目的:观察保肾通络方对糖尿病肾病(DN)小鼠肾小管间质纤维化及上皮细胞间充质转分化(EMT)的影响.方法:选用KK-Ay小鼠作为DN模型小鼠,随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,正常对照组小鼠选用C57 BL/6J 小鼠.保肾通络方组小鼠给予保肾通络方灌胃治疗,缬沙坦组小鼠给予缬沙坦灌胃治疗,模型组、正常对照组小鼠给予剂量相同的蒸馏水灌胃治疗;灌胃给药 12 周后检测各组血清肌酐、尿素氮水平,HE、PAS、Masson染色观察肾组织病理改变,同时进行细胞外基质蛋白Collagen Ⅰ、FN及肾小管 EMT标志蛋白α-SMA、E-cadherin表达检测.结果:模型组小鼠血清肌酐、尿素氮水平较正常对照组明显升高(均P<0.05),保肾通络方组及缬沙坦组小鼠血清肌酐、尿素氮水平较模型组明显降低(均P<0.05).与正常对照组相比,模型组小鼠肾小管出现明显的间质纤维化及上皮细胞脱落、空泡变性,而保肾通络方组及缬沙坦组小鼠上述病理改变均明显减轻.模型组小鼠肾小管Collagen Ⅰ、FN蛋白及mRNA表达较正常对照组明显上调(均P<0.05),保肾通络方组及缬沙坦组小鼠肾小管Collagen Ⅰ、FN蛋白及 mRNA表达较模型组明显下调(均P<0.05).与正常对照组相比,模型组小鼠肾小管上皮细胞α-SMA蛋白及 mRNA表达明显上调,E-cadherin蛋白及 mRNA表达明显下调(均P<0.05);与模型组相比,保肾通络方组及缬沙坦组小鼠α-SMA 蛋白及 mRNA 表达明显下调,E-cadherin蛋白及 mRNA 表达明显上调(均P<0.05).结论:保肾通络方能够改善DN小鼠肾小管间质纤维化,减轻肾小管 EMT.

目的 观察黄芪多糖(APS)对KK-Ay小鼠肾组织血管内皮损伤的影响.方法 将C57BL/6J小鼠设为空白组,将KK-Ay小鼠通过喂养高脂高糖饲料建立糖尿病肾病模型,造模后随机分为模型组、对照组(25 mg·kg-1厄贝沙坦灌胃)和低、中、高实验剂量组(100、200、400 mg·kg-1APS灌胃),每日灌胃1次,连续4周.给药干预4周后,心脏取血.用免疫组织化学染色方法测定小鼠肾组织中内皮素-1(ET-1)、血管性血友病因子(vWF)的蛋白表达水平;用蛋白质印迹法分析小鼠肾组织中NT蛋白的表达水平;用实时荧光定量聚合酶链反应法检测小鼠肾组织中SUR亚基2B/内整流钾离子通道亚单位6.1(SUR2B/Kir6.1)mRNA的表达水平.结果 空白组、模型组、对照组和低、中、高剂量实验组小鼠的ET-1蛋白表达水平分别为0.25±0.05、0.43±0.02、0.28±0.06、0.39±0.01、0.34±0.03 和 0.30±0.02;vWF 蛋白表达水平分别为 0.24±0.04、0.35±0.02、0.26±0.03、0.34±0.03、0.30±0.03 和 0.28±0.02;NT 蛋白表达水平分别为 1.00±0.03、1.67±0.06、1.05±0.05、1.39±0.08、1.37±0.07 和1.14±0.05;SUR2B mRNA 表达水平 分别为 1.00±0.02、0.18±0.01、0.83±0.02、0.29±0.01、0.46±0.02 和 0.63±0.02;Kir6.1 mRNA 表达水平分别为 1.00±0.03、0.13±0.02、0.74±0.02、0.21±0.02、0.33±0.05 和0.51±0.02.对照组、高剂量实验组上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 黄芪多糖能够改善DN小鼠肾组织血管内皮损伤,保护微血管结构与功能,延缓DN病情进展.

