目的:探究甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1(MASP1)对肝癌细胞生物学行为的影响及可能分子机制。方法:选取2022年1月10日至10月25日在南通大学附属医院行肝癌切除手术患者的20对新鲜肝癌组织和癌旁(距癌组织3 cm)正常组织标本并分析MASP1的表达情况。收集2012年3月1日至2017年5月20日南通大学附属医院病理科组织标本库中67例肝癌患者的癌组织及对应的癌旁(距癌组织3 cm)正常组织，分析MASP1的表达水平与肝癌患者临床资料的相关性。培养人肝癌细胞系SK-Hep1、Hep3B并构建 MASP1过表达和 MASP1敲减细胞株，设立SK-Hep1阴性对照、SK-Hep1 MASP1过表达组与Hep3B阴性对照和Hep3B MASP1敲减组。通过裸鼠皮下移植瘤实验分析MASP1对肝癌细胞增殖的影响。通过蛋白质印迹法检测MASP1对上皮-间质转化相关蛋白质[神经钙黏素、基质金属蛋白酶9(MMP9)、上皮钙黏素]表达的影响，以及MASP1对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白质的表达及其磷酸化水平的影响。统计学方法采用独立样本 t检验、配对 t检验和卡方检验。 结果:20对新鲜组织标本的免疫组织化学染色结果显示，MASP1在肝癌组织中的表达低于癌旁正常组织(3.73±1.03比6.76±1.46)，差异有统计学意义( t＝16.97， P<0.001)。67例肝癌患者的临床资料与MASP1的表达水平相关性分析显示，MASP1的表达水平与肿瘤有无侵犯血管有关，差异有统计学意义( χ2＝5.20， P＝0.023)。裸鼠皮下移植瘤实验显示，SK-Hep1 MASP1过表达组小鼠的皮下肿瘤比SK-Hep1阴性对照组体积更小、重量更轻[(165.42±149.08) mm 3比(260.42±179.78) mm 3、(0.13±0.12) g比(0.18±0.12) g]，差异均有统计学意义( t＝5.15、3.89，均 P<0.05)。蛋白质印迹法显示，SK-Hep1 MASP1过表达组神经钙黏素和MMP9表达低于SK-Hep1阴性对照组，上皮钙黏素表达高于SK-Hep1阴性对照组(0.73±0.01比1.02±0.02、0.40±0.01比0.69±0.01、0.91±0.02比0.78±0.02)，差异均有统计学意义( t＝24.23、36.87、9.27，均 P<0.001)。Hep3B MASP1敲减组神经钙黏素和MMP9表达高于Hep3B阴性对照组，上皮钙黏素表达低于Hep3B阴性对照组(1.04±0.01比0.31±0.01、0.54±0.02比0.04±0.01、0.56±0.01比0.93±0.01)，差异均有统计学意义( t＝163.20、53.16、60.74，均 P<0.001)。SK-Hep1 MASP1过表达组的磷酸化PI3K、磷酸化Akt、磷酸化mTOR的表达低于SK-Hep1阴性对照组(0.59±0.01比1.02±0.01、0.64±0.01比1.12±0.02、0.10±0.01比1.05±0.02)，Hep3B MASP1敲减组的磷酸化PI3K、磷酸化Akt、磷酸化mTOR的表达高于Hep3B阴性对照组(0.96±0.01比0.55±0.01、0.99±0.01比0.38±0.01、0.93±0.02比0.06±0.01)，差异均有统计学意义( t＝40.87、40.91、87.30、44.17、107.50、67.28，均 P<0.001)。 结论:MASP1在肝癌组织中低表达，并且与肝癌患者的不良预后及肿瘤血管侵袭的发生显著相关，其可能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路影响肝癌细胞的增殖和迁移能力，提示 MASP1有望成为治疗肝癌的关键基因。

肝细胞损伤被认为是肝纤维化发生的始动因素,而肝星状细胞(HSC)激活既是肝纤维化形成的关键因素,同时也在肝损伤修复及愈合中发挥着重要作用. 然而,关于肝细胞损伤及炎症反应对HSC的直接调节作用并不清楚. 既往研究大多关注于HSC本身,而忽略了损伤肝细胞对HSC活性的调控作用. 因此,亟需进一步明确肝纤维化中损伤肝细胞对HSC的直接调节作用及详细机制,从而揭示HSC活化和肝纤维化形成的机理,并研发有效的靶向治疗手段.

