目的:探究LncRNA HCG18调控CD8+T细胞抗鼻咽癌细胞的功能及机制.方法:qRT-PCR检测鼻咽癌组织及癌旁组织 HCG18表达以及人鼻黏膜上皮细胞 HNEpC和人鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、HONE-1、HNE-2 中 HCG18 表达.CNE1 细胞分为 si-HCG18 组、si-NC 组、si-HCG18+PD-L1组,HNE-2细胞分为 HCG18组、Vector组和 HCG18+sh-PD-L1组,上述各组CNE1细胞和 HNE-2细胞分别与 CD8+T 细胞共孵育 24h(si-HCG18+CD8+T 组、si-NC+CD8+T 组、si-HCG18+PD-L1+CD8+T组、HCG18+CD8+T 组、Vector+CD8+T 组和 HCG18+sh-PD-L1+CD8+T 组),酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度,细胞毒性试剂 盒检测肿瘤细胞裂解率.Western blot检测PD-L1蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证HCG18与miR-20b-5p的靶向关系,miR-20b-5p与PD-L1的靶向关系.结果:鼻咽癌组织中HCG18表达显著高于癌旁组织,CNE1、CNE2、HONE-1、HNE-2细胞中HCG18表达均显著高于 HNEpC细胞(P＜0.05).si-HCG18组CNE1细胞中PD-L1表达显著低于si-NC 组(P＜0.05),HCG18组 HNE-2细胞PD-L1表达显著高于 Vector 组(P＜0.05),相比于 si-NC+CD8+T 组,si-HCG18+CD8+T 组共孵育体系中 INF-y、TNF-α、IL-2浓度显著增加(P＜0.05),CNE1细胞裂解率显著增加(P＜0.05),相比于si-HCG18+CD8+T组,si-HCG18+PD-L1+CD8+T 组共孵育体系中 INF-γ、TNF-α、IL-2 浓度显著降低(P＜0.05),CNE1 细胞裂解率显著降低(P＜0.05).相比于Vector+CD8+T组,HCG18+CD8+T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著降低(P＜0.05),HNE-2细胞裂解率显著降低(P＜0.05),相比于HCG18+CD8+T组,HCG18+sh-PD-L1+CD8+T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著增加(P＜0.05),HNE-2细胞裂解率显著增加(P＜0.05).miR-20b-5p 为 HCG18 靶基因,PD-L1 为 miR-20b-5p 靶基因.结论:HCG18 上调鼻咽癌细胞PD-L1表达并且抑制CD8+T细胞的抗肿瘤活性.

目的:通过分析胃蛋白酶在鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）组织中的表达情况，初步探讨咽喉反流（LPR）与NPC的相关性，以及LPR对NPC患者放射治疗（简称放疗）后生活质量的影响。方法:采用连续入组的方法，选取2005—2019年于贵州医科大学附属医院和贵州医科大学附属肿瘤医院耳鼻咽喉科行放疗的NPC患者133例，其中男90例，女43例，年龄（44.32±7.47）岁；选取同期于门诊行鼻咽部活检的慢性鼻咽炎患者58例作为对照组，采用免疫组织化学染色法检测2组患者鼻咽部标本胃蛋白酶表达水平。另外同期选取188名正常人作为正常组。采用一般资料调查表、生活质量量表对放疗前和放疗后6个月内的NPC患者进行问卷调查。检测NPC患者放疗前、后和正常组的唾液中胃蛋白酶含量。采用SPSS 21.0软件进行统计学分析。结果:133例NPC患者标本中胃蛋白酶表达强阳性24例（18.05%），阳性21例（15.79%），弱阳性69例（51.88%），阴性19例（14.29%）。58例对照组标本中胃蛋白酶表达无强阳性及阳性，弱阳性10例（17.24%），阴性48例（82.76%）。NPC组的胃蛋白酶表达阳性率高于对照组，差异有统计学意义（χ2=83.15， P<0.001）。NPC患者放疗后唾液中的胃蛋白酶含量［（30.31±7.82）ng/ml］高于放疗前［（20.47±8.21）ng/ml］和正常组［（5.11±2.13）ng/ml］，放疗前唾液中的胃蛋白酶含量高于正常组，差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。放疗后，NPC患者生活质量的5个功能领域和总体生活质量下降，相关症状评分上升（ P值均<0.05）。多元线性回归分析显示，唾液中的胃蛋白酶含量是NPC患者放疗后生活质量中5个功能领域、相关症状和总体生活质量的影响因素（ P值均<0.05）。 结论:NPC组织中胃蛋白酶表达阳性率升高，NPC放疗前后唾液中的胃蛋白酶明显高于正常人，提示LPR可能参与了NPC的进程，并影响了NPC患者放疗后的生活质量。

