目的:评价大鼠神经病理性痛时外周神经免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)与电压门控性钠离子通道亚型1.8(Na v1.8)的关系。 方法:SPF级健康雄性SD大鼠44只，体重210～260 g。采用坐骨神经慢性缩窄损伤(CCI)法制备神经病理性痛模型。实验Ⅰ　采用随机数字表法将20只大鼠分为2组( n＝10)：假手术组(Sham组)和CCI组。实验Ⅱ　采用随机数字表法将24只大鼠分为3组( n＝8)：假手术组(Sham组)、CCI＋生理盐水组(CCI＋NS组)和CCI＋BIP抑制剂HA15组(CCI＋H组)。于术后第4天开始，CCI＋NS组腹腔注射0.9%生理盐水1 ml，CCI＋H组腹腔注射HA15 0.7 mg/kg，连续3 d(1次/d)。实验Ⅰ和Ⅱ均于术前1 d、术后1、3、d及7 d(T 0-T 4)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)，术后第7天行为学测试完成后采用Western blot法检测背根神经节和坐骨神经BIP与Na v1.8的表达。实验Ⅰ于术后第7天行为学测试结束后采用免疫荧光检测背根神经节和坐骨神经BIP和Na v1.8的表达及共定位情况，采用免疫共沉淀实验评价BIP和Na v1.8相互作用情况。 结果:实验Ⅰ　与Sham组比较，CCI组T 1-T 4时MWT降低，TWL缩短，背根神经节Na v1.8表达下调，BIP表达上调，坐骨神经Na v1.8和BIP表达上调( P<0.05)，CCI组背根神经节和坐骨神经BIP与Na v1.8存在明显共定位，背根神经节BIP可以免疫共沉淀出Na v1.8，Na v1.8也能免疫共沉淀出BIP。实验Ⅱ　与Sham组比较，CCI＋NS组T 1-T 4时MWT降低，TWL缩短，背根神经节Na v1.8表达下调，BIP表达上调，坐骨神经Na v1.8和BIP表达上调( P<0.05)；与CCI＋NS组比较，CCI＋H组T 3，4时MWT升高，TWL延长，背根神经节和坐骨神经Na v1.8和BIP表达下调( P<0.05)。 结论:BIP可介导外周神经Na v1.8的再分布，参与大鼠神经病理性痛的病理生理机制。

Nav1.5通道是经典的心肌细胞特异型钠通道，由SCN5A基因编码。SCN5A是负责调控多种心脏功能的主要基因，在心脏发育和疾病的发生中有着重要的作用。但近年来，陆续有研究报道了神经型钠通道基因SCN10A及其编码的Nav1.8通道不仅与多种心律失常的发生有关，还与心力衰竭和肥厚心肌的离子通道重构有关，提示SCN10A/Nav1.8可能是除SCN5A/Nav1.5外，潜在的参与心脏疾病发生的钠通道。这不仅更新了以往对心脏钠通道种类的经典认识，同时也为相关疾病的治疗提供了一个新的靶点。本文就SCN10A/Nav1.8在心血管疾病中的研究进展进行综述。

背景:食管高敏感是胃食管反流病(GERD)患者烧心等症状产生的重要原因.瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)和电压门控钠离子通道1.8(NaV1.8)可能在食管高敏感的调控中发挥重要作用.目的:检测TRPV1、NaV1.8在GERD动物模型食管和迷走神经感觉神经元中的表达,探究其在食管高敏感中的作用.方法:12只雄性豚鼠随机分为对照组和GERD组,后者通过饮用盐酸胃蛋白酶溶液建立GERD模型.通过观察动物体质量变化、食管炎症组织学评分和炎症细胞因子表达验证造模成功与否.通过分析心率变异性(HRV)明确动物是否处于内脏高敏感状态.以免疫荧光法、qRT-PCR和蛋白质印迹法检测食管、迷走神经结状神经节和颈静脉神经节中的TRPV1、NaV1.8表达、分布和共表达情况.结果:GERD组食管炎症组织学评分显著高于对照组(0.85±0.43对0.22±0.45),促炎细胞因子表达增高,抗炎细胞因子表达降低,体质量增长缓慢(P均<0.05).造模前两组HRV指标低频/高频(LF/HF)比值无明显差异(P>0.05),造模后GERD组LF/HF比值显著增高(P<0.05).GERD组食管黏膜上皮和颈静脉神经节TRPV1、NaV1.8表达和共表达均显著上调(P均<0.05),结状神经节中两者表达无明显变化(P均>0.05).结论:在食管酸暴露情况下,食管黏膜上皮TRPV1、NaV1.8表达增高,迷走神经颈静脉神经节中两者表达亦显著上调,促进迷走神经通路伤害性信号的传递,最终导致食管高敏感发生.

