目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-4699-3p在卵巢癌细胞株中的表达，观察其靶向调控线粒体核糖体蛋白S23(MRPS23)表达的能力及对卵巢癌细胞迁移和增殖的影响。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-4699-3p在卵巢癌细胞株(OVCAR-3、SKOV-3、HO-8910、OC3、A2780)和正常卵巢上皮细胞(IOSE80)中的表达。采用脂质体转染法分别将miR-4699-3p模拟物或阴性对照miR-NC转染至miR-4699-3p表达最低的细胞株，定义为实验组和对照组。qRT-PCR验证转染效率。生物信息学技术预测miR-4699-3p的候选靶基因，双荧光素酶报告基因实验鉴定其对靶基因的调控能力。qRT-PCR和Western blot检测MRPS23在mRNA和蛋白水平的表达变化。细胞计数法(CCK-8)和Transwell迁移实验分别检测miR-4699-3p对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响。结果:miR-4699-3p在卵巢癌细胞株中的表达明显低于正常卵巢上皮细胞( P<0.05)，在OVCAR-3细胞中的表达最低( P<0.01)。转染miR-4699-3p后，实验组OVCAR-3细胞中miR-4699-3p表达量显著升高( P<0.01)，证明转染成功。生物信息学软件预测，miR-4699-3p的候选靶基因可能是线粒体核糖体蛋白S23(MRPS23)，双荧光素酶报告基因实验证实miR-4699-3p可直接靶定MRPS23基因mRNA的3′-非翻译区(UTR)( P<0.01)。与对照组OVCAR-3细胞相比，实验组过表达miR-4699-3p后，MRPS23基因在mRNA和蛋白表达水平均明显降低( P<0.01)，细胞转移和细胞周期调控蛋白Twist、Slug、CDK6、Cyclin D3表达均降低( P<0.05)，OVCAR-3细胞的增殖能力降低( P<0.05)，OVCAR-3细胞迁移能力降低( P<0.01)。 结论:miR-4699-3p在卵巢癌细胞株中低表达，上调OVCAR-3细胞中的miR-4699-3p表达可通过干扰MRPS23基因表达，抑制卵巢癌细胞增殖和迁移能力。

目的:探讨人卵巢上皮癌实体瘤组织片和人卵巢上皮癌细胞株OVCAR-3来源的裸鼠原位移植瘤模型的卵巢内肿瘤浸润类型，以及人卵巢上皮癌卵巢内肿瘤浸润类型的特点。方法:将人卵巢上皮癌实体瘤组织片和人卵巢上皮癌细胞株OVCAR-3皮下移植获取瘤源，再分别植入裸鼠单侧卵巢包膜内制备裸鼠原位移植瘤模型。观察两种方法制备的肿瘤模型卵巢内的浸润类型。同时通过病理检查分析了54例国际妇产科联盟(FIGO)Ⅰ～Ⅱ期人卵巢上皮性癌的肿瘤浸润类型。结果:肿瘤在卵巢内浸润类型大致分为三类：假包膜型、假包膜浸润型和假包膜穿透型。实体瘤组假包膜型发生率(18.2%)低于细胞株组(42.3%， P<0.05)，而实体瘤组假包膜穿透型发生率(50.0%)高于细胞株组(23.1%， P<0.05)，两组间的假包膜浸润型差异无统计学意义( P>0.05)。肿瘤在卵巢内浸润类型随着种植时间而发生变化，种植初期假包膜型比例较高，随着种植时间的延长，假包膜穿透型比例增加。人卵巢上皮癌卵巢内浸润类型中，Ⅰ期假包膜型比例较高( P<0.05)，而Ⅱ期包膜穿透型比例较高( P<0.05)。两种病理类型之间其肿瘤生长类型的比例差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:人卵巢上皮癌实体瘤组织片和人卵巢上皮癌细胞株OVCAR-3制备裸鼠原位移植瘤模型有差别；相对于实体瘤组织片模型，细胞株模型更稳定，更适合后续研究。三种肿瘤卵巢内浸润类型在移植瘤种植8周时比例比较均衡，8周是后续实验最佳切入时机。

