目的:从基因学角度研究与探讨1例Rh null血型的形成机制，同时研究其家族成员的Rh血型基因。 方法:通过血型血清学检测泰州市人民医院内科就诊的先证者的Rh血型表型，采用荧光PCR法进行RhCE基因分型，采用桑格法进行RhD、RhCE及RhAG外显子测序，然后分析先证者的Rh null形成机制。作为对比，通过血型血清学检测先证者的姐姐和儿子的Rh血型表型，进行RhCE基因分型和RhD、RhCE、RhAG外显子测序。 结果:先证者的基因型结果为CcDEe，RhAG外显子测序结果为纯合型移码突变，突变位置在Exon 5，核苷酸改变为c.732delC，氨基酸改变为p.Phe245Serfs*16。先证者姐姐的血清学结果、基因分型和RhAG外显子测序结果及突变位置与先证者相同。其子的血清学结果为CCDee，基因型结果为CCDee，RhAG外显子测序结果为杂合型移码突变，与先证者一致。结论:分析发现RhAG基因新的变异位点；此位点使得患者RhAG蛋白表达不完整，进而影响其他Rh抗原在细胞膜上的表达，致血清学结果为Rh null。

采用转录组数据挖掘与实验验证相结合的研究策略,识别表征激素性股骨头坏死(SONFH)痰、瘀、虚证素的标志基因.首先,利用项目组前期临床转录组学检测所得SONFH痰瘀阻络证、经脉痹阻证、肝肾亏虚证共性差异表达基因集,整合差异表达趋势分析与功能挖掘,分别预测出表征痰、瘀、虚证素的候选标志基因集.再利用来源于临床SONFH患者的全血样本、SONFH大鼠的全血和受累股骨头组织样本,采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测上述候选标志基因的表达量;进一步,采用受试者工作特征曲线(ROC)法,客观评价上述候选标志基因的辨证效能.转录组数据分析结果显示,痰证素候选标志基因为超长链脂肪酸延伸酶6(ELOVL6),瘀证素候选标志基因为锚蛋白1(ANK1)、血型糖蛋白A/B(GYPA/B)、Rh相关糖蛋白(RHAG),虚证素候选标志基因为溶质载体家族2(促进葡萄糖转运体)成员1(SLC2A1)、胃口素(STOM).qPCR验证结果显示,与非SONFH组比较,ELOVL6在痰瘀阻络证患者外周血中的表达量最低(P＜0.05);与正常对照组比较,其在SONFH大鼠造模4周外周血和受累股骨头组织中的表达量最低(P＜0.01),且对大鼠造模4周的辨证效能(AUC=0.850,P=0.006)优于其他造模时间点(8、12、16、21 周 AUC 分别为 0.689、0.766、0.588、0.662).与非 SONFH 组比较,ANK1、GYPA、RHAG 均在经脉痹阻证患者外周血中表达最低(P＜0.05);与正常对照组比较,其在SONFH大鼠造模12周外周血和受累股骨头组织中的表达量最低(P＜0.05,P＜0.01),且对大鼠造模 12 周的辨证效能(ANK1:AUC=0.855,P=0.006;GYPA:AUC=0.861,P=0.012;RHAG:AUC=0.854,P=0.009)优于其他造模时间点(4、8、16、21 周,ANK1 的 AUC 分别为 0.630、0.658、0.657、0.585;GYPA 的 AUC 分别为 0.646、0.573、0.691、0.617;RHAG 的 AUC 分别为 0.592、0.511、0.515、0.536).与非 SONFH 组比较,SLC2A1和STOM均在肝肾亏虚证患者外周血中表达量最低(P＜0.05);与正常对照组比较,其在SONFH大鼠造模21周外周血和受累股骨头组织中的表达量最低(P＜0.05,STOM在大鼠外周血中表达量与正常对照组间的差异无统计学意义除外),且SLC2A1对大鼠造模21周的辨证效能(AUC=0.806,P=0.009)优于其他造模时间点(4、8、12、16周AUC分别为0.520、0.580、0.741、0.774),STOM的辨证效能无意义.综上,SONFH中痰证素的标志基因为ELOVL6,瘀证素的标志基因为ANK1、GYPA和RHAG,虚证素的标志基因为SLC2A1,有助于从基因水平揭示SONFH痰、瘀、虚证素的生物学内涵.

目的 研究RhD--缺失型患者的血型血清学及分子生物学,指导临床用血安全.方法 采用患者EDTA-K2 抗凝血,进行Rh血型系统常见抗原的检测及其相关血清学检测,同时提取患者DNA,利用SBT法对其RHCE基因和RHAG基因的外显子 1-10 进行测序.结果 患者血清学检测为O型RhD--,抗体鉴定 10 谱全阳性,RHCE基因测序表现为RHCE?02/RHCE?02,RHAG基因测序表现为 6 号外显子的 808 号位点G＞A和 861 号位点G＞A的突变.结论 当患者Rh血清学表现型缺失,在妊娠和或输血史等相关免疫情况下,可采取自体输血或血浆置换等方式满足患者的急救用血.

目的 通过mRNA异常剪接体外验证实验,即体外微基因剪接系统(minigene splicing assay,MSA),研究中国人群中发现的RHAG突变对于RHAG基因mRNA剪接的影响.方法 通过对KMxD数据库中RHAG基因数据的分析,选择 10 种中国人群中分布频率相对较高的位于RHAG基因剪接位点附近的突变或编码区域的同义突变,构建相应的RHAG外显子野生型及突变型pSplice POLR2G微基因表达质粒.转染HEK-293T细胞,48h后收集细胞提取总RNA,反转录后进行PCR扩增,然后进行琼脂糖凝胶电泳检测和毛细管电泳检测,根据实验结果判断RHAG基因突变是否会影响相应外显子的正常剪接.结果 2 种RHAG基因剪接位点附近突变(c.158-5delT,c.807+3A＞C)轻微减弱了原剪接位点的剪接效率,其余 8 种突变(c.312G＞A,c.341+3G＞A,c.609C＞T,c.681G＞A,c.861G＞A,c.957T＞A,c.984T＞C和 c.1139-7G＞A)均不影响RHAG基因mRNA的剪接.结论 RHAG基因在剪接方面比较保守,剪接位点附近突变及编码区同义突变较少会引起RHAG基因异常剪接.

