目的:探讨微小核糖核酸876-5p(micro ribonucleic acid-876-5p, miR-876-5p）通过靶向叉头盒蛋白M1(forkhead box M1，FOXM1）对儿童髓母细胞瘤（medulloblastoma ，MB）细胞增殖的影响。方法:收集2018年1月至2020年10月在湖南省儿童医院进行手术治疗的30例MB患儿临床资料，其中男21例，女9例，年龄为（10.42±2.17）岁，范围为5~14岁。通过qPCR检测肿瘤组织和癌旁组织标本中miR-876-5p和FOXM1、TAp73、Beclin1、Livin、Cyclin D1在mRNA水平的表达情况；通过CCK8和Transwell实验观察过表达miR-876-5p后对MB细胞的增殖和侵袭能力的影响；通过qPCR和WB实验检测过表达miR-876-5p前后，FOXM1、TAp73、Beclin1、Livin、Cyclin D1在蛋白或mRNA水平表达的变化。结果:miR-876-5p在MB中表达显著降低（ P<0.001），过表达miR-876-5p能够显著抑制MB细胞的增殖和侵袭能力（ P<0.01）。FOXM1在MB中表达上调，其表达与miR-876-5p呈负相关（ r=-0.527， P=0.013 ）。在MB细胞中过表达miR-876-5p能够抑制FOXM1的表达。此外，在MB中，miR-876-5p的表达与TAp73和Beclin1呈正相关（ r=0.506， P=0.008； r=0.535， P=0.003），与Livin和Cyclin D1 mRNA呈负相关（ r=-0.496， P= 0.011； r=-0.574 ， P=0.005 ）。与之相反，FOXM1的表达与TAp73和Beclin1呈负相关（ r=-0.554 ， P=0.007 ； r=-0.497， P=0.016 ），与Livin和Cyclin D1呈正相关（ r=0.502， P=0.009 ； r=0.476， P=0. =0.015 ）。此外，miR-876-5p在MB细胞中可以下调Livin和Cyclin D1的表达，上调TAp73在Beclin1的表达。 结论:miR-876-5p具有抑制MB增殖和侵袭的作用，而FOXM1可能促进MB增殖和侵袭。miR-876-5p可能通过靶向调控FOXM1促进机体内抑癌基因的表达并抑制致癌基因表达，最终抑制MB细胞增殖和侵袭。

目的:探讨长链非编码RNA MCM3AP-AS1（MCM3AP antisense RNA 1，MCM3AP-AS1）靶向调控微小RNA-876-5p（miR-876-5p）对卵巢癌SKOV3细胞增殖和转移的影响。方法:选取2017年4月至2018年5月温州市中心医院妇产科收治的40例卵巢癌患者癌组织和相应癌旁组织标本，及卵巢癌细胞系（CaOV3、SKOV3、OVCAR3、OV90）和正常卵巢上皮细胞系（HOSE）。采用实时定量聚合酶链式反应法（qRT-PCR）检测卵巢癌组织和细胞中lncRNA MCM3AP-AS1的表达水平；建立lncRNA MCM3AP-AS1低表达模型，采用MTT实验检测卵巢癌细胞增殖，采用transwell检测卵巢癌细胞的迁移和侵袭水平；采用生物信息分析、荧光素酶实验、qRT-PCR验证lncRNA MCM3AP-AS1和miR-876-5p的靶向关系。结果:lncRNA MCM3AP-AS1在卵巢癌组织中的水平为（8.45±0.86），高于癌旁组织（4.45±0.45）；在卵巢癌细胞中的水平为CaOV3（1.53±0.12），SKOV3（1.82±0.23），OVCAR3（1.34±0.12），高于正常卵巢上皮细胞HOSE（1.00±0.10）；下调lncRNA MCM3AP-AS1能降低卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭；lncRNA MCM3AP-AS1能与miR-876-5p相互作用并下调其表达。结论:lncRNA MCM3AP-AS1可通过靶向抑制miR-876-5p促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的 探讨LINC00707 对缺氧缺血脑损伤后海马神经元凋亡及氧化应激的影响及其可能作用机制.方法 采用谷氨酸与D-Hanks液处理大鼠海马神经元细胞HT-22 建立缺氧缺血脑损伤模型,si-NC、si-LINC00707、miR-NC、miR-876-5p mimics、anti-miR-NC+si-LIN C00707、anti-miR-876-5p+si-LINC00707 分别转染至HT-22 细胞后进行缺氧缺血处理;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LINC00707、miR-876-5p的表达量;利用试剂盒检测丙二醛(MDA)水平与超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测LINC00707 与miR-876-5p的靶向关系;Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶(Cleaved-caspase)-3 蛋白表达量.结果 缺氧缺血脑损伤后HT-22 细胞中LINC00707 的表达量显著升高(P＜0.05),miR-876-5p的表达量显著降低(P＜0.05);缺氧缺血脑损伤后HT-22 细胞中转染si-LINC00707 或转染 miR-876-5p mimics 后,MDA 的水平、细胞凋亡率和 Cleaved-caspase-3 蛋白水平显著降低(P＜0.05),SOD、CAT 的活性显著升高(P＜0.05);LINC00707 可靶向调控 miR-876-5p 的表达;共转染 anti-miR-876-5p+si-LINC00707 可降低转染si-LINC00707 对缺氧缺血脑损伤后HT-22 细胞凋亡及氧化应激的作用.结论 干扰LINC00707 表达可通过靶向调控miR-876-5p表达而抑制缺氧缺血脑损伤后海马神经元凋亡及氧化应激.

