目的:建立乳腺癌原代细胞成瘤模型，探讨体内转染干扰中电导钙激动钾离子通道(KCa3.1)的表达在乳腺癌增殖、肿瘤新生血管中的效应。方法:收集随机选取的23例2018年至2019年于安徽医科大学第一附属医院乳腺外科手术切除的乳腺浸润性癌新鲜组织标本，分离并体外培养人乳腺癌原代细胞，建立22例裸鼠乳腺癌原代细胞成瘤模型；合成胆固醇修饰小干扰RNA(siRNA)并鉴定其转染效率，将成瘤裸鼠随机分为实验组(11例，siRNA干扰)及对照组(11例，阴性对照)，检测体内转染Chol-siRNA干扰KCa3.1对乳腺癌成瘤组织增殖及血管生成的影响。应用SPSS 18.0统计软件分析，组间采用 χ2检验及 t检验。 结果:预先设计的siRNA1与siRNA2均可对乳腺癌原代细胞中KCa3.1产生有效干扰，蛋白质印迹法(Western blot)检测其干扰效率为(71.03±9.97)%及(65.81±9.18)%( t＝21.034、20.883， P<0.05)，差异有统计学意义；成功建立22例乳腺癌原代细胞BALB/c裸鼠成瘤模型，成瘤率为70.96%；成瘤组织行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测KCNN4干扰效率，Chol-siRNA组中KCNN4 mRNA表达水平显著低于对照组( t＝6.541， P<0.05)，差异有统计学意义；免疫组织化学检测成瘤组织肿瘤细胞因子的表达，对照组中VEGF的阳性表达率为(43.42±7.89)%，siRNA组中的阳性表达率为(13.19±4.32)%( t＝11.146， P<0.05)，差异有统计学意义；对照组中CD31的阳性表达率为(17.49±4.15)%，siRNA组中的阳性表达率为(9.28±5.86)%( P<0.05)，差异有统计学意义；对照组中细胞核增殖抗原(Ki-67)的阳性表达率为(88.77±7.61)%，siRNA组中的阳性表达率为(58.17±9.62)%( t＝8.274， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:KCa3.1参与调控乳腺癌细胞的增殖及肿瘤血管生成，成功在体内成瘤模型中验证了干预KCa3.1对肿瘤形成的抑制作用。

目的:探讨百草枯（PQ）染毒肺泡上皮细胞内KCa3.1对NLRP3炎症小体的调控作用。方法:体外培养A549细胞，分为对照组、TRAM-34（KCa3.1的特异性抑制剂）组、PQ组及PQ+TRAM-34组。免疫荧光检测细胞中KCa3.1的变化。Western Blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白及NIMA相关激酶7（NEK7）蛋白的表达。细胞钾离子浓度变化比色法定量检测试剂盒检测钾离子的变化。结果:免疫荧光结果提示A549细胞染毒后，KCa3.1表达明显增加。Western Blot结果提示PQ处理后，A549细胞内NLRP3炎症小体（相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1）及NEK7蛋白表达明显升高；抑制KCa3.1后，NLRP3炎症小体及NEK7表达减少；且差异具有统计学意义[NLRP3蛋白（NLRP3/β-actin，对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组）：[(0.02±0.00) vs (0.03±0.00) vs （0.74±0.00） vs （0.32±0.01）]；ASC蛋白（ASC/ β-actin，对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组）: [（0.12±0.01） vs（0.11±0.03） vs（0.46±0.02） vs（0.17±0.03）]；Caspase-1蛋白（Caspase-1/ β-actin，对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组）:[(0.05±0.00) vs 0.04±0.00) vs （0.34±0.03） vs（0.15±0.01）];NEK7蛋白（NEK7/ β-actin，对照组比染毒组比染毒+抑制剂组）：[(0.38±0.03) vs （0.83±0.02) vs (0.51±0.01)，均 P<0.01]。比色法检测结果提示PQ处理后细胞内钾离子明显下降，抑制KCa3.1后细胞内钾离子下降明显减少；且差异有统计学意义（对照组比染毒组比染毒+抑制剂组：[(1.00±0.00) vs （0.60±0.05） vs（0.86±0.02），均 P<0.01]。 结论:PQ中毒后，可能激活KCa3.1促使细胞内钾离子外流，上调NEK7表达，从而激活NLRP3炎症小体，促进肺纤维化的发生。

目的 探究心脏自主神经节(GP)中电导钙激活钾通道(KCa3.1)介导巨噬细胞极化在心房颤动发生中的作用.方法 本研究于2023年在武汉大学心血管病研究所中开展.18只比格犬按随机数字表法分为对照组(n=6)、快速心房起搏(RAP)组(n=6)和TRAM-34组(Kca3.1阻断剂),分别在TRAM-34组和其他组犬的GP中局部注射TRAM-34(0.3 ml,15mmol/L)和生理盐水.之后,所有组监测右前GP(ARGP)神经活性及心房在体电生理.最终取材后检测ARGP组织中炎性因子水平及巨噬细胞极化情况.结果 TRAM-34注射后对非起搏犬心房电生理及ARGP活性无明显影响.RAP明显缩短了心房各部位的有效不应期(ERP),增加了心房颤动易损性和ARGP神经活性,而TRAM-34局部注射有效抑制了这些变化.RAP组和TRAM-34组ARGP组织中CD68+细胞、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平均高于对照组.此外,起搏组ARGP组织中CD68+细胞、iNOS和炎性细胞因子水平高于TRAM-34组.结论 心房快速起搏时,阻断KCa3.1可抑制GP活性,降低心房颤动易损性,该作用可能与抑制局部巨噬细胞参与GP的炎症反应有关.