目的:分析鼻咽癌患者血液学检查结合临床因素与放射性甲状腺功能减退(甲减)的关系。方法:回顾性分析2015-2018年在中国科学院大学附属肿瘤医院接受放疗的206例鼻咽癌患者，分析一般临床资料、血液学检查与甲减相关性，建立血液学预测模型。结果:单因素分析显示性别、N分期、甲状腺体积、平均剂量、V 20Gy、V 25Gy、V 30Gy、V 35Gy、V 40Gy、V 45Gy、纤维蛋白原含量、胆碱酯酶以及中性粒细胞计数与甲减发生率密切相关。多因素分析显示甲状腺体积、纤维蛋白原含量和胆碱酯酶是甲减的独立预测因素。 结论:联合性别、N分期、甲状腺体积、甲状腺剂量参数、纤维蛋白原含量、胆碱酯酶、中性粒细胞百分比和中性粒细胞计数指标可预测甲减发生率(AUC＝0.777)。

目的:探讨高压氧(HBO)对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其机制。方法:建立人鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤模型，取荷瘤成功裸鼠20只，按照随机数字表法分为对照组和HBO组，每组10只。HBO组裸鼠每天接受HBO暴露1次，每次1 h，连续处理2周。处理2周后，将2组裸鼠全部处死并测量肿瘤质量和体积，计算抑瘤率。采用RT-PCR实验检测移植瘤血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA的表达水平。采用免疫组化法检测移植瘤VEGF、bFGF的蛋白表达和肿瘤病理微血管密度(MVD)。采用Spearman相关性分析评估VEGF、bFGF蛋白表达与MVD的相关性。结果:HBO连续处理14 d ，HBO组移植瘤裸鼠肿瘤体质量抑制率和肿瘤体积抑制率分别为43.12%和43.06%,均明显低于对照组( P<0.01)。HBO组移植瘤组织中VEGF、bFGF mRNA的表达量均显著低于对照组( P<0.01)。免疫组化结果显示，VEGF、bFGF蛋白在肿瘤细胞胞质内表达，阳性细胞细胞质染色呈棕黄色，细胞核染色为淡蓝色。HBO组移植瘤组织中VEGF、bFGF蛋白表达均显著低于对照组( P<0.01)。免疫组化结果显示，CD-34蛋白在血管内皮细胞内表达，染色呈棕黄色，微血管形态各异、大小差别大，尚未形成规则血管腔。HBO组MVD(33.16±4.89)显著低于对照组(45.69±5.26)，差异有统计学意义( P<0.01)。Spearman相关性分析结果显示，VEGF蛋白表达与MVD呈正相关( r＝0.862， P＝0.001)，bFGF蛋白表达与MVD亦呈正相关( r＝0.745， P＝0.013)。 结论:HBO对鼻咽癌裸鼠移植瘤具有显著的生长抑制作用，其作用机制可能与降低VEGF、bFGF的表达水平有关。

