目的 探究氟维司群对血小板功能的影响及相关机制.方法 将不同浓度的氟维司群(0.1、1和10 μmol/L)及溶剂对照(0.25％二甲基亚砜DMSO)分别与人血小板在体外进行共孵育,然后用聚集仪检测其对凝血酶、胶原、U46619刺激的血小板聚集及ATP释放的影响;流式细胞术检测血小板表面P-选择素表达和整合素αⅡbβ3活化情况;荧光显微镜观察氟维司群对纤维蛋白原表面血小板铺展的影响;蛋白免疫印迹检测AKT Ser473和PKC蛋白的磷酸化水平.结果 氟维司群能够抑制凝血酶、胶原、U46619诱导的血小板聚集和ATP释放,抑制血小板P-选择素表达和整合素αⅡbβ3活化和血小板铺展,降低AKT Ser473和PKC的磷酸化水平.结论 氟维司群抑制血小板聚集、释放、铺展功能,其机制与调控AKT和PKC蛋白磷酸化水平有关,可作为潜在的抗血小板药物.

目的:通过体外实验探讨生长抑素5（SSTR5）激活对垂体催乳素腺瘤激素分泌的抑制作用及其机制。方法:使用前期研究中构建好的SSTR5过表达的GH3细胞系作为垂体催乳素腺瘤的体外细胞模型，使用SSTR5激动剂BIM23052联合其他G蛋白下游通路的抑制剂进行细胞刺激，荧光素酶报告基因检测Prl-luc启动子活性，酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒检测细胞上清催乳素（PRL）的浓度。Student’s t检验和单向方差分析进行组间统计分析。 结果:预处理Gi蛋白抑制剂百日咳毒素后GH3 SSTR5细胞中Prl启动子活性从对照组[Ctrl （Control）组（100.00±6.82）%比BIM组（BIM23052）组（69.08±7.09）%， t＝5.43， P<0.01]到干预组[Ctrl组（107.86±12.40）%比BIM组（115.51±11.76）%， t＝0.76， P>0.05]，预处理百日咳毒素后细胞上清PRL的浓度变化从对照组[Ctrl组（100.00±12.38）%比BIM组（70.60±9.12）%， t＝3.31， P<0.05]到干预组[Ctrl组（91.31±9.81）%比BIM组（89.91±9.48）%， t＝0.18， P>0.05]，百日咳毒素可消除BIM23052对Prl启动子活性的影响；beta-ARK过表达激活G beta-gamma亚单位，Prl启动子活性从空白转染组[Ctrl组（100.00±3.27）%比BIM组（64.70±2.26）%， t＝15.38， P<0.01]到betaARK过表达组[Ctrl组（96.91±5.36）%比BIM组（70.12±6.82）%， t＝5.35， P<0.05]，beta-ARK过表达并不影响BIM23052对Prl启动子活性的抑制作用。使用cGMP类似物Rp8-pCPT-cGMPS、PKG抑制剂KT5823和PKG inhibitor、PKC广谱抑制剂Staurosporin和G?6983预处理GH3 SSTR5细胞，均不影响BIM23052对Prl启动子活性的抑制作用，其中cGMP类似物Rp8-pCPT-cGMPS为，Prl启动子活性从对照组[Ctrl组（100.00±3.97）%比BIM组（52.98±5.16）%， t＝12.5， P<0.01]到干预组[Ctrl组（95.99±5.38）%比BIM组（60.23±2.63）%， t＝10.35， P<0.01]；PKG抑制剂KT5823为，Prl启动子活性分别从对照组[Ctrl组（100.00±2.50）%比BIM组（72.64±0.45）%， t＝18.66， P<0.01]到干预组[Ctrl组（93.13±9.31）%比BIM组（53.54±11.50）%， t＝4.30， P<0.05]；PKG inhibitor为，对照组[Ctrl组（100.00±7.55）%比BIM组（64.07±3.49）%， t＝7.48， P<0.01]到干预组[Ctrl组（96.27±4.89）%比BIM组（74.17±1.16）%， t＝7.62， P<0.01]；Staurosporin为，不同浓度梯度0、5、50、100 nmol/L，Prl启动子活性分别从Ctrl组[（100.00±5.07）%、（102.03±1.08）%、（131.85±4.33）%、（109.62±7.98）%]到BIM组[（68.35±4.63）%、（74.24±9.64）%、（90.18±8.87）%、（85.24±6.63）%， P<0.01]；G?6983为，Prl启动子活性分别从对照组[Ctrl组（100.00±7.81）%比BIM组（66.09±7.66）%， t＝4.79， P<0.05]到干预组[Ctrl组（92.37±5.78）%比BIM组（77.31±1.54）%， t＝3.43， P<0.05]，提示PKG和PKC抑制剂均不影响BIM23052对Prl启动子活性的抑制作用。 结论:SSTR5激活对PRL合成的抑制作用是通过Gi alpha介导的，而不是通过涉及PKG或PKC的替代途径。