本研究利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)基因表达综合数据库(GEO)下载获取甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC) mRNA表达谱芯片(7例PTC样本VS 7例正常组样本,登录号为GSM85-215～GSM85228)及miroRNA高通量测序数据(3例PTC样本VS 3例正常组样本,GSM 1388420～GSM 138-8425).通过Qlucore Omics Explorer (QOE) 3.2、DAVID 6.7、STING 9.1、miRecords等分析软件对PTC差异基因及microRNA进行综合生物信息学分析.筛选出来497个甲状腺乳头状癌相关致病基因及86个相关microRNAs;其中,致病基因中上调表达的有257个,下调表达的有240个;microRNAs中上调表达的有47个,下调表达的有39个.对其进行生物信息学分析发现,ERBB3、TNNT1、MYL1、POSTN基因及hsa-miR-183-5p (ERBB4)、hsa-miR-139-5p (SUV39H1)、hsa-miR-152 (MAML 1)、hsa-miR-1 (FOXD3)、hsa-miR-146b-5p(MEF2C)、hsa-miR-152 (DOT1L)、hsa-miR-493-5p (FBXW7)、hsa-miR-876-5p (PIK3R1)、hsa-miR-183-3p(MDM2)、hsa-miR-382-3p (CD80)、hsa-miR-18 lb-5p (SIRTl)、hsa-miR-874-5p (MTOR)、hsa-miR-876-5p(GPRC6A)等microRNAs-靶基因参与涉及ErbB信号通路、细胞凋亡信号通路、B细胞受体信号通路、磷脂酰肌醇代谢信号通路等,在PTC疾病发生发展中可能起着重要作用.从分子水平上分析甲状腺乳头状癌相关致病基因及microRNAs,为揭示PTC发病机制、药物研发及临床诊断治疗提供新的思路和依据.

背景:目前已有研究发现lncRNA GAS5激活了退变椎间盘髓核细胞(nucleus pulposus cels,NPC)内的线粒体凋亡通路,进而促进髓核细胞的凋亡.目的:探索有关椎间盘退变的ceRNA网络调控机制,寻找治疗椎间盘退变的潜在靶点.方法:计算机检索GEO数据库,下载lncRNA微阵列芯片GSE56081,重注释比对平台文件中的探针核酸序列,运用Perl软件将芯片系列矩阵文件中的探针ID转化为基因名,并添加基因属性.运用R软件分析系列矩阵文件得到差异的lncRNA与mRNA.在miRcode平台下载高度保守的miRNA家族文件,比对后得出lncRNA-miRNA关联.根据miRDB数据库、miRTarBase数据库和TargetScan数据库预测miRNA调控的mRNA,与芯片数据差异分析得到的差异mRNA取交集,得出miRNA-mRNA关联.构建ceRNA网络,运用String数据库分析蛋白互作关系,筛选关键蛋白互作模块.使用DAVID数据库分析关键蛋白模块的功能与相关通路,挖掘关键ceRNA网络.结果与结论:退变椎间盘的髓核细胞中差异lncRNA与mRNA竞争miRNA,从而调控蛋白合成,最终影响泛素介导的蛋白水解、Wnt信号通路和PI3K-Akt信号通路.并发现7种miRNA(hsa-miR-107、hsa-miR-449c-5p、hsa-miR-301b-3p、hsa-miR-135a-5p、hsa-miR-17-5p、hsa-miR-20b-5p、hsa-miR-876-3p)可能在导致椎间盘退变的蛋白质分解代谢与细胞凋亡的过程中发挥关键作用.