目的 研究中药降糖复方水提取物(WEJTD)对自发性2型糖尿病(T2DM)模型KK-Ay小鼠骨骼肌糖代谢PI3K/Akt信号通路的影响.方法 将KK-Ay小鼠按随机数法随机分为5组:模型组、盐酸二甲双胍(MH,250 mg/kg)组和WEJTD低、中、高剂量(2、4、8 g/kg)组,C57BL/6J小鼠作为对照组,每天ig给药1次,共12周,对照组和模型组ig等体积蒸馏水.给药12周后,取小鼠血清,ELISA试剂盒法检测胰岛素水平;Trizol法提取肌肉组织中的RNA,荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测磷脂酰肌醇激酶-3(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)、糖原合成酶激酶-3β (GSK-3β)、糖原合成酶(GS)、胰岛素受体底物(IRS-1)mRNA水平.结果 与模型组比较,WEJTD高、中剂量显著上调小鼠血清胰岛素水平、骨骼肌中IRS-1 mRNA水平(P＜0.05、0.001);高、中、低剂量均显著下调骨骼肌中GSK-3β mRNA水平,显著上调PI3K、Akt、GLUT-4、GS mRNA水平(P＜0.05、0.01、0.001).结论 中药降糖复方通过上调PI3K/Akt信号通路,减少糖原沉积,刺激骨骼肌中葡萄糖转运.

目的 应用自发性2型糖尿病模型KK-Ay小鼠,研究中药降糖复方水提物(WEJTD)对糖尿病及其引起的糖尿病肾病(DN)的疗效及作用机制.方法 将KK-Ay小鼠按随机数法随机分为5组:模型组、盐酸二甲双胍(250 mg/kg)组和WEJTD低、中、高剂量(2、4、8 g/kg)组,C57BL/6J小鼠作为对照组,每天ig给药1次,共12周,对照组和模型组ig等体积蒸馏水.给药12周后,将小鼠放入代谢笼,检测摄食、饮水及尿量;内眦取血,ELISA法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;随后处死小鼠,取小鼠肾脏做苏木精-伊红(HE)及过碘酸六胺银(PASM)染色;取肾组织,采用蛋白免疫印迹(Western blotting)和实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测磷脂酰肌醇激酶-3 (PDK)、蛋白激酶B(Akt)、核因子-κB (NF-κB)、IL-6、ICAM-1、TNF-α等指标.结果 WEJTD显著减少KK-Ay小鼠摄食、饮水和尿量(P＜0.05、0.01、0.001);缓解小鼠肾脏的病理形态学变化,显著改善糖原沉积(P＜0.001);显著降低血清和肾脏组织中炎症因子IL-6、ICAM-1和TNF-α水平(P＜0.05、0.01、0.001);显著上调PDK和Akt的磷酸化水平(P＜0.05、0.01、0.001);抑制NF-κB磷酸化水平(P＜0.001).结论 WEJTD显著改善KK-Ay小鼠糖尿病症状、肾脏病理变化,可能与激活PI3K-Akt信号通路,进而抑制NF-κB磷酸化,降低体内炎症因子有关.

目的 基于肝肾同源理论,观察糖尿病肾病(kk-ay)小鼠后期谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶含量(aspartate transaminase,AST)变化以及芪水煎对肝、肾基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloe proteinas-9,MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响.方法 采用kk-ay小鼠高糖高脂饮食4周建立糖尿病肾病模型后,随机分为模型组、黄芪水组、通心络组,设立C57BL/6J小鼠作为对照组.予芪水煎及通心络干预12周后,监测各组小鼠血ALT、AST,采用Western Blot、Realtime-PCR检测肝、肾组织MMP-9和TIMP-1蛋白含量及mRNA表达水平.结果 与模型组比较,芪水煎组AST显著降低(P＜0.01)、ALT呈下降趋势(P＞0.05),肝MMP-9蛋白及mRNA表达显著升高(P＜0.01),TIMP-1蛋白显著降低(P＜0.01),mRNA表达降低(P＜0.05),肾MMP-9蛋白及mRNA表达升高(P＜0.05),TIMP-1蛋白及mRNA表达降低(P＜0.05).结论kk-ay小鼠后期会出现肝损伤,芪水煎对kk-ay小鼠肝、肾损伤具有一定的保护作用.