目的:探讨老年2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者血清蛋白激酶Cε(PKCε)活性与胰岛素抵抗的相关性。方法:回顾性分析2017年10月至2018年10月西安交通大学医学院第二附属医院住院的T2DM患者229例，根据病情分为T2DM组112例，T2DM＋NAFLD组117例，另选同期健康对照组110例。比较3组入选者临床资料和实验室检查结果，计算稳态模型的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)，采用酶联免疫吸附法测定血清PKCε活性，并分析其与胰岛素抵抗的相关性。结果:T2DM＋NAFLD组患者血清PKCε活性和HOMA-IR均高于单纯T2DM组和健康对照组[(195.5±62.1)μg/L比(188.7±61.2)μg/L和(89.1±20.2)μg/L、(12.5±7.9比14.1±5.7和5.8±4.1)， F值分别为9.76、10.21，均 P＝0.010]。 Pearson相关分析，T2DM＋NAFLD组患者血清PKCε活性、HOMA-IR及三酰甘油呈正相关( r值分别为0.339、0.305、0.329，均 P<0.015)。Logistic回归分析，血清PKCε活性、HOMA-IR和三酰甘油是T2DM＋NAFLD组的危险因素( β值分别为0.849、0.022和0.710，均 P<0.05)。血清PKCε活性升高是T2DM合并NAFLD的独立影响因素。 结论:老年T2DM合并NAFLD患者血清PKCε活性升高与胰岛素抵抗呈正相关，降低血清PKCε活性和改善胰岛素抵抗有助于延缓或改善T2DM及NAFLD。

目的:探讨蛋白激酶Cβ2 (protein kinase Cβ2, PKCβ2）在高糖与缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation, HR）诱导的心肌细胞焦亡中的作用。方法:将培养的H9c2心肌细胞按随机数字表法分为5组（每组6孔）：低糖组（LG组）、低糖缺氧/复氧组（LG+HR组）、高糖组（HG组）、高糖缺氧/复氧组（HG+HR组）、高糖缺氧/复氧+PKCβ2抑制剂CGP53353 （1 μmol/L）治疗组（HG+HR+CGP组）。采用三气培养箱（5%CO 2、94%N 2、1%O 2）缺氧4 h，正常氧浓度复氧2 h构建细胞HR模型，细胞计数试剂盒（cell counting kit-8, CCK8）检测细胞存活率，ELISA法检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）水平，Western blot法检测细胞PKCβ2及焦亡相关蛋白Nod样受体蛋白-3 (Nod-like receptor pyrin domain3, NLRP3）、IL-1β、半胱氨酸蛋白酶-1 (caspase-1）表达水平，JC-1染色评估H9c2细胞线粒体膜电位水平。 结果:与LG组比较，HG组、LG+HR组、HG+HR组细胞存活率明显降低而LDH释放水平明显增加（ P<0.05），同时伴随PKCβ2活化及NLRP3、IL-1β、caspase-1表达上调（ P<0.05）；与HG组比较，HG+HR组LDH释放水平增加，细胞存活率明显降低（ P<0.05），JC-1单体细胞百分比及磷酸化PKCβ2 [phospho-PKCβ2 （Ser660）, P-PKCβ2]蛋白、NLRP3、IL-1β、caspase-1表达上调（ P<0.05）；与LG+HR组比较，HG+HR组LDH释放水平增加，细胞存活率明显降低（ P<0.05），P-PKCβ2表达明显增加，NLRP3、IL-1β、caspase-1表达上调（ P<0.05）。与HG+HR组比较，HG+HR+ CGP组细胞存活率明显增加，LDH释放水平、JC-1单体细胞百分比、P-PKCβ2、NLRP3、IL-1β、caspase-1表达下调（ P<0.05）。 结论:选择性抑制PKCβ2过度活化可减轻心肌细胞高糖HR性损伤，其机制可能与降低细胞焦亡水平及减轻线粒体损伤有关。

