目的 初步探讨Na+通道在锰神经细胞毒性中对γ-氨基丁酸(GABA)的作用.方法 SH-SY5Y细胞建立锰暴露模型,并分为空白对照组、0.25 mmol/L MnCl2、0.50 mmol/L MnCl2、1.00 mmol/L MnCl2.河豚毒素(tetro-dotoxin,TTX)0.10μmol/L、0.20μmol/L进行干预,MTT法测其细胞存活率、光学显微镜进行形态学观察、蛋白质印迹法检测Na+通道中Nav1.1通道蛋白和GABA的标记酶谷氨酸脱羧酶65(GAD65)蛋白的表达水平.结果 MnCl2可抑制细胞增殖,0.25 mmol/L MnCl2、0.50 mmol/L MnCl2、1.00 mmol/L MnCl2均可显著降低细胞存活率,差异均具有统计学意义(P<0.05);TTX可改善锰暴露所致的神经元损伤,提高细胞存活率,差异具有统计学意义(P<0.05);锰暴露可上调神经元GAD65蛋白表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05),但锰暴露未改变神经元细胞Nav1.1蛋白的表达水平,差异无统计学意义(P>0.05).结论 锰暴露所致神经元损伤及GABA能损伤可能与其Nav1.1蛋白表达无关.

目的 通过免疫组化和电生理记录来探讨大鼠小脑浦肯野神经元发育过程中电压门控钠通道亚基的表达差异特性及其与电生理特性发育成熟的相关关系.方法 将大鼠根据发育阶段分为4组:出生后5～7 d(婴幼儿组)、12～14 d(幼年组)、21～24 d(青少年组)、42～60 d(成年组).运用免疫组化染色方法检测NaV1.1、1.2、1.3、1.6在浦肯野神经元发育过程中的表达变化,并分析不同年龄段的平均光密度值量化发育过程中各亚基的差异变化特性.同时,运用离体脑片全细胞膜片钳技术记录自发性电活动研究发育过程中浦肯野神经元电生理基本特性变化.结果 NaV各亚基在大鼠浦肯野神经元发育过程中表达差异明显.NaV1.1亚基在整个发育阶段呈高表达,且随发育时间增加而增加(P＜0.05).NaV1.2在整个发育阶段无表达(P＞0.05).NaV1.3随发育表达量降低(P＜0.05),青少年期后无表达.NaV1.6婴幼年期无表达,随发育时间增加,表达量增多(P＜0.05).神经元发育早期主要表达NaV1.1和NaV1.3,而随发育增加,NaV1.3消失,NaV1.6增加.青少年期后主要表达NaV1.1和NaV1.6.NaV蛋白总量随发育逐渐增加(P＜0.05),青少年期后趋于成熟.浦肯野神经元自发放频率和兴奋性随发育逐渐增强,到青少年期达到成熟水平.NaV亚基的发育表达变化与放电频率呈正相关(r=0.9942,P＜0.05),与阈值变化呈负相关(r=-0.9891,P＜0.05).结论 NaV亚基在浦肯野神经元表达发育变化与神经元高频电生理特性的发育成熟具有相关性,提示NaV亚基的表达成熟是电生理特性不断成熟的基础.

癫痫(epilepsy,EP)是一种由大脑神经元异常放电所引起的以短暂的大脑功能失常为特征的常见脑部疾病,易反复发作,严重影响患者的健康和生活质量.研究发现,表达在中枢神经系统中电压门控钠通道(voltage-gated sodium channel,VGSC)亚型Nav1.1、Nav1.2、Nav1.3、Nav1.6、Nav1.7在癫痫发病机制中起重要作用,是相关抗癫痫药物(AEDs)的作用靶点.这些通道α亚基编码基因突变可引起不同形式的癫痫发作.本文针对表达在中枢神经系统中的上述5种VGSC亚型基因突变相关癫痫发生和临床治疗作简要综述,为癫痫的发生发展电生理机制和临床治疗研究奠定基础.

