目的:探讨老年2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者血清蛋白激酶Cε(PKCε)活性与胰岛素抵抗的相关性。方法:回顾性分析2017年10月至2018年10月西安交通大学医学院第二附属医院住院的T2DM患者229例，根据病情分为T2DM组112例，T2DM＋NAFLD组117例，另选同期健康对照组110例。比较3组入选者临床资料和实验室检查结果，计算稳态模型的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)，采用酶联免疫吸附法测定血清PKCε活性，并分析其与胰岛素抵抗的相关性。结果:T2DM＋NAFLD组患者血清PKCε活性和HOMA-IR均高于单纯T2DM组和健康对照组[(195.5±62.1)μg/L比(188.7±61.2)μg/L和(89.1±20.2)μg/L、(12.5±7.9比14.1±5.7和5.8±4.1)， F值分别为9.76、10.21，均 P＝0.010]。 Pearson相关分析，T2DM＋NAFLD组患者血清PKCε活性、HOMA-IR及三酰甘油呈正相关( r值分别为0.339、0.305、0.329，均 P<0.015)。Logistic回归分析，血清PKCε活性、HOMA-IR和三酰甘油是T2DM＋NAFLD组的危险因素( β值分别为0.849、0.022和0.710，均 P<0.05)。血清PKCε活性升高是T2DM合并NAFLD的独立影响因素。 结论:老年T2DM合并NAFLD患者血清PKCε活性升高与胰岛素抵抗呈正相关，降低血清PKCε活性和改善胰岛素抵抗有助于延缓或改善T2DM及NAFLD。

目的:分析1例非典型溶血尿毒综合征(aHUS)伴肾病水平蛋白尿患儿的临床和基因变异特征，以明确其诊断和遗传学病因。方法:选取2020年6月25日于青岛大学附属医院就诊的1例aHUS伴肾病水平蛋白尿患儿为研究对象。收集患儿的临床资料，应用全外显子组测序(WES)技术对患儿进行基因检测，用Sanger测序进行患儿及其父母的变异位点验证。结果:患儿为8月龄男性，主要表现为水肿、少尿、血尿、肾病水平蛋白尿、贫血、血小板减低、肌酐及尿素升高、高胆固醇血症，补体水平正常。检测发现患儿携带父源性 DGKE基因c.12_18dupGAGGCGG(p.P7fs*37)和母源性c.1042G>T(p.D348Y)复合杂合变异，根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)指南，分别评估为可能致病性变异和临床意义不明变异。结合临床表现和基因检测的结果，确诊患儿为aHUS伴肾病水平蛋白尿。 结论:婴幼儿期起病的aHUS伴肾病水平蛋白尿，需考虑 DGKE基因变异的可能。本研究确诊了1例aHUS伴肾病水平蛋白尿患儿，明确了其遗传学病因，并拓展了 DGKE基因的变异谱。

目的:研究脑顶叶皮质水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)在褪黑素(melatonin,MT)治疗胆红素脑病(bilirubin encephalopathy,BE)中的表达变化,以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)信号通路在MT对AQP4调控中的作用,以探讨MT对BE的治疗机制.方法:80只出生5～7 d的健康SD乳鼠,根据其处理方式,随机分为以下5组:假手术组、BE模型组、MT干预组、PKC抑制剂(PKC inhibitor,PKCi)干预组和mTOR抑制剂(mTOR inhibitor,mTORi)干预组.采用HE染色和尼氏染色检测各组鼠脑皮质病理改变;采用干-湿重法测定各组脑顶叶皮质含水量;应用免疫荧光染色法检测脑皮质AQP4的表达区域;运用TUNEL染色法检测脑顶叶皮质神经细胞的凋亡变化;使用Western blot法测定各组鼠脑顶叶皮质AQP4、caspase-3、cleaved caspase-3和PKCε的表达量.结果:HE和尼氏染色显示,MT可减轻胆红素所致神经细胞的损伤.干-湿重法结果显示,MT可降低BE乳鼠脑顶叶皮质脑含水量.免疫荧光染色显示,BE组AQP4荧光强度增加,主要表达于大脑顶叶皮质血管壁和星形胶质细胞膜;MT干预可阻止BE所致AQP4表达的增加.TUNEL染色显示,MT可减少BE所致细胞凋亡.Western blot显示,与假手术组相比,BE组脑顶叶皮质AQP4、cleaved caspase-3和caspase-3表达增加,PKCε表达降低;MT干预可降低BE鼠顶叶皮质AQP4、cleaved caspase-3和caspase-3表达,增加PKCε表达.PKCi和mTORi均可下调PKCε的表达,阻止MT通过mTOR/PKC信号通路降低AQP4的表达.结论:MT可通过减少BE大鼠脑顶叶皮质中AQP4的表达来缓解脑水肿,并减少caspase-3介导的神经细胞凋亡.MT下调AQP4表达的机制与mTOR/PKC信号通路的激活有关.

