半乳糖血症(galactosemia)是一种罕见的常染色体隐性遗传代谢病,是由于半乳糖代谢途径中4种酶的任一种发生缺陷,导致代谢产物在体内蓄积而致病.半乳糖血症最常见的类型为半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(galactose-1-phosphate uridyl-transferase,GALT)缺陷,又称为半乳糖血症Ⅰ型或经典半乳糖血症.

目的 了解拉祜族p血型个体及其家系成员的血清学及分子生物学遗传特性.方法 采集之前已发现拉祜族6例p血型的家系成员血液样本,用试管法进行ABO、Rh、P1PK血型系统血型血清学鉴定、PCR测序分析A4GALT基因编码区序列.结果 6例p血型来自5个家庭中共计39例家系成员中检出12例p血型个体(含6例先证者),其中B型7例、O型2例、A型1例、AB型1例、1例未检ABO血型.11例p血型个体血浆中均检出抗-PP1Pk抗体,而1例仅采集指血,未检测意外抗体.对其中23例采集静脉血的家系成员进行A4GALT基因编码区序列测序,11例测序结果显示A4GALT第3外显子c.559G＞C纯合突变(含6例已发现先证者),为p血型,5例为c.559G/C突变杂合子,7例测序与参考系列一致.结论 A4GALT基因c.559G＞C突变可能是拉祜族人群形成p血型的分子基础.

目的 分析1例p血型白血病患儿的免疫血清学特点、p血型分子基础及用血管理和治疗,为罕见血型白血病患儿临床治疗提供参考.方法 采用血清学方法检测p表型和抗-PP1Pk(-Tja)抗体,并联合测序分析.结果 该患儿为p血型,血清中含有抗-Tja.A4GALT基因检测结果发现该例患儿为c.343 A＞T(AAA＞TAA)纯合突变,多态性位点c.903 C＞G(CCC＞CCG)纯合突变.调整常规化疗方案后,配合红细胞输注,治疗过程顺利.结论 该白血病患儿为罕见p血型,为配合用血管理,需要合理调整临床治疗方案.对于拥有罕见血型的血液系统疾病患者,需要得到更加精细化的用血管理,并调整常规化疗方案.

目的 明确2例疑似半乳糖血症患儿的分子遗传学病因.方法 应用新一代测序技术对患儿基因组进行外显子捕获检测,对患儿及其父母的突变位点进行Sanger测序验证;用SIFT、PolyPhen-2和MutationTaste软件对新突变进行致病性分析.结果 新一代测序检测结果显示例1携带GALT基因c.564G＞C(p.Q188H)和c.116A＞T(p.D39V)复合杂合突变;例2携带c.754C＞T(p.Q252X)和c.904+1G＞T复合杂合突变;Sanger测序验证结果显示2例患儿分别携带c.564G＞C(p.Q188H)、c.116A＞T(p.D39V)和c.754C＞T(p.Q252X)、c.904+ 1G＞T突变;例1父亲携带GALT基因c.564G＞C杂合突变,母亲携带c.116A＞T杂合突变,例2父亲携带c.754C＞T杂合突变,母亲携带c.904+1G＞T突变,因此患儿的突变分别遗传自父母.4个突变经检索HGMD均为未报道的新突变.结论 GALT基因的复合杂合突变可能是2例半乳糖血症患儿的发病原因.

半乳糖血症是一种潜在致死性疾病,主要表现为出生后1周喂养困难、黄疸、呕吐、肝衰竭、出血倾向和脓毒症,常导致新生几期死亡[1].半乳糖代谢过程中半乳糖激酶、半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶、半乳糖尿苷二磷酸-4-表异构酶的任何一种酶先天性缺陷均可致半乳糖血症,其中以半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(GALT,EC2.7.7.12)缺陷所致常染色体隐性遗传代谢性经典半乳糖血症(OMIM#230400)较常见[2].目前,国内对半乳糖血症相关报道不多,有基因检测结果的报道非常有限[3].为加深对半乳糖血症的认识,早发现、早诊断、早治疗,改善半乳糖血症患儿的预后.现报道以慢性腹泻为首发表现,GALT基因检测c.982C ＞T(p.R328C)/c.1064C＞T(p.A355V)复合杂合突变的经典半乳糖血症患儿1例.