目的:通过射频热凝损伤大鼠坐骨神经,建立热损伤引起的神经病理性疼痛动物模型.方法:取24只健康成年SD大鼠随机分为四组,每组6只.其中假手术组(Sham组)仅进行相关手术操作,RF55 组、RF65 组和RF75 组分别给予坐骨神经55℃、65℃和75℃射频热凝处理,观察术前、术后1～40天机械刺激缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)变化,并判断大鼠自发性痛行为和术后运动功能差异,确定最佳造模温度.另取20只大鼠随机分为假手术组(Sham组)和最佳造模温度65℃射频热凝模型组(RF65 组),每组10只.进行模型复制,观察术后14天光镜下坐骨神经形态学变化,RT-PCR法测定大鼠L4～L6 背根神经节Nav1.8 mRNA表达.结果:RF55 组术后3～10天MWT低于术前;TWL术后7～15天明显缩短.RF65 MWT术后5～30天降低;TWL术后7～30天缩短.RF75 MWT术后3～15天增高;TWL术后均延长.射频热凝组均在术后出现自发性疼痛行为,运动功能评分降低.坐骨神经 65℃射频热凝后,组织水肿明显,空泡增多,Nav1.8 mRNA相对表达量明显高于Sham组.结论:大鼠坐骨神经65℃射频热凝,可以复制稳定的热损伤神经病理性疼痛模型.

目的 探讨阻断神经元型Nav1.8通道对正常犬心脏交感神经节活性和心室电生理性质的影响.方法 16只健康成年犬(16～18 kg)随机分为实验组(n=8)和对照组(n=8).分离左侧心脏交感神经节,实验组向神经节内注射20 mmol/L的Nav1.8通道特异性阻断剂(A-803467)o.1 ml,对照组向神经节内注射等体积的二甲基亚枫.在基础状态和药物注射60 min后,分别记录左侧心脏交感神经节活性,并测定心室有效不应期(ERP)和动作电位时程(APD).结果 实验组在干预后心脏交感神经节的放电频率[(45±6)次／分vs (83±7)次／分,P＜0.05]和幅度[(0.03±0.01)mV vs (0.05±0.01)mY,P＜0.05]均显著降低,心室各部位ERP和APD90显著延长,ERP离散度[(13±5)ms vs (21±4)ms,P＜0.05]和APD90离散度[(22±10) ms vs (38±14) ms,P＜0.05]显著降低.而对照组以上指标无显著性改变(P＞0.05).结论 阻断Nav1.8通道可显著降低心脏交感神经节活性,提高心室电生理稳定性.阻断Nav1.8通道可能具有抑制室性心律失常的作用.

心律失常是心血管疾病中的常见病症,严重威胁人类的健康.目前针对心律失常的治疗方法颇多,由于心律失常发生机制的复杂性以及认识的局限性,总体疗效仍不理想.近年SCN10A基因编码的电压门控性钠通道Nav1.8备受关注,越来越多的学者发现应用A-803467特异性阻断Nav1.8,可能通过抑制心脏自主神经,改善心脏电重构,与Nav1.5相互作用改变心肌的电生理特性等途径,在心律失常中发挥着重要作用,为心律失常的治疗提供了新的思路.

Voltage-gated sodium channels (Navs) play an important role in human pain sensation.However,the expression and role of Nav subtypes in native human sensory neurons are unclear.To address this issue,we obtained human dorsal root ganglion (hDRG) tissues from healthy donors.PCR analysis of seven DRG-expressed Nav subtypes revealed that the hDRG has higher expression of Nav 1.7 (～ 50％ of total Nay expression) and lower expression of Navl.8 (～ 12％),whereas the mouse DRG has higher expression of Nav 1.8 (～ 45％) and lower expression of Navl.7 (～ 18％).To mimic Nay regulation in chronic pain,we treated hDRG neurons in primary cultures with paclitaxel (0.1-1 μmol/L) for 24 h.Paclitaxel increased the Nav1.7 but not Nav1.8 expression and also increased the transient Na+ currents and action potential firing frequency in small-diameter (＜50 μm) hDRG neurons.Thus,the hDRG provides a translational model in which to study "human pain in a dish" and test new pain therapeutics.

