目的 探讨卷曲跨膜受体蛋白2(FZD2)在小鼠舌鳞癌中的功能,及其对细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)单抗治疗的影响.方法 细胞实验:SCCVII小鼠舌鳞癌细胞分为空白对照组(转染LV-kdCon)和实验组(转染LV-kdFZD2).用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖能力,用Transwell小室实验检测迁移能力,用人脐静脉内皮细胞验证血管生成能力.动物实验:雌性C3H/He小鼠构建荷瘤小鼠模型,分为对照组[给予磷酸盐缓冲液注射(PBS)]、kdFZD组(接种实验组细胞并给予等量PBS注射)、αCTLA4组(小鼠皮下接种空白对照组细胞并给予CTLA4单抗注射)和kdFZD+αCTLA组(小鼠皮下接种实验组细胞并给予CTLA4单抗注射).用定量聚合酶链反应检测肿瘤组织mRNA相对表达水平,测量肿瘤体积和质量.结果 空白对照组和实验组细胞中FZD2 mRNA相对表达水平分别为1.01±0.18和0.52±0.18,细胞迁移数为(466.70±44.10)和(160.00±26.46)个,人脐静脉内皮上皮细胞形成的小管分支节点数分别为(108.70±6.35)和(84.33±10.02)个,总毛细血管长度分别为(20 235±2 229)和(16 549±338)pm,组间比较,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).对照组、kdFZD 组、αCTLA4 组和 kdFZD+αCTLA 组肿瘤体积分别为(449.50±114.80)、(131.10±13.49)、(83.62±26.47)和(2.45±0.91)mm3,肿瘤质量分别为(0.78±0.11)、(0.22±0.06)、(0.13±0.02)和(0.03±0.01)g,组间比较,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.001,P＜0.000 1).结论 FZD2可作为潜在的舌鳞癌治疗靶点,有望成为舌鳞癌辅助免疫治疗优化的关键分子.

目的:本研究利用单细胞RNA测序分析技术(scRNA-seq)初步探索乳腺癌4T1细胞表达淋巴细胞抗原6复合物E(Ly6E)调控肿瘤免疫微环境(TIME)的潜在机制.方法:利用CRISPR-Cas9技术构建Ly6e基因敲除小鼠乳腺癌4T1细胞(Ly6E-KO),观察其和野生型细胞(Ly6E-WT)体外增殖和体内生长能力的差异.流式细胞术分选两类肿瘤组织中的CD45阳性细胞,再进行scRNA-seq分析.对于测序结果,首先利用Seurat软件包筛选差异表达基因谱,根据标记基因进行注释;再利用Cellchat和Monocle2软件分析细胞互作关系和特定免疫细胞的演化轨迹.结果:与Ly6E-WT相比,Ly6E-KO体外增殖能力无显著差异,但体内生长能力显著降低(P<0.001).ScRNA-seq分析显示,Ly6E-KO移植瘤浸润DC比例显著高于Ly6E-WT,且DC处于更加活跃的增殖和分裂状态;三种DC亚群(pDC、cDC1和cDC3)与T细胞均存在显著的互作关系.同时发现,Ly6E-KO肿瘤中浸润T淋巴细胞增殖、活化及效应相关的基因表达水平均升高,提示Ly6E-KO具有更强抗肿瘤能力.最后,本研究对人类乳腺癌队列的scRNA-seq数据进行了分析,进一步证实了上述发现.结论:肿瘤细胞Ly6e基因敲除后可通过增加TIME中DC活化及浸润,继而增强机体抗肿瘤免疫应答.

目的:观察血液透析滤过（HDF）处理嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞）免疫疗法后IL-6受体抑制剂治疗无效细胞因子释放综合征（CRS）的有效性及安全性。方法:回顾性分析2015年7月至2021年7月深圳大学第一附属医院血液内科经CAR-T细胞治疗后出现托珠单抗治疗无效的3～4级CRS并接受HDF治疗的3例患者，包括急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）2例，弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）1例。结果:患者在HDF治疗结束后12 h内临床症状（体温、血压、血氧）缓解，细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α、INF-γ及C反应蛋白（CRP）明显下降。随访3个月未发现HDF治疗相关不良反应。结论:HDF控制CAR-T细胞治疗后托珠单抗治疗无效3～4级CRS安全可行。

