目的:探讨G蛋白偶联受体30(GPR30)抑制TLR4/NF-κB通路减少蛛网膜下腔出血(SAH)后神经元凋亡的作用及其机制。方法:采用随机分组的方式将SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组 n＝24，Sham 2组 n＝21)、SAH模型组(SAH组 n＝24，SAH 2组 n＝21)及SAH模型+G1激动剂组(简称G1组， n＝24)。通过颈内动脉穿刺法进行SAH模型的构建。采用Sugawara评分评价大鼠SAH的严重性。SAH后24 h采用Garcia评分和平衡木试验评分评定神经功能缺损程度。成功建模24 h后，称重脑组织湿重和干重，计算脑组织含水率。绘制伊文思蓝标准曲线，评估血脑屏障通透性。采用免疫荧光染色观察各组小胶质细胞活化情况。采用蛋白质免疫印迹法(WB)检测各组GPR30、TLR4及NF-κB蛋白的表达情况；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组外周血TNF-α、IL-1β和IL-6促炎细胞因子的表达情况；采用TUNEL法检测神经元凋亡情况。 结果:与SAH组相比，G1组Sugawara评分降低、平衡木试验评分和Garcia评分升高、脑含水率和伊文思蓝的渗出率均降低(均 P<0.05)。随着时间的变化，Sham 2组GPR30表达量无明显变化( P>0.05)，建模后6、12、24、48和72 h，SAH 2组的GPR30表达量均较Sham 2组高，SAH 2组建模24 h的GPR30表达量最高，而后下降(均 P<0.05)。Sham组、SAH组与G1组三组间比较，GPR30、TLR4和NF-κB表达量的差异均有统计学意义(均 P<0.05)，其中G1组较SAH组TLR4和NF-κB表达量下降(均 P<0.05)。免疫荧光染色结果显示，SAH组小胶质细胞数目较Sham组增多，而G1组较SAH组的小胶质细胞减少。ELISA结果显示，SAH组、Sham组与G1组的TNF-α、IL-1β及IL-6的表达差异均有统计学意义(均 P<0.05)，其中，与SAH组比较，G1组的TNF-α、IL-1β及IL-6的表达均降低(均 P<0.05)。TUNEL法染色结果显示，SAH组的TUNEL阳性细胞数较Sham组增加，而G1组较SAH组的TUNEL阳性细胞数减少。 结论:GPR30活化后可能通过抑制TLR4/NF-κB通路减少SAH后的神经元凋亡，改善SAH后早期脑损伤，保护神经功能。

目的:研究乳化剂吐温-80(Tween-80)对电离辐射诱导胆汁酸肠肝循环障碍的影响。方法:48只雄性C57BL/6 J小鼠按照随机数表法分为健康对照组、单纯照射组、照射+Tween-80组和照射+Tween-80+丁酸组，每组12只。采用特制的屏蔽装置及γ射线辐照仪对小鼠进行腹部局部照射。照射前7 d，照射+Tween-80组和照射+Tween-80+丁酸组小鼠每天给予Tween-80灌胃，健康对照组及单纯照射组给予水灌胃；照射后照射+Tween-80+丁酸组每天给予丁酸灌胃直至麻醉处死，健康对照组、单纯照射组和照射+Tween-80组分别每天给予水灌胃直至麻醉处死。照射后21 d，取小鼠小肠及粪便样品，通过酶联免疫吸附试验检测小鼠小肠及粪便中胆汁酸的含量；通过实时定量聚合酶链反应(PCR)检测小肠和(或)结肠样品中TGR5及JAM-A的表达，计算白介素10(IL-10)/白介素12(IL-12)比率的变化；通过免疫组织化学染色比较结肠中GPR43蛋白的含量。结果:与单纯照射组相比，Tween-80预处理的受照小鼠小肠中胆汁酸含量进一步降低，粪便中胆汁酸含量升高(7.92%、7.99%， t＝3.93、2.94， P<0.05)；介导胆汁酸发挥生物学功能的TGR5受体及其下游JAM-A表达水平下降(20.93%、9.91%， t＝4.85、5.14， P<0.05)、结肠IL-10/IL-12比率(抗炎指标)降低(4.59%， t＝3.39， P<0.05)；结肠中能结合短链脂肪酸使其发挥作用的GPR43蛋白表达量降低。丁酸给药使得小鼠小肠胆汁酸含量回升(8.06%， t＝9.25， P<0.05)、粪便中胆汁酸含量降低(14.41%， t＝4.71， P<0.05)；TGR5及JAM-A表达量升高(19.35%、32.71%， t＝7.69、19.23， P<0.05)，小肠及结肠IL-10/IL-12比率升高(2.39%、4.05%， t＝3.38、5.92， P<0.05)；结肠中GPR43蛋白含量增加。 结论:Tween-80加重电离辐射诱导的小鼠胆汁酸肠肝循环障碍，给予丁酸能够改善Tween-80对受照小鼠胆汁酸肠肝循环的抑制作用。

