目的:探讨木香烃内酯对慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/ADR多柔比星敏感性的影响及其机制。方法:取对数生长期K562/ADR细胞，分别以不同浓度木香烃内酯、多柔比星以及两药联合作用72 h，CCK-8法检测细胞增殖情况，计算细胞增殖率，获得两药半数抑制浓度（IC 50）。以10 μmol/L木香烃内酯、10 μmol/L多柔比星及两药联合作用于K562/ADR细胞48 h，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测p38-MAPK通路相关蛋白的表达水平。 结果:木香烃内酯与多柔比星联用组细胞增殖率均低于相应浓度两药单用组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。多柔比星对K562/ADR细胞的IC 50为（13.50±0.86）μmol/L，木香烃内酯为（7.30±0.55）μmol/L，差异有统计学意义（ t=7.044， P=0.002）。流式细胞术检测结果显示，10 μmol/L木香烃内酯和10 μmol/L多柔比星联用组K562/ADR细胞凋亡率均高于空白对照组、木香烃内酯单用组以及多柔比星单用组[（19.68±3.21）%比（2.96±0.87）%、（9.34±2.89）%、（9.18±2.13）%]，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。与10 μmol/L木香烃内酯单用组和10 μmol/L多柔比星单用组相比，两药联用组凋亡抑制蛋白bcl-2表达下调，bad、p-p38、cleaved-caspase-3及cleaved-PARP蛋白的表达水平上调。 结论:木香烃内酯可增强多柔比星对慢性粒细胞白血病K562/ADR细胞增殖的抑制作用，促进多柔比星诱导细胞凋亡，其可能通过调控p38-MAPK通路逆转K562/ADR细胞的耐药性。

目的:研究木犀草素(luteolin,Lut)对人耐多柔比星(adriamycin,ADR)慢性髓系 白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)细胞K562/ADR增殖及铁死亡的影响,并探讨可能的作用机制.方法:用不同浓度的ADR处理K562细胞和K562/ADR细胞,采用CCK-8法检测K562细胞和K562/ADR细胞对ADR的敏感性;采用CCK-8法检测不同浓度Lut对K562/ADR细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)筛选出后续实验的药物浓度.不同浓度的Lut处理后,在倒置光学显微镜下观察细胞形态的变化;CCK-8法检测Lut对ADR的增敏作用,FCM法检测Lut对K562/ADR细胞凋亡的影响;随后再用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧(reactive oxygen specie,ROS)的含量,谷胱甘肽(glutathione,GSH)试剂盒检测各组细胞内GSH的含量;Fe2+比色法检测各组细胞内Fe2+的含量,蛋白质印迹法检测各组细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、核因子 E2 相关因子 2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和血红素加氧-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白的表达量.CCK-8法检测铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)干预后Lut对K562/ADR细胞增殖、ROS含量、GSH含量、Fe2+含量及GPX4表达量的影响.结果:与Lut(0pmol/L)组相比,Lut可显著抑制K562/ADR细胞增殖(P＜0.001),提高K562/ADR细胞对ADR的敏感性(P＜0.05);Lut可明显提高K562/ADR细胞的凋亡率(P＜0.001)以及细胞中ROS的含量(P＜0.05),同时降低K562/ADR细胞内GSH并提高Fe2+的含量(P＜0.001和P＜0.01);与 Lut(0 μmol/L)组相比,细胞内 GPX4、Nrf2 和 HO-1蛋白的表达量随Lut浓度的升高而降低(P均＜0.05);与Lut单药组相比,Fer-1干预后可部分逆转Lut对K562/ADR细胞增殖的抑制作用(P＜0.05),K562/ADR细胞内ROS的含量降低(P＜0.001),GSH的水平升高(P＜0.001),Fe2+的含量降低(P＜0.001),GPX4蛋白的表达水平显著升高(P＜0.01).结论:Lut可通过铁死亡途径抑制K562/ADR细胞增殖,提高对ADR的敏感性,其机制可能与Nrf2/HO-1信号通路有关,这将为Lut通过铁死亡方式治疗白血病提供实验依据.