目的 探讨核因子-κB激酶抑制剂ε(IKKε)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠主动脉夹层形成过程中的作用.方法 选用C57BL/6品系载脂蛋白E(ApoE)基因敲除(ApoE-/-)小鼠和ApoE和IKKε基因双敲除(ApoE-/-IKKε-/-)两组小鼠,ApoE-/-IKKε-/-组皮下泵入AngⅡ(DA组)和生理盐水(DN组)为实验组,ApoE-/-组皮下泵入AngⅡ(AA组)和生理盐水(AN组)为对照组.分别记录各组小鼠的血压变化,统计各组小鼠死亡率并观察各组小鼠血管的形态学改变.结果 AN、DN组小鼠血压值无明显异常改变,且小鼠无死亡.AN、DN组小鼠主动脉血管壁结构完整,未见异常的病理学改变.AA、DA组小鼠血压升高,且与DA组比较,AA组血压升高更明显(P=0.000);AA组小鼠无死亡,DA组4只小鼠于1周内死亡(P =0.000);AA、DA组小鼠血管壁均呈现不同程度的病理学改变,但与AA组比较,DA组小鼠血管壁明显增厚,中膜层平滑肌缺失增加(DA组小鼠血管壁肌肉缺失程度比AA组小鼠血管壁肌肉缺失程度:4.50±1.12比1.50 ±0.93,P=0.000),细胞外基质降解程度严重(DA组弹力蛋白降解程度比AA组弹力蛋白降解程度:2.25±0.66比0.63±0.74,P=0.000).结论 在AngⅡ诱导小鼠主动脉夹层模型中,IKKε的缺失促进实验小鼠主动脉夹层的形成.

目的 探讨外周神经元蛋白酶激活受体2-蛋白激酶A/蛋白激酶Cε(PAR2-PKA/PKCε)通路在痛转化中的作用,寻找同时干预急性痛和慢性痛的可能方案.方法 SD大鼠随机分为空白组、假诱发组、诱发组、抑制剂1组和抑制剂2组.除空白组和假诱发组,所有大鼠均通过先后足部注射角叉菜胶和前列腺素E2(PGE2)建立痛觉敏化诱发模型.PGE2于角叉菜胶注射后7 d进行足部注射.抑制剂1组和抑制剂2组大鼠于PGE2注射前/后,分别给予PAR2抑制剂.观察角叉菜胶/生理盐水,注射前、注射后5h、3d、6d、7d0.5h、7d4h和7d24h大鼠机械痛阈(PWTs)的变化,检测角叉菜胶注射后7 d 24 h造模侧背根神经节(DRG)中PAR2、蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶(PKCε)表达.结果 痛觉敏化诱发模型建立成功.角叉菜胶注射后7 d给予PGE2,显著延长了PGE2诱发疼痛的存在时间,角叉菜胶注射后7 d 24 h假诱发组大鼠PWTs与同期空白组相比差异无显著性(P>0.05),而诱发组大鼠PWTs明显低于同期空白组和假诱发组大鼠(P<0.01).诱发组大鼠造模侧DRG中PAR2和PKCε表达在角叉菜胶注射后7 d 24 h明显提升,高于同期假诱发组和空白组(P<0.05).给予PAR2抑制,不论时间均能显著翻转角叉菜胶注射后7 d 24 h,诱发组大鼠由PGE2诱发的疼痛(P<0.05),并抑制DRG中PKCε表达.但,给予PAR2抑制剂不能影响PGE2诱发的急性疼痛和调制DRG中PKA含量.结论 抑制PAR2表达能阻断急性痛向慢性痛转化,这可能与其抑制DRG中PAR2-PKCε通路激活有关.但抑制PAR2并不能干预急性痛,这可能是因为DRG中PAR2相关通路未参与急性痛的产生.