目的:探讨Xp22.3微缺失/微重复的基因型与临床表型的相关性.方法:对15例SNP-array检测结果为Xp22.3微缺失/微重复病例的分子遗传学特征、临床表型和随访信息进行回顾性分析.结果:15例Xp22.3微缺失/微重复胎儿中,8例为微缺失病例(8/15),片段大小165～5.1Mb,片段内基因包括SHOX、ARSE、STS、ANOS1、NL-GN4X、GPR143等30个OMIM基因,其中SHOX、ARSE、STS、ANOS1为单倍剂量不足基因.7例(7/15)为微重复病例,片段大小为229～1.7Mb,片段内基因包括SHOX、ARSE、ANOS1、STS、NLGN4X、GPR143等23个OMIM编码基因,不含三倍剂量敏感基因.8例微缺失病例中7例诊断为致病性拷贝数变异(CNV),1例诊断为临床意义不明(VOUS);7例微重复病例均诊断为VOUS.15例胎儿中7例(7/15)超声发现异常特征,其中四肢短小3例(3/7),唇腭裂1例(1/7),心血管异常1例(1/7),侧脑室增宽1例(1/7),鼻骨缺如1例(1/7).对12例病例进行了亲本来源验证,5例(5/12)为母源性遗传,3例为父源性遗传(3/12).15病例中4例(4/15)微缺失选择终止妊娠,1例稽留流产,均为男性胎儿;10例(10/15)选择继续妊娠,除1例新生儿左耳听力受损外,其余随访均无异常.结论:Xp22.3微缺失因涉及SHOX、ARSE、STS、ANOS1等单倍剂量敏感基因,为致病性CNV,表现为生长发育迟缓、软骨发育不全等症状.Xp22.3微重复无三倍剂量敏感基因,定义为VOUS,胎儿妊娠结局良好.当SNP-array诊断为Xp22.3微缺失/微重复时,应对其基因组信息与临床表型相关性进行分析,为孕妇提供指导.

目的 研究胃饥饿素(ghrelin)对内质网应激及高浓度葡萄糖导致的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)凋亡的影响.方法 将HRMECs细胞分为对照组、高糖组、高糖+ghrelin组和高糖+ghrelin+衣霉素(内质网应激诱导剂)组.对照组细胞不加干预,高糖组采用30 mmol/L葡萄糖构建细胞损伤模型,高糖+ghrelin组采用30 mmol/L葡萄糖和10 nmol/L ghrelin处理细胞,高糖+ghrelin+衣霉素组采用30 mmol/L葡萄糖、10 nmol/L ghrelin和10 μmol/L衣霉素联合处理细胞,所有细胞均培养48 h.采用Annexin V-FITC/7-AAD试剂盒检测4组细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测对照组、高糖组和高糖+ghrelin组细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2及内质网应激蛋白GPR78、IRE1α的表达.结果 与对照组比较,高糖组HRMECs细胞凋亡率明显升高(P＜0.05);与高糖组相比,高糖+ghrelin组细胞凋亡率明显降低(P＜0.05).与对照组比较,高糖组细胞Bax、GPR78及p-IRE1α的蛋白表达明显增加(均P＜0.05),Bcl-2的表达明显降低(P＜0.05);与高糖组相比,高糖+ghrelin组细胞Bax、GPR78及p-IRE1α的蛋白表达均明显降低(均P＜0.05),Bcl-2的表达明显升高(P＜0.05).与高糖+ghrelin组相比,高糖+ghrelin+衣霉素组的细胞凋亡率明显升高(P＜0.05).结论 Ghrelin可以减少高糖诱导的视网膜血管内皮细胞凋亡,其机制可能与ghrelin抑制激活的内质网应激有关.