目的:基于芯片数据并通过细胞实验验证鼻咽癌受m6A甲基化调控的关键放射抗拒基因。方法:从GEO数据库分别下载鼻咽癌放射抗拒基因与鼻咽癌m6A调控基因以及鼻咽癌基因mRNA表达谱芯片数据，使用R软件进行差异基因的筛选与统计学分析，采用生物信息学方法对这些基因进行生物学过程、信号通路及互作网络分析。分别通过敲低m6A调控因子、放射抵抗株构建，以实时反转录PCR（qRT-PCR）和蛋白质印迹法对上述鼻咽癌m6A差异放射抗拒基因进行筛选验证。甲基化RNA免疫共沉淀后实时定量PCR（MeRIP-qPCR）验证筛选基因的m6A修饰及与甲基转移酶3（METTL3）直接结合的能力。在鼻咽癌细胞中转染筛选基因的siRNA，电离辐射处理后，用CCK-8、EdU法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期，克隆形成实验检测放射敏感性。通过配对 t检验，比较电离辐射处理后对照组与EGLN3敲减组Fe 2+丰度及脂质过氧化程度的差异趋势。 结果:芯片数据GSE48501与GSE200792、GSE53819交集得到6个差异基因，分别是 EGLN3、 FOSL2、 ADM、 JUN、 VEGFA、 PRDM1。经TNMplot、KMplot等生信数据平台进一步筛选得到目标基因 EGLN3、 FOSL2。目标基因mRNA直接与METTL3结合并受到其介导的m6A修饰。目标基因在电离辐射后的亲代细胞中呈现剂量、时间梯度上调；在放射抵抗细胞中也显著上调。沉默 EGLN3/ FOSL2后的鼻咽癌细胞经照射处理后，细胞增殖活性下降更多，与未下调者的放射增敏比的差异有统计学意义。沉默 EGLN3后的鼻咽癌细胞经照射处理后，显著下调谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）表达，并进一步增加Fe 2+丰度及脂质过氧化程度，通过诱发铁死亡发挥放疗增敏作用。 结论:EGLN3、FOSL2在鼻咽癌中通过METTL3介导的m6A甲基化修饰发挥放射抵抗作用；下调EGLN3并联合电离辐射可以增加鼻咽癌细胞内Fe 2+丰度、脂质过氧化程度并降低GPX4表达，以铁死亡途径增鼻咽癌放射敏感性。

目的:探讨 18F-氟脱氧葡萄糖（FDG） PET/CT相关代谢参数预测鼻咽癌治疗前表皮生长因子受体（EGFR）表达水平的价值。 方法:回顾性分析2017年1月至2019年11月广西省柳州市工人医院收治的61例[男性44例、女性17例，年龄21~84(57.8±6.2）岁]经组织病理学检查确诊的鼻咽癌患者的临床资料及PET/CT显像资料。分析所有患者的 18F-FDG PET/CT图像，计算最大标准化摄取值（SUV max）、肿瘤代谢体积（MTV）、肿瘤糖酵解总量（TLG）。所有患者的肿瘤标本经链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（sp）法免疫组织化学染色法染色后，计算标本的EGFR阳性表达情况。采用 χ2检验或Fisher确切概率法分析性别、肿瘤T分期、最大径、病理分型等计数资料；SUV max、MTV、TLG两样本的组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验；年龄的组间比较采用独立样本 t检验。采用单因素Logistic回归方程分析临床病理因素、代谢参数等因素对EGFR表达水平的影响，把单因素分析中差异有统计学意义的因素纳入多因素Logistic回归分析模型中，评估EGFR表达水平的独立影响因素。绘制鼻咽癌患者代谢参数的受试者工作特征（ROC）曲线，评估其诊断效能。 结果:61例鼻咽癌患者的EGFR阳性表达率为93%（57/61），EGFR高表达34例（高表达组），EGFR低表达27例（低表达组）。EGFR高表达组的SUV max、MTV、TLG明显高于低表达组（ U=-4.197、-2.273、-2.425，均 P<0.05 ）。EGFR高表达组与EGFR低表达组在肿瘤T分期、肿瘤最大径之间的差异均有统计学意义（ χ2=11.128、5.165，均 P<0.05），而在性别（ χ2=0.720 ）、年龄（ t=-0.087）、病理分型（ χ2=1.914）之间的差异均无统计学意义（均 P>0.05）。单因素回归分析结果显示，肿瘤T分期（ OR=0.103，95% CI：0.018~ 0.582， P=0.025）、肿瘤最大径（ OR=1.612，95% CI：1.090~2.385， P=0.017）、SUV max（ OR=1.270，95% CI：1.115~1.446， P<0.01）、MTV（ OR=1.008，95% CI：1.002~1.014， P=0.015）、TLG（ OR= 1.085，95% CI：1.015~1.160， P=0.016）是EGFR表达水平的影响因素。多因素回归分析结果显示，SUV max（ OR=1.340，95% CI：1.019~1.764， P=0.036）是预测EGFR高表达的独立影响因素。ROC曲线结果表明，SUV max[曲线下面积（AUC）=0.815，95% CI：0.709~0.921， P<0.01]对于预测EGFR高表达的诊断效能优于MTV （AUC=0.682 ，95% CI：0.548~0.816， P=0.015）、TLG (AUC=0.670，95% CI：0.535~0.805， P=0.023）。SUV max、MTV、TLG临界值分别为16.39、136.29 cm 3、19.28时诊断鼻咽癌的灵敏度分别为58.8%、50.0%、41.2%，特异度分别为96.3%、85.2%、96.3%。 结论:18F-FDG PET/CT代谢参数SUV max可作为预测鼻咽癌患者EGFR表达水平的独立影响因素。