目的:探究线粒体转录终止结构域1(MTERFD1)在卵巢癌细胞恶性生物学行为中的作用及初步的分子机制。方法:实时荧光定量法检测人卵巢癌(OC)细胞系SKOV3、HEY及OVCAR3，人胚肾上皮细胞系HEK-293和正常卵巢组织中的MTERFD1 mRNA表达水平。MTERFD1过表达质粒及小干扰RNA(siRNA)转染后，MTT法检测细胞增殖，Annexin-V/PI双染色法检测细胞凋亡；ELISA法检测卵巢癌细胞中MTERFD1水平对IL-6表达的影响，MTT法检测改变IL-6水平对不同MTERFD1表达的卵巢癌细胞增殖的影响。结果:人卵巢癌细胞系HEY、SKOV3及OVCAR3中MTERFD1 mRNA水平高于正常卵巢组织和HEK-293细胞系，差异均有统计学意义( P<0.05)。OVCAR3和HEK-293细胞中MTERFD1过表达组细胞增殖活力高于空白质粒组；敲减MTERFD1后，HEY和SKOV3细胞增殖活力明显减慢，细胞凋亡率高于阴性对照，差异均有统计学意义( P<0.05)。卵巢癌细胞中IL-6水平与MTERFD1表达呈正相关，同时IL-6阻断性抗体能够逆转MTERFD1在卵巢癌细胞增殖中的作用，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:MTERFD1可能通过调节IL-6促进卵巢癌细胞增殖。

目的:探讨miR-485-5p对顺铂耐药卵巢癌细胞的影响及其机制。方法:RT-qPCR检测人正常卵巢上皮细胞株（IOSE-80）及卵巢癌细胞株（A2780、SKOV3、OVCAR3、OVCA433）中miR-485-5p的表达。构建顺铂（DDP）耐药卵巢癌细胞并检测miR-485-5p与EGFR的表达。CCK8法检测各组细胞增殖能力，流式细胞术测定细胞凋亡。结果:相对于IOSE-80细胞，各卵巢癌细胞株中miR-485-5p的表达显著下降，EGFR表达上升（均 P<0.05）。SKOV3/DDP细胞株（0.17±0.02）中miR-485-5p表达较SKOV3细胞（0.32±0.04）进一步下降（ t=5.81, P=0.004）。而SKOV3/DDP细胞中EGFR表达则较SKVO3进一步上升（ P<0.05）。SKOV3/DDP细胞转染miR-485-5p mimic能抑制细胞增殖活力、诱导细胞凋亡，转染miR-485-5p inhibitor则相反（均 P<0.05）。SKOV3/DDP细胞转染EGFR能促进细胞增殖并抑制细胞凋亡，该作用被miR-485-5p mimic部分抵消。 结论:miR-485-5p参与调控卵巢癌细胞的顺铂耐药，过表达miR-485-5p能提高卵巢癌化疗敏感性，该作用可能是通过负调控EGFR实现的。

目的:探讨RNA结合基序蛋白15(RBM15)与高级别浆液性卵巢癌(HGSOC)患者预后的关系及对肿瘤细胞的生物学功能的影响。方法:在基因表达数据库(GEO)中用GSE69428和GSE40595数据集分析RBM15在HGSOC及正常组织中的表达，在Kaplan-Meier Plotter在线网站分析RBM15与HGSOC预后的相关性。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测人正常卵巢上皮细胞以及卵巢癌细胞系中RBM15的表达。运用慢病毒转导技术进行RBM15敲降。采用平板克隆实验、细胞计数试剂盒(CCK-8)法细胞增殖实验Transwell迁移侵袭实验、药物毒性实验检测各组细胞的集落形成、增殖、迁移、侵袭能力及顺铂敏感性。采用 t检验或单因素方差分析进行统计分析。 结果:在GSE69428和GSE40595数据集中，RBM15基因在肿瘤组织中显著高表达(7.53±0.44比6.40±0.37， t＝6.215， P<0.01；6.18±0.46比5.61±0.20， t＝4.487， P<0.01)，且高表达组无进展生存期及总生存期显著高于低表达组。与正常人上皮卵巢细胞系IOSE80比较，RBM15在卵巢癌细胞系SKOV3及OVCAR3中的表达显著上调(1.56±0.09比1.00±0.04， t＝10.190， P<0.01；2.19±0.03比1.00±0.04， t＝42.360， P<0.01)。