目的:研究石斛三七降糖散对KK-Ay小鼠的降糖降脂作用,为评价石斛三七降糖散治疗Ⅱ型糖尿病的作用提供参考.方法:将KK-Ay糖尿病小鼠根据随机血糖水平均分为模型组、石斛三七降糖散1.5、3、6g/kg/d剂量组、二甲双胍组(0.26g/kg/d),每组20只,雌雄各半;另设20只C57BL/6J小鼠作为正常组,每日给药2次,连续给药4周.每周观察记录摄食量、体重、随机血糖、空腹4h血糖等指标,给药4周后采血检测血脂、糖化血红蛋白水平和胰岛素敏感指数.结果:与模型组比较,给药2周、3周、4周,雌性KK-Ay小鼠石斛三七降糖散6g/kg剂量组随机血糖、空腹4h血糖、体重均显著降低,雌性KK-Ay小鼠石斛三七降糖散3g/kg剂量和雄性KK-Ay石斛三七降糖散6g/kg剂量组的随机血糖显著降低;给药2周时石斛三七降糖散6g/kg剂量组随机血糖降糖率最高,雌性为53.73％,雄性为41.71％;给药4周后,雌性和雄性KK-Ay小鼠石斛三七降糖散6g/kg剂量组总胆固醇(CHO)和甘油三酯(TG)显著低于模型组;雌性和雄性KK-Ay小鼠石斛三七降糖散6g/kg剂量组的胰岛素敏感指数(ISI)显著高于模型组.结论:石斛三七降糖散有改善Ⅱ型糖尿病KK-Ay小鼠高血糖、肥胖和脂质代谢紊乱的作用,对雌性KK-Ay小鼠的降糖效果优于雄性.

目的 观察糖肾清2号方对糖尿病肾病模型小鼠AMP激活蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响.方法 采用自发性2型糖尿病模型KK-Ay小鼠,予高脂饲料诱导3周诱导糖尿病肾病模型.造模成功的小鼠随机分为模型组,阳性药组,中药大、中、小剂量组,以C57BL/6J小鼠设为正常组,每组各6只.正常组及模型组予去离子水0.1 mL/(10 9·d),阳性药组予缬沙坦13.33 mg/(kg·d),中药大、中、小剂量组分别按照糖肾清2号方生药量40.66、20.33、10.17 g/(kg·d)剂量灌胃.各组小鼠每日灌胃1次,连续干预治疗12周后取血清及肾脏.采用RT-PCR技术检测肾脏组织AMPK-α1、NF-κB P65、TNF-α、IL-6mRNA转录水平.Western blot技术、免疫组化法测定肾脏组织AMPK-α1、NF-κB P65蛋白表达水平.ELISA法检测血清TNF-α、IL-6蛋白表达水平.结果 与正常组比较,模型组AMPK-α1 mRNA转录水平及蛋白表达水平明显下调(P＜0.01),NF-κB P65、IL-6、TN F-αmRNA转录水平及蛋白表达水平明显上调(P＜0.01).与模型组比较,中药大、中、小剂量组AMPK-α1 mRNA及蛋白表达均有上调(P ＜0.05,P＜0.01),NF-κB P65、IL-6、TNF-αmRNA及蛋白表达水平均明显下调(P ＜0.05,P＜0.01).与阳性药组比较,中药各组AMPK-α1 m RNA转录水平及蛋白表达水平明显下调(P＜0.01),NF-κB P65、TNF-α、IL-6 mRNA水平均明显上调(P＜0.01),NF-κB P65、IL-6蛋白表达水平均明显上调(P ＜0.05,P＜0.01);中药大、中剂量组TNF-α蛋白表达水平明显下调(P＜0.05).结论 糖肾清2号方对肾脏的保护作用可能与激活AMPK-α1活性,间接抑制NF-κB活性从而抑制炎症反应有关.