目的 探讨远程缺血预处理(RIPC)对兔脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)时脑源性神经营养因子(BDNF)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(PKC)ε蛋白和mRNA含量的影响及其意义.方法 日本大耳白兔36只,随机均分为假手术组(S组)、缺血性损伤组(IR组)、IR+ RIPC组.每组6只动物分别于再灌注第2天和第5天处死.S组不阻断腹主动脉,IR组和IR+RIPC组夹闭腹主动脉30分钟建立SCIRI模型,IR+RIPC组于主动脉阻断前1小时实施RIPC.3组动物在再灌注第2天和第5天行后肢神经功能评分后处死并取脊髓组织L3-L5段,评估病理学变化;用Western blotting和RT-PCR法分别检测脊髓组织 BDNF、PKCε蛋白及其 mRNA含量.结果 同一时间点,与IR组相比,IR+RIPC组后肢神经功能评分和脊髓组织病理切片分级明显改善(P<0.05),脊髓组织BDNF、PKCε蛋白及mRNA表达均明显升高(P< 0.05).结论 RIPC对兔SCI-RI有一定的防治作用,其作用机制与RIPC激活了PKCε/ PKC信号通路,进而上调脊髓损伤区域BDNF蛋白的表达有关.

目的 探讨α干扰素-1b调控蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCε)蛋白激酶Cε、蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)抑制肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)纤维化及机制.方法 采用不同浓度α干扰素-1b(100、200、400、800、1000 U/mL)处理HSC-T6细胞株,同步设置无α干扰素-1b处理的对照组;四甲基偶氮唑盐比色法分析HSC-T6细胞增殖;分析羟脯氨酸含量变化;免疫荧光染色检测PKCε和PKCα的表达,RT-PCR检测PKCε、PKCα、β-链蛋白(β-catenin)、生存素(Survivin)mRNA的水平.蛋白质印迹法检测PKCε、PKCα、β-catenin、Survivin蛋白水平.采用One-Way ANOVA分析.结果 给药24 h后,100、200、400、800、1000 U/mLα干扰素-1b组抑制率分别为(15.85±1.05)％ 、(36.59±1.03)％ 、(45.12±1.05)％ 、(50.00±1.01)％ 和(62.20±1.02)％,组间比较差异有统计学意义(F=27.478,P<0.01);48 h抑制率分别为(20.87±1.09)％ 、(43.96±1.08)％ 、(53.85±1.08)％ 、(64.84±1.06)％ 和(74.72±1.07)％,组间比较差异有统计学意义(F=25.321,P<0.01).48 h时半抑制浓度为343.47 U/mL.100、200、400 U/mLα干扰素-1b组的羟脯氨酸水平分别为(7.48±0.28)、(6.26±0.17)、(3.86±0.20)μg/mL,均低于对照组的(8.47±0.32)μg/mL,差异均有统计学意义(t值分别为4.033、10.564和21.160,均P<0.05).100、200、400 U/mLα干扰素-1b组的PKCε荧光强度均低于对照组,比较差异均有统计学意义(t值分别为1.984、2.457、7.771,均P<0.05);PKCα的荧光强度分别也均低于对照组,比较差异均有统计学意义(t值分别为9.232、15.921、22.222,均P<0.01).随着α干扰素-1b水平的增加,HSC-T6细胞PKCε、PKCα、β-catenin、Survivin mRNA水平较对照组明显下降,比较差异均有统计学意义(t值分别为7.020、24.562、45.701和14.241,均P<0.01).随着α干扰素-1b水平的增加,HSC-T6细胞PKCε、PKCα、β-catenin和Survivin蛋白水平较对照组明显降低,比较差异均有统计学意义(t值分别为9.564、4.409、10.036和6.794,均P<0.01).结论 α干扰素-1b能够剂量依赖性地下调肝星状细胞胶原表达,降低PKCε、PKCα、β-catenin、Survivin表达水平,抑制HSC-T6增殖.