目的:构建同时表达神经纤毛蛋白质1(NRP-1)和存活素(Survivin)双基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒，通过体内外实验，观察其对鼻咽癌细胞CNE-2Z生长增殖的影响。方法:构建同时表达NRP-1和Survivin双基因的质粒(Plasmid-1)，并构建单独表达NRP-1和Survivin基因质粒(分别为Plasmid-2、Plasmid-3)。转染入鼻咽癌CNE-2Z细胞株，于荧光显微镜观察质粒转染及表达情况；以噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力；定量聚合酶链反应(PCR)及免疫印迹法(Western blot)在mRNA水平和蛋白水平上检测目的基因抑制作用。建立稳定转染裸鼠移植瘤模型，体内裸鼠成瘤实验观察质粒对肿瘤的抑制效果。原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测移植瘤细胞凋亡率。多组间比较采用单因素方差分析。结果:通过测序证实重组shRNA真核表达载体构建成功。各重组质粒表达载体成功转染CNE-2Z细胞，可见大量的癌细胞表达绿色荧光。MTT显示细胞增殖受到抑制，且双基因干扰质粒对细胞增殖的抑制作用明显强于单基因干扰质粒，差异有统计学意义(0.209±0.021比0.392±0.013、0.384±0.014， F＝354.121， P<0.05)。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)证实双基因联合沉默组和单基因沉默组均能有效抑制目的基因mRNA表达，双基因组NRP-1 mRNA(0.20±0.06)表达明显低于NRP-1单基因组(0.27±0.05)，差异有统计学意义( F＝198.437， P<0.05)；双基因组Survivin mRNA表达(0.13±0.02)明显低于Survivin单基因组(0.17±0.01)，差异有统计学意义( F＝245.647， P<0.05)。Western blot检测结果双基因组对NRP-1和Survivin蛋白的表达抑制率分别为67.41%和79.24%，与单基因组比较均有统计学意义( F＝129.354、216.411， P<0.05)。体内抑瘤实验证实，与NRP-1单基因干扰组[(0.628±0.013) cm 3]、Survivin单基因干扰组[(0.601±0.301) cm 3]比较，双基因干扰组[(0.205±0.002) cm 3]瘤体积生长明显受到抑制，差异有统计学意义( F＝49.214， P<0.05)，抑瘤率为81.71%。TUNEL实验表明双基因干扰组凋亡指数[(49.84±1.98)%]，显著高于NRP-1单基因组[(21.53±2.01)%， P<0.05]和Survivin单基因组[(19.91±2.11)%]，差异有统计学意义( F＝254.130， P<0.05)。 结论:同时表达两个不同基因的shRNA质粒载体转染鼻咽癌细胞后，可同时敲降NRP-1和survivin基因表达，与单个基因沉默比较，可以更好的促进细胞凋亡，抑制细胞生长增殖。

目的:研究放疗前格拉斯哥预后评分（Glasgow prognostic score，GPS）及相关指标与鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）放化疗患者临床预后的关系。方法:2010年1月至2016年6月于宜宾市第三人民医院、宜宾市中医医院和核工业四一六医院放化疗的NPC患者183例，回顾患者病历资料并随访至2022年6月30日，采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，Log-rank检验和Cox回归分析患者预后的影响因素。结果:中位随访时间87个月，随访期内死亡42例（23.0%），患者3年和5年总生存率分别为91.8%和61.2%。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析发现白蛋白（ALB）、淋巴细胞计数（LYM）、体重指数（BMI）和C反应蛋白（CRP）4项指标对预测患者生存状况有统计学意义（ P<0.05），最佳截断值（optimal cut-off）分别为34.85 g/L、1.65×10 9/L、22.25 kg/m 2和8.0 mg/L。单因素分析：肿瘤分期、T分级、N分级、ALB、LYM、BMI、CRP、NRS 2002评分及GPS等9个指标与患者总生存率有关（ P<0.05），Cox回归分析发现：GPS（1分、2分）和肿瘤分期（Ⅱ期、Ⅲ期）是患者预后的危险因素，其HR及 95%CI分别为2.473（1.111~5.500：1分）、5.536（1.839~16.652：2分）、1.907（1.218~2.989：Ⅱ期）和4.392（1.844~10.468：Ⅲ期）（ P<0.05）。 结论:放疗前营养、炎症和免疫状况与NPC患者临床预后有关，GPS和肿瘤分期可以作为患者预后的独立预测因子。