shRBM15组细胞表达明显低于shNC组细胞(SKOV3：0.59±0.05、0.78±0.04比1.00±0.04， F＝62.991， P<0.01；OVCAR3：0.27±0.01、0.45±0.03比1.01±0.13， F＝66.290， P<0.01)。shRBM15组细胞的集落形成能力明显高于shNC组(SKOV3：307±40、287±13比209±26， F＝9.715， P<0.05；OVCAR3：299±37、192±24比121±12， F＝34.591， P<0.05)。shRBM15组细胞的体外增殖能力明显高于shNC组(SKOV3：72 h 1.43±0.03、1.52±0.09比1.12±0.04， F＝40.240， P<0.01；OVCAR3：72 h 2.52±0.03、2.59±0.09比2.36±0.05， F＝9.753， P<0.05)。shRBM15组细胞的迁移能力明显高于shNC组(SKOV3：656±87、655±99比395±95， F＝12.771， P<0.01；OVCAR3：240±9、237±19比185±24， F＝13.729， P<0.01)。shRBM15组细胞的侵袭能力明显高于shNC组(SKOV3：971±109、876±160比649±65， F＝9.803， P<0.01；OVCAR3：325±37、349±38比220±55， F＝11.983， P<0.01)。在SKOV3细胞中，shRBM15组细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC 50)高于shNC组(13.91、12.13 μmol/L比9.17 μmol/L)。 结论:RBM15在HGSOC中高表达，且与较好预后相关。RBM15在浆液性卵巢癌细胞系中高表达，干扰RBM15的表达可以促进肿瘤细胞的克隆形成、增殖、迁移和侵袭，并且影响细胞对顺铂的敏感性。

目的:探讨SET结构域分支型组蛋白赖氨酸甲基转移酶1（SETDB1）基因在卵巢高级别浆液性癌（HGSOC）组织中的表达，并探讨其对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞增殖、侵袭能力的影响及其分子机制。方法:（1）收集2009年1月至2014年12月在郑州大学第一附属医院接受初次手术治疗且临床病理资料完整的90例HGSOC患者的癌组织标本，以同期收治的30例因子宫肌瘤行子宫及双侧附件切除术患者的正常卵巢组织标本为对照。应用荧光定量PCR技术、免疫组化法检测SETDB1 mRNA、蛋白在HGSOC组织、正常卵巢组织中的表达，分析SETDB1蛋白表达与HGSOC患者临床病理特征、预后的关系；（2）荧光定量PCR技术检测卵巢癌细胞系A2780、COC1、OVCAR3、SKOV3细胞中SETDB1 mRNA的表达。（3）过度表达及沉默SETDB1基因的卵巢癌细胞株的构建及筛选后，活细胞计数法检测转染后卵巢癌细胞的增殖能力，穿膜（transwell）小室实验检测转染后卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。（4）蛋白印迹（western blot）法检测转染后卵巢癌细胞中磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路关键分子［包括磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）］及上皮-间质转化（EMT）相关蛋白［包括E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、锌指转录因子（Slug）、波形蛋白（vimentin）］的表达。