目的 从分子水平研究半乳糖血症患儿半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶基因(GALT基因)突变情况.方法 选取2例确诊为半乳糖血症的患儿,分离其外周血淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR扩增GALT基因全长cDNA;将PCR产物亚克隆至T-easy载体,筛选阳性克隆并测序；同时,采用限制性片段多态性的方法将PCR产物进行酶切鉴定.结果 2例患儿均出现了未报道过的突变.其中1例患儿GALT基因1006位A突变为G,导致M336V氨基酸突变；另1例患儿GALT基因779位A突变为T,导致H260L突变.这2例突变均为碱基替换形成的错义突变,且均为杂合型突变.结论 基因诊断可提高半乳糖血症诊断的准确性,并为该病的产前筛查、造血干细胞移植甚至基因治疗提供有价值的参考.

目的 分析1例胎死宫内患者血型血清学及分子生物学特点,明确患者血型及不规则抗体类型.方法 采用血清学方法对患者的ABO、P1PK血型及不规则抗体进行鉴定;对编码P1PK抗原形成关键酶的α1,4-半乳糖基转移酶基因(α1,4-galactosyltransferase gene,A4GALT)进行测序,分析DNA序列,确定突变位点.结果 血清学实验证实患者为P1PK血型系统的p表型,患者血清中存在抗-PP1PK;测序结果显示,患者的A4GALT编码区出现304-305insG突变.结论 患者为P1PK血型系统的p表型,其A4GALT基因突变类型为304-305insG,患者体内的抗-PP1PK可能为其胎死宫内的原因.

目的 鉴定并分析p1pk血型系统p表型的血清学特征和血型基因变异机制.方法 对1倒献血者血液样本作血清学及DNA序列分析:采用盐水介质试管法完成ABO、RhD、p1pk血型鉴定、直接抗球蛋白试验;采用盐水介质试管法、间接抗球蛋白法及微柱凝胶法完成不规则抗体筛查、抗体鉴定及抗体效价测定试验;采用聚合酶链式反应直接测序法(PCR-SBr)进一步对先证者基因组DNA作p1pk血型相关的A4GALT基因PCR扩增和DNA序列分析.结果 先证者血清学检测:O型、RhD阳性;血清中检出抗-pp1pk(抗-Tja),IgM室温效价及IgC效价为64和128;血清学鉴定试验:确认为罕见的p表型.DNA测序:先证者A4GALT基因编码区存在c.559G＞C及c.903C＞G纯合突变.结论 先证者体内存在IgM和IgG混合性质的高效价抗-pp1pk,A4GALT基因c.559G＞C突变(p.Gly187Arg变异)可能是其形成p表型及产生抗-pp1pk抗体的分子基础.

目的 研究1例P1+PK+P-(P1K)表型个体的血型、抗体及其分子机制.方法 采用血清学方法鉴定血型和不规则抗体,采用PCR扩增α-1,4-半乳糖基转移酶基因(α-1,4-galactosyltransferase,A4GALT)和β-1,3-N-乙酰半乳糖氨基转移酶基因(β-1,3-N-acetylgalactosaminyltransferase,B3GALNT1)编码区,并测序分析DNA序列.结果 血清学试验鉴定受检者为P1K表型,血清中含有可与P阳性红细胞凝集并溶血的抗-P,分子生物学技术发现其B3GALNT1基因编码区存在c.202C＞T(CGA＞TGA)纯合突变.结论 受检者为罕见的P1K表型,血清中存在抗-P,B3GALNT1基因c.202C＞T无义突变可能是导致其P1K表型的分子机制.

GALT基因突变是人类I型半乳糖血症的主要病因.拟通过CRISPR/cas9系统打靶小鼠Galt基因以模拟人GALT基因突变,从而为建立精准模拟I型半乳糖血症的动物模型奠定基础.首先分析了我国I型半乳糖血症GALT基因的致病突变位点,并将其定位在小鼠Glat基因上,作为小鼠Galt基因的拟突变位点,然后根据拟突变位点区域的序列设计了sgRNA导向序列,构建sgRNA表达质粒,将其与cas9表达质粒共转染小鼠3T3细胞,通过嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选阳性转染细胞,提取阳性细胞基因组DNA,PCR扩增打靶位点的DNA片段,通过TA克隆测序鉴定基因编辑情况并分析编辑效率.结果表明,3个sgRNA导向序列均可以通过CRISPR/Cas9系统高效编辑小鼠Galt基因,编辑效率为100％.