目的:探寻IGF2BP3基因表达水平与急性髓系白血病(AML)患者预后的关系.方法:通过对本中心27例AML患者骨髓原代白血病细胞进行转录组高通量测序,分析IGF2BP3基因表达水平与患者临床特征之间的关系,并在初治AML患者及难治AML(Refractory AML)患者样本中验证.分析20例健康对照者和26例AML患者中IGF2BP3基因表达水平的差异.采用RT-qPCR、Western blot检测两种蒽环类耐药细胞系(HL60/ADR、K562/ADR)中IGF2BP3表达水平,比较其与敏感细胞(HL60、K562)的表达差异.通过3个数据集,分析IGF2BP3在AML患者中的表达水平及与预后的关系,进一步使用Cox生存分析IGF2BP3在AML中的预后价值.结果:在本中心27例AML患者骨髓原代白血病细胞中,难治性AML患者的IGF2BP3表达量明显高于化疗敏感的患者(P=0.0343),白血病细胞髓外浸润(extramedullary infiltration,EMI)患者的IGF2BP3表达量明显高于无髓外浸润的AML患者(P=0.0049).与健康人比较,IGF2BP3在AML患者中表达增加(P=0.0009).蒽环类耐药细胞系(HL60/ADR、K562/ADR)中 IGF2BP3 mRNA 的表达显著高于敏感细胞系(K562/ADR vs K562,P=0.0430;HL60/ADR vs HL60,P=0.7369).Western blot结果显示,耐药细胞中IGF2BP3蛋白表达显著高于敏感细胞(P＜0.001).qPCR结果显示,难治AML患者中IGF2BP3的mRNA表达水平明显高于化疗敏感患者(P=0.002).在3个大样本AML患者队列中IGF2BP3高表达预示AML预后不良(P＜0.05).单因素和多因素预后分析证实IGF2BP3高表达与患者较短的无事件生存(HR=1.887,P=0.024)和总体生存(HR=1.619,P=0.016)显著相关.结论:IGF2BP3基因高表达可能是AML预后不良的重要因素,提示IGF2BP3基因有望成为AML的临床预后评估和提供治疗策略的新的分子标志物.

目的 探究木犀草素(Lut)对慢性髓系白血病K562/ADR细胞多药耐药性的逆转作用及其机制.方法K562和K562/ADR细胞经不同浓度阿霉素(ADR)处理24h后,采用CCK-8实验检测K562/ADR细胞耐药倍数.Lut单独或联合ADR作用K562/ADR细胞24h后,采用CCK-8实验检测Lut的细胞毒性及对ADR的增敏作用.取对数生长期K562/ADR细胞分为0μmol/L Lut组、2μmol/L Lut组、4μmol/L Lut组,采用流式细胞术检测细胞内ADR蓄积量的变化;RT-PCR法和Western blot法分别检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶pi(GST-pi)mRNA和蛋白的表达;谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测细胞内GSH的含量.结果 与K562细胞相比,K562/ADR细胞株对ADR具有明显的耐药性,耐药倍数为53.69倍.与0μmol/L Lut相比,不同浓度Lut作用于K562/ADR细胞后,细胞生长均受到不同程度的抑制(P＜0.05),其中2、4μmol/L Lut对K562/ADR细胞的增殖抑制率＜10%,为无毒性的Lut浓度.与0μmol/L Lut组相比,2、4μmol/L Lut组可明显增强ADR对K562/ADR的细胞增殖抑制率,增加细胞内ADR蓄积量,提高逆转耐药倍数,降低细胞内GSH含量,下调细胞中MRP1、P-gp、GST-pi、Nrf2 mRNA及蛋白的表达(P＜0.05);且4μmol/L Lut作用效果较2μmol/L Lut更显著.结论Lut可抑制K562/ADR细胞增殖,逆转其对ADR的耐药性,其机制可能与Lut下调Nrf2、MRP1、P-gp、GST-pi表达,进而增加细胞内ADR蓄积量有关.

目的:探讨舒尼替尼(SU11248)对耐药白血病细胞K562/ADR死亡的诱导作用及其相关信号通路.方法:使用不同浓度舒尼替尼干预K562/ADR细胞,分别于24、48、72、96 h收集各组细胞,采用MTS法检测舒尼替尼对K562/ADR细胞增殖能力的影响,确定适当的舒尼替尼干预时间和浓度.通过qPCR和Western blot检测舒尼替尼干预后K562/ADR细胞的凋亡相关基因mRNA和蛋白表达水平变化.使用4种不同细胞死亡抑制剂Nec-1、VX-765、CQ、Fer-1检测舒尼替尼干预后K562/ADR细胞的死亡方式.通过qPCR和 Western blot检测舒尼替尼干预后K562/ADR细胞的焦亡相关基因mRNA和蛋白表达水平变化.结果:舒尼替尼可明显抑制K562/ADR细胞的增殖,抑制效果呈一定的时间及浓度依赖性(r48h=0.9579、r4μg/ml=0.9740),其48 h的IC50为(3.96±0.14)μg/ml;舒尼替尼干预后K562/ADR细胞凋亡相关基因Bax、BCL-2、Caspase-3、Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平均无明显变化;4种不同细胞死亡抑制剂处理后,仅焦亡抑制剂VX-765能够明显逆转舒尼替尼对K562/ADR细胞的增殖抑制作用(P＜0.01);舒尼替尼干预后 K562/ADR 细胞焦亡相关基因 Caspase-1、Caspase-4、Caspase-5、NLRP3、GSDMD、IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P＜0.01).结论:舒尼替尼可诱导耐药白血病细胞K562/ADR发生焦亡,深入研究细胞焦亡相关信号通路有望为耐药白血病治疗提供实验依据.

