目的:本研究探讨布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)对阿尔茨海默样病变及NIMA相关激酶7(NEK7)-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路的调控作用.方法:选取2、4、6月龄的5xFAD阿尔茨海默病(AD)模型小鼠和野生型(WT)小鼠,采用Western blot检测脑内BTK、NEK7及NLRP3等蛋白水平,免疫荧光染色法检测BTK、NEK7及NLRP3等蛋白的表达,免疫沉淀法检测NEK7和NLRP3的相互作用;选取3月龄5xFAD小鼠,随机分为BTK抑制剂依鲁替尼处理组和溶剂对照组,腹腔注射依鲁替尼(10 mg/kg)或溶剂连续14 d,随后进行Morris水迷宫和Y迷宫行为学实验分析各组小鼠学习与记忆能力;采用β-淀粉样蛋白42(Aβ42)侧脑室注射法构建AD模型,注射14 d后进行Morris水迷宫实验,Western blot检测脑内BTK蛋白水平;在BV2细胞中分别使用依鲁替尼预处理脂多糖(LPS)诱导的神经炎症模型或者Aβ42刺激的AD细胞模型,Western blot检测细胞NEK7、NLRP3、BTK以及p-BTK(Y223)蛋白水平的变化,免疫荧光染色法检测炎症小体,包括ASC、caspase-1、NEK7及NLRP3等蛋白的表达.结果:与WT组小鼠相比,5xFAD小鼠脑内炎症小体通路相关蛋白表达增加,NEK7蛋白表达增加,NEK7与NLRP3之间存在相互作用,AD模型小鼠脑内BTK蛋白围绕4G8斑块表达,表达量增加,且与Iba1存在共定位现象;与AD模型组小鼠相比,BTK抑制剂依鲁替尼处理组小鼠学习记忆功能有所改善;细胞实验结果显示,依鲁替尼预处理有效的抑制了Aβ42刺激后BV2细胞NLRP3炎症小体通路相关蛋白以及NEK7的表达.结论:BTK能够通过NEK7-NLRP3相互作用介导神经炎症,抑制BTK可减轻神经炎症、从而改善阿尔茨海默样病变小鼠的学习记忆功能.

目的:探讨中心体相关蛋白激酶2(NEK2)和高迁移率蛋白A2(HMGA2)在乳腺癌组织中的表达水平及其临床意义。方法:收集东阳市妇幼保健院2011年1月至2019年6月收治的79例乳腺癌组织和癌旁组织标本应用免疫组织化学法检测NEK2和HMGA2的表达水平，组间比较采用 χ2检验。 结果:乳腺癌组织中的NEK2表达率为70.89%(56/79)，明显高于癌旁组织NEK2表达率24.05%(19/79)，差异有统计学意义( t＝34.747， P<0.01)；NEK2表达水平与乳腺癌组织学分级、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移明显相关( t＝8.985、7.429、8.871、7.221， P<0.05)。乳腺癌组织中的HMGA2表达率为63.29%(50/79)，明显高于癌旁组织HMGA2表达率27.85%(22/79)，差异有统计学意义( t＝ 20.005， P<0.01)；HMGA2表达水平与乳腺癌组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关( t＝ 7.570、8.662、11.293， P<0.05)。 结论:乳腺癌组织中NEK2和HMGA2呈高表达，可用于评估乳腺癌组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况。

目的:探讨中心体相关蛋白激酶2(NEK2)和细丝蛋白A(FLNa)的表达与胃癌患者临床特征及预后之间的关系。方法:以2017年10月至2022年12月烟台市烟台山医院收治的108例胃癌患者组织标本作为研究对象，采用免疫组织化学方法检测上述胃癌组织和癌旁组织中NEK2和FLNa表达水平，结合临床资料，应用 χ2检验进行分析。 结果:胃癌组织中NEK2表达率为62.96%(68/108)，明显高于癌旁组织中NEK2表达率[11.11%(12/108)]，差异有统计学意义( χ2＝62.259， P<0.01)。胃癌组织中FLNa表达率为30.56%(33/108)，明显低于癌旁组织中FLNa表达率[80.56%(87/108)]，差异有统计学意义( χ2＝54.675， P<0.01)。NEK2表达水平与胃癌患者组织学分化程度、TNM分期(TNM stage，tumor node metastasis stage)、淋巴结转移、肿瘤大小明显相关( χ2＝4.723、6.632、4.246、7.021， P<0.05)，NEK2表达水平与胃癌患者年龄、性别无相关( χ2＝0.001、0.027， P>0.05)。FLNa表达水平与胃癌患者TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小明显相关( χ2＝5.102、6.279、5.645， P<0.05)，FLNa表达水平与胃癌患者组织学分化程度、年龄、性别无相关( χ2＝0.004、0.023、0.329， P>0.05)。 结论:NEK2在胃癌组织中高表达、FLNa在胃癌组织中低表达，NEK2和FLNa的表达水平与胃癌的形成发展密切相关。