目的:测定大鼠心肌组织KCa3.1蛋白、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)蛋白,探讨槲皮素对缺氧性肺动脉高压(PAH)右心衰竭的保护作用.方法:选取清洁级雄性SD大鼠40只,分为正常对照组(Control组)、正常槲皮素组(CQ组)、缺氧组(H组)、缺氧槲皮素组(HQ组),每组10只.模型制备成功后,HE染色观察大鼠心肌纤维化情况;麦胚凝集素观察大鼠心肌细胞肥大水平;ELISA检测大鼠血清KCa3.1蛋白表达;Western blotting测定大鼠心肌组织KCa3.1蛋白、NLRP3蛋白表达;超声评估大鼠右心游离壁厚度;计算大鼠右心肥厚指数.结果:槲皮素可以降低PAH大鼠右心室肥厚指数,减轻右心室纤维化,并缓解右心室心肌细胞肥大(P＜0.01);Western blotting和ELISA结果显示槲皮素干预可以明显降低心肌KCa3.1和NLRP3的蛋白表达(P＜0.01).结论:槲皮素对缺氧性PAH造成的右心衰竭有保护作用,可能与其抑制大鼠心肌KCa3.1与NLRP3表达有关.

以肿瘤微环境中缺少免疫细胞浸润为特征的"冷肿瘤"通常对免疫治疗的响应性低,探究"冷肿瘤"形成的原因并进行干预,从而将其变成"热肿瘤"是提高免疫治疗疗效的重要策略.作为腺苷三磷酸的水解产物,腺苷在肿瘤微环境中的浓度显著高于正常组织,对肿瘤获得性免疫具有抑制作用.肿瘤细胞、树突状细胞、巨噬细胞及T淋巴细胞的表面有丰富的腺苷受体,腺苷与受体结合后可以启动下游信号通路来抑制肿瘤的抗原提呈和免疫细胞活化,从而抑制肿瘤的获得性免疫.腺苷可下调树突状细胞和巨噬细胞上主要组织相容性复合体Ⅱ和共刺激因子的表达,从而抑制抗原向T淋巴细胞的提呈.腺苷抑制T淋巴细胞上T细胞受体与配体结合和跨膜信号传导,同时能抑制抗肿瘤细胞因子分泌从而抑制T淋巴细胞的激活.腺苷也通过抑制趋化因子的分泌和KCa3.1通道从而抑制效应T淋巴细胞运输至肿瘤部位并浸润.此外,腺苷通过促进免疫抑制性细胞因子的分泌、增加免疫检查点蛋白表达、提高免疫抑制性细胞的活性等途径遏制细胞毒性T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用.鉴于腺苷对肿瘤获得性免疫的抑制作用,目前已有多种抑制腺苷生成或阻断腺苷受体的抑制剂正处于临床前或临床研发阶段,旨在增强其他免疫疗法的效果.本文总结分析腺苷对肿瘤获得性免疫的抑制作用及分子机制,并对抑制腺苷途径在抗肿瘤免疫中的最新应用进展进行综述.

目的:探讨依普利酮(EPL)对慢性心力衰竭(CHF)患者CD4+T淋巴细胞Kv1.3等通道的mRNA及蛋白质表达的影响.方法:收集慢性心衰Ⅱ、Ⅲ期的患者及正常人全血样本(30例vs 20例).免疫磁珠分选外周血CD4+T淋巴细胞,利用流式细胞仪检测其纯度,CCK-8法检测不同浓度的EPL对CD4+T淋巴细胞增殖的影响.共分为3组,Control组、CHF组及CHF+ EPL组.RT-qPCR检测各组培养体系中的Kv1.3、KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达;In-cell Western blot技术检测CD4+T淋巴细胞膜上Kv1.3通道蛋白质的表达.结果:EPL的最佳抑制浓度为30 μmol/L;CHF组Kv1.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别是Control组的10.74倍和1.20倍(P＜0.01),CHF+ EPL组Kv1.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别比CHF组降低了64.80％和39.62％ (P＜0.01);CHF组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达分别是Control组的4.73倍和3.77倍(P＜0.01),CHF+ EPL组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达比CHF组分别降低了19.30％和37.14％(P＜0.01).结论:CD4+T淋巴细胞的三种离子通道的mRNA和/或蛋白质在慢性心力衰竭情况下均有高表达,依普利酮均能明显下调三种离子通道的mRNA和/或蛋白质,其中Kv1.3通道的变化尤为突出,推测醛固酮受体拮抗剂可能通过抑制CD4+T淋巴细胞膜上的Kv1.3通道的激活,减少T淋巴细胞的活化/增殖,最终抑制CHF过程中炎症作用的发生发展而对心衰有利.

