目的:探讨缺氧复氧（hypoxia reoxygenation, HR）对H9C2心肌细胞凋亡、自噬和焦亡3种细胞死亡方式的影响。方法:将培养的H9C2心肌细胞按随机数字表法分为正常对照组（Ctrl组）和HR组，其中HR组H9C2心肌细胞在缺氧培养箱中进行氧糖剥夺8h，然后复氧12 h。通过检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）含量及四甲基偶氮唑盐[3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5 diphenyl tetrazolium bromide, MTT]比色法检测细胞活力来评估细胞损伤情况（每组6孔），Western blot检测（每组9孔）细胞凋亡相关蛋白[天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（cysteinyl aspartate-specific proteinase, caspase）-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia 2, Bcl-2）、Bcl相关蛋白（bcl-associate x protein, Bax）]、自噬相关蛋白[（轻链蛋白3(light chain 3, LC3）Ⅱ/Ⅰ、p62、Beclin-1、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（phosphorylated mammalian target of ra-pamycin, p-mTOR）]、焦亡相关蛋白[Nod样受体蛋白-3(nod-like receptor pyrin domain3, NLRP3）、凋亡相关斑点样蛋白（apopto-sis associated speck-like protein, ASC）、caspase-1p20、IL-1β、IL-18]。通过免疫荧光染色进一步评估细胞凋亡、自噬及焦亡情况（每组6孔）。结果:与Ctrl组比较，HR组H9C2心肌细胞HR后细胞活力降低（ P<0.05），LDH释放增加（ P<0.05），活化的cas-pase-3及Bax的表达上调（ P<0.05），Bcl-2表达下降（ P<0.05），TUNEL染色显示HR后细胞凋亡显著增加（ P<0.05），提示HR后细胞凋亡及损伤增加；而p-mTOR、p62均表达增加（ P<0.05），但LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1蛋白降低（ P<0.05），LC3Ⅱ/Ⅰ免疫荧光染色显示HR后细胞内的自噬小体增加（ P<0.05），表明HR后H9C2心肌细胞自噬受到明显抑制；同时炎性小体NLRP3、ASC、cas-pase-1p20蛋白均显著上调（ P<0.05），活化的炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达增加（ P<0.05），提示HR后NLRP3炎性小体活化，细胞焦亡增加。 结论:H9C2心肌细胞在HR损伤过程中自噬被抑制，细胞焦亡及凋亡增加。

目的 探究脑电图分级标准在抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)脑炎预后判断中的应用价值.方法 回顾性分析2014年1月至2022年9月在山西医科大学第一医院诊断为抗NMDAR脑炎病人50例.根据ECBER、Synek、Young和Laviz-zari脑电图分级标准,对病人入院后的首次脑电图进行分级.在病人出院时依据改良Rankin量表(mRS)评分评价预后,mRS评分0～2分为预后良好.比较4种不同脑电图分级标准与预后之间的相关性,选择预后预测效能最高的脑电图分级标准,研究其与病情严重程度、辅助检查及检验结果的相关性.结果 ECBER、Synek、Lavizzari这3种脑电图分级标准与病人预后均有明显相关性(P<0.05),脑电图级别越高,预后越差.经预测效能分析,Lavizzari标准的预后预测效能最高[曲线下面积(AUC)值达到0.86,灵敏度为83.33％,特异度为76.32％,P<0.001].Lavizzari标准的中重度异常脑电图组,在住院时间、监护室住院时间、临床症状数量、并发症数量和病情严重例数及占比分别为[42.00(29.00,53.00)d、16.00(0.00,42.00)d、5.00(4.50,5.50)个、3.00(1.00,3.50)个、13例(68.42％)],轻度异常脑电图组分别为[18.00(12.50,26.00)d、0.00(0.00,1.00)d、3.00(3.00,4.00)个、0.00(0.00,1.50)个、9例(29.03％)],差异有统计学意义(P<0.05),在脑脊液抗体滴度、头颅核磁异常等指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 抗NMDAR脑炎病人脑电图异常比例较高.Lavizzari脑电图分级标准对抗NMDAR脑炎病人早期病情评估及预后有较好预测价值,其异常程度与脑脊液抗体滴度、头颅MRI及疾病复发无关.

抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体(N-methyl-D-as-partate receptor,NMDAR)脑炎是由抗 NMDAR 抗体介导的自身免疫性脑炎,以累及灰质与神经元为主,常以发热、头痛等为前驱症状,偶可见于单纯疱疹病毒性脑炎等感染性疾病之后,其症状包括精神行为异常、认知功能损害、记忆力降低、癫痫发作、言语运动功能受损、意识改变、自主神经功能障碍等.

目的:探讨血必净对抗N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体脑炎模型小鼠脑组织损伤及脑脊液(CSF)中辅助性T淋巴细胞17(Th17)/调节性T淋巴细胞(Treg)免疫失衡的影响,阐明其治疗作用.方法:60只健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量血必净组和高剂量血必净组,每组 15只.除对照组外,其余 3组小鼠均给予抗原注射与免疫刺激结合法建立抗NMDA受体脑炎模型,低和高剂量血必净组小鼠分别给予腹腔注射 5和 10 mL·kg-1 血必净注射液.采用HE染色观察各组小鼠脑组织病理形态表现,TUNEL法检测各组小鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠血清中白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-17和转化生长因子β(TGF-β)水平,流式细胞术检测各组小鼠CSF中Th17和Treg细胞百分率,Western blotting法检测各组小鼠脑组织中维甲酸相关核孤儿受体(RORγt)、叉头状转录因子3(Foxp3)、IL-10和IL-17 蛋白表达水平,免疫组织化学染色法检测各组小鼠脑组织中 IL-17 和 Foxp3 阳性细胞率.结果:HE染色,对照组小鼠脑组织海马 CA1 区结构清晰,未见明显病变;与对照组比较,模型组小鼠脑组织海马CA1区部分锥体细胞呈三角形固缩浓染,顶树突拉长,少数神经细胞脱失,组织稀疏;与模型组比较,低和高剂量血必净组小鼠脑组织海马CA1区细胞损伤减小,形态恢复正常,排列较为整齐,且高剂量血必净组小鼠脑组织海马CA1区损伤的改善情况更明显.TUNEL法,与对照组比较,模型组小鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,低和高剂量血必净组小鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡率明显降低(P<0.05);与低剂量血必净组比较,高剂量血必净组小鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡率明显降低(P<0.05).ELISA法,与对照组比较,模型组小鼠血清中IL-6和IL-17水平明显升高(P<0.05),IL-10和TGF-β水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,低和高剂量血必净组小鼠血清中IL-6和IL-17水平明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β水平明显升高(P<0.05);与低剂量血必净组比较,高剂量血必净组小鼠血清中IL-6和IL-17水平明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β水平明显升高(P<0.05).流式细胞术,与对照组比较,模型组小鼠CSF中CD4+IL-17A+Th17细胞百分率明显升高(P<0.05),CD25+Foxp3+Treg细胞百分率明显降低(P<0.05);与模型组比较,低和高剂量血必净组小鼠CSF中CD4+IL-17A+Th17细胞百分率明显降低(P<0.05),CD25+Foxp3+Treg细胞百分率明显升高(P<0.05);与低剂量血必净组比较,高剂量血必净组小鼠CSF中CD4+IL-17A+Th17细胞百分率明显降低(P<0.05),CD25+Foxp3+Treg细胞百分率明显升高(P<0.05).Western blotting法,与对照组比较,模型组小鼠脑组织中RORγt和IL-17蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Foxp3和IL-10蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,低和高剂量血必净组小鼠脑组织中RORγt及IL-17蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Foxp3和IL-10蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与低剂量血必净组比较,高剂量血必净组小鼠脑组织中RORγt和IL-17蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Foxp3和IL-10蛋白表达水平明显升高(P<0.05).免疫组织化学染色法,与对照组比较,模型组小鼠脑组织中IL-17阳性细胞率明显升高(P<0.05),Foxp3阳性细胞率明显降低(P<0.05);与模型组比较,低和高剂量血必净组小鼠脑组织中IL-17阳性细胞率明显降低(P<0.05),Foxp3 阳性细胞率明显升高(P<0.05);与低剂量血必净组比较,高剂量血必净组小鼠脑组织中IL-17阳性细胞率明显降低(P<0.05),Foxp3阳性细胞率明显升高(P<0.05).结论:血必净能够有效改善抗NMDA受体脑炎小鼠脑组织损伤,调控细胞因子水平,干预抗NMDA受体脑炎小鼠Th17/Treg免疫失衡现象.

