目的:探讨尼克酰胺转甲基酶(NNMT)、转化生长因子β1(TGF-β1)及Smad2在胃癌前病变(PLGC)胃黏膜组织中的表达。方法:72只SD大鼠随机数字法分为正常组和模型组，每组36只，模型组大鼠按5 ml/kg灌胃200μg/ml N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)，正常组给予等量生理盐水，造模时间8周，观察造模开始第10、22、34周大鼠胃黏膜组织变化及NNMT、TGF-β1、Smad2的表达情况，组间比较采用 t检验。 结果:正常组大鼠胃黏膜上皮细胞完整，腺体排列整齐，模型组随着造模时间的延长，炎性细胞浸润更加明显，腺体排列紊乱或扩张，并出现异型增生。正常组NNMT、TGF-β1、Smad2 mRNA表达量低于模型组第10天(1.00±0.10比1.37±0.13、1.00±0.10比1.32±0.12、1.00±0.10比1.29±0.13， t＝5.746、5.903、5.903， P<0.01)，正常组NNMT、TGF-β1、Smad2蛋白表达量低于模型组第10天(0.15±0.01比0.42±0.04、0.12±0.01比0.64±0.06、0.23±0.02比0.72±0.07， t＝5.952、5.854、5.898， P<0.01)。正常组NNMT、TGF-β1、Smad2 mRNA表达量低于模型组第22天(1.00±0.10比1.67±0.13、1.00±0.10比1.62±0.16、1.00±0.10比1.59±0.16， t＝5.945、6.136、6.348， P<0.01)，正常组NNMT、TGF-β1、Smad2蛋白表达量低于模型组第22天(0.22±0.02比0.64±0.06、0.11±0.01比0.45±0.04、0.14±0.01比0.65±0.06， t＝6.234、6.385、6.461， P<0.01)。正常组NNMT、TGF-β1、Smad2 mRNA表达量低于模型组第34天(1.00±0.10比1.86±0.19、1.00±0.10比1.82±0.18、1.00±0.10比1.76±0.17， t＝6.237、6.341、6.926， P<0.01)，正常组NNMT、TGF-β1、Smad2蛋白表达量低于模型组第34天(0.23±0.02比1.23±0.12、0.17±0.01比1.23±0.12、0.22±0.02比0.98±0.10， t＝6.925、6.345、6.126， P<0.01)。 结论:NNMT、TGF-β1及Smad2参与PLGC的发生与发展。

本研究通过免疫组织化学检测本医院食管癌患者中烟酰胺N甲基转移酶(NNMT)表达，探讨NNMT对EC9706食管癌细胞增殖、侵袭的影响及其机制。

目的:探讨GATA结合蛋白3(GATA3)和烟酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在胃癌组织的表达，其各自与胃癌患者临床特征的关系。方法:选取2019年1月至2023年2月广东医科大学附属医院收治的88例胃癌患者组织及对应癌旁组织标本，采用免疫组织化学方法检测组织标本中GATA3和NNMT表达水平，应用 χ2检验分析其表达与胃癌患者临床特征的关系。 结果:胃癌组织中GATA3表达率为40.91%(36/88)，明显低于对应癌旁组织[77.27%(68/88)]，差异有统计学意义( χ2＝24.068， P<0.01)。GATA3表达水平与胃癌患者组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关( χ2＝5.892、4.346、4.676， P<0.05)，GATA3表达水平与胃癌患者年龄、肿瘤大小、性别无明显相关( χ2＝0.050、0.004、1.411， P>0.05)。胃癌组织中NNMT表达率为71.59%(63/88)，明显高于对应癌旁组织[36.36%(32/88)]，差异有统计学意义( χ2＝21.980， P<0.01)。NNMT表达水平与胃癌患者TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小明显相关( χ2＝4.130、5.8420、5.965， P<0.05)，NNMT表达水平与胃癌患者年龄、组织学分化程度、性别无明显相关( χ2＝0.034、0.060、0.144， P>0.05)。 结论:胃癌组织中GATA3低表达、胃癌组织中NNMT高表达，GATA3和NNMT均为胃癌患者预后不良的影响因素。