目的 比较 γ-谷氨酰转肽酶和血小板比值指数(γ-glutamyl transpeptidase platelet ratio index,GPR)、AST和血小板比值指数(aspartate aminotransferase-to-platelet ratio index,APRI)、基于4因子的纤维化指数(fibrosis index based on the four factors,Fib-4)对CHB纤维化 、肝硬化的诊断价值.方法 根据Metavir评分将262例CHB患者分为F0～F1组131例,F2～F3组102例,F4组29例,记录患者年龄 、性别 、ALT、AST、γ-GT、血小板计数.分别计算GPRI、APRI、Fib-4评分.统计学处理采用t检验 、秩和检验 、χ2检验;血清学诊断模型与肝纤维化的相关性采用Spearman秩相关分析.结果 F0～F1组 、F2～F3组及F4组患者GPRI评分为0.39(0.21,0.95)、1.05(0.38,2.39)、2.11(1.12,3.33),差异有统计学意义(χ2=40.645,P<0.01);APRI评分为0.49(0.32,0.97)、0.77(0.52,1.52)、1.12(0.77,2.50),差异有统计学意义(χ2=32.636,P<0.01);Fib-4评分为1.36(0.92,2.05)、2.34(1.28,4.35)、3.86(3.03,8.99),差异有统计学意义(χ2=48.943,P<0.01).年龄 、γ-GT、AST与肝纤维化呈正相关(r值分别为0.322、0.301、0.199,均P<0.05);血小板与肝纤维化呈负相关(r=-0.455,P<0.05);ALT与肝纤维化无明显相关(r=0.111,P=0.073).GPRI、APRI、Fib-4等3种血清学诊断模型与肝纤维化均呈正相关(r值分别为0.625、0.417、0.399,均P<0.05).GPRI诊断显著肝纤维化 、进展期肝纤维化及肝硬化的受试者工作特征曲线下面积分别为0.818、0.864、0.837;APRI为0.694、0.766、0.722;Fib-4为0.696、0.770、0.724.GPRI诊断各阶段肝纤维化的低截断值分别为0.99、1.04、1.06,其诊断的敏感度 、特异度及阳性预测值(positive predictive value,PPV)、阴性预测值(negative predictive value,NPV)均高于APRI及Fib-4;GPRI诊断各阶段肝纤维化的高截断值分别为2.49、3.69、6.77,诊断的敏感度 、特异性度及PPV、NPV均高于APRI及Fib-4.结论 GPRI对CHB肝纤维化的诊断价值高于APRI及Fib-4.

目的 探讨G蛋白偶联受体48(GPR48)基因在膀胱癌组织中的表达及意义.方法 取83例膀胱癌患者手术切除的癌组织标本和癌旁正常组织标本(均经病理检查证实),采用实时荧光定量PCR法检测GPR48 mR-NA相对表达量,采用免疫组化法检测GPR48蛋白.分析GPR48 mRNA表达与患者临床病理参数的关系.采用Kaplan-Meier生存曲线法和Log-Rank检验比较GPR48高表达(癌组织GPR48蛋白染色强度大于对应的癌旁正常组织)和低表达(癌组织 GPR48蛋白染色强度小于对应的癌旁正常组织),者术后5年总生存率及生存时间.结果 癌组织、癌旁组织GPR48 mRNA相对表达量分别为4.68 ±2.24、1.12 ±0.31,P<0.05.GPR48 mRNA相对表达量与膀胱癌患者的年龄、淋巴结转移、远处转移和临床分期有关(P均<0.05),与患者性别、肿瘤直径和分化程度无关(P均>0.05).GPR48高表达者(71例)癌组织GPR48蛋白染色强度大于对应的癌旁组织,GPR48低表达者(12例)癌组织GPR48蛋白染色强度小于对应的癌组织;GPR48低、高表达者术后5年总生存率分别为91.67%、57.75%,生存时间分别为(56.00 ±3.83)、(47.97 ±2.07)个月,P均<0.05.结论 GPR48在膀胱癌组织中呈高表达.膀胱癌组织GPR48 mRNA表达情况有助于判断患者病情及预后预后.

目的:通过观察左归丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞GPR48、BMP6、ATF4的表达影响,研究左归丸治疗骨质疏松症的疗效机制,从而证明中医“肾藏精”理论的科学性.方法:将40只SPF级雌性大鼠按照正常组、左归丸组、诱导液组、阳性药物组骨疏康组、福善美组进行随机分组,并灌胃5d,5d后制备合药血清.运用现代医学实验技术观察左归丸含药血清对骨髓间充质干细胞的影响.结果:通过将左归丸组与正常组和阳性药物组及诱导液组的对比,可以看到该组的蛋白表达水平明显上升.结论:①骨质疏松症的发生与G蛋白偶联受体GPR48密切相关;②中药左归丸极有可能通过G蛋白偶联受体GPR48信号通路,来促使骨髓间充质干细胞向骨细胞分化.