目的 探讨血必净对抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)脑炎小鼠的治疗作用及对辅助性T细胞1(Th1)/辅助性T细胞 2(Th2)变化的影响.方法 实验分组:对照组、模型组、低剂量血必净组、高剂量血必净组,每组 10 只小鼠,除对照组外,其余 3 组小鼠采用抗原注射与免疫刺激建立抗NMDAR脑炎模型,低、高剂量血必净组的小鼠分别通过腹腔注射 5 ml/kg、10 ml/kg血必净注射液,12 h注射1 次,连续3 d;2 周后,HE染色观察小鼠脑组织病理学改变,尼氏染色观察小鼠神经细胞形态变化,TUNEL染色检测小鼠神经细胞凋亡情况,ELISA检测小鼠血清和脑脊液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素 1β(IL-1β)、白细胞介素 4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)含量,免疫组织化学染色与Western blotting检测脑组织IFN-γ、IL-4表达情况,流式细胞术检测外周血Th1、Th2 细胞比例分布,并计算Th1/Th2 比值.结果 与模型组比较,低剂量血必净组和高剂量血必净组的小鼠海马组织损伤得到改善,神经细胞形态变化较小,尼氏小体形态较为完整且数目增加,神经细胞的TUNEL阳性率降低,血清和脑脊液中TNF-α、IL-1β、IFN-γ含量均减少而IL-4含量增加,脑组织内IFN-γ阳性细胞百分比与蛋白相对表达量降低,IL-4阳性细胞百分比与蛋白相对表达量升高,外周血分化簇(CD)4+IFN-γ+标记的Th1 细胞比例、Th1/Th2 比值降低,且高剂量血必净组小鼠外周血CD4+IL-4+标记的Th2 细胞比例升高,差异均具有统计学意义(P＜0.05).与低剂量血必净组比较,高剂量血必净组小鼠的上述各项检测指标改善效果更为明显,且差异也均具有统计学意义(P＜0.05).结论 血必净能够改善抗NMDAR脑炎小鼠海马神经元损伤,该作用可能与减少IFN-γ表达、促进IL-4 表达进而维持Th1/Th2 细胞平衡有关.

目的 探讨银杏酮酯(GBE50)通过抑制小胶质细胞的炎症反应对神经元突触损伤的影响.方法 ①采用格里斯(Griess)试剂检测不同浓度GBE50(25～400 mg·L-1)干预对经脂多糖(LPS)刺激后BV2小胶质细胞培养液中亚硝酸盐含量的影响.②不同浓度GBE50(25～400 mg·L-1)干预经LPS刺激的BV2小胶质细胞,收集上清液作为条件培养基(CM)处理PC12细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测BV2小胶质细胞和PC12细胞活力.③将对数生长的BV2和PC12细胞以2×106个/孔铺板于6孔板中,分为空白对照组(Ctrl组,仅培养液培养),对照加药组(Ctrl+GBE50组,GBE50干预浓度为200 mg·L-1),模型组(LPS组,LPS刺激浓度为100 μg·L-1),模型加药组(LPS+GBE50组,GBE50预处理1 h后,加入LPS),各组进行相应干预.采用Western blot、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测CM处理的PC12细胞N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)亚基蛋白及基因表达量.结果 ①Greiss法结果显示,GBE50干预可降低LPS刺激BV2细胞产生的一氧化氮(NO)水平(P<0.05).②MTT法结果显示,GBE50对BV2细胞活力无影响;LPS刺激后的CM处理PC12细胞活力显著下降,该现象在GBE50干预的CM中有所改善,GBE50浓度在200 mg·L-1时细胞活力已无明显下降(P<0.05).③Western blot结果显示,与LPS组比较,LPS+GBE50组中NMDAR亚基NR1、NR2A和NR2B蛋白表达升高(P<0.05);RT-qPCR结果显示,与LPS组比较,LPS+GBE50组中NMDAR亚基基因表达量均增加(P<0.05).结论 GBE50可通过抑制激活小胶质细胞的炎症反应,减少NMDAR的损伤,对神经元突触起到保护作用.

