRC5A表达后胰腺癌细胞的细胞外酸化率出现下调.结论 GPRC5A在胰腺癌组织中高表达,其高表达与较差预后相关,并能影响胰腺癌细胞的糖酵解能力.

目的 探究G蛋白偶联受体C型家族5A(GPRC5A)基因对骨肉瘤细胞系143B迁移和侵袭的影响及其机制.方法 从数据集GSE32981筛选出转移瘤中差异表达的基因,结合TCGA数据库对差异表达基因进行生存分析;CCK8实验、划痕实验和Transwell小室法侵袭实验检测GPRC5A敲低或过表达对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响;RT-qPCR和Western blot检测GPRC5A敲低或过表达对EMT相关基因mRNA和蛋白水平的影响.结果 转移瘤中有299个基因表达水平发生改变,联合TCGA数据库进一步筛选出37个与骨肉瘤患者生存密切相关的基因;细胞实验结果表明,GPRC5A不影响骨肉瘤细胞增殖,GPRC5A过表达能显著促进骨肉瘤细胞迁移和侵袭(P<0.05);过表达GPRC5A能促进EMT相关蛋白N-Cad和Vim的表达,抑制E-Cad的表达(P<0.05).结论 GPRC5A能通过诱导EMT促进骨肉瘤细胞系143B迁移和侵袭,与骨肉瘤患者生存密切相关,可作为抗骨肉瘤转移药物潜在作用靶点.

目的 探究G蛋白偶联受体家族C组5型(GPRC5A)对脂多糖(LPS)诱导的人支气管上皮16HBE细胞多种生物学特性的影响,并探讨其分子机制.方法 利用LPS建立16HBE细胞损伤模型,将细胞分为4组:Control组、LPS组、LPS+pcDNA组和LPS+pcDNA-GPRC5A组.利用患者样本和基因表达组学数据库数据分析支气管哮喘(BA)患者和健康受试者气道组织中的GPRC5A的表达情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测GPRC5A、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的mRNA表达水平;采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡;Western-Blot检测GPRC5A、气道黏蛋白5AC(MUC5AC)、NF-κB p65和NF-κB抑制因子α(IκBα)蛋白的表达水平.结果 成功构建LPS诱导的16HBE细胞损伤模型;与健康受试者组织和Control组细胞比较,GPRC5A在EBCs组织和LPS组的16HBE细胞中下调(P<0.05);而与LPS组和LPS+pcDNA组比较,LPS+pcDNA-GPRC5A组的细胞凋亡率、炎症因子TNF-α和IL-6、气道黏蛋白MUC5AC、NF-κB p65和IκBα的表达均显著下降,而细胞活力升高(P<0.05).结论 GPRC5A可能通过NF-κB通路抑制LPS诱导的16HBE细胞凋亡、炎症反应和气道黏蛋白的分泌,促进细胞的活力,发挥阻碍损伤的作用.

G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors, GPCRs)是已知人类基因组中最大的一类膜蛋白受体家族,包括A类视紫红质样受体、B类分泌素受体、C类代谢型谷氨酸受体、D类真菌交配信息素受体、E类环腺苷酸受体及F类卷曲受体(Frizzled/Smoothened家族)[1-2].其中A类视紫红质样受体包含了GPCRs中大部分种类,共含有19个子类(A1～A19)719种,是目前临床上大多数药物作用的潜在靶点[3-4].在A类视紫红质样受体家族中,目前已知197种受体存在明确的配体(不包括嗅觉、视觉、味觉及犁鼻器感觉受体),但87种受体目前尚不清楚其内源性配体,被称为"孤儿(orphan)受体",其中54种孤儿受体至少有一篇文献报道了其可能的内源性配体[5].探寻并鉴定孤儿GPCRs的内源性配体的研究即为GPCRs的去孤儿化(deorphanization)[6],但由于大部分内源性配体的特性未知及相关工具药物的缺乏,相关受体的去孤儿化研究受到较大限制.目前,鉴定内源性配体的研究策略主要有受体-配体绑定分析、受体内化激活分析、β-arrestin募集分析及环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)和三磷酸肌醇(inositol tri-phosphate,IP3)生成、钙离子信号通路检测等方法[6-7].