As the most common cancer and one of the leading causes of cancer-associated mortality,breast cancer continues to need more key molecules to regulate its progression.F-box and leucine-rich repeat protein 19 antisense RNA 1 (known as FBXL19-AS1) is a long non-coding RNA (IncRNA) which has been reported as an oncogene in several types of human cancers.However,the specific downstream targets of FBXL19-AS1 remain unknown.In this study,we set out to find more reliable downstream molecules of FBXL19-AS1 in breast cancer.FBXL19-AS1 was expressed at a high level in breast cancer cells.Loss-of-function experiments revealed that silencing FBXL19-AS1 could impair cell proliferation and induce cell apoptosis in breast cancer.In addition,the location of FBXL19-AS1 in the cytoplasm was detected by fluorescent in situ hybridization assay,while FBXL19-AS1 regulated the expression of Forkhead box M1 (FOXM 1) by directly absorbing miR-876-5p.Through rescue assays,it was observed that FOXM1 overexpression recovered the inhibited tumor growth caused by FBXL19-AS1 downregulation.We affirmed the function of FBXL19-AS1 in breast cancer and described the mechanism of the FBXL19-AS1/miR-876-5p/FOXM1 axis.The current work presents the molecular mechanism which underlies FBXL19-AS1 in breast cancer and suggests a comprehensive,feasible FBXL19-AS1-mediated therapeutic approach for treating breast cancer.

目的 探究微小RNA(microRNA,miR)-876-5p通过靶向F-box蛋白31 (FBXO31)促进卵巢癌细胞增殖和侵袭的机制.方法 对TCGA数据库中,miR-876-5p和FBXO31在卵巢癌患者中的表达特点和与预后的关系进行分析.通过双荧光素酶报告验证miR-876-5p靶向FBXO31.将卵巢癌细胞系SKOV-3分为4组:对照组、mimic组、mimic+FBXO31组和FBXO31组.通过质粒转染技术过表达miR-876-5p和(或)FBXO31.qPCR和Western blot检测RNA或蛋白的表达水平.分别通过CCK-8法、Transwell实验检测各组的细胞生长和侵袭能力.通过荷瘤裸鼠实验在体内验证miR-876-5p和FBXO31对肿瘤生长的影响.结果 在TCGA数据库中,miR-876-5p高表达的患者的生存率显著低于miR-876-5p低表达患者(P＜0.05).卵巢癌患者FBXO31水平显著降低,卵巢癌分期的越高FBXO31水平越低,并且FBXO31高表达卵巢癌患者的生存率显著高于FBXO31低表达(P＜0.05).miR-876-5p直接靶向FBXO31.过表达miR-876-5p抑制FBXO31 mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.05),过表达FBXO31显著逆转miR-876-5p对FBXO31的抑制作用(P＜0.05).Mimic组的细胞活力和细胞迁移能力显著高于对照组(P＜0.05),FBXO31组的细胞活力和细胞迁移能力显著低于对照组(P＜0.05),并且mimic+FBXO31组的细胞活力和细胞迁移能力显著低于mimic组(P＜0.05).miR-876-5p组荷瘤裸鼠的肿瘤体积和质量均显著高于对照组(P＜0.05),miR-876-5p+FBXO31组肿瘤体积和质量显著低于miR-876-5p组(P＜0.05).结论 miR-876-5p具有促进卵巢癌进展的作用,而FBXO31可能抑制卵巢癌进展.miR-876-5p直接靶向FBXO31,并且miR-876-5p过表达可通过抑制FBXO31促进卵巢癌细胞生长、侵袭,起到抑制卵巢癌生长的作用.