目的 探讨抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)脑炎合并癫痫脑电图分级、抗体效价变化及临床意义.方法 选取2021 年1 月—2022 年10 月就诊 15 例抗NMDAR脑炎(脑炎组)及 15 例抗NMDAR脑炎合并癫痫(合并组)为研究对象,分析合并组临床表现.应用Nicolet EEG V32-18040180 脑电图仪对患者行脑电图检查,采用ELISA法检测患者脑脊液NMDAR抗体效价,分析联合检查对抗NMDAR脑炎合并癫痫的诊断价值.据改良Rankin量表将合并组分为轻中度组、重度组,分析脑电图分级及脑脊液抗体效价对病情程度的评估价值及与病情程度的相关性.结果 合并组脑电图分级及脑脊液抗体效价增高情况均高于脑炎组(P＜0.05).脑电图分级及脑脊液抗体效价联合检查诊断抗NMDAR脑炎合并癫痫的受试者工作特征曲线下面积大于单独检查(P＜0.05).重度组脑电图分级及脑脊液抗体效价增高情况高于轻中度组(P＜0.05).抗NMDAR脑炎合并癫痫患者脑电图分级与脑脊液抗体效价呈正相关(r =0.712,P＜0.05);脑电图分级、脑脊液抗体效价变化与病情严重程度均呈正相关(r =0.583、0.642,P＜0.05).脑电图分级及脑脊液抗体效价联合检查评估抗NMDAR脑炎合并癫痫病情程度的受试者工作特征曲线下面积大于单独检查(P＜0.05).结论 抗NMDAR脑炎合并癫痫患者脑电图分级及脑脊液抗体效价增高与病情严重程度相关,且联合检查对抗NMDAR脑炎合并癫痫患者具有诊断和病情程度评估价值.

血管性痴呆(vascular dementia)是由于急慢性脑组织灌注不足导致的一种认知障碍疾病.目前临床治疗主要以改善脑缺血、提高认知功能和控制精神行为为主.近些年来中药活性成分在治疗血管性痴呆的基础及临床研究方面取得一定的成果,其中主要包括银杏叶提取物、葛根素、淫羊藿苷、丹参酮、人参皂苷等.作用机制方面大都以抗炎、抗凋亡、抗氧化及神经保护等作用为主,但葛根素在改善胆碱能神经障碍及增加突触可塑性方面具有一定的优势.化学成分方面葛根素、银杏黄酮、淫羊藿苷均属于黄酮类化合物,而丹参酮属于二萜类化合物.葛根性辛,既能引清阳上养脑窍,又具风药升、散、动、窜之特征,入络则血脉通利,气血畅行,入玄府则通玄开智,脑神得通,符合血管性痴呆中医病机特点.因此,该文通过汇总葛根主要成分葛根素治疗血管性痴呆的作用机制,发现葛根素的作用途径包括改善胆碱能神经系统障碍、抑制兴奋性毒性作用、抗炎、抑制细胞凋亡、抑制氧化应激损伤、增加突触可塑性、促进神经保护因子表达、增加脑循环代谢、抑制Aβ损伤等,其作用通路包括激活核因子E2 相关因子 2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kina-ses,ERK)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、Janus激酶 2(Janus-acti-vating kinase 2,JAK2)/信号转导和转录激活因子 3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)及抑制肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、瞬时受体电位M2(transient re-ceptor potential melastatin 2,TRPM2)/N-甲基-D-天门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate-receptor,NMDAR)、p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)、Toll样受体 4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor kap-paB,NF-κB)、早期生长反应因子 1(early growth response 1,Egr-1)、基质金属蛋白酶 9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)等通路.该文搜集中国知网、万方、维普、PubMed、Web of Science等数据库近10 年关于葛根素治疗血管性痴呆的研究文献,以期为血管性痴呆治疗及药物研发提供支持.