结果:（1）与正常卵巢组织比较，HGSOC组织中STEDB1 mRNA、蛋白的表达水平均显著增高（ P均<0.01），且STEDB1蛋白表达与HGSOC患者的手术病理分期、淋巴结转移状态均显著有关（ P均<0.05）；Kaplan-Meier法生存分析显示，SETDB1蛋白阳性表达患者的中位总生存时间显著短于SETDB1阴性表达者（分别为31.0、43.4个月， P=0.020）。（2）卵巢癌细胞系A2780、COC1、OVCAR3、SKOV3细胞中SETDB1 mRNA的表达水平，均显著高于正常卵巢细胞系T29细胞（ P均<0.01）。（3）沉默SETDB1基因表达的SKOV3-shSETDB1-1、SKOV3-shSETDB1-2细胞的增殖、侵袭和迁移能力，均显著低于其对照SKOV3-NC细胞（ P均<0.01）；过度表达SETDB1基因的OVCAR3-SETDB1细胞的增殖、侵袭和迁移能力，均显著高于其对照OVCAR3-NC细胞（ P均<0.01）。（4）与对照SKOV3-NC细胞比较，沉默SETDB1基因表达的SKOV3-shSETDB1-1、SKOV3-shSETDB1-2细胞中p-Akt、p-mTOR、N-cadherin、Slug、vimentin蛋白的表达强度均显著降低，E-cadherin蛋白的表达强度均显著增高；与对照OVCAR3-NC细胞比较，过度表达SETDB1基因的OVCAR3-pSETDB1细胞中p-Akt、p-mTOR、N-cadherin、Slug、vimentin蛋白的表达强度显著增高，E-cadherin蛋白的表达强度显著降低。 结论:SETDB1基因在HGSOC组织和卵巢癌细胞中均呈高表达，过度表达SETDB1基因可促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭，其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路及促进肿瘤细胞EMT相关。

目的:探讨聚二磷酸腺苷核糖聚合酶（PARP）抑制剂联合白细胞介素1β（IL-1β）抑制剂对同源重组修复缺陷（HRD）阴性卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞的抑制作用。方法:（1）使用HRD阴性的卵巢癌细胞系OVCAR3、CAOV3细胞，先分别给予PARP抑制剂奥拉帕利（122 μmol/L）和二甲基亚砜（作为对照）处理OVCAR3细胞，RNA测序及筛选差异表达基因；随后采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和蛋白印迹（western blot）法验证奥拉帕利处理后OVCAR3、CAOV3细胞中IL-1β蛋白的表达。（2）根据不同浓度（0、1.25、2.5、5、10、20、40、80、160、320 μmol/L）IL-1β抑制剂diacerein（为蒽醌类化合物）在OVCAR3和CAOV3细胞中的药物剂量反应曲线，确定两种细胞IL-1β抑制剂的50%抑制浓度（IC 50）。细胞实验分为4组，对照组、奥拉帕利组、IL-1β抑制剂组、奥拉帕利+IL-1β抑制剂组，活细胞计数（CCK-8）法检测4组OVCAR3、CAOV3细胞的存活率。（3）将稳定表达荧光素酶基因luciferase的OVCAR3细胞（OVCAR3-Luc细胞）按照1×10 7个/只接种于裸鼠腹腔中，建立裸鼠腹腔移植瘤模型。动物实验将16只成瘤裸鼠采用随机表法随机分为4组，对照组、奥拉帕利组、IL-1β抑制剂组、奥拉帕利+IL-1β抑制剂组，每组4只。采用荧光素酶小动物活体成像测定4组裸鼠移植瘤的荧光信号强度，免疫组化法检测移植瘤组织中增殖相关核抗原（Ki-67）蛋白的表达。（4）药物毒副反应：腹腔注射后第29天，裸鼠称重后取其外周血进行血常规和肝肾功能检测；随后处死裸鼠，取裸鼠重要器官进行HE染色评估药物对器官的损害情况。 结果:（1）RNA测序及差异表达基因筛选，共获得25个显著差异表达基因，尤以IL-1β mRNA的表达差异最显著。