目的:通过总结分析国内多中心、真实世界的大样本数据，为联合免疫治疗的新辅助治疗对结直肠癌患者的临床应用提供借鉴和依据。方法:本研究为回顾性、多中心、病例系列研究。回顾性收集2017年1月至2021年10月期间，北京大学肿瘤医院（55例）、华中科技大学同济医学院附属协和医院（19例）、中山大学肿瘤防治中心（13例）和海军军医大学附属长海医院（7例）共计94例患者联合新辅助免疫治疗的结直肠癌患者资料，其中男性48例，女性46例；中位年龄58岁。直肠癌81例，结肠癌13例（2例为结肠双原发癌）；肿瘤TNM分期：Ⅱ期12例，Ⅲ期82例；肿瘤高分化46例，中分化37例，低分化11例。26例（27.7%）为错配修复缺陷（dMMR）和微卫星高度不稳定（MSI-H），行单纯免疫治疗，主要为程序性死亡蛋白-1（PD-1）；68例（72.3%）为错配修复正常（pMMR）和微卫星稳定（MSS），行免疫联合新辅助治疗，主要为CapeOx（卡培他滨+奥沙利铂）联合PD-1+长程或短程放疗，或PD-1联合细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）。按美国国立癌症研究所通用毒性标准3.0版分析评价新辅助联合免疫治疗期间的不良反应；了解手术情况并按照Clavien-Dindo分级标准评价手术并发症；联合新辅助免疫治疗的疗效评估包括以下指标：主要病理学缓解（MPR），定义为新辅助治疗诱导的肿瘤消退在病理上残留肿瘤≤10%；病理完全缓解（pCR）定义为新辅助治疗诱导的肿瘤消退患者在病理上未见残留肿瘤；肿瘤评效为疾病控制率（DCR），即完全缓解（CR）、部分缓解（PR）和疾病稳定（SD）患者在全组中所占的比例；客观缓解率（ORR），为CR+PR。结果:全组94例患者接受新辅助联合免疫治疗的中位周期数为4（1~10）个，免疫相关不良反应发生率为37.2%（35/94），包括皮肤相关不良反应35例（37.2%）、甲状腺功能异常21例（22.3%）和免疫性肠炎8例（8.5%），其中Ⅲ级不良反应占1.1%。末次新辅助联合免疫治疗至手术的中位时间为30（21~55） d，直肠癌根治术81例，结肠癌根治术11例，结肠癌联合其他脏器切除2例；全部患者原发灶切除均达到R 0。手术相关并发症发生率为22.3%（21/94），主要为吻合口漏（4例）、盆腔感染（4例）、腹腔积液（3例）、吻合口狭窄（3例）和腹盆腔出血（2例）；Ⅰ~Ⅱ级并发症13例（13.8%），Ⅲ级并发症8例（8.5%），无Ⅳ级及以上并发症。全组患者中位随访32（1~46）个月，DCR为98.9%（93/94），ORR为88.3%（83/94），pCR率41.5%（39/94），MPR率60.6%（57/94）。行单纯免疫治疗的26例dMMR和MSI-H患者pCR率为57.7%(15/26)，MPR率为65.4%(17/26)。行联合免疫治疗的68例pMMR和MSS患者pCR率为35.3%(24/68)，MPR率为58.8%（40/68）。 结论:对于初始可切除的结直肠癌患者，新辅助联合免疫治疗具有很好的肿瘤控制率和病理缓解率；围手术期不良反应及手术并发症发生率可以接受。

目的:建立一种检测HIV-1特异性CD4 +T细胞亚群功能的活化诱导标记法(activation-induced markers，AIM)，从而更有效地评价HIV-1抗原特异性CD4 +T细胞免疫应答水平。 方法:选取12例未经抗病毒治疗的HIV-1慢性感染者及6例未感染HIV-1的健康人，分别以基于多色流式细胞术的AIM法和细胞内因子染色法(intracellular cytokine staining，ICS)检测抗原特异性T淋巴细胞功能，并探讨两种方法用于评价HIV-1感染者抗原特异性T细胞免疫应答的能力。结果:AIM法检测HIV-1慢性感染者中HIV-1抗原特异性PD-1 +CD25 +CD4 +T、CD69 +CD200 +CD4 +T、CD69 +ICOS + CD4 +T细胞阳性的比例为11/12、8/12和7/12，检测CD69 +ICOS +CD8 +T、CD137 +CD69 +CD8 +T、PD-1 +CD25 +CD8 +、OX40 +PD-1 +CD8 +T细胞阳性的比例为8/12、8/12、7/12、7/12。ICS法检测HIV-1抗原特异性IL-2 +CD4 +T、IFN-γ +CD4 +T、TNF-α +CD4 +T细胞阳性的占比为2/12、2/12、0；IFN-γ +CD8 +T、TNF-α +CD8 +T、IL-2 +CD8 +T细胞阳性的占比为12/12、10/12、5/12。 结论:AIM法在评价CD4 +T细胞功能方面更为敏感，可作为ICS法的补充，两种方法联合使用可更全面地评估抗原特异性T淋巴细胞反应。