目的:分析全程营养支持对鼻咽癌急性放疗患者的影响。方法:以中山大学肿瘤防治中心放疗科2020年1月至2022年12月收治的鼻咽癌放疗患者92例为研究对象，采用随机数字表法将其分为对照组与观察组，每组46例。对照组采用常规营养干预，观察组采用全程营养支持。于患者放疗1 w与放疗4 w时，比较两组患者的血清总蛋白、白蛋白及血红蛋白水平，并使用急性放射反应评分标准及癌症患者生活质量量表对两组患者的毒副反应及生活质量进行评估和比较。结果:放疗1 w时，两组患者相关营养指标含量、癌症生活质量量表评分比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)；放疗4 w时，观察组相关营养指标高于对照组、放疗症状毒副反应评分低于对照组，同时观察组癌症生活质量量表中的正性条目评分高于对照组，负性条目评分低于对照组，两组比较差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:全程营养支持的应用，能够明显改善鼻咽癌放疗患者的机体营养状况，缓解放疗症状毒副反应，同时大幅度提升患者的生活质量。

目的:探索miR-18a过表达和抑制表达对人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2放疗敏感性的影响及可能的机制。方法:采用miR-18a过表达质粒miR-18a模拟物和抑制表达质粒miR-18a遏制物及空白对照质粒转染人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2细胞，实时荧光定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法（WB）检测其对毛细血管扩张性共济失调症突变（ataxia telangiectasia mutated， ATM）基因和蛋白表达的影响。构建miR-18a过表达和抑制表达的人鼻咽癌细胞CNE1和CNE2细胞株。四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测miR-18a过表达和抑制表达联合放疗处理前后对人鼻咽癌细胞株生长的影响，流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期，克隆形成实验检测细胞放疗敏感性，吖啶橙染色结合WB检测细胞自噬水平及自噬相关蛋白表达。采用SPSS 16.0软件进行统计学分析，2组间均数比较采用独立样本 t检验。 结果:100、200 nmol/L miR-18a模拟物转染CNE1和CNE2细胞48 h后，与对照组相比， ATM mRNA表达受到显著抑制（CNE1相对表达量为0.174±0.139和0.003±0.001， t值为9.939和19 470.783；CNE2：相对表达量为0.024±0.008和0.019±0.012， t值为270.230和137.746， P值均<0.001），72 h后， ATM蛋白水平显著下降；100、200 nmol/L miR-18a遏制物转染48 h后，CNE1细胞中 ATM转录显著增加（CNE1相对表达量为9.419±2.495和2.500±1.063， t值为-4.427和-41.241， P值均<0.05）；CNE2细胞中 ATM转录亦显著增加（相对表达量为7.210±0.171和115.875±15.805， t值为-62.789和-12.589， P值均<0.05），72 h后， ATM蛋白水平增高。miR-18a过表达的CNE1和CNE2细胞放疗后与CNE1和CNE2细胞单纯放疗相比，细胞增殖受到明显抑制（ P值均<0.05）；稳定抑制miR-18a表达与单纯放疗相比，细胞增殖能力增加（ P值均<0.01）。100 nmol/L miR-18a模拟物转染联合放疗组与单纯放疗组相比，CNE1细胞凋亡率增加［（22.9±2.1）%比（16.3±1.0）%， t=-4.870， P<0.01］。稳定过表达miR-18a联合放疗与单纯放疗相比，G1期和G2/M期的细胞比例显著减少［（20.2±3.0）%比（29.8±4.4）%， t=3.119；（21.5±0.9）%比（33.4±3.1）%， t=6.410， P值均<0.05］，S期的细胞比例显著增加［（56.7±4.9）%比（36.8±6.4）%， t=-4.246， P<0.05］。稳定过表达miR-18a的CNE1细胞与对照细胞相比，放疗后克隆形成能力下降、自噬溶酶体数量增加、自噬相关LC3表达增加（ P值均<0.05），p62没有明显变化。 结论:miR-18a过表达可以增强人鼻咽癌细胞放疗敏感性，其机制与其抑制 ATM表达，去除G1/S，G2/M期阻滞，诱导细胞自噬和凋亡有关。