ELISA法检测显示，奥拉帕利处理后OVCAR3、CAOV3细胞分泌的IL-1β蛋白含量分别为（36.2±3.5）和（49.5±3.5）pg/ml，均显著高于对照OVCAR3、CAOV3细胞［分别为（5.3±0.7）和（14.7±0.7）pg/ml； P均<0.001］；western blot检测显示，奥拉帕利处理后OVCAR3和CAOV3细胞中IL-1β蛋白的相对表达水平分别为2.87±0.37、2.05±0.08，均显著高于对照OVCAR3、CAOV3细胞（均设为1.00； P均<0.001）。（2）剂量反应曲线确定IL-1β抑制剂在OVCAR3细胞中的IC 50为75 μmol/L，CAOV3细胞中为100 μmol/L。CCK-8法检测显示，对照组、奥拉帕利组、IL-1β抑制剂组、奥拉帕利+IL-1β抑制剂组OVCAR3细胞的存活率分别为（100.0±0.4）%、（63.1±6.2）%、（61.6±4.7）%、（32.9±5.2）%，CAOV3细胞分别为（100.0±3.5）%、（63.3±3.8）%、（63.8±3.5）%、（30.0±1.3）%，奥拉帕利+IL-1β抑制剂组OVCAR3、CAOV3细胞的存活率均低于对照组、奥拉帕利组、IL-1β抑制剂组（ P均<0.01）。（3）腹腔注射后第29天，荧光素酶小动物活体成像显示，奥拉帕利+IL-1β抑制剂组裸鼠移植瘤的荧光信号强度为（0.5±0.4）×10 10 p/s，显著低于对照组［（4.2±1.0）×10 10 p/s］、奥拉帕利组［（3.1±0.9）×10 10 p/s］、IL-1β抑制剂组［（2.2±0.9）×10 10 p/s； P均<0.05］；奥拉帕利+IL-1β抑制剂组裸鼠瘤重为（0.09±0.03）g，显著低于对照组［（0.25±0.05）g］、奥拉帕利组［（0.17±0.03）g］、IL-1β抑制剂组［（0.19±0.04）g； P均<0.05］。免疫组化法检测显示，奥拉帕利+IL-1β抑制剂组裸鼠移植瘤组织中Ki-67蛋白的表达水平为0.33±0.10，显著低于对照组（1.00±0.20）、奥拉帕利组（0.76±0.07）、IL-1β抑制剂组（0.77±0.12； P均<0.05）。（4）药物毒副反应：腹腔注射后第29天，奥拉帕利+IL-1β抑制剂组裸鼠的体重、血常规和肝肾功能，分别与对照组、奥拉帕利组、IL-1β抑制剂组比较，差异均无明显统计学意义（ P均>0.05）。重要器官包括心、肝、脾、肺和肾，镜下观察均未见明显致死性损害。 结论:PARP抑制剂奥拉帕利联合IL-1β抑制剂在HRD阴性的卵巢癌细胞中显示出显著的肿瘤抑制作用，且无明显的药物毒副反应。

目的:探究长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）NRSN2-AS1在卵巢癌组织中表达的临床意义及体外生物学效应。方法:临床收集84例卵巢癌组织及相应正常癌旁组织，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测NRSN2-AS1表达，并分析其与患者临床资料的关系；体外培养人卵巢上皮细胞HOSEpiC、人卵巢癌细胞A2780及OVCAR3，于A2780及OVCAR3细胞中分别转染过表达及干扰NRSN2-AS1载体及相应的对照载体，作为本研究的空白组、过表达组及对照组、干扰组；CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化；Transwell侵袭及迁移实验检测细胞转移能力的变化，RT-qPCR技术及蛋白质印记（Western blot）技术检测细胞NRSN2-AS1潜在下游基因SRY相关HMG盒转录因子12（SOX12）mRNA及蛋白的表达。