目的 研究氯化锂-匹罗卡品癫痫模型大鼠海马Ⅰ型电压门控性钠通道α亚基蛋白(Nav1.1)及其钠通道功能的变化.方法 建立氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠模型.采用免疫组织化学染色法(IHC)检测实验大鼠海马Nav1.1的表达;采用全细胞膜片钳技术检测钠通道功能(电流-电压曲线、激活曲线、失活曲线及失活后恢复曲线)的变化.结果 1.成功复制氯化锂-匹罗卡品大鼠模型.观察到实验大鼠行为学3期(急性期、潜伏期和慢性期)的表现,而空白组未见发作.2.IHC结果:致痫大鼠海马CA1区和DG区神经元结构基本正常,且Nav1.1的表达变化不明显.在CA3区,神经元变性、坏死明显,Nav1.1在神经元变性、坏死部位染色变浅,甚至消失;在变性、坏死神经元周围的正常组织中染色增强,与空白组比较,模型组大鼠Nav1.1的表达增高(0.235 ±0.008比0.210±0.002),差异有统计学意义(t’=-7.426,P＜0.05).3.全细胞膜片钳技术记录钠电流结果:与空白组比较,模型组的钠电流密度明显增加[(-319.70±28.24)pA/pF比(-229.06±26.01)pA/pF,t=8.178,P＜0.05]、激活曲线阈值下降(4.15 ±0.80比4.50 ±0.85,t=11.020,P＜0.05)、失活曲线阈值上升(7.47 ±0.53比6.24 ±0.31,t=6.940,P＜0.05)、失活后恢复时间缩短[(1.36±0.15) ms比(1.86±0.21) ms,t=6.712,P＜0.05],差异均有统计学意义.结论 反复癫痫发作可以导致Nav1.1代偿性表达增多,钠通道电流密度明显增高,而激活曲线阈值下降、失活曲线阈值上升、失活后恢复时间缩短,最终引起大鼠神经元兴奋性增高,更易引起癫痫发作.

[目的]研究中药复方熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马电压门控性Ⅰ型钠通道α亚基蛋白(Nav1.1)表达的影响.[方法]建立氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠模型.实验大鼠随机分为5组:空白组 、模型组 、熄风胶囊低剂量治疗组(熄低组)、熄风胶囊中剂量治疗组(熄中组)、熄风胶囊高剂量治疗组(熄高组).分别通过免疫组织化学染色法检测实验大鼠海马Nav1.1的表达.[结果]Nav1.1蛋白在IE大鼠海马的表达,发现致痫大鼠海马CA1区和DG区神经元结构基本正常,且Nav1.1变化不明显,在CA3区,模型组致痫大鼠神经元变性、坏死明显,Nav1.1在神经元变性、坏死部位染色变浅,甚至消失,在变性、坏死神经元周围的正常组织中染色增强.其中,模型组可见CA3区神经元退变、坏死,Nav1.1在神经元退变、坏死部位染色变浅,甚至消失,而在熄风胶囊治疗组中,随剂量增大,退变、消失的神经元减少,同时棕褐色区域减少程度减低,均与剂量成正相关,但在变性、坏死的神经元周围的正常组织中染色增强不明显,而且从定量分析来看,模型组Nav1.1的表达量增多,而各熄风胶囊治疗组却增加不明显.[结论]熄风胶囊可能通过保护海马神经元,调节IE大鼠海马神经元Nav1.1的表达,推测其可通过对钠通道的抑制作用以降低神经元细胞膜兴奋性而发挥抗癫痫作用.

目的 探讨钙调蛋白对通道的调节功能,分析钙调蛋白与Nav1.1 IQ在不同Ca2+离子浓度下的结合情况,进一步探讨钙调蛋白和Nav1.1结合的Ca2+依赖性.方法 应用pull-down技术检测不同Ca2+离子浓度下Nav1.1IQ与钙调蛋白及其突变体的结合情况.结果 CaM野生型与Nav1.1 IQ基序的结合随着钙浓度和CaM浓度的增加而增高,而CaM1234与Nay 1.1 IQ的结合也随着CaM1234浓度的增加而增高,但在不同钙浓度下的结合无变化.结论 CaM野生型和CaM1234对电压门控性钠通道Nav1.1具有调节作用.

目的 探讨钙调蛋白激酶CaMKII对电压门控性钠通道Nav1.1结合钙调蛋白CaM的调节功能,分析CaMKII在不同Ca2+浓度下对二者结合的影响,进一步探讨CaMKII、Ca2+对CaM结合Nav1.1的共同调节作用.方法 应用pull-down技术检测不同Ca2+浓度下经过CaMKI磷酸化处理后Nav1.1 IQ与CaM的结合情况.结果 无钙条件下,CaMKII不影响CaM与Nav1.1 IQ的结合;有钙条件下,CaMKII使CaM与Nay1.1结合增加.结论 钙离子存在时,CaMKII磷酸化作用使Nav1.1与CaM结合增加.

