目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白8(LRP8)在结直肠癌组织中的表达情况及其与临床病理特征之间的关系，为结直肠癌患者的诊治及预后评估提供理论依据。方法:收集湖南省人民医院2020年1月1日至2020年9月1日住院的结直肠癌患者手术切除标本(术前未行放化疗及免疫治疗等辅助治疗措施)和相应的癌旁正常组织45例，采用免疫组化检测LRP8在结直肠癌及癌旁正常组织中的表达，并通过单因素logistic回归分析、Spearman相关性分析明确LRP8与结直肠癌患者临床特征的关系。结果:免疫组化结果显示45例结直肠癌组织中LRP8蛋白高表达37例(82.22%)，低表达8例(17.78%)；45例癌旁正常组织中LRP8蛋白高表达17例(37.78%)，低表达28例(62.22%)；LRP8蛋白在结直肠癌组织和其癌旁正常组织中的表达差异具有统计学意义( P<0.05)。χ 2检验发现LRP8蛋白的表达与结直肠癌的分期、神经侵犯、血管侵犯、癌胚抗原(CEA)、低密度脂蛋白有关(均 P<0.05)；与性别、年龄、肿瘤分化程度、Ki67、糖类抗原199(CA199)、淋巴结转移、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白无关(均 P>0.05)；经logistic回归分析发现，TNM分期、血管侵犯、神经侵犯及血清CEA、低密度脂蛋白水平均为结直肠癌患者LRP8高表达的影响因素(均 P<0.05)。ApoB与肿瘤分期( rs＝-0.382)、淋巴结转移( rs＝-0.316)、血管侵犯( rs＝-0.311)存在弱的负相关(均 P<0.05)。 结论:LRP8蛋白在结直肠癌组织中表达增加，其表达增加与结直肠癌的分期、神经血管侵犯、低密度脂蛋白水平存在相关性；LRP8高表达的患者，其肿瘤分期更差、更易并发神经及血管侵犯。

目的:探究血清抗低密度脂蛋白受体相关蛋白4抗体（LRP4-ab）阳性在成人重症肌无力（MG）患者中的发生情况，并总结LRP4-ab阳性MG患者临床特点及对治疗的反应和预后。方法:纳入首都医科大学宣武医院MG数据库中于2017年2月至2018年12月入库的成人MG（起病年龄≥18岁）患者共355例，采用商用放射免疫测定法检测其血清中乙酰胆碱受体抗体（AChR-ab）和骨骼肌特异性酪氨酸激酶抗体，采用基于细胞底物的实验方法检测LRP4-ab。回顾性分析其中LRP4-ab阳性MG患者的临床特点、对治疗的反应和预后，并与同期入库的LRP4-ab阴性MG患者进行比较。结果:355例成人MG患者中，有13例（3.7%）患者血清LRP4-ab阳性，且均同时AChR-ab阳性；男女性别比为2.3∶1，平均起病年龄54岁。其中5例行胸腺手术，病理证实3例为胸腺瘤，2例为胸腺增生。LRP4-ab阳性和阴性MG患者在起病症状、AChR-ab滴度、球肌无力、呼吸肌无力、胸腺瘤和病情最重时的美国重症肌无力基金会（MGFA）临床分型方面差异均无统计学意义，但LRP4-ab阳性MG患者中MGFA分型为Ⅲ型者（病情最重时）的比例明显高于阴性患者［分别为8/13和26.9%（7/26）， P=0.08］。13例LRP4-ab阳性患者经治疗后，10例病情缓解，3例临床明显改善，与LRP4-ab阴性患者无明显差异。 结论:本组MG患者的LRP4抗体阳性率为3.7%，LRP4抗体阳性MG的临床特点与阴性者无明显差别。