目的:探讨AT丰富结合域1A(ARID1A)和中心体相关蛋白激酶2(NEK2)在原发性肝癌(PLC)组织中表达及其临床意义。方法:收集收集山西医科大学第二医院2015年1月至2020年12月经病理确诊的79例PLC组织标本、38例肝硬化组织标本和22例正常肝组织标本，采用免疫组织化学方法检测上述组织中ARID1A和NEK2表达，采用 χ2检验分析ARID1A和NEK2与PLC临床病理特征之间的关系。 结果:ARIDIA在正常肝组织、肝硬化组织与PLC组织中阳性表达率分别为86.36%(19/22)、55.26%(21/38)、27.85%(22/79)，两两之间比较差异有统计学意义( χ2＝6.065、24.433、8.296， P<0.05)；NEK2在正常肝组织、肝硬化组织与PLC组织中阳性表达率分别为9.09%(2/22)、34.21%(13/38)、73.42%(58/79)，两两之间比较差异有统计学意义( χ2＝4.689、29.527、16.532， P<0.05)。ARIDIA表达水平与PLC肿瘤大小、TNM分期(tumor node metastasis stage，TNM stage)和血管浸润明显相关( χ2＝5.039、6.769、5.277， P<0.05)，NEK2表达水平与PLC血管浸润、TNM分期明显相关( χ2＝5.4349、6.5142， P<0.05)。 结论:ARID1A在PLC组织中表达下调，NEK2在PLC组织中表达上调，ARID1A和NEK2表达可能与PLC的发生发展、侵袭转移有关；检测ARID1A和NEK2有助于评估PLC患者病情。

目的:探讨中心体相关蛋白激酶2(NEK2)和环氧合酶2(COX2)在前列腺癌组织的表达及两者与前列腺癌临床病理参数的关系。方法:选取广东医科大学附属医院2013年2月至2019年9月收治的77例前列腺癌组织标本和27例前列腺增生组织标本作为研究对象，应用免疫组织化学法检测两者组织中NEK2和COX2的表达水平，结合临床资料进行相关统计学分析。各组间比较采用 t检验。 结果:前列腺癌组织中的NEK2表达率明显高于前列腺增生组织NEK2表达率(61.43%比20.00%， t＝ 10.702， P<0.01)，NEK2表达水平与前列腺癌组织学分级、临床分期明显相关( t＝8.901、9.848， P<0.05)；前列腺癌组织中的COX2表达率明显高于前列腺增生组织COX2表达率(64.29%比15.00%， t＝ 15.182， P<0.01)，COX2表达水平与前列腺癌组织学分级、精囊腺侵犯、临床分期明显相关(分别为 t＝9.043、4.400、10.536， P<0.05)。 结论:NEK2和COX2在前列腺癌组织中高表达，检测NEK2和COX2有助于判断前列腺癌患者恶性程度。

目的:探讨脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)及其抑制剂胡桃醌(Juglone)对肺动脉高压(PAH)的影响及作用机制。方法:将8周龄雄性SD大鼠按随机数目表法分配原则分为3组：正常对照组(Con)、PAH组、Juglone组，每组8只。野百合碱建立大鼠PAH模型。Juglone组在造模14 d后开始给予Juglone干预，4周后测定右心室收缩压(RVSP)，处死动物并取材，计算右心肥厚指数(RVHI)。苏木精-伊红(HE)染色观察肺血管病理学改变；免疫荧光染色检测Pin1在PAH中的表达；蛋白印迹法(Western blot)检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及S期激酶相关蛋白(Skp2)/p27通路蛋白的表达。多组间均数比较采用单因素方差分析。结果:PAH组大鼠体重低于Con组[(303.11±20.41) g比(418.83±26.77) g， q＝12.912， P<0.01]，而RVSP及RVHI则高于Con组[(39.83±2.31) mmHg、(40.49±3.12)%比(17.03±2.12) mmHg、(23.52±1.61)%， q＝28.291、16.105， P<0.01]；Juglone组大鼠体重高于PAH组[(349.73±21.96) g比(303.11±20.41) g， q＝5.204， P<0.01]，RVSP及RVHI则低于PAH组[(26.89±1.92) mmHg、(31.40±3.76)%比(39.83±2.31) mmHg、(40.49±3.12)%， q＝16.063、8.637， P<0.01]。免疫荧光染色结果显示PAH组Pin1表达高于Con组[(8.39±0.19)%比(3.32±0.26)%， t＝13.000， P<0.01]。HE染色结果显示，PAH组肺小动脉管壁增厚，Juglone干预后肺小动脉壁厚度减轻。Western blot结果显示，Con组α-SMA和Pin1的表达低于PAH组(1.02±0.04、1.00±0.07比2.21±0.07、3.37±0.04， t＝14.976、27.427， P<0.01)。PAH组p-AMPK表达低于Con组(0.52±0.02比1.00±0.04， F＝25.771， P<0.01)，Juglone组p-AMPK表达高于PAH组(0.65±0.04比0.52±0.02， F＝6.972， P<0.01)；PAH组Skp2表达高于Con组(4.05±0.12比1.00±0.07， F＝51.213， P<0.01)，Juglone组Skp2表达低于PAH组(2.91±0.08比4.05±0.12， F＝19.093， P<0.01)；PAH组p27表达低于Con组(0.55±0.03比1.00±0.02， F＝28.937， P<0.01)，Juglone组p27表达高于PAH组(0.75±0.03比0.55±0.03， F＝13.051， P<0.01)。 结论:Pin1在PAH肺组织中过表达，并参与肺血管重构过程。Pin1抑制剂胡桃醌通过激活AMPK从而调控Skp2/p27信号通路抑制肺血管重构。