目的 研究5-羟色胺转运体(5-HTT)敲除对小鼠大脑皮层谷氨酸(Glu)能和γ-氨基丁酸(GABA)能系统的影响,为探索抑郁发生发展提供科学依据.方法 根据基因分型将5-HTT敲除的雄性实验小鼠分为5-HTT-/-(纯合子)、5-HTT+/-(杂合子)及5-HTT+/+(野生型)3个实验组,每组8只.采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测小鼠大脑皮层谷氨酸能系统N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(GluNl)、α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体1(GluR1)、兴奋性氨基酸转运体1(EAAT1)、兴奋性氨基酸转运体2(EAAT2)和GABA能系统谷氨酸脱羧酶67(GAD67)、囊泡 γ-氨基丁酸转运体(VGAT)和γ-氨基丁酸转运体1(GAT1)mRNA水平,采用蛋白免疫印迹法检测上述分子蛋白水平.采用SPSS 26.0软件进行单因素方差分析和LSD检验.结果 将5-HTT+/+组mRNA和蛋白表达量标准化为1,小鼠大脑皮层谷氨酸能系统相关分子变化为,与5-HTT+/+组相比,5-HTT-/-组GluR1、EAAT1、EAAT2mRNA水平较高(相对表达量分别为1.48±0.57、1.73±0.52和1.41±0.20),差异均有统计学意义(P＜0.05);与5-HTT+/+组和5-HTT+/-组(5-HTT+/-组EAAT1蛋白相对表达量为1.13± 0.28)比较,5-HTT-/-组EAAT1蛋白水平较高(相对表达量为1.62±0.38),差异均有统计学意义(P＜0.05).GABA能系统相关分子变化为,与5-HTT+/+组相比,5-HTT-/-组VGAT和GAT1 mRNA水平较高(相对表达量为1.36±0.44、1.47±0.35),差异均有统计学意义(P＜0.05);与5-HTT+/+组和5-HTT+/-组(5-HTT+/-组VGAT蛋白相对表达量为1.02±0.13)比较,5-HTT-/-组VGAT蛋白水平较低(相对表达量为0.74±0.16),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 5-HTT基因缺失可能激活皮层谷氨酸能系统并且抑制GABA系统,导致谷氨酸和γ-氨基丁酸失衡,可能与抑郁的发生发展有关.

目的 研究地塞米松预处理对长时程异氟醚麻醉后认知功能的影响.方法 将32只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组(C组,8只)、麻醉组(A组,9只)、地塞米松组(D组,8只)和地塞米松+麻醉组(DA组,7只).D组和DA组小鼠预先给予连续7 d地塞米松5 mg·kg-1·d-1腹腔注射后,A组和DA组小鼠行长时程异氟醚麻醉,异氟醚浓度为1.0％～1.5％,麻醉时长6 h.麻醉后14 d内检测小鼠空间记忆能力和情景记忆能力.各组小鼠于麻醉后1、3、7、14 d取右侧海马采用实时荧光定量PCR法检测糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)和N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B(N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B,NR2B)mRNA的表达情况.结果 A组小鼠在异氟醚麻醉后2～11 d,正确象限访问率下降(P<0.05).麻醉后第3、7天,A组小鼠辨别指数(discrimination index,DI)均分别低于C组、DA组,差异有统计学意义(P<0.05).异氟醚麻醉后1、3、7 d,A组小鼠海马区NR2B mRNA水平比C组均增加(P<0.05),预给予地塞米松后上调麻醉后NR2B mRNA表达水平的降低(P<0.05).结论 长时程异氟醚麻醉可引起小鼠空间记忆能力和情景记忆能力的损伤,而预给予地塞米松可改善这一损伤效应,GR和NR2B介导的信号通路可能参与其中.