目的:探讨尼克酰胺-N-甲基转移酶（NNMT）在多种肿瘤组织中的表达及其在甲状腺乳头状癌中的预后价值。方法:收集2016年1月至2021年12月浙江大学医学院附属邵逸夫医院和浙江中医药大学附属第三医院168例结直肠癌、75例胃癌、178例肺癌、15例肝癌、60例甲状腺癌、7例前列腺癌、74例乳腺癌、14例肾癌的手术切除组织石蜡样本，其中58例甲状腺乳头状癌及另外19例甲状腺炎组织样本收集时间为2016年1月至12月。制备免疫组织化学试剂盒，并进行性能测试。选择胃癌、结直肠癌、肺癌、甲状腺癌、前列腺癌、乳腺癌、肾癌组织标本及癌旁组织标本（距肿瘤边缘3 cm）和正常组织标本（距癌旁组织边缘5 cm以上）。采用免疫组织化学试剂盒检测正常组织标本、不同肿瘤组织及其癌旁组织中NNMT蛋白的表达；使用X-tile软件结合甲状腺乳头状癌肿瘤组织和癌旁组织NNMT诊断肿瘤的受试者工作特征曲线，明确NNMT诊断肿瘤的最佳临界值为41.5，NNMT蛋白低表达为<41.5，高表达为≥41.5。比较不同临床病理特征甲状腺乳头状癌患者的NNMT蛋白表达情况；采用Kaplan-Meier法分析甲状腺乳头状癌患者的总生存；采用Cox比例风险模型对总生存的影响因素进行多因素分析。结果:制备的免疫组织化学试剂盒有效期至少为12个月，具有良好的批内、批间重复性及良好的稳定性和特异性。NNMT蛋白在结直肠组织、肺组织、甲状腺组织、前列腺组织、乳腺组织、肾组织以及胃组织中均不表达或偶见低表达。NNMT蛋白在结直肠癌、胃癌、乳腺癌、肾癌、甲状腺癌、肺癌、前列腺癌组织中均高表达；在相应的癌旁组织中均低表达。甲状腺炎组织、甲状腺乳头状癌组织以及癌旁组织中NNMT蛋白高表达率分别为15.79%（3/19）、68.97%（40/58）、31.03%（18/58），甲状腺乳头状癌组织NNMT蛋白高表达率高于甲状腺炎组织和癌旁组织。甲状腺乳头状癌患者中，NNMT蛋白高表达组40例，低表达组18例。不同年龄、性别、分化程度、肿块长径、TNM分期、淋巴结转移情况、血清抗甲状腺球蛋白抗体（TgAb）水平患者的NNMT蛋白表达水平比较，差异均无统计学意义（均 P>0.05）。58例患者中位总生存时间为18.5个月，5年总生存率为90.0%；肿块长径≥2 cm患者的总生存较肿块长径<2 cm患者差（ P<0.001）；有淋巴结转移患者的总生存较无淋巴结转移患者差（ P＝0.041）；NNMT蛋白高表达患者总生存较低表达患者差，血清TgAb高水平患者总生存较血清TgAb低水平患者差，但差异均无统计学意义（均 P>0.05）。肿块长径（ HR＝35.56，95% CI 2.64~478.25， P＝0.007）、NNMT蛋白表达（ HR＝308.12，95% CI 2.21~42 958.20， P＝0.023）、血清TgAb水平（ HR＝142.85，95% CI 1.88~10 854.25， P＝0.025）为甲状腺乳头状癌患者总生存的独立影响因素。 结论:NNMT在多种肿瘤组织中高表达。NNMT表达与甲状腺乳头状癌患者的预后相关，NNMT高表达的患者较低表达患者预后差。

目的:观察烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)和肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)在食管癌组织中的表达水平，分析NNMT和TRAP1与食管癌临床病理因素之间的关系。方法:选取2018年3月至2022年10月广东医科大学附属医院治疗的73例食管癌患者的癌组织和癌旁组织标本作为研究对象，通过免疫组织化学法检测上述组织中NNMT和TRAP1表达，采用 χ2检验分析NNMT和TRAP1的表达与食管癌临床病理特征的关系。 结果:NNMT在食管癌组织中阳性表达率明显高于癌旁组织[75.34%(55/73)比21.92%(16/73)]，差异有统计学意义( χ2＝41.703， P<0.01)。NNMT表达水平与食管癌患者淋巴结转移、TNM分期、组织学分化程度明显相关( χ2＝9.156、5.095、4.434， P<0.05)，NNMT表达水平与食管癌患者性别、年龄无明显相关( χ2＝0.004、0.044， P>0.05)。TRAP1在食管癌组织中阳性表达率明显高于癌旁组织[65.75%(48/73)比12.33%(9/73)]，两者差异有统计学意义( χ2＝43.774， P<0.01)。TRAP1表达水平与食管癌患者淋巴结转移、TNM分期明显相关( χ2＝4.544、4.561， P<0.05)，TRAP1表达水平与食管癌患者组织学分化程度、性别、年龄无明显相关( χ2＝0.268、0.031、0.218， P>0.05)。 结论:食管癌组织中NNMT和TRAP1表达水平升高，NNMT和TRAP1表达与食管癌的发生发展呈明显相关。