重症监护病房（ICU）患者死亡的主要原因是脓毒症，脓毒症及脓毒性休克严重影响患者的预后，增加了患者的病死率和再次发病率，早期、及时的干预可以降低脓毒症患者的病死率及复发率。脓毒症的发生可能与连接蛋白43（Cx43）的磷酸化有关，而Cx43的磷酸化需要通过各种信号通路实现。Cx43的相关位点通过不同信号通路发生磷酸化，实现了对脓毒症的精准调节，这些位点可能成为治疗脓毒症的相关靶点，为精准化治疗脓毒症提供方向。本文主要分析蛋白激酶A（PKA）、蛋白激酶C（PKC）、丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）等与Cx43相关的信号通路在脓毒症发生机制中的作用。

Purpose::Wallerian degeneration (WD) is an antegrade degenerative process distal to peripheral nerve injury. Numerous genes are differentially regulated in response to the process. However, the underlying mechanism is unclear, especially the early response. We aimed at investigating the effects of sciatic nerve injury on WD via CLDN 14/15 interactions in vivo and in vitro. Methods::Using the methods of molecular biology and bioinformatics analysis, we investigated the molecular mechanism by which claudin 14/15 participate in WD. Our previous study showed that claudins 14 and 15 trigger the early signal flow and pathway in damaged sciatic nerves. Here, we report the effects of the interaction between claudin 14 and claudin 15 on nerve degeneration and regeneration during early WD.Results::It was found that claudin 14/15 were upregulated in the sciatic nerve in WD. Claudin 14/15 promoted Schwann cell proliferation, migration and anti-apoptosis in vitro. PKCα, NT3, NF2, and bFGF were significantly upregulated in transfected Schwann cells. Moreover, the expression levels of the β-catenin, p-AKT/AKT, p-c-jun/c-jun, and p-ERK/ERK signaling pathways were also significantly altered. Conclusion::Claudin 14/15 affect Schwann cell proliferation, migration, and anti-apoptosis via the β-catenin, p-AKT/AKT, p-c-jun/c-jun, and p-ERK/ERK pathways in vitro and in vivo. The results of this study may help elucidate the molecular mechanisms of the tight junction signaling pathway underlying peripheral nerve degeneration.

目的:探讨经典型蛋白激酶C（PKC）对低氧诱导的小鼠远端肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖及细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（Akt）表达的影响。方法:利用Dynal MPC-1磁分离器分离含铁粉的远端肺小动脉，原代培养并鉴定肺动脉平滑肌细胞。应用PKC激动剂（PMA）、PKCα抑制剂（safingol）、PKCβⅠ抑制剂（Go6976）、PKCβⅡ抑制剂（LY333531）分别干预细胞。在常氧和低氧条件下，采用免疫印迹法观察cPKC亚型蛋白表达变化以及ERK1/2、Akt磷酸化水平变化。应用PKCα、PKCβ的慢病毒载体，通过病毒转染技术特异性敲减目标基因活性，采用免疫印迹法观察低氧诱导小鼠PASMC中cPKC亚型蛋白表达变化，以及ERK1/2、Akt磷酸化水平变化。结果:采用Brdu法，检测到用safingol、Go6976、LY333531分别抑制cPKCα、βⅠ和βⅡ时，低氧诱导的PASMC增殖能力受到明显抑制，与低氧对照组相比，Brdu阳性细胞率分别为（7.35±0.26）% vs（11.28±0.43）%，（3.76±0.25）% vs（7.98±0.28）%和（4.12±0.46）% vs（7.78±0.53）%；且PMA在常氧条件下可显著促进PASMC的增殖能力，与常氧对照组相比，Brdu阳性细胞率分别为（9.65±0.47）% vs（6.34±0.52）%，（9.34±0.38）% vs（5.42±0.21）%和（7.78±0.53）% vs（4.12±0.46）%；此外经过PKCα、PKCβ的慢病毒载体转染细胞后，也发现低氧转染组的PASMC增殖能力较空载对照组显著下降，Brdu阳性细胞率分别为（3.58±0.54）% vs（5.97±0.63）%。用safingol、Go6976、LY333531分别抑制cPKCα、βⅠ和βⅡ表达后，低氧诱导的PASMC中ERK1/2、Akt的磷酸化水平较对照组显著降低，使用safingol之后，ERK1/2、Akt的磷酸化水平分别为：0.56±0.07 vs 1.08±0.13和0.49±0.04 vs 0.97±0.08，使用Go6976之后，ERK1/2、Akt的磷酸化水平分别为：0.41±0.09 vs 0.79±0.10和0.48±0.09 vs 0.82±0.16，使用LY333531之后，ERK1/2、Akt的磷酸化水平分别为：0.42±0.03 vs 0.87±0.06和0.34±0.07 vs 0.78±0.05；PMA可使常氧条件下PASMC中ERK1/2、Akt的磷酸化水平增高，分别为1.25±0.12 vs 0.41±0.07和0.98±0.06 vs 0.37±0.08；利用病毒转染技术对cPKCα、β的表达进行特异性敲底，发现在低氧条件下，转染细胞后均可使细胞中ERK1/2磷酸化水平显著降低，其磷酸化水平为0.29±0.06 vs 0.76±0.05，而Akt磷酸化水平较对照组无明显变化。 结论:激动剂及抑制剂干预或病毒转染可使PASMC中cPKCα、βⅠ和βⅡ表达下降，可显著抑制低氧诱导的小鼠远端PASMC异常增殖，其作用机制可能与cPKCα、βⅠ和βⅡ蛋白表达上调有关。低氧可能通过上调cPKCα、βⅠ和βⅡ的蛋白表达，使得ERK1/2磷酸化水平增高，最终引起小鼠远端PASMC的异常增殖，参与低氧性肺动脉高压的形成过程。