目的 探讨sclerostin/Lrp4在高磷诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)钙化过程中的可能机制及银杏叶提取物的保护作用.方法 提取SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞并鉴定,分为正常对照组,高磷诱导钙化组(10 mmol/L β-甘油磷酸钠+50μg/ml抗坏血酸),高磷诱导钙化+银杏叶提取物干预组(10 mmol/L β-甘油磷酸钠+50μg/ml抗坏血酸+0.5 mg/ml银杏叶提取物),培养基诱导干预14d.VON KOSSA染色、茜素红染色检测各组VSMC钙化情况,实时定量PCR检测β-catenin、骨钙素(bone gamma carboxyglutamic acidcontaining proteins,BGP)的mRNA表达,Western印迹检测sclerostin、Lrp4的蛋白表达. 结果 VON KOSSA染色、茜素红染色均显示,与正常对照组相比,高磷诱导VSMC钙化组有明显的钙盐沉积,银杏叶提取物干预组钙盐沉积较钙化组明显减少.实时定量PCR结果显示高磷诱导VSMC钙化组β-catenin、BGP的mRNA表达明显高于正常对照组(均P＜0.05).银杏叶提取物干预组β-catenin、BGP的mRNA表达明显低于钙化组(均P＜0.05).Western印迹结果显示,高磷诱导VSMC钙化组sclerostin蛋白表达明显高于正常对照组(P＜0.05),Lrp4蛋白表达明显低于正常对照组(P＜0.05).银杏叶提取物干预组sclerostin蛋白表达明显低于钙化组(P＜0.05),Lrp4蛋白表达明显高于钙化组(P＜0.05).结论 高磷可通过激活Wnt/β-catenin信号通路诱导VSMC钙化,Sclerostin/Lrp4参与了高磷诱导的VSMC钙化过程,而银杏叶提取物可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路减轻高磷诱导的VSMC钙化.

目的 探讨不稳定型心绞痛(UAP)患者血清C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1(CTRP1)水平变化及意义.方法 119例UAP患者(UAP组)根据冠状动脉病变支数分为单支病变组、双支病变组和多支病变组,根据冠状动脉狭窄程度分为轻度组、中度组、重度组和完全组,选取稳定型心绞痛(SAP)患者(SAP组)45例和非冠心病者40例作为对照组,ELISA法检测血清CTRP1水平.结果 UAP组血清CTRP1水平高于SAP组和对照组(P＜0.05);多支病变组大于双支病变组大于单支病变组(P＜0.05);完全组大于重度组大于中度组大于轻度组(P＜0.05);UAP组血清CTRP1水平与总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白-C (LDL-C)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、血小板分布密度(PDW)和平均血小板体积(MPV)呈正相关(P＜0.05),而与血小板(Plt)呈负相关(P＜0.05).结论 UAP患者血清CTRP1水平升高,可能参与了UAP发生、进展过程.

目的 探讨缺血性脑卒中患者血清低密度脂蛋白受体相关蛋白6 (LRP6)及CD36水平与颅内外动脉狭窄的关系,为缺血性脑卒中的诊治提供参考.方法 选取2015年9月至2018年8月在洛阳新区人民医院神经内科住院治疗的90例缺血性脑卒中患者,所有患者均行数字减影血管造影检查,根据颅内动脉(颈内动脉的颅内段、大脑中动脉M1段、椎动脉颅内段及基底动脉)及颅外动脉(颈总动脉、颈内动脉、椎动脉颅外段及锁骨下动脉)是否狭窄,分为无狭窄组12例(A组)和颅内外动脉狭窄组78例(B组);根据狭窄发生的部位不同再将颅内外动脉狭窄组分为单纯颅内动脉狭窄组32例(B1组)、单纯颅外动脉狭窄组26例(B2组)和颅内外动脉均有狭窄组20例(B3组).比较各组血清LRP6、CD36水平差异,并分析颅内外动脉不同狭窄程度组间血清LRP6、CD36水平差异.结果 B组高血压病、糖尿病比例和CD36水平高于A组,而LRP6水平低于A组(P＜0.05).B1组、B2组及B3组LRP6、CD36水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).颅内外动脉不同狭窄程度组间LRP6、CD36水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 缺血性脑卒中患者血清LRP6、CD36水平与颅内外动脉狭窄存在相关关系,可一定程度反映颅内外动脉狭窄程度.通过检测LRP6、CD36水平能够了解患者颅内外动脉狭窄程度,对临床诊治有一定指导意义.