痛转化指疼痛由急性向慢性转化的过程.干预痛转化的发生,有助于缓解慢性痛的发生与发展.蛋白激酶Cε(protein kinase C epsilon,PKCε)是重要的细胞内信号传导分子,参与多种生理病理状态过程.瞬时受体亚型1(transient receptor potential Vanilloid 1,TRPV1)是其主要下游信号分子之一,也被证实参与各类慢性疼痛的形成与维持.最新研究表明,外周神经元PKCε-TRPV1信号通路是痛转化产生的关键环节.本文将进一步明确PKCε-TRPV1信号通路及可能的中间信号分子在痛转化中的作用,为慢性疼痛的治疗提供新的思路.

目的 探讨血管紧张素Ⅱ对肝星状细胞蛋白激酶Cε(PKCε)、Cα(PKCα)表达的影响.方法 采用不同浓度的血管紧张素Ⅱ处理HSC-T6细胞株,四唑盐(MTT)法检测HSC-T6细胞增殖,分析羟脯氨酸含量变化,免疫荧光染色检测PKCε和PKCα的表达,RT-PCR分析PKCε和PKCα mRNA的水平.结果 不同浓度血管紧张素Ⅱ促进HSC-T6细胞增殖(F=25.321,P＜0.001),上调羟脯氨酸水平(F=13.283,P＜0.001),并呈现明显的剂量效应;伴随血管紧张素Ⅱ浓度的增加,PKCε表达明显增加(F=21.387,P＜0.01),并发生转位于细胞膜;PKCα表达明显增加,尤以转位膜、胞浆比较明显(F=19.431,P＜0.01),并呈现明显的剂量效应;同时PKCε和PKCα mRNA水平增加(F=13.279、15.174,P＜0.05).结论 血管紧张素Ⅱ能够剂量依赖性地上调肝星状细胞胶原表达,提高蛋白激酶Cε、Cα表达水平,促进肝星状细胞的增殖.

目的 探讨通心络对肥大细胞介导的大鼠心肌缺血再灌注损伤中 β-氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase,β-Hex)、类糜蛋白酶及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)表达的影响,进而探寻通心络对受损心肌的保护作用及相关机制.方法 将36只健康成年雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、通心络组,每组12只.通过可逆性左冠状动脉前降支结扎法建立心肌缺血再灌注模型,大鼠心肌缺血1小时,再灌注2小时;假手术组仅穿线不结扎.通心络组大鼠予通心络灌胃,假手术组和模型组给予等量的生理盐水灌胃.1周后,采用RT-PCR法检测左心室心肌组织PKCε 和PKCδmRNA的表达;Western blot法检测PKCα 的表达水平.Elisa法分别检测心肌组织 β-氨基己糖苷酶和类糜蛋白酶的水平.结果 通心络组大鼠 β-氨基己糖苷酶、类糜蛋白酶及PKC表达水平较模型组均明显降低(P<0.01或P<0.05).结论 通心络可以降低 β-氨基己糖苷酶、类糜蛋白酶及PKC表达水平,抑制肥大细胞脱颗粒,减轻受损心肌的炎症反应,进而保护心肌组织.