[目的]考察生脉胶囊(SM)逆转小鼠结肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的作用和机制.[方法]利用中医药整合药理学研究平台获取生脉胶囊调节的靶基因(基因集1),在Gene Cards数据库检索到结直肠癌化疗抵抗相关基因(基因集2)和5-FU抗性相关基因(基因集3),取三者交集为研究对象,进行基因本体(GO)分析和京都基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;筛选5-FU耐药的CT26细胞(CT26/FU),构建小鼠移植瘤模型,将小鼠分为模型组、FU组(腹腔注射5-FU)和FU+SM组(腹腔注射5-FU,同时灌胃生脉胶囊).每天测量肿瘤大小,10 d后处死小鼠,称量移植瘤的质量,提取各组移植瘤的总RNA,通过Real time RT-PCR检测5-FU耐药相关基因胸苷酸合成酶(TYMS)、二氢嘧啶脱氢酶(DPYD)、DNA拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)、尼克酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)和糖皮质激素受体(NR3C1)的表达.[结果]网络药理学分析筛选出38个候选基因,富集到多条药物耐药通路上.实验表明,与模型组相比,FU组的肿瘤大小和质量没有差异,但FU+SM组肿瘤的大小和质量都明显降低.同时,与FU组相比,FU+SM组中TOP2A基因的表达降低.[结论]SM能够逆转CT26/FU的耐药性,其机制可能与下调TOP2A表达有关.

目的 评估类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)关节滑液富集的 CC 趋化因子配体 18(CC chemokine lig-and 18,CCL18)与关节破坏的相关性及其可能机制.方法 纳入 2018 年 1 月至 2023 年 4 月于中山大学孙逸仙纪念医院风湿免疫科就诊的处于疾病活动期的 RA患者并随访 1 年,比较有或无放射学进展者基线关节滑液CCL18 水平的差异.体外细胞实验明确关节滑液富集的CCL18 或重组 CCL18 对 RA-成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)或健康FLS(healthy FLS,HFLS)迁移的影响.结果 RA 滑液 CCL18 显著高于配对的血清[差值为(806±609)ng/ml,P<0.001],有 1 年放射学进展者基线关节滑液CCL18 水平显著高于无放射学进展者[(914±166)ng/ml比(264±72)ng/ml,P<0.001].RA患者滑膜组织多重免疫荧光染色及公开的单细胞测序平台示滑膜 CCL18 主要由滑膜巨噬细胞产生.使用RA患者滑液预处理 24h可激活 RA-FLS的迁移活性,而CCL18 中和抗体可使 RA-FLS迁移率降低 40%(P<0.001).重组 CCL18 既直接激活RA-FLS或 HFLS的迁移活性,又可在Transwell下室发挥趋化作用,两种作用可叠加.采用Oris动态迁移实验连续观察 60h,CCL18 激活 RA-FLS迁移活性呈剂量和时间依赖性.进一步行高通量测序示重组 CCL18 诱导HFLS产生与 RA-FLS相似的基因转录谱.实时荧光定量聚合酶链反应验证,CCL18 干预的 HFLS 中ANXA2、THBS1、TAGLN、NNMT、CDH11、HSPB1、TRIM8、SUMO1 等 8 个与迁移相关基因表达上调.结论 RA滑液富集的 CCL18 主要由滑膜巨噬细胞产生并通过促进RA-FLS迁移参与关节破坏.