目的 探究低密度脂蛋白(LDL)氧化的可能分子机制.方法 天然LDL(100 mg/L)诱导人单核细胞系THP-1细胞0、1、3、5h.用诱导不同时间点的单核细胞进行表达谱芯片实验,筛选与LDL氧化相关的基因.在mRNA水平和蛋白质水平上分别用实时定量PCR和Western blot进一步验证部分微阵列结果.利用DAVID数据库进行基因聚类、生物学功能以及与脂质和氧化相关的信号传导途径分析.结果 LDL诱导THP-1后,细胞内大量生物膜相关基因的表达发生变化,提示脂质氧化的发生定位在生物膜上.LDL诱导3h后细胞内脂质氧化相关基因的表达发生变化,提示脂质氧化已经开始.差异表达基因的功能注释分析发现,Toll样受体(TLR)信号通路、凋亡、内吞、细胞周期、脂质筏、脂质结合、定位、转运、细胞黏附、金属离子稳态、氧化还原等生物学通路得到不同程度的富集.天然LDL诱导THP-1不同时间点炎症因子的mRNA以及蛋白水平的表达均受到了抑制,如肿瘤坏死因子α、白细胞介素33、c-FOS等基因的表达随着LDL孵育时间的延长,其表达量逐渐降低.结论 本研究提示,天然LDL的氧化可能与TLR4-TLR10-CD36的识别和炎症信号转导有关.

目的 分析氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)及其清道夫受体SR-PSOX在RA患者中的表达水平,探讨ox-LDL与疾病活动度之间的关系.方法 采用ESLIA法检测RA患者和健康体检者血清以及RA、OA、炎性关节炎(IA)患者关节滑液ox-LDL表达水平,同时采用蛋白质印迹法检测RA及IA患者关节滑液来源的混合细胞中SR-PSOX表达情况.RA患者临床资料分析采用非参数检验,t检验分析RA及对照组血清中的ox-LDL表达水平的差异,Pearson相关分析RA患者ox-LDL与CRP、ESR等炎性指标及疾病活动度之间的相关性.结果 RA患者血清ox-LDL表达水平[(3 076±131) mU/ml]高于健康对照组[(2 334±84) mU/ml] (t=4.242,P＜0.01).RA滑液ox-LDL表达水平[(4 963±254) mU/ml]高于OA组[(3 956±347) mU/ml] (t=2.372,P＜0.05).RA滑液混合细胞SR-PSOX表达水平高于IA组[(4.92±0.18)和(0.24±0.04),t=33.53,P＜0.01].RA血清ox-LDL表达水平与ESR、CRP及整体疾病活动度DAS28评分呈负相关(分别为r=-0.42,P=0.009;r=-0.35,P=0.029 7;r=-0.42,P=0.008 4).中度疾病活动度患者血清ox-LDL表达水平高于高度疾病活动度患者,且差异有统计学意义[(3 302±138) mU/ml和(2 464±228)mU/ml,t=3.335,P＜0.01],而低疾病活动度和病情缓解的RA患者ox-LDL表达水平较高疾病活动度患者虽有上升趋势但差异无统计学意义.经DMARDs治疗后,RA患者ox-LDL整体有轻微上升趋势,但差异无统计学意义.ox-LDL/LDL-C或ox-LDL/HDL-C与DAS28无相关性.结论 RA患者血清及滑液高表达ox-LDL,滑液高表达其受体SR-PSOX,血清ox-LDL水平与ESR、CRP、DAS28呈负相关,与疾病活动度有关,提示ox-LDL及其受体SR-PSOX可能在RA致病中发挥着一定作用,仍需进一步深入探讨.