目的:探讨部分性癫痫伴热性惊厥附加症(PEFS+)中SCN1A基因检测阳性的患者表型和基因型的特征,丰富热性惊厥相关癫痫的临床诊治体系,为临床基因个体化诊治提供依据.方法:回顾性分析26例SCN1A基因突变PEFS+患者的临床特征和药物反应等临床资料以及SCN1A基因突变类型、遗传特征等.结果:26例患者中共存在27个杂合突变位点,其中截短突变3个(11.1％)、剪切位点突变3个(11.1％)、错义突变20个(74.1％)、框内缺失1个(3.7％).27个突变中16个为新生突变(59.3％),9个为遗传突变(33.3％),2个遗传方式未明.截短突变均位于远离SCN1A基因的终止密码子的基因序列上游;剪切位点突变位于可变剪切位点或深部内含子区;错义突变中11个位于Nav1.1通道的关键功能区(55.0％).患者起病年龄中位数12.0(8.0)月,6岁前发作频率中位数8.5(6.0)次/年,所有患者恰当抗癫痫药物(AEDs)治疗均获得发作缓解,38.5％的患者可出现轻或中度精神运动发育迟滞.20例次患者曾使用钠通道阻滞类AEDs,治疗效果均不佳,70％发作加重.结论:SCN1A突变相关PEFS+表型在SCN1A相关EFS谱中表现较为温和的临床特征,钠通道阻滞类AEDs可加重SCN1A相关PEFS+患者的发作并与SCN1A基因突变有关.

Voltage-gated sodium channels (VGSCs) are transiently expressed in cochlear hair cells before hearing onset and play an indispensable role in shaping spontaneous activity.In this study,we showed that Na+ currents shaped the spontaneous action potentials in developing mouse inner hair cells (IHCs) by decreasing the time required for the membrane potential to reach the actionpotential threshold.In immature IHCs,we identified 9 known VGSC subtypes (Nav1.1α-1.9α),among which Nav1.7α was the most highly expressed subtype and the main contributor to Na+ currents in developing hair cells.Electrophysiological recordings of two cochlea-specific Nav1.7 variants (CbmNav1.7a and CbmNav1.7b) revealed a novel loss-of-function mutation (C934R) at the extracellular linker between segments 5 and 6 of domain Ⅱ.In addition,post-transcriptional modification events,such as alternative splicing and RNA editing,amended the gating properties and kinetic features of CbmNav1.7a(C934).These results provide molecular and functional characteristics of VGSCs in mammalian IHCs and their contributions to spontaneous physiological activity during cochlear maturation.

背景与目的:淋巴结转移是影响结直肠癌(CRC)患者预后的关键因素.电压门控钠通道(Nav)在多种肿瘤中高表达,且与肿瘤的转移密切相关.因此,本研究探讨CRC组织中不同的Nav亚型的表达情况以及Nav的表达与CRC淋巴结转移及侵袭性的关系.方法:收集100例首发CRC患者的肿瘤组织和癌旁组织手术标本,行HE检测鉴别后,采用qRT-PCR检测两种组织中不同Nav亚型的表达.分析不同亚型Nav表达与CRC患者淋巴转移情况、脉管侵润以及神经累犯的关系.用免疫组化检测相关Nav在非转移性淋巴结和转移性淋巴结中的表达差异.结果:多种Nav亚型在CRC组织中高表达,尤其是Nav1.1、Nav1.5、Nav1.6、Nav1.8.其中Nav1.1、Nav1.6在淋巴结阳性患者的癌组织中明显高表达,而Nav1.6在有脉管侵犯的患者的癌组织中明显高表达(均P＜0.05).相关性分析结果显示,Nav1.1、Nav1.6的表达与淋巴结转移呈明显正相关(r=0.272,P=0.006;r=0.234,P=0.019);Nav1.6的表达与脉管侵润相关(r=0.341,P=0.001),而 Nav1.1的表达与神经累犯呈正相关(r=0.330,P=0.001).免疫组化检测结果显示,Nav1.6在阳性淋巴结中高表达,而Nav1.1在阳性淋巴结与阴性淋巴结中均呈低表达.结论:CRC组织中有多种Nav亚型的异常表达,其中Nav1.1和Nav1.6可能是CRC淋巴结转移的潜在标记物,且Nav1.6可能与CRC细胞的侵袭性密切相关.