目的:通过制作大鼠肾移植模型，探讨蛋白激酶C-β(PKC-β)抑制剂对大鼠移植炎性反应的影响并观察与磁共振成像(MRI)的对应关系。方法:将大鼠肾移植模型随机分为3组：同质移植组、异质移植组和异质移植PKC-β抑制剂组，每组10对。术后24 h行MRI检查，然后处死大鼠，取血标本用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测低氧诱导因子-1(HIF-1)和血红素氧合酶-1(HO-1)的mRNA表达量，取肾脏标本用免疫组织化学检测肾组织中白细胞介素(IL)-4、IL-8、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和单核细胞迁移抑制因子(MIF)的表达。组间比较采用单因素方差分析。结果:MRI显示术后24 h大鼠移植肾在异质移植PKC-β抑制剂组冠状位扫描记录动脉自旋标记(ASL)及T1成像分别为[(294.19±42.13) ml/(min×100 g)、(1 951.1±82.9) ms]，显著高于异质移植组[(253.24±25.18) ml/(min×100 g)、(1842.1±79.6) ms]，而低于同质移植组[(331.65±49.44) ml/(min×100 g)、(2 047.6±89.3) ms]，差异有统计学意义( F＝42.323、95.445， P值均<0.01)；血清中的HIF-1和HO-1在异质移植PKC-β抑制剂组水平[(1 245.17±305.96)、(249.72±51.01)]分别高于异质移植组[(947.34±112.65)、(111.71±41.02)]和同质移植组[(1 157.74±224.63)、(147.52±42.22)]，差异有统计学意义( F＝61.252、37.832， P值均<0.01)；而肾组织中的IL-4、IL-8、MCP-1、MIF在异质移植PKC-β抑制剂组表达水平[(45.3±4.3)、(47.2±4.5)，(37.7±3.6)、(31.2±3.0)]分别高于同质移植组[(19.4±2.6)、(19.6±2.5)、(17.4±2.1)、(16.7±2.5)]，但低于异质移植组[(82.5±6.5)、(88.6±6.6)、(77.4±5.6)、(71.2±4.5)]，差异有统计学意义( F＝51.237、59.432、49.375、51.223， P值均<0.01)。 结论:PKC-β抑制剂通过减轻炎症浸润及产生保护因子来减轻肾移植后移植物损伤，与MRI检测结果呈对应关系。

目的:观察通督启神电针法的抗抑郁作用，探讨其调控抑郁模型大鼠蛋白激酶C（PKC）/还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化应激途径的作用机制。方法:将32只SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、通督启神电针组和艾司西酞普兰组。模型组、通督启神电针组及艾司西酞普兰组采用慢性不可预知的应激建立抑郁模型。开始造模后，通督启神电针组每日施以电针治疗，15 min/次；艾司西酞普兰组灌胃艾司西酞普兰30 mg/kg。实验开始前1天和实验第28天称重，观察体重增长情况，并进行糖水偏好实验及旷场实验。采用Western blot免染总蛋白归一法检测大鼠下丘脑组织蛋白激酶Cα（PKCα）、NADPH氧化酶活化蛋白p47（p47phox）、Ras相关C3肉毒菌素物底物1（RAC1）蛋白表达，应用免疫荧光技术检测NADPH氧化酶2（NOX2）阳性面积比率；使用DCFH-DA荧光探针技术检测活性氧（ROS）含量。结果:与模型组比较，通督启神电针组和艾司西酞普兰组大鼠体重增长量升高（ P<0.01），糖水偏好指数升高（ P<0.01），旷场实验总移动距离和中心区停留时间延长（ P<0.01或 P<0.05）；下丘脑区PKCα、p47phox、RAC1蛋白表达降低（ P<0.05或 P<0.01），NOX2蛋白阳性面积比率降低（ P<0.05），ROS水平降低（ P<0.01）。 结论:通督启神电针法可改善抑郁大鼠行为方式，减少PKC/NADPH途径的氧化应激反应，减少ROS生成，从而减轻氧化应激损伤，缓解抑郁症状。