目的 基于基因表达综合(GEO)数据库和癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛选肺腺癌(LUAD)预后相关基因.方法 从GEO数据库中筛选出GSE118370、GSE10072、GSE115002 3个数据集,使用R软件筛选LUAD组织和相邻正常肺组织中的差异基因,对差异基因进行基因本体(GO)及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.应用STRING数据库构建与差异基因相关的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络.应用Cytoscape软件鉴定差异基因中的关键基因,采用基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库分析关键基因在LUAD组织和正常肺组织中的表达,比较关键基因高表达与低表达LUAD患者的总生存期和无病生存期,比较不同临床分期LUAD患者关键基因的表达情况.应用UALCAN数据库对LUAD组织和正常肺组织中关键基因的表达情况进行分析.结果 共获得101个上调差异基因和213个下调差异基因.GO富集分析结果显示,上调差异基因主要富集在细胞外基质组织、有丝分裂细胞周期、上皮细胞分化等生物过程中,以及细胞黏附分子结合、蛋白激酶结合等分子功能方面;KEGG通路富集分析结果显示,上调差异基因主要富集在p53信号通路、松弛素信号通路等通路.GO富集分析结果显示,下调差异基因主要富集在血管发育、细胞对细胞因子刺激的反应等生物过程中,以及细胞外基质和膜筏等细胞组成中;KEGG通路富集分析结果显示,下调差异基因主要富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用、神经活性配体-受体相互作用等通路中.最终筛选出8个关键基因,分别是BUB1有丝分裂检查点丝氨酸/苏氨酸激酶B(BUB1B)、ZW10相互作用着丝点蛋白(ZWINT)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、DNA拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)、泛素结合酶E2C(UBE2C)、细胞周期蛋白B2(CCNB2)、NIMA相关激酶2(NEK2)、纺锤体微管的装配因子(ASPM).这8个基因在LUAD组织中的表达水平均高于正常肺组织,且与LUAD患者的总生存期、无病生存期及临床分期有关.结论 BUB1B、ZWINT、CDK1、TOP2A、UBE2C、CCNB2、NEK2、ASPM基因在LUAD组织和正常肺组织中的表达具有差异,并且与LUAD患者的总生存期、无病生存期及临床分期有关.

目的:分析鼠李柠檬素通过NIMA相关激酶2(NEK2)抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制.方法:网络药理学分析鼠李柠檬素可能的作用靶点为NEK2,TCGA_LIHC数据库分析肝癌组织中NEK2表达及预后的关系.检测不同浓度鼠李柠檬素对肝癌细胞增殖及NEK2蛋白表达的影响,设置对照组和鼠李柠檬素组,检测两组细胞增殖、迁移和侵袭.观察鼠李柠檬素对移植瘤体积、质量及瘤组织中Ki67蛋白表达.构建shNEK和稳定过表达NEK2细胞,观察鼠李柠檬素抑制NEK2对肝癌细胞生物学行为的影响.结果:与癌旁组织相比,癌组织NEK2的表达明显上调(P＜0.05),且其表达量与预后有关(P＜0.05).随着鼠李柠檬素浓度越高,HepG2细胞和Hep3B细胞相对存活率降低(P＜0.05).鼠李柠檬素组增殖活性、侵袭、迁移细胞数均低于对照组(P＜0.05),移植瘤体积和质量明显低于对照组(P＜0.05),Ki67蛋白表达明显低于对照组(P＜0.05),且随着鼠李柠檬素浓度越高、作用时间越久,NEK2蛋白表达下降更为明显(P＜0.05).NEK2基因沉默可以促进细胞增殖、侵袭和迁移,NEK2过表达可以逆转鼠李柠檬素抑制的细胞增殖、侵袭和迁移(P＜0.05).结论:鼠李柠檬素可以抑制NEK2蛋白表达,抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭.