目的:研究中药龙葵碱对白血病耐药细胞株K562/ADR多药耐药性的影响,并进一步探讨其作用机制.方法:不同质量浓度(5～40 μg/mL)的龙葵碱单独或联合多柔比星(doxorubicin,DOX)作用K562/ADR细胞24 h后,采用CCK-8法检测龙葵碱的细胞毒性及对DOX的增敏作用;FCM法检测细胞内DOX平均荧光强度的变化;蛋白质印迹法检测多药耐药相关蛋白1 (multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)和磷酸化JNK (phosphorylated JNK,p-JNK)的表达变化.结果:无毒剂量(5和10 μg/mL)的龙葵碱可明显增强DOX对K562/ADR细胞的毒性(P值均＜0.05),而且明显提高细胞内DOX的平均荧光强度(P值均＜ 0.05),且呈一定的剂量依赖性.经5和10 μg/mL的龙葵碱处理后,K562/ADR细胞中MRP1和p-JNK蛋白的表达水平均明显下调(P值均＜0.05).结论:龙葵碱在体外可有效逆转K562/ADR细胞的多药耐药性,其机制可能与阻滞JNK信号通路并下调MRP1表达有关.

[目的]研究布托啡诺在临床使用剂量范围内通过抑制ABCB1的转运功能增加白血病耐药细胞的化疗药物敏感性.[方法]采用HL60及其ABCB1过表达的耐药细胞株HL60/VCR、K562及其ABCB1过表达的耐药细胞株K562/ADR均在培养环境中加入含胎牛血清的DMEM或RPMI-1640的培养液中进行培养.采用MTT法检测布托啡诺的细胞毒性,通过流式细胞仪检测阿霉素(DOX)在HL60/VCR细胞内的累积程度;加入布托啡诺培养72 h后用免疫荧光观察ABCB1在细胞膜表面的形态和分布变化以及采用Western Blotting检测ABCB1的表达水平.[结果]布托啡诺能将K562/ADR细胞的阿霉素的抵抗倍数由48.1倍下降到9.6倍,长春新碱(VCR)的抵抗倍数由108.4倍下降到20.7倍,HL60/VCR的DOX的抵抗倍数由37.8倍下降到7.6倍,长春新碱抵抗倍数由23.4下降到4.8倍,差异均有统计学意义.ABCB1的表达水平及其在细胞膜上的定位没有变化.[结论]布托啡诺明显降低阿霉素和长春新碱在ABCB1过表达的白血病耐药细胞株中的IC50,有效增加阿霉素在HL60/VCR细胞内的累积水平.布托啡诺不改变HL60/VCR和K562/ADR细胞ABCB1的表达水平和ABCB1在细胞膜表面的形态和定位.

目的 探讨千金藤素协同多柔比星逆转K562/ADR细胞耐药的分子机制.方法 MTT法测定K562、K562/ADR细胞存活率;Western blot检测多药耐药蛋白Mdr-1、凋亡相关蛋白以及线粒体分裂关键蛋白Drp1和p-Drp1(Ser637)、线粒体外膜蛋白Tom20蛋白的表达:流式细胞仪检测K562/ADR细胞凋亡以及ROS生成量;免疫共沉淀技术检测Drp1、Tom20蛋白之间特异性结合.结果 梯度浓度多柔比星均会降低K562、K562/ADR细胞存活率,两者的IC50值分别为(0.75±0.11)、(75.97±2.17) μmol/L,差异有统计学意义(P＜0.01).K562细胞中检测不到多药耐药蛋白,而在K562/ADR细胞中Mdr-1高表达.千金藤素与多柔比星协同作用于K562/ADR细胞,导致K562/ADR存活率明显降低并呈较好的量效关系,协同系数均小于1,K562/ADR细胞凋亡率显著增加(P＜0.01).千金藤素与多柔比星协同作用于K562/ADR细胞导致ROS生成量显著升高,Drp1线粒体转位增加.抑制ROS则可阻断两种药物协同作用引起的Drp1线粒体转位,降低K562/ADR细胞凋亡率(P＜0.01).结论 千金藤素协同多柔比星诱导ROS生成促进Drp1线粒体转位,导致线粒体过度分裂和细胞凋亡,最终逆转K562/ADR耐药.