动脉粥样硬化(AS)是常见的慢性炎症性血管疾病,特征为血管壁进行性增厚,是心血管疾病致死主要原因之一[1].AS主要病理过程为多种因素(炎症、血流剪切力、高血压)引起的血管内皮细胞受损;低密度脂蛋白与内皮细胞结合后进入内皮下间隙,经氧化修饰被巨噬细胞清道夫受体识别并快速摄取,诱使巨噬细胞转变为泡沫细胞并大量聚集、坏死形成细胞外脂质核心;随后动脉中膜的平滑肌细胞迁入内膜并大量增生,最终演变为纤维斑块.这其中涉及的主要细胞类型包括内皮细胞、血管平滑肌细胞(VSMC)、巨噬细胞.微小RNA (miRNA)主要通过降解靶基因或抑制翻译过程,减少蛋白质合成,参与调节上述3种细胞功能,进而影响AS进展.我们就miRNA作用于内皮细胞、VSMC、巨噬细胞的最新研究进展进行综述,并讨论miRNA作为生物标志物诊断AS及利用miRNA治疗AS的潜在价值.

目的:肝脏X受体(liver X receptor,LXR)是核受体超家族中的一员,其中LXR-β是脑细胞内胆固醇含量的重要感受器,而LXR-β/类视黄醇X受体(retinoic X receptor,RXR)-α/ATP结合盒转运子A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)胆固醇跨膜转运体系与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发生、发展密切相关.LXR激动剂TO901317能影响APP/PS1双转基因小鼠脑组织中β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)的生成,但其具体机制尚未阐明.本研究旨在观察LXR激动剂TO901317对高胆固醇饲料饲喂的AD小鼠的认知功能的影响,并从胆固醇代谢的角度探讨其可能的机制.方法:选取24只雄性6月龄APP/PS1双转基因AD小鼠,并随机分为4组,即普通饲料(control)组、高胆固醇饮食(cholesterol rich diet,CRD)组、CRD联合LXR激动剂TO901317饲喂组(TO901317组)以及CRD、TO901317联合LXR拮抗剂GSK2033饲喂组(GSK2033组),每组各6只.以CRD为基础饲料混合猪油、蛋黄粉、鱼肝油等加工制成的颗粒饲料,按每天两次饲喂小鼠;药物组在CRD的同时给予药物,TO901317及GSK2033溶解后均稀释至最终浓度0.03％,并按照小鼠体重通过胃管每日灌胃给药,各组总治疗时间为3个月.饲喂3个月后,采用Morris水迷宫实验观察各组小鼠空间探索和记忆能力的变化;酶标仪比色法检测各组小鼠血清中TC、LDL和HDL的含量;ELISA法检测各组AD小鼠脑组织中Aβ42的表达情况;蛋白质印迹法检测各组小鼠脑组织LXR-β、RXR-α、ABCA1和Caveolin-1蛋白质水平的变化.结果:Morris水迷宫实验结果显示:与control组相比,CRD组小鼠穿越平台的次数、距离和时间均显著降低(均P<0.05);相较于CRD组,TO901317组小鼠穿越平台的次数、距离和时间显著增加(均P<0.05);而相较于TO901317组,GSK2033组上述指标均降低(均P<0.05).酶标比色仪检测结果显示:CRD组小鼠血清中TC和LDL含量较control组显著增加,而HDL却显著减少(均P<0.001);TO901317组中TC和LDL含量较CRD组减少,HDL含量增加(均P<0.001);GSK2033组小鼠血清中TC和LDL含量较TO901317组却显著增加,HDL含量显著减少(均P<0.001).ELISA结果显示:4组中CRD组小鼠脑内的Aβ42生成量最多;与CRD组比较,TO901317组小鼠脑内的Aβ42量显著减少(P<0.001),4组中含量最低;control组与GSK2033组含量接近.蛋白质印迹法结果显示:CRD组中LXR-β、RXR-α、ABCA1蛋白质水平较control组显著降低,Caveolin-1蛋白质水平却明显升高(均P<0.01).而经TO901317处理后,AD小鼠脑组织中LXR-β、RXR-α、ABCA1蛋白质水平明显升高,Caveolin-1蛋白质水平降低(均P<0.001);在GSK2033组中,TO901317对AD小鼠的影响被GSK2033部分逆转,相较于TO901317组,小鼠脑内的LXR-β、RXR-α、ABCA1蛋白质水平降低,Caveolin-1蛋白质水平升高(均P<0.05).结论:CRD导致转基因AD小鼠产生更加严重的空间探索障碍和学习记忆能力障碍,而LXR激动剂TO901317减轻了这一效应.其机制可能为TO901317通过激活LXR-β/RXR-α/ABCA1跨膜转运体系促进胆固醇外排,降低Caveolin-1的表达并改善脂筏的构成,最终降低脑内Aβ42的生成.