目的 观察电针对脑缺血再灌注大鼠不同时间点脑缺血区脑神经细胞凋亡及内质网应激凋亡通路信号分子葡萄糖调节蛋白(GPR78)和Caspase-12影响.方法 126只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,其中假手术组6只,模型组和电针组各60只.模型组和电针组再随机分为再灌注6、12、24、48、72 h组,每组12只,采用改良线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型.电针组电针百会和大椎,每次30 min,每12h治疗1次,假手术组和模型组大鼠捆绑固定30 min,不做任何治疗.假手术组于手术后24 h、各组大鼠于相应时间进行神经学分级评定后处死大鼠并提取脑组织,观察海马CA1区形态学改变.TUNEL法检测各组神经细胞凋亡指数,免疫组化法和Western blot检测脑组织GRP78、Caspase-12蛋白表达的变化.结果 模型组和电针组海马CA1出现不同程度细胞凋亡变形.与本组前一时间点比较,模型组及电针组再灌注12、24、48、72 h神经功能评分降低(P ＜0.05,P＜0.01),再灌注12、24 h神经细胞凋亡指数、Caspase-12阳性细胞数、Caspase-12蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01),再灌注48、72 h神经细胞凋亡指数、Caspase-12阳性细胞数及蛋白表达降低(P ＜0.05,P＜0.01),再灌注12 h GRP78阳性细胞数、GRP78蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01),再灌注24、48、72 h GRP78阳性细胞数及蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01).与模型组同期比较,电针组再灌注12、24、48、72 h神经学评分、Caspase-12阳性细胞数降低(P＜ 0.05,P＜0.01);电针组各时间点神经细胞凋亡指数、GRP78阳性细胞数及蛋白表达、Caspase-12蛋白表达降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论 缺血再灌注24 h为神经元凋亡高峰,Caspase-12的免疫活性出现的时间晚于GRP78.电针可能通过抑制GRP78、Caspase-12的释放和激活减轻脑缺血再灌注后不同时间所致缺血脑神经细胞凋亡.

G蛋白偶联受体48(GPR48)作为一富含亮氨酸重复序列的膜上七次跨膜受体,其LRR结构域与R-spondin1或Norrin结合形成复合体后可作用于下游关键因子可调控骨质疏松、阿尔茨海默病、高血压等疾病发生.骨作为重要的生理学和生物力学组织,由成骨细胞(OB)和破骨细胞(OC)分别主导的骨形成和骨吸收之间的拮抗及协同调控骨组织代谢平衡.骨细胞是力学刺激敏感细胞,调节应力加载后的骨适应性反应,而运动训练对骨产生的力学刺激可翻译成结构级联性生化反应(Wnt、cAMP/PKA/Atf4、OPG/RANKL/RANK等途径稳态表达),调控骨形成和/或骨吸收.并且,GPR48通过R-spondin1可直接调控以上信号途径的激活状态.那么,GPR48能否通过下游级联信号途径从而在运动影响骨代谢中起分子介导作用呢？探究GPR48在运动影响骨代谢中的作用及其分子介导机制,希望能进一步完善运动影响骨代谢的分子机制信号网络并为骨疾病诊治提供新靶点和非药物干预方式.

目的 初步探讨不同浓度盐酸左西替利嗪对体外培养人毛乳头细胞(hDPC)生长的影响及机制.方法 将hDPC在含1、10、100、1 000、10 000 μg/L盐酸左西替利嗪的DMEM培养液中培养48 h,免疫荧光染色观察细胞的生长情况,MTT法检测细胞增殖活力,实时荧光定量PCR法检测环氧化酶2(COX-2)、前列腺素D2合酶(PTGDS)、前列腺素E2(PGE2)、前列腺素F2α(PGF2α)、G蛋白偶联受体44(GPR44)、蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的mRNA表达水平;Western印迹法检测PTGDS蛋白水平.hDPC在含以上浓度盐酸左西替利嗪的DMEM培养液中培养24 h,酶联免疫吸附试验检测培养上清液中前列腺素D2(PGD2)和PGD2受体(PGD2R)的水平.以不加药物同等条件培养的hDPC为对照组.采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析,组间两两比较使用LSD-t检验.结果 免疫荧光染色显示,100 μg/L组细胞生长良好,融合度超过90％.MTT法显示,不同浓度盐酸左西替利嗪组与对照组hDPC的增殖率差异有统计学意义(F=42.22,P＜0.05),100 μg/L组增殖率(115.80％±5.10％)高于对照组(100％,t=28.26,P＜0.05).不同浓度盐酸左西替利嗪组的COX-2、PGF2a、PTGDS、GPR44、AKTmRNA相对表达水平(以对照组表达为1)差异均有统计学意义(F值分别为1.97、3.66、2.17、2.66、7.32,P＜0.05),PGE2、GSK3β表达差异无统计学意义(F值分别为0.87、1.19,P＞0.05);100 μg/L组COX-2、PTGDS、GPR44 mRNA表达(0.84±0.08、0.81±0.10、0.85±0.09)低于对照组(t值分别为1.97、2.17、2.66,均P＜0.05),PGF2α、AKT的表达(1.96±0.25、1.74±0.32)高于对照组(t值分别为3.66、7.32,均P＜0.05).不同浓度盐酸左西替利嗪组PTGDS、PGD2、PGD2R水平差异均有统计学意义(P＜0.05),100 μg/L组PTGDS、PGD2、PGD2R蛋白水平均低于对照组(P＜o.05).结论 盐酸左西替利嗪可能通过抑制PGD2-GPR44通路,激活AKT信号通路,促进体外培养人毛乳头细胞的生长.