目的 探讨长基因间非编码RNA 00689(LINC00689)对膀胱癌细胞T24增殖、凋亡的影响和可能机制.方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析膀胱癌组织、癌旁组织、T24细胞以及正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中LINC00689和miR-876-5p表达.双荧光素酶报告基因和RT-qPCR验证LINC00689对miR-876-5p的调控作用.将T24细胞分为si-NC组、si-LINC00689组、miR-NC组、miR-876-5p组、si-LINC00689+anti-miR-NC组和si-LINC00689+anti-miR-876-5p组.运用细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞术分析细胞活力和凋亡,蛋白质免疫印记(Western blot)分析细胞周期素D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)表达.结果 膀胱癌组织、T24细胞中LINC00689表达升高,miR-876-5p表达降低(P<0.05).LINC00689负调控miR-876-5p表达.与si-NC组比较,si-LINC00689组细胞活力、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达降低,凋亡率、p21和Bax蛋白升高(P<0.05).与miR-NC组比较,miR-876-5p组细胞活力、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达降低,凋亡率、p21和Bax蛋白升高(P<0.05).与si-LINC00689+anti-miR-NC组比较,si-LINC00689+anti-miR-876-5p组细胞活力、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达升高,凋亡率、p21和Bax蛋白降低(P<0.05).结论 抑制LINC00689通过负调控miR-876-5p能够降低膀胱癌T24细胞的增殖能力,并促进细胞凋亡.

目的 探讨环状RNA分子circRNA_103736和circRNA_103737在皮肤鳞癌中的表达及作用.方法 利用CIRC pedia数据库筛选出与皮肤鳞癌相关的环状RNA分子circRNA_103736和circRNA_103737及其对应基因La蛋白相关家族1(LARP1),选择2017年1月至2019年1月在北京大学深圳医院确诊为皮肤鳞癌患者及自身正常皮肤组织30例.应用荧光定量PCR分别检测两种环状RNA分子及对应基因LARP1在其皮肤鳞癌患者和自身对照组的表达水平,并对其进行生物信息学分析.结果 荧光定量PCR分析结果显示,与自身正常对照组相比,皮肤鳞癌患者组织中LARP1的mRNA及其所对应的环状RNA(circRNA_103736和circRNA_103737)均有明显程度的增加,且差异有统计学意义(P＜0.05).生物信息学结果提示,能与circRNA_103736和circRNA_103737相结合的miRNA包括hsa-miR-876-5p等.结论 皮肤鳞癌患者的circRNA_103736和circRNA_103737及其对应基因LARP1的表达上调,两种环状RNA分子可能通过竞争性结合hsa-miR-876-5p来参与皮肤鳞癌的发生.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)微小染色体维持蛋白3相关蛋白-反义链1(MCM3AP-AS1)靶向调控miR-876-5p对结直肠癌(CRC)细胞的增殖和迁移的作用.方法 实时定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测CRC组织和细胞中MCM3AP-AS1的表达;用MTT法、划痕愈合实验和Transwell小室法检测CRC细胞的增殖和迁移;采用生物信息分析、双荧光素酶基因报告实验、RT-qPCR验证MCM3AP-AS1和miR-876-5p的靶向关系.结果 与非肿瘤组织和正常结直肠上皮细胞系相比,MCM3AP-AS1在CRC组织和细胞系中表达上调(P<0.05);敲低MCM3AP-AS1能抑制CRC细胞增殖和迁移(P<0.05);生物信息学分析、双荧光素酶基因报告实验和RT-qPCR表明MCM3AP-AS1与miR-876-5p可相互作用;miR-876-5p可削弱MCM3AP-AS1对CRC细胞增殖和迁移的促进作用(P<0.05).结论 MCM3AP-AS1可以通过吸附miR-876-5p促进CRC细胞的增殖和迁移.