目的 探讨维生素D对白血病耐药细胞株Jurcat/ADR,K562/ADR的耐药逆转作用及其逆转作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛择无毒浓度的维生素D,并行浓度依赖实验;流式细胞仪检测维生素D对细胞内柔红霉素水平和细胞表面P-糖蛋白(P-gp)表达水平的影响;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检测维生素D对细胞内mdr1 mRNA和mrp1 mRNA表达的影响;生物化学法检测维生素D对细胞内谷胱甘肽(GSH)水平的影响.结果 耐药逆转实验显示:维生素D可降低耐药细胞耐药倍数,存在剂量依赖关系;维生素D处理Jurcat/ADR、K562/ADR细胞48 h后,能增加细胞内化疗药物浓度,降低P-gp和mdr1、mrp1基因的表达;维生素D可降低K562、K562/ADR、Jurcat及Jurcat/ADR细胞内GSH的水平.结论 维生素D对白血病耐药细胞株Jurcat/ADR,K562/ADR均有耐药逆转作用,考虑与抑制细胞表面的P-gp功能和表达,降低mdr1、mrp1耐药基因的表达和降低细胞内GSH水平有关,维生素D通过影响上述机制,进而增加细胞内的药物浓度,达到有效杀灭肿瘤细胞的作用.

目的 观察芍药苷对慢性髓系白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)耐阿霉素(adriamycin,ADR)细胞株K562/ADR多药耐药性的逆转作用,并探讨其作用机制.方法 CCK-8法检测ADR对K562/ADR细胞和K562细胞的半抑制浓度(IC50),计算K562/ADR细胞对ADR的耐药倍数;CCK-8法检测芍药苷对K562/ADR细胞的细胞毒性,选择细胞增殖抑制率<10％的芍药苷浓度用于后续实验.将K562/ADR细胞分为A(分别加入0、4、8、16、32μg/mL的ADR)、B(分别加入0、4、8、16、32μg/mL的ADR及2μmol/L的芍药苷)、C(分别加入0、4、8、16、32μg/mL的ADR及4μmol/L的芍药苷)三组,CCK-8法检测三组ADR对K562/ADR细胞的IC50,计算其耐药逆转倍数.将K562/ADR细胞分为a(加入3μg/mL的ADR)、b(加入2μmol/L的芍药苷及3μg/mL的ADR)、c(加入4μmol/L的芍药苷及3μg/mL的ADR)三组,流式细胞仪检测三组K562/ADR细胞内ADR浓度,Western blotting法检测三组K562/ADR细胞中多药耐药相关蛋白MRP1、MAPK信号通路蛋白p38和磷酸化p38(p-p38).结果 ADR对K562/ADR细胞、K562细胞的IC50分别为(48.37±2.10)、(1.47±0.36)μg/mL,K562/ADR细胞对ADR的耐药倍数为32.91倍.芍药苷在K562/ADR细胞内的无毒剂量为2、4μmol/L.A、B、C组ADR对K562/ADR细胞的IC50分别为(29.97±1.72)、(20.03±0.75)、(13.78±0.63)μg/mL,两两相比,P均<0.05;B、C组ADR的耐药逆转倍数分别为1.51、2.17倍.a、b、c组ADR荧光强度分别为320±14、676±62、883±28,两两相比,P均<0.05.a、b、c组K562/ADR细胞中MRP1蛋白的相对表达量分别为87.69％ ±1.54％、80.95％ ±4.10％、67.72％ ±5.98％,两两相比,P均<0.05;p-p38蛋白的相对表达量分别为72.43％ ±2.67％、63.18％ ±2.32％、52.23％ ±6.02％,两两相比,P均<0.05.结论 芍药苷能逆转K562/ADR细胞对ADR的耐药性,其逆转作用与抑制细胞P38 MAPK信号通路及下调MRP1蛋白表达有关.