目的:探讨宫颈细胞DNA倍体分析联合负性共刺激分子B7同源物4（B7-H4）和蛋白激酶Cδ（PKCδ）对宫颈癌的诊断价值。方法:选取2018年1月到2022年1月在石家庄市人民医院诊治的宫颈癌患者160例作为宫颈癌组，同期在本院做宫颈癌前筛查的女性160例作为对照组，根据检查结果分为正常或炎症组（ n=52）、低级别宫颈上皮内瘤变（CIN）组（ n=68）、高级别CIN组（ n=40）。采用全自动细胞图像分析系统分析宫颈细胞DNA倍体情况。采用酶联免疫吸附法测定血清B7-H4、PKCδ水平。采用Pearson相关分析探讨血清B7-H4、PKCδ的相关性；采用受试者操作特征（ROC）曲线评估宫颈细胞DNA倍体分析联合血清B7-H4、PKCδ对宫颈癌的诊断价值；采用logistic多因素回归进行宫颈癌的危险因素分析。 结果:正常或炎症组、低级别CIN组、高级别CIN组、宫颈癌组DNA倍体阳性例数分别为16（30.8%）、27（39.7%）、26（65.0%）、127（79.4%），差异有统计学意义（ H=55.86， P<0.001）。进一步两两比较发现，与正常或炎症组比较，高级别CIN组、宫颈癌组DNA倍体阳性比例均高（均 P<0.05）；与低级别CIN组比较，宫颈癌组DNA倍体阳性比例高（ P<0.05）。正常或炎症组、低级别CIN组、高级别CIN组、宫颈癌组血清B7-H4水平分别为（57.21±10.21）、（79.17±11.34）、（92.73±15.36）、（126.56±20.25）ng/ml，差异有统计学意义（ F=285.45， P<0.001），血清PKCδ水平分别为（89.34±18.29）、（71.79±15.82）、（53.39±11.84）、（40.23±10.21）ng/ml，差异有统计学意义（ F=216.28， P<0.001），进一步两两比较发现，正常或炎症组、低级别CIN组、高级别CIN组、宫颈癌组血清B7-H4水平依次升高（均 P<0.05）；正常或炎症组、高级别CIN组、宫颈癌组血清PKCδ水平依次降低（均 P<0.05）。Pearson检验分析结果显示，宫颈癌患者血清B7-H4、PKCδ水平呈负相关（ r=-0.47， P<0.001）。ROC曲线分析显示，宫颈细胞DNA倍体诊断宫颈癌的曲线下面积（AUC）为0.82（95% CI为0.78~0.86），敏感性、特异性分别为83.9%、79.9%；血清B7-H4诊断宫颈癌的AUC为0.92（95% CI为0.89~0.95），敏感性、特异性分别为95.7%、76.1%，截断值为111.12 ng/ml；血清PKCδ诊断宫颈癌的AUC为0.92（95% CI为0.89~0.95），敏感性、特异性分别为85.6%、88.9%，截断值为54.83 ng/ml；三者联合诊断宫颈癌的AUC为0.99（95% CI为0.97~0.99），敏感性、特异性分别为98.3%、75.9%。三者联合诊断宫颈癌的AUC大于宫颈细胞DNA倍体（ Z=8.00， P<0.001）、血清B7-H4（ Z=4.34， P<0.001）、血清PKCδ（ Z=4.61， P<0.001）单独诊断的AUC。多因素logistic回归分析结果显示，血清B7-H4高水平（ OR=2.94，95% CI为1.78~4.84， P<0.001）、PKCδ低水平（ OR=4.33，95% CI为1.88~10.00， P=0.001）、宫颈细胞DNA倍体阳性（ OR=5.77，95% CI为2.38~13.99， P<0.001）均为影响宫颈癌发生的独立危险因素。 结论:宫颈癌患者宫颈细胞DNA倍体阳性比例升高，血清B7-H4水平升高、PKCδ水平降低，宫颈细胞DNA倍体分析联合血清B7-H4和PKCδ对宫颈癌具有较高的诊断价值。