目的 分析胃癌组织中磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT)相关基因的表达及功能,寻找胃癌相关的潜在生物标志物.方法 在癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载胃癌数据,在分子特征数据库(MSigDB)下载PI3K-AKT相关基因集合,使用Wilcoxon检验和倍性变化筛选差异表达基因.通过R包"survival"进行生存分析.使用STRING数据库分析相关蛋白质交互作用(PPI)网络信息.基于Metascape对差异表达基因进行富集分析.应用CIBERSORT算法计算胃癌免疫细胞浸润水平.选取2023年3—5月在河北医科大学第四医院外三科行根治性手术的20例进展期胃癌患者标本,使用Western法检测肿瘤组织和癌旁组织中CXC基序受体4(CXCR4)的表达.结果 基于TCGA数据库,胃癌组织中上调基因10个,分别为溶质载体家族2成员1(SLC2A1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、E2F转录因子1(E2F1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、tribbles假激酶3(TRIB3)、G蛋白亚基γ转导蛋白1(GNGT1)、成纤维细胞生长因子17(FGF17)、白细胞介素4(IL-4)和CXCR4.下调基因12个,分别为蛋白激酶Cβ型异构体(PRKCB)、双特异性蛋白磷酸酶3(DUSP3)、类钙结合蛋白39(CAB39L)、蛋白激酶AMP激活催化亚基α2(PRKAA2)、腺苷酸环化酶2(ADCY2)、丝裂原活化蛋白激酶10(MAPK10)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(CDKN1A)、Toll通路中进化保守的信号传导中间体(ECSIT)、肽基脯氨酰顺/反异构酶-NIMA相互作用1(PIN1)、丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)、MAPK相互作用的丝氨酸/苏氨酸激酶2(MKNK2)和T细胞淋巴瘤侵袭转移诱导蛋白1(TIAM1).CXCR4基因的表达与患者的预后相关,103例高表达CXCR4患者的3和5年总生存率分别为33.8％和18.8％,303例低表达CXCR4患者的3和5年总生存率分别为51.3％和42.5％,差异有统计学意义(x2=16.60,P<0.001).对CXCR4进行PPI网络显示,其与其他蛋白具有广泛的相互作用.通路富集分析结果显示,在基因本体论(GO)数据库收录的通路中,CXCR4主要与细胞因子介导的信号通路、调节白细胞胞间黏附、正向调节细胞因子产生、调节肽基酪氨酸磷酸化、调节造血功能和调节防御反应密切相关.在京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据库收录的通路中,CXCR4主要与趋化因子信号通路、Th17细胞分化、破骨细胞分化、人巨细胞病毒感染、细胞因子-细胞因子受体相互作用密切相关.免疫细胞浸润结果显示,胃癌组织中,CXCR4的表达与初始B细胞浸润呈正相关(r=0.24,P<0.001),与CD8+T细胞浸润也呈正相关(r=0.25,P<0.001).Western blot法检测显示,CXCR4蛋白在胃癌组织中的相对表达水平为1.52±0.27,明显高于其在癌旁组织中的相对表达水平(0.42±0.12;t=17.05,P<0.001).结论 PI3K-AKT相关基因CXCR4在胃癌组织中高表达,且与胃癌患者预后、多种信号通路及初始B细胞和CD8+T细胞浸润相关,是胃癌潜在的生物标志物.

目的:探索资生肾气丸对醋酸致小鼠扭体模型的镇痛作用.方法:将42只小鼠随机分为7组,分别给予相应药液灌胃,末次灌胃1h后造模,建立醋酸致小鼠扭体模型.观察小鼠扭体次数,计算其扭体抑制率,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清白细胞介素-1 β(IL-1 β)、前列腺素E2(PGE2)、神经生长因子(NGF)含量,采用实时PCR(RT-PCR)检测嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)mRNA、Nod样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、NIMA相关激酶7(NEK7)mRNA的表达情况.结果:与模型组比较,随着时间的增加,资生肾气丸低剂量、中剂量、高剂量均可抑制小鼠扭体反应,降低扭体次数,增加小鼠扭体抑制率,降低小鼠血清中IL-1β、PGE2、NGF 的含量,降低P2X7RmRNA、NLRP3mRNA、NEK7mRNA的表达以抑制疼痛反应,以高剂量效果最优(P＜0.05),与吲哚美辛、痛风舒片疗效相近.结论:资生肾气丸高剂量对小鼠血清疼痛因子的降低效果显著,其机制可能与嘌吟配体P2X门控离子通道型受体7信号通路有关.