目的 研究天然产物天麻素( gastrodin,GSTD)在KK-Ay小鼠中的抗糖尿病作用.方法 以C57BL/6J小鼠为正常对照,KK-Ay糖尿病小鼠分为未治疗组、GSTD组(10、20、50 mg·kg-1)、二甲双胍组( Met 200 mg·kg-1),共5组,每组10只. GSTD组和Met组均灌胃给药8 周.实验前和实验过程中每周1次测定空腹血糖(FBG),给药第7周进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT)和胰岛素耐量实验(ITT),实验结束前收集24 h尿标本,并测定相关指标.实验结束时采血分离血清,测定糖化血红蛋白( GHb),胰岛素浓度和其他生化指标,动物处死后收集肝脏、肾脏和胰腺进行病理学检查,试剂盒测定肾组织中晚期糖基化终末产物(AGE)和甘油 三酯(TG)含量.结果 各剂量GSTD均明显降低KK-Ay糖尿病小鼠的FBG、尿糖、GHb、血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数,明显抑制体质量增加,改善糖耐量和胰岛素耐量(P<0.05或P<0.01).病理学检查显示,GSTD明显增加肝组织糖原含量,减少胰岛体积并改善其病理学变化. GSTD还明显减轻糖尿病引起的肾小球硬化,并使KK-Ay小鼠的血清肌酐( Scr)、 24 h 尿量、 24 h 尿总蛋白和微量白蛋白(mAlb)以及肾组织中AGE、TG的含量明显下降(P<0.05或P<0.01). 50 mg·kg-1GSTD的抗糖尿病效果与200 mg ·kg-1的Met相当.结论 GSTD对 KK-Ay糖尿病小鼠具有明显的降血糖,改善胰岛素抵抗和减轻糖尿病肾病的效果,其调控糖代谢和胰岛素增敏作用的具体机制尚需深入研究.

目的 探讨糖肾清2号抑制糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠免疫炎性损伤的分子机制.方法 将30只健康雄性KK-Ay小鼠,予高脂饲料诱导3周制备DN模型,随机分为模型组、缬沙坦组、糖肾清2号大、中、小剂量组,每组6只,另设6只C57BL/6J小鼠为正常组,正常组及模型组予去离子水0.1 mL/(10 g·d)灌胃;缬沙坦组给予缬沙坦13.33 mg/(kg·d)灌胃;糖肾清2号大、中、小剂量组分别按含生药量40.66,20.33,10.17g/(kg·d)剂量灌胃.各组小鼠1次/d灌胃,连续干预12周.采用RT-PCR技术检测肾脏组织IL-1β、iNOS、MCP-1 mRNA转录水平.Western blot技术、免疫组化测定肾脏组织iNOS蛋白表达水平.ELISA法检测血清IL-1β、MCP-1蛋白表达水平.结果 与正常组比较,模型组IL-1β、MCP-1、iNOS mRNA转录及蛋白表达水平显著上调(P＜0.01,P＜0.05).与模型组比较,缬沙坦组、中药各组IL-1β、MCP-1 mRNA转录及蛋白表达水平显著下调(P ＜0.01,P＜0.05);缬沙坦组、中药大剂量组iNOS mRNA转录水平及蛋白表达水平显著下调(P＜0.01,P＜0.05),中药中剂量组iNOSmRNA转录水平显著下调(P＜0.01).与中药小剂量组比较,中药大剂量组iNOS mRNA转录水平及蛋白表达水平显著下调(P ＜0.01,P＜0.05),中药中剂量组iNOS m RNA转录水平显著下调(P＜0.01).结论 糖肾清2号改善DN肾组织免疫炎性损伤的分子机制可能与抑制IL-1β、iNOS、MCP-1的生物活性有关.

目的:探讨醒脑益智方基于PI3K-Akt对2型糖尿病(T2DM)痴呆小鼠性激素及Erα、Erβ的影响.方法:以C57BL/6作为空白组,检测随机血糖≥16.7mmol/L的KK-ay小鼠随机分为模型组、吡拉西坦组、醒脑益智组.给药前后各行1次Morris水迷宫实验,记录潜伏期和目标象限探索时间.小鼠麻醉后迅速取血、大脑海马制备样本,酶联免疫法检测性激素水平,采用实时定量PCR法检测Erα、Erβ和PI3K、Akt mRNA水平.结果:与模型组比较,醒脑益智方能改善CID,下调FSH、T、LH,上调P、E2、PRL水平及Erα、ErβmRNA及PI3K、 Akt mRNA在海马中的表达(P<0.01,P<0.05).结论:醒脑益智方能明显改善CID,与性激素及受体水平,激活 PI3K-Akt通路有关.