为挖掘草鱼关键抗性分子,研究利用4D label-free定量蛋白质组学技术系统分析了团队前期获得的GCRV感染存活草鱼(候选抗性草鱼)与对照草鱼的血清蛋白表达差异.共鉴定到858个草鱼血清蛋白,329个蛋白在两类草鱼中差异表达,其中163个蛋白在候选抗性草鱼血清中显著高表达,166个蛋白显著低表达.差异表达蛋白的功能主要注释为体液免疫反应调节相关蛋白,显著富集到补体凝血级联、细胞黏附和铁死亡等信号通路.对差异表达的免疫相关蛋白进行分析发现,候选抗性草鱼血清中体液免疫分子MASP2、C4a、C4b、C7b、C8b、C8g、C9、CFI、C3a.1、C3a.2、C3a.3和C3a.6等补体和抗原提呈相关免疫分子MHC1UBA和IGL4V8等蛋白表达水平显著高于对照草鱼,而T细胞免疫相关分子TRAV、IGHV1-1、IGHV2-1、IGHV6-1、IGHV3-2和IGHV11-2等蛋白表达水平显著低于对照草鱼.免疫印迹检测进一步证实,以C3和IgM为代表的体液免疫分子在候选抗性草鱼血清中显著高表达,可能与草鱼抗病能力关联.研究将为高抗性草鱼的选育提供可参考的分子资源.

目的 研究雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾组织甘露糖结合凝集素(MBL)及甘露聚糖结合凝集素丝氨酸肽酶2(MASP2)表达的影响,探讨雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护机制.方法 45只雄性SD大鼠随机分为实验组(n=35)和正常对照组(n=10).实验组喂以高糖高脂饲料6周后,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病肾病大鼠模型.实验组有33只大鼠造模成功,将33只大鼠随机分为糖尿病肾病模型组(n=16)和雷公藤多苷治疗组(n=17),治疗组以雷公藤多苷[10 mg/(kg·d)]灌胃8周.第14周末,比较模型组和治疗组24h尿蛋白定量及血清生化指标;过碘酸希夫反应(PAS)观察肾组织形态学改变;荧光定量PCR检测肾组织MBL1、MASP2、核因子κB(NF-κB)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA水平,Western blot法检测肾组织MBL-A、MASP2、NF-κB、MCP-1的蛋白水平,免疫组织化学染色检测MBL-A、MASP2蛋白在肾组织的表达和分布.结果 与治疗组相比,模型组大鼠24h尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮增高,肾组织MBL、MASP2、NF-κB及MCP-1表达明显增加;相关性分析显示,MBL与MASP2、NF-κB、MCP-1表达及24h尿蛋白定量呈显著正相关.结论 雷公藤多苷能抑制糖尿病模型大鼠肾组织MBL及MASP2的表达,减轻糖尿病大鼠肾损伤.

甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3(MASP3)是补体凝集素途径的酶成分之一,由MASP1/3基因编码.既往资料证实,MASP3不参与凝集素途径活化,对补体蛋白C3、C4以及C2均无酶切活性,而近期研究表明MASP3是参与补体D因子活化的关键酶,进而可能是联系补体凝集素途径和旁路途径活化的重要成分.此外,人们通过动物疾病模型研究发现MASP3可能作为补体旁路途径异常相关疾病的新治疗靶点,从而为相关疾病提供新的治疗思路.本文旨在对MASP3的编码基因、蛋白结构、生物学功能以及其在旁路途径功能异常相关疾病模型中的研究进展进行综述.

目的 探讨粒细胞集落刺激因子3受体( CSF3R)基因表达对胰腺导管细胞癌患者预后的影响及其机制.方法 从GEO数据库中下载包含CSF3R表达数据的人类胰腺导管细胞癌表达谱,包括132例份胰腺导管细胞癌样本.通过R2分析平台,以Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析CSF3R表达与患者预后的关系,筛选出与CSF3R表达显著相关的基因并进行KEGG通路分析与GO分析.结果 CSF3R表达与患者总体生存率呈负相关(P＜0.05),CSF3R高表达患者的总体生存率低于低表达患者(P＜0.05).检测出与CSF3R表达呈显著相关的基因共6 521个,其中正相关基因3 040 个、负相关基因3 481 个. KEGG分析发现,有27 个高表达基因( C1QA、C1QB、C1QC、 C2、 C3AR1、 C5、 C5AR1、 FCAR、 FCGR2A、 FCGR2B、 FCGR3A、 FCGR3B、 FGG、 FPR1、 FPR2、 FPR3、HLA-DMB、HLA-DQA1、HLA-DQB1、ICAM1、ITGAM、ITGB2、MASP1、MASP2、MBL2、PLG、SELPLG)仅涉及1个信号通路,即金黄色葡萄球菌感染. GO分析发现,CSF3R及其相关基因主要与细胞对刺激的反应、免疫反应、RAS调控、胰腺发育等相关.结论 CSF3R表达与胰腺导管细胞癌患者总体生存率相关,其可能是预测患者预后的潜在分子标记物.

目的 制备甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MBL-associated serine protease-2,MASP-2)EGF功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定,为后续研究奠定基础.方法 利用带有EGF基因片段的pGEX-6P-2原核载体诱导表达GST-EGF融合蛋白,并采用商品化GST-Beads进行纯化;将纯化的融合蛋白作为抗原,与弗氏完全佐剂充分混合后,免疫5周龄BALB/c雌性健康小鼠,制备多克隆抗体;利用琼脂双扩散法检测多克隆抗体的效价,并进一步应用Western blot鉴定多克隆抗体的特异性及效价.结果 成功表达并纯化EGF蛋白,以此成功制备出特异性强的GST-EGF融合蛋白的多克隆抗体,与其他蛋白无交叉反应;琼脂双扩散法检测的EGF抗体效价为1∶8;Western blot检测的EGF抗体效价大于1∶2 000.结论 成功制备出具有特异性强且效价高的GST-EGF蛋白的多克隆抗体.