[背景]砷可引起肝脏功能紊乱、脂肪变性、炎症、纤维化等不同程度肝损伤,但其机制尚不明确且缺乏有效治疗手段.[目的]从S-腺苷甲硫氨酸(SAM)代谢角度初步探讨刺梨汁对砷致大鼠肝损伤的干预作用及机制.[方法]36只Wistar大鼠按随机数字法分为 6组,每组 6只,雌雄各半.低、中、高砷剂量组分别给予 2.5、5.0、10.0 mg·kg-1 亚砷酸钠(NaAsO2)(以体重计,后同)灌胃,对照组给予10 mL·kg-1 去离子水灌胃;刺梨汁干预组给予 10 mg·kg-1 NaAsO2 灌胃 4 h后给予 10 mL·kg-1刺梨汁灌胃;刺梨汁对照组给予 10 mL·kg-1 刺梨汁灌胃;每天灌胃 1次,每周灌胃 6 d,共处理4个月.苏木素-伊红染色(HE染色)观察大鼠肝脏组织病理学改变;酶循环法、速率法分别检测大鼠肝功能指标总胆汁酸(TBA)、谷氨酰胺转移酶(γ-GT);超高效液相色谱(UPLC-MS)检测大鼠肝脏SAM、S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)含量;实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测大鼠肝脏中SAM代谢相关酶甘氨酸-N-甲基转移酶(GNMT)、烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)、磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶(PEMT)基因(Gnmt、Nnmt、Pemt)的mRNA水平.[结果]对照组大鼠肝细胞核染清晰,胞浆染色均匀,肝索呈放射状排列,无炎性细胞浸润;低、中、高砷剂量组可见不同程度的肝窦扩张、充血,炎性浸润.与对照组比较,中、高砷组TBA及高砷组γ-GT明显增加(P<0.05),且随染砷剂量增加逐渐升高(P趋势<0.05).与对照组相比,低、中、高砷剂量组SAH含量明显增高,SAM含量、SAM/SAH明显降低(P<0.05),且均与染砷剂量呈剂量-反应关系(P趋势<0.05);SAM、SAM/SAH的降低与大鼠肝功能指标TBA(SAM:r=-0.569;SAM/SAH:r=-0.607)、γ-GT(SAM:r=-0.577;SAM/SAH:r=-0.622)的增加相关(P<0.05).此外,与对照组相比,高砷剂量组Gnmt及低、中、高砷剂量组Nnmt、Pemt基因mRNA表达水平均明显上升(P<0.05),且随染砷剂量升高呈上升趋势(P趋势<0.05).Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达与SAM(r=-0.490,r=-0.567,r=-0.593)、SAM/SAH(r=-0.433,r=-0.564,r=-0.746)均呈负相关(P<0.05).与高砷剂量组相比,刺梨汁干预组大鼠肝细胞肝窦扩张减轻,炎性浸润情况得到缓解;γ-GT、TBA明显降低,且恢复至对照组水平;Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达明显降低,SAH含量下降,SAM含量及SAM/SAH回升(P<0.05).[结论]砷诱导的大鼠肝损伤与肝脏Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达升高和SAM消耗密切相关.刺梨汁可能通过抑制砷诱导的Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达异常升高及SAM过度消耗改善砷引起的大鼠肝损伤.该研究结果为从维持SAM角度防治砷中毒肝损伤提供了依据.

目的 观察烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)和肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)在食管癌组织中的表达水平,分析NNMT和TRAP1与食管癌临床病理因素之间的关系.方法 选取2018年3月至2022年10月广东医科大学附属医院治疗的73例食管癌患者的癌组织和癌旁组织标本作为研究对象,通过免疫组织化学法检测上述组织中NNMT和TRAP1表达,采用x2验分析NNMT和TRAP1的表达与食管癌临床病理特征的关系.结果 NNMT在食管癌组织中阳性表达率明显高于癌旁组织[75.34％(55/73)比21.92％(16/73)],差异有统计学意义(x2=41.703,P＜0.01).NNMT表达水平与食管癌患者淋巴结转移、TNM分期、组织学分化程度明显相关(x2=9.156、5.095、4.434,P＜0.05),NNMT表达水平与食管癌患者性别、年龄无明显相关(x2=0.004、0.044,P＞0.05).TRAP1在食管癌组织中阳性表达率明显高于癌旁组织[65.75％(48/73)比12.33％(9/73)],两者差异有统计学意义(x2=43.774,P＜0.01).TRAP1表达水平与食管癌患者淋巴结转移、TNM分期明显相关(x2=4.544、4.561,P＜0.05),TRAP1表达水平与食管癌患者组织学分化程度、性别、年龄无明显相关(x2=0.268、0.031、0.218,P＞0.05).结论 食管癌组织中NNMT和TRAP1表达水平升高,NNMT和TRAP1表达与食管癌的发生发展呈明显相关.

目的:通过蛋白质组学筛选和验证肾透明细胞癌中潜在肿瘤标志物.方法:采用比较蛋白质组学方法筛选正常肾组织和肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织中的差异表达蛋白,通过二维差异凝胶电泳(two-dimensional difference gel electrophoresis,2D-DIGE)和傅里叶变换离子回旋共振质谱(Q-Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry,FT-ICR MS)分离并鉴定16例RCC组织及其相应的正常组织中差异显著的蛋白,并进一步通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)、Western印迹和免疫组织化学在RNA和蛋白水平进行验证.结果:通过2D-DIGE共筛选出1 873个蛋白质点,选取68个表达差异大于1.5倍的蛋白质点进行鉴定,成功鉴定出51个蛋白质(P＜0.05),其中16个蛋白表达上调,35个表达下调.采用qRT-PCR和Western印迹验证16例肿瘤和对照组织,结果表明在肿瘤组织中NNMT和Annexin Ⅳ表达显著升高,而ACY1和Calbindin显著下调(P＜0.01).同时针对ACY1和Annexin Ⅳ蛋白分别在53例和47例样本中进行免疫组织化学,结果显示相较于对照组织,ACY1在肾透明细胞癌中表达显著降低(P＜0.001),而Annexin Ⅳ显著升高(P＜0.001).结论:ACY1和Annexin Ⅳ可作为肾透明细胞癌的肿瘤标志物.