目的 观察微小 RNA-145(miR-145)对糖尿病神经病理性痛大鼠痛阈的影响,并探讨其可能机制.方法 取正常大鼠12只作为对照组(N组),糖尿病神经痛模型制备成功的 SD大鼠36只,随机分为三组:糖尿病神经痛组(D组)、糖尿病神经痛-空载组(DN组)和糖尿病神经痛-miR-145过表达组(agomiR-145组),每组12只.N 组和 D组大鼠鞘内分别注射等剂量生理盐水10 μl, DN组大鼠鞘内注射阴性对照病毒(10 μl,1×106TU/ml),agomiR-145组大鼠鞘内注射 agomiR-145(10 μl,1×106TU/ml).于鞘内注药前1 d 和注药后1、3、7、14 d 测定四组大鼠机械缩足痛阈(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL).然后采用RT-PCR法检测大鼠背根神经节(DRG)中miR-145 mRNA相对表达量,免疫荧光检测大鼠背根神经节 Nav1.8阳性细胞荧光相对强度.荧光素酶报告实验验证 miR-145的靶基因.结果 注药前1 d D 组、DN 组和 agomiR-145组 MWT 明显低于、TWL 明显短于N组(P<0.05);注药后3、7、14 d agomiR-145组MWT明显高于D组和DN组(P<0.05);注药后7、14 d agomiR-145组大鼠TWL明显长于 D 组和 DN 组(P<0.05).D 组和 DN 组DRG中 miR-145 mRNA相对表达量明显低于 N 组和 agomiR-145组,电压门控钠离子通道1.8 (Nav1.8)阳性细胞明显多于 N组和 agomiR-145组(P<0.05).荧光素酶报告实验验证 miR-145作用于 Nav 1.83'-非翻译区并调控 Nav1.8的表达.结论 miR-145通过下调背根神经节 Nav 1.8表达缓解糖尿病大鼠机械痛敏和热痛敏.

目的 评价蛋白激酶C(PKC)在大鼠慢性炎性痛维持中的作用及其与背根神经节Nav1.8表达的关系.方法 清洁级健康雌性SD大鼠30只,体重180～220 g,采用随机数字表达分为3组(n=10):对照组(C组)、慢性炎性痛组(CIP组)和PKC抑制剂组(P组).C组大鼠右后足底每天注射生理盐水20μl,连续14 d;CIP组大鼠每天足底注射前列腺素E2(PGE2) 100 ng,连续13 d,制备大鼠慢性炎性痛模型,第14天足底注射二甲基亚砜20μl;P组大鼠足底注射PGE2100 ng,连续13d,第14天足底注射PKC抑制剂GF109203X 100 nmol/20μl.于注射前1d、末次注射后1、3、7和14d(T1-4)时测定右后足机械缩足反应阈(MWT).随后处死大鼠取L4.5节段背根神经节,通过免疫荧光和Western blot法检测背根神经节Nav1.8表达.结果 与C组比较,CIP组和P组T1-4时MWT降低,CIP组背根神经节Nav1.8表达上调(P＜0.05);与CIP组比较,P组T4时MWT升高,背根神经节Nav1.8表达下调(P＜0.05).结论 背根神经节PKC激活后Nav1.8表达上调参与了大鼠慢性炎性痛的维持.

目的:探讨外周伤害性感受器蛋白激酶G-Ⅰ(protein kinase G-Ⅰ,PKG-Ⅰ)在慢性炎性痛吗啡耐受中的调节作用,为临床吗啡镇痛提供新的途径和手段.方法:根据Cre-Loxp原理,使用携带了在等位基因prkg1两侧加入LoxP的PKG-Ⅰfl/fl小鼠与以Nav1.8为启动子的SNS-Cre(sensory neuron specific-Cre)小鼠交配,从而特异性敲除了外周伤害性感受器中的PKG-Ⅰ(SNS-PKG-Ⅰ-/-).建立CFA慢性炎性痛吗啡耐受模型,并观察外周伤害性感受器PKG-Ⅰ在慢性炎性痛敏和吗啡耐受中的作用.结果:通过Cre/LoxP系统建立的SNS-PKG-Ⅰ-/-小鼠已达到特异性敲除外周伤害性感受神经元PKG-Ⅰ的目的.野生型小鼠足底注射CFA诱致慢性炎性痛条件下,单次注射吗啡可诱致显著的镇痛效应.然而,连续吗啡注射(共5d,每天2次)可诱致其镇痛效率呈现显著下降趋势,即耐受现象.外周伤害性感受器PKG-Ⅰ敲除后,连续吗啡注射诱致的耐受现象被显著削弱,而单次吗啡诱致的急性镇痛作用不受影响.结论:外周伤害性感受器PKG-Ⅰ在慢性炎性痛下的吗啡耐受过程中发挥关键作用.