Rose has emerged as a model ornamental plant for studies of flower development,senescence,and morphol ogy,as well as the metabolism of floral fragrances and colors.Virus-induced gene silencing (VIGS) has long been used in functional genomics studies of rose by vacuum infiltration of cuttings or seedlings with an Agrobacterium suspension carrying TRV-derived vectors.However,VIGS in rose flowers remains a challenge because of its low efficiency and long time to establish silencing.Here we present a novel and rapid VIGS method that can be used to analyze gene function in rose,called ‘graft-accelerated VIGS',where axillary sprouts are cut from the rose plant and vacuum infiltrated with Agrobacterium.The inoculated scions are then grafted back onto the plants to flower and silencing phenotypes can be observed within 5 weeks,post-infiltration.Using this new method,we successfully silenced expression of the RhDFR1,RhAG,and RhNUDX1 in rose flowers,and affected their color,petal number,as well as fragrance,respectively.This grafting method will facilitate high-throughput functional analysis of genes in rose flowers.Importantly,it may also be applied to other woody species that are not currently amenable to VIGS by conventional leaf or plantlet/seedling infiltration methods.

RHAG血型抗原是系统抗原,国际输血协会(ISBT)的命名RHAG,系统编号030,已确认该系统有4个抗原.RHAG抗原过去被称为RH50,是一个与RHD/CE相关的抗原(RHD/CE被称为RH30).本文就RHAG抗原的最新研究进展,做一简略介绍.

目的 分析研究2例D--表型患者的血清学和基因型的特征.方法 采用盐水法鉴定2位患者的ABO、Rh血型;采用盐水法和抗球蛋白法对样本进行抗体筛查和抗体鉴定;测序分析样本的RHCE、RHD及RHAG的外显子序列.结果 2位患者血型均为B型D--,抗体筛查阳性,血清中存在抗-Hro.患者1的RHGE基因型为RHCE-D(3-7)-CE,患者2的RHCE基因型为RHCE-D(3-8)-CE.结论 2例D--表型形成的分子机制与RHCE基因和RHD基因之间的基因重组有关;D--表型易产生抗-Hro.

目的 总结1例罕见Rhnull综合征患者的血型鉴定方法和输血策略,为该类患者的输血和检验积累资料、提供参考.方法 采用血清学试验检测该患者ABO、RhCcDEe血型抗原和血型不规则抗体,家系调查患者3代ABO、RhCcDEe血型抗原,荧光PCR对该患者及其家族中疑似Rhnull者行基因分型和RHD、RHCE、RHAG基因测序;凝胶卡法交叉配血;探讨患者临床输血方案,确保输血安全.结果 患者及其姐姐均为RHAG序列中534G缺失(外显子4)导致的Rhnull regular(调节型),RH基因型均为CCDee,ABO血型均为A型;患者血液与A、RhCCDee的献血者血液交叉配血,主次侧均相合;患者未行输血治疗.结论 Rhnull血型鉴定,血型血清学方法结合家系调查可做出初步判断,分子生物学技术可进一步准确判断.Rhnull血型临床输血在参考《临床输血技术规范》和《特殊情况紧急抢救输血推荐方案》中对RhD抗原阴性患者输血规定和推荐方案基础上,应尽可能对RhCcEe匹配输注,并监测患者输血后血型不规则抗体,尤其是有生育需求的女性.

Rh血型系统(ISBT004)包含RHD和RHCE两个同源连锁基因,分别编码D抗原和CcEe抗原,是最重要的红细胞血型系统之一.RHAG血型系统(ISBT030)由RHAG基因编码Rh相关蛋白RhAG,RhAG蛋白对RhD/CE抗原在红细胞膜上的正确连接定位十分重要[1].RHAG基因变异可导致Rh血型抗原显著减少,称为Rhmod[2].我们通过1例由于RHAG新复合杂合突变导致的Rhmod家系进行血清学与基因检测,并采用生物信息学方法和蛋白结构模型,初步探讨这例新的复合突变导致Rhmod型的分子基础.

Retinoblastoma antigen(RbAg) and retinal tissue antigen(RAg) were made from alloge-neic retinoblastoma tissues and normal retinal tissue using,the 3M KCl method.We have examined leu-kocyte migration inhibition test (LMIT) and enzy-me-linked immunosorbent assay (ELISA) to RbAg and RAg in normal controls and the patients with retinoblastoma,including two spontaneously regres-sed cases.In LMIT,six out of the 11 patients tested against RhAg showed positive reactivity,in which 4 cases reacted only with RbAg,but not with RAg.All nine control subjects had negative reactivity to the two antigens.In ELISA,4096 of the retinoblasto-ma patients and 5.56％ in normal controls showed positive reaction against RbAg.It was suggested that not only retinal antigens but also retinoblasto-ma specific antigens present in human retinoblasto-ma cells.The results also suggested that patients with retinoblastoma and those with spontaneous re-gression of Rb had both cell-mediated immunologic reactivity and humoral immune response toward re-tinoblastoma antigen in vitro.These immune respon-ses to RbAg may be responsible for spontaneous re-gression of retinoblastoma.