结果:NRSN2-AS1在卵巢癌组织及细胞中显著高表达（ P<0.05），且其高表达与患者预后不良、淋巴结转移及高临床分期显著相关（ P<0.05）；空白组及过表达组NRSN2-AS1表达分别为：1.00±0.08及5.78±0.41，SOX12 mRNA表达分别为：1.00±0.10及3.08±0.23；SOX12蛋白表达分别为：1.00±0.08及7.26±0.39，每视野侵袭细胞数分别为：22.7±4.9个及79.0±6.2个，每视野迁移细胞数为26.5±4.1个及43.5±4.5个；对照组及干扰组NRSN2-AS1表达分别为：1.00±0.11及0.37±0.04，SOX12 mRNA表达分别为：1.00±0.07及0.59±0.05；SOX12蛋白表达分别为：1.00±0.07及0.36±0.03，每视野侵袭细胞数68.3±6.1及30.6±5.5，每视野迁移细胞数为85.2±7.0个及22.7±4.2。相比空白组，过表达组SOX12 mRNA及蛋白表达均显著增高（ P<0.05），细胞增殖及转移能力显著增强（ P<0.05）；相比对照组，干扰组SOX12 mRNA及蛋白表达均显著降低（ P<0.05），细胞增殖及转移能力显著减弱（ P<0.05）。 结论:NRSN2-AS1在卵巢癌组织中表达上调，且与患者预后不良及病情进展密切相关，体外可促进SOX12的表达及细胞的恶性行为。

目的:探讨LINC00958在卵巢癌细胞中对增殖和侵袭中的作用。方法:利用在线软件GEPIA分析TCGA数据库中LINC00958在多种肿瘤组织中的表达；采用qRT-PCR检测转染过表达载体和siRNA后LINC00958的表达水平转染效率；应用CCK8法检测LINC00958对卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3增殖能力的影响；采用Transwell实验检测LINC00958对卵巢癌细胞侵袭能力的影响。结果:经GEPIA软件分析TCGA数据库发现LINC00958在膀胱尿路上皮癌、宫颈鳞癌、头颈部鳞状细胞癌、肺鳞状细胞癌、卵巢浆液性囊腺癌、甲状腺癌、子宫内膜癌和子宫肉瘤等8种肿瘤中表达增加，在急性髓系白血病、皮肤恶性黑色素瘤和睾丸精原细胞肿瘤等3种肿瘤中表达下降;过表达LINC00958后，可增加卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力（ P<0.05），而抑制LINC00958的表达可降低卵巢癌细胞的增殖和侵袭（ P<0.05）。 结论:LINC00958可促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭。

目的:探讨长链非编码RNA MCM3AP-AS1（MCM3AP antisense RNA 1，MCM3AP-AS1）靶向调控微小RNA-876-5p（miR-876-5p）对卵巢癌SKOV3细胞增殖和转移的影响。方法:选取2017年4月至2018年5月温州市中心医院妇产科收治的40例卵巢癌患者癌组织和相应癌旁组织标本，及卵巢癌细胞系（CaOV3、SKOV3、OVCAR3、OV90）和正常卵巢上皮细胞系（HOSE）。采用实时定量聚合酶链式反应法（qRT-PCR）检测卵巢癌组织和细胞中lncRNA MCM3AP-AS1的表达水平；建立lncRNA MCM3AP-AS1低表达模型，采用MTT实验检测卵巢癌细胞增殖，采用transwell检测卵巢癌细胞的迁移和侵袭水平；采用生物信息分析、荧光素酶实验、qRT-PCR验证lncRNA MCM3AP-AS1和miR-876-5p的靶向关系。结果:lncRNA MCM3AP-AS1在卵巢癌组织中的水平为（8.45±0.86），高于癌旁组织（4.45±0.45）；在卵巢癌细胞中的水平为CaOV3（1.53±0.12），SKOV3（1.82±0.23），OVCAR3（1.34±0.12），高于正常卵巢上皮细胞HOSE（1.00±0.10）；下调lncRNA MCM3AP-AS1能降低卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭；lncRNA MCM3AP-AS1能与miR-876-5p相互作用并下调其表达。结论:lncRNA MCM3AP-AS1可通过靶向抑制miR-876-5p促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。