目的:探讨甘露糖结合凝集素(MBL)途径相关蛋白甘露糖结合丝氨酸蛋白酶-2(MASP2)、MASP3在C3肾小球病(C3G)患者血清中的表达及其在C3G发病中的作用.方法:回顾性分析15例C3G患者(14例C3肾小球肾炎和1例致密物沉积病)的临床资料,用ELISA测定肾活检当天血清MASP2、MASP3水平,分析MASP2、MASP3与临床及病理指标的关系.10名健康志愿者为对照.结果:C3G患者血清MASP2、MASP3水平均高于对照组(P<0.05).血清MASP2、MASP3水平与肾小球滤过率及血清补体C3水平均无关(P>0.05),血清MASP3水平与24 h尿蛋白定量呈正相关(r=0.563,P=0.036).C3荧光强度高或有基底膜内电子致密物沉积的C3G患者血清MASP2水平较低(P<0.05).结论:C3G患者尿蛋白量随着血清MASP3的升高而升高,提示MBL途径可能参与该病的发生发展;MASP2水平的异常降低可能与C3G病理损伤程度加重有关.

目的 比较保留与不保留左结肠动脉第三站淋巴结清扫术在直肠癌腹腔镜D3根治术中的应用效果.方法54例直肠癌患者分为保留组29例与非保留组25例,保留组接受保留左结肠动脉并联合第三站淋巴结清扫的直肠癌腹腔镜D3根治术治疗,非保留组接受肠系膜下动脉高位结扎的直肠癌腹腔镜D3根治术治疗,采用结肠边缘动脉弓压力(MASP)水平评估吻合口血流灌注情况.结果两组手术治疗过程中均实现无张力吻合,4例发生吻合口瘘,其中保留组1例,非保留组3例;MASP的检测结果显示,保留组为(48.6±2.5)mmHg,非保留组为(42.2±1.9)mmHg,组间差异有统计学意义(t=10.4545,P<0.001),年龄、外周血压(SP)及远端结肠长度(DCL)为影响MASP的潜在预测因素,年龄与分组因素为MASP的独立影响因素;MASP与外周血压(SP)呈正相关(r=0.351,P=0.006),与年龄和远端结肠长度(DCL)呈负相关性(r=-0.285,P=0.031和r=-0.324,P=0.023),MASP受手术方式的影响最为显著(P=0.003);两组总淋巴结收获量、D3淋巴结收获量及手术时间差异均无统计学意义(P>0.05),发生吻合口瘘患者的平均MASP较未发生吻合口瘘患者显著更低(P<0.001).结论保留较不保留左结肠动脉的直肠癌腹腔镜D3根治术更有利于直肠癌根治术患者术后获得更佳的远端结肠及吻合口血供,且对总淋巴结及第三站淋巴结收获数量均未造成影响,也不明显增加手术时间,能在一定程度控制吻合口瘘发生率.

目的:对膀胱癌患者和正常对照尿液中的差异蛋白进行鉴定和生物信息分析.方法:应用swiss-prot、ProtParam、Uniprot、Gene Ontology、KEGG等数据库对前期研究中筛选出的膀胱癌尿液差异蛋白分别从蛋白、基因、核酸水平进行基本理化性质、分子功能、参与生物进程、细胞组分、代谢途径等方面的综合分析.结果:前期研究中筛选出的30个差异点鉴定出22个蛋白质,合并去重后共得到14个蛋白质,分别为:β2微球蛋白;脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白;凝溶胶蛋白;凝溶胶蛋白亚型1;肌红蛋白;纤维蛋白原α链;载脂蛋白A-I;前列腺素合成酶;AMBP蛋白;转甲状腺素蛋白;角蛋白1;角蛋白8;推测蛋白白蛋白;推测蛋白甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶2.其中KRT8、KRT1、FGA、APOA1、FABP4、ALB、GSN、B2M、MASP2、TTR 10个基因均具有蛋白结合的分子功能;PTGDS、ALB、TTR 3个基因均具有转运蛋白活性的分子功能;ALB、MB2个基因具有氧结合功能,ALB还具有抗氧化活性.筛选的差异蛋白中大部分具有相似的本体注解,APOA1参与了膀胱癌分子通路途径中的PPAR信号通路.结论:14个膀胱癌尿液差异蛋白具有各自不同的理化属性,其基因产物具有蛋白结合、转运蛋白活性、氧结合及抗氧化活性的分子功能;参与了转运和细胞骨架合成等生物进程.结合生物信息学分析和大量文献检索,为下一步的靶蛋白研究提供方向.