目的 基于网络药理学探索活血解毒Ⅰ号方治疗动脉粥样硬化的物质基础和作用机制,并进行实验验证.方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台检索活血解毒Ⅰ号方活性成分及其靶点,采用Uniprot蛋白质数据库标准化蛋白质靶点信息.通过在线人类孟德尔遗传、GeneCards、DrugBank数据库获取动脉粥样硬化相关靶点基因,筛选药物和疾病共同靶点,构建"成分-靶点"网络并筛选关键活性成分.通过STRING平台构建共同靶点蛋白质-蛋白质相互作用网络,筛选关键靶点基因.采用Matascape数据库进行GO和KEGG通路富集分析,构建"药物-靶点-通路"多维网络图.选用SPF级8周龄雄性ApoE-/-小鼠30只,体重18～22 g,通过高脂饲料喂养12周建立动脉粥样硬化模型,按随机数字表法将其分为模型组、他汀组、活血解毒Ⅰ号方组,每组10只,另选相同周龄及遗传背景的雄性C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组.他汀组予阿托伐他汀3.400 mg/(kg·d),活血解毒Ⅰ号方组予药液2.171 g/(kg·d),正常对照组、模型组予等量生理盐水,四组均灌胃12周.实验结束后采用比色法检测四组血脂指标,对主动脉行HE染色及斑块比例定量分析,Western blot检测四组主动脉组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、caspase-3和核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白表达水平.结果 共筛选出活血解毒Ⅰ号方活性成分25个,潜在靶点214个,与动脉粥样硬化疾病共同靶点118个.GO分析显示2 173个结果包括通路165条.活血解毒Ⅰ号方治疗动脉粥样硬化的关键活性成分包括槲皮素、黄芩素、β-谷甾醇、鞣花酸、小檗浸碱、非洲防己碱、小檗碱等,可调控 TNF、AKT1、IL-6、VEGFA、TP53、IL-1B、JUN、CASP3、PTGS2、PPARG等相关靶点,并可能通过TNF、Toll样受体、NF-κB、HIF-1、PI3K-Akt、细胞凋亡、T细胞受体、MAPK、Foxo等信号通路对动脉粥样硬化的发生发展产生影响.实验结果显示,模型组血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)高于正常对照组,高密度脂蛋白胆固醇水平低于正常对照组,活血解毒Ⅰ号方组血清TC、TG、LDL-C低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).主动脉根部HE染色结果显示,正常对照组主动脉根部无粥样斑块沉积,余各组主动脉根部管壁均可观察到不同程度的粥样斑块沉积.斑块比例定量分析显示,活血解毒Ⅰ号方组斑块面积占血管面积的比例低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).模型组TNF-α、IL-6、caspase-3、NF-κBp65蛋白水平高于正常对照组,活血解毒Ⅰ号方组低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 本研究初步揭示了活血解毒Ⅰ号方治疗动脉粥样硬化的"多成分-多靶点-多通路"作用网络,实验验证其作用机制与抑制相关炎症通路及细胞凋亡有关,为活血解毒Ⅰ号方治疗动脉粥样硬化临床应用提供研究依据.