目的:研究KCa3.1在糖氧剥夺诱导的原代星形胶质细胞内质网应激(ERS)中的调控作用.方法:通过构建原代星形胶质细胞糖氧剥夺(OGD)模型,应用cck-8法、免疫荧光技术、western blotting等分子生物学技术研究KCa3.1在OGD引起的原代星形胶质细胞内质网应激中的作用.结果:OGD4h处理后星形胶质细胞内KCa3.1的表达明显上调.OGD处理后星形胶质细胞的细胞活力显著性降低,且具有时间依赖性.给予KCa3.1通道抑制剂TRAM-34可提高OGD 4 h处理后星形胶质细胞的细胞活力,并具有剂量依赖性.OGD处理0.5 h、1h、3h、4h、6h后,原代星形胶质细胞内ERS信号通路被激活,GRP78、p-eIF-2α的表达显著性上调.给予KCa3.1通道抑制剂TRAM-34后,OGD引起的星形胶质细胞内GRP78、p-eIF-2α的上调幅度显著性降低.结论:KCa3.1通道参与了星形胶质细胞内OGD引起的内质网应激通路的激活.

目的 探讨槲皮素(Que)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其与中电导钙激活钾通道(KCa3.1)的关系.方法 选取清洁级SD大鼠,采用组织块贴壁法培养大鼠VSMCs,将VSMCs分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+TRAM 34组、AngⅡ+不同浓度(20、40、80μmol/L)Que组、AngⅡ+TRAM 34+80μmol/L Que组,采用CCK-8法测定细胞增殖率,Western blotting法检测KCa3.1蛋白的表达量.结果 与正常对照组比较,AngⅡ组细胞增值率明显增加(P<0.05).与AngⅡ组比较,AngⅡ+TRAM 34组、AngⅡ+20、40、80μmol/L Que组细胞增殖率降低(P均<0.05).与AngⅡ+TRAM 34组相比,AngⅡ+TRAM 34+80μmol/L Que组细胞增殖率降低(P<0.05).与对照组比较,AngⅡ组KCa3.1通道蛋白表达增加(P<0.05).与AngⅡ组相比,AngⅡ+TRAM 34组、AngⅡ+20、40、80μmol/L Que组KCa3.1通道蛋白降低(P均<0.05).AngⅡ+TRAM 34+80μmol/L Que组与AngⅡ+TRAM 34组相比,KCa3.1表达未见明显异常(P>0.05).结论 Que可以抑制大鼠VSMCs的增殖,这种作用可能与抑制KCa3.1的表达有关.

目的 探讨溃疡性结肠炎(UC)血小板中钾通道和 NLRP3的表达,以及与UC临床特征的关联分析.方法 收集11例正常对照组和17例UC患者临床资料.提取血小板,采用 RT-PCR、Western blot 法检测 Kca3.1、Kvl. 3 及 NL-RP3的表达水平.结果 与正常对照组相比,UC患者血小板中Kca3. 1、Kvl.3及NLRP3 mRNA表达量均明显增加(t=-6.067、-4.991、-18.981,P<0.05),与 UC 严重程度无明显相关.UC患者血小板中Kca3. 1、Kvl. 3及NLRP3蛋白表达量均明显高于对照组,差异有统计学意义(t =-9. 627、-7. 39、-7. 821,P< 0. 05),与 UC 严重程度无明显相关.UC患者血小板中Kca3. 1与NLRP3蛋白表达水平明显相关(r =0. 877,P<0.05),Kvl.3与NLRP3蛋白表达水平有一定的相关性,但差异无统计学意义.UC患者血小板中Kca3.1、Kvl.3及NLRP3蛋白表达与患者临床指标红细胞沉降率、C反应蛋白及Mayo评分均不相关.结论 UC患者血小板中NLRP3与钾通道表达增高,两者具有一定相关.

Kca3.1通道是重要的钙激活钾离子通道,广泛分布于人体多种类型细胞(上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞、免疫细胞等)并参与调控细胞增殖、迁移、凋亡等细胞活动.目前研究发现Kca3.1通道与恶性肿瘤、气道重塑、血管缩窄、肾纤维化、贫血等多种疾病密切相关.本文通过对Kca3.1通道相关文献的复习,从生物学特征、电生理特点、作用机制(细胞增殖、迁移、分化、凋亡)等方面对Kca3.1通道进行综述,进一步阐述Kca3.1通道参与调控多个系统疾病的发生发展,为之后进一步研究提供参考.