目的:探讨新疆出血热病毒（XHFV）糖蛋白的2个抗原优势区（GcⅠ和GcⅡ）以不同嵌合策略以及不同免疫方式诱导小鼠免疫应答的效果。方法:以在5'端加入或不加鼠白细胞介素-2（IL-2）信号肽与通用型辅助性T细胞（Th）表位为不同设计策略，将GcⅠ、GcⅡ及GcⅠ上已鉴定出来的表位（Gc 233~248、Gc 241~256和Gc 281~296）分别进行融合并构建至真核表达载体pVAX1与原核表达载体pET-28a上。采用间接免疫荧光法检测重组真核质粒的体外表达效果后进行大量提取，将重组原核质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达及纯化。通过基因免疫、蛋白免疫和DNA初免-蛋白加强免疫（联合免疫）3种方式免疫BALB/c小鼠，酶联免疫吸附测定法检测小鼠体内IgG抗体水平以及小鼠脾细胞培养上清中IL-4和干扰素-γ（IFN-γ）的含量，噻唑蓝比色法检测小鼠脾T淋巴细胞的增殖情况。 结果:双酶切及测序结果表明8种重组质粒构建成功。荧光显微镜下可见构建的重组真核质粒在体外细胞均能成功表达。3次免疫小鼠后，各实验组的小鼠血清IgG抗体水平和刺激指数均明显高于对照组（均 P<0.01）。Th2型细胞因子IL-4与Th1型细胞因子IFN-γ的质量浓度检测结果表明，联合免疫组引起的免疫应答偏向Th1型。 结论:成功构建了XHFV糖蛋白的多表位嵌合疫苗且靶抗原在小鼠体内可有效表达，各免疫组与对照组相比均激发了较强的体液免疫及细胞免疫应答，其中pVAX1-ST（GcⅠe+GcⅡ）联合重组蛋白r（GcⅠe+GcⅡ）的免疫效果最好，有望作为XHFV的新型候选疫苗。

目的:观察比较单纯输注抗B细胞成熟抗原（BCMA）嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞）与输注抗BCMA联合抗CD19 CAR-T细胞治疗复发/难治性多发性骨髓瘤（RRMM）患者免疫重建的差异。方法:以2017年6月至2020年12月在我院行CAR-T细胞治疗的61例RRMM患者为研究对象，其中单纯接受抗BCMA靶点者26例，接受抗BCMA联合抗CD19靶点者35例。流式细胞术分别测定CAR-T治疗前后不同时间点的T细胞亚群（CD3 +、CD4 +、CD8 +、CD4 +/CD8 +）、B细胞（CD19 +）及NK细胞（CD16 +CD56 +），免疫比浊法检测免疫球蛋白IgG、IgA及IgM水平。对比两组淋巴细胞亚群及免疫球蛋白的重建规律。 结果:CAR-T细胞输注后，CD8 + T淋巴细胞恢复最快，BCMA组与BCMA+CD19组分别在输注后3个月和输注后1个月时恢复至输注前水平[BCMA：695（357, 1264）个/μl对424（280, 646）个/μl；BCMA+CD19：546（279, 1672）个/μl对314（214, 466）个/μl]。两组NK细胞均在输注后3个月时恢复至正常水平[分别为171（120, 244）个/μl、153（101, 218）个/μl（正常参考范围150~1100个/μl）]，但BCMA组不能维持在稳定水平。两组CD4 + T淋巴细胞恢复缓慢，输注后12个月内仍处于持续低水平，多数患者未观察到恢复。CD4 +/CD8 +比值倒置持续1年以上。两组CD19 + B细胞均在输注后3个月恢复至输注前水平[BCMA：62（10, 72）个/μl对57（24, 78）个/μl；BCMA+CD19：40（4, 94）个/μl对29（14, 46）个/μl]。BCMA组IgG在输注后12个月恢复至输注前水平[7.82（6.03, 9.64）g/L对6.92（4.62, 12.76）g/L]，BCMA+CD19组未恢复。IgA先后在输注后9个月和12个月恢复至输注前水平[BCMA：0.46（0.07, 0.51）g/L对0.22（0.12, 4.01）g/L；BCMA+CD19：0.46（0.22, 0.98）g/L对0.27（0.10, 0.53）g/L]。两组IgM在输注后6个月恢复至输注前水平[BCMA：0.43（0.06, 0.60）g/L对0.20（0.13, 0.37）g/L；BCMA+CD19：0.53（0.10, 0.80）g/L对0.16（0.11, 0.28）g/L]。两组患者淋巴细胞亚群重建及免疫球蛋白恢复在各时间点的差异均无统计学意义。 结论:在接受CAR-T细胞治疗的RRMM患者中，可基本不考虑单纯抗BCMA CAR-T与抗BCMA联合抗CD19 CAR-T治疗之间免疫重建的差异而选择合适的靶抗原。中国临床试验注册中心：:ChiCTR-OIC-17011271、ChiCTR-OIC-17011272

双特异性抗体（BsAb）是一种可以同时或先后特异性结合两个抗原或抗原表位的新型高效抗肿瘤药物。目前，靶向表皮生长因子受体（EGFR）和cMET的埃万妥珠单抗已获批应用于治疗EGFR ex20ins的局部晚期或转移性非小细胞肺癌（NSCLC），靶向程序性死亡蛋白配体-1（PD-L1）和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）、程序性死亡蛋白-1（PD-1）和CTLA-4、PD-L1和转化生长因子-β、PD-1和血管内皮生长因子的抑制剂应用于NSCLC的治疗正在进行中，均表现出良好的安全性和有效性。深入探讨BsAb在NSCLC治疗中的研究进展，将为临床治疗NSCLC提供新的诊疗思路。

目的:分析CTD合并新型隐球菌感染患者临床特点及相关因素，提高对该病的认识和临床诊疗水平。方法:回顾性分析2010年1月至2021年4月在北京大学人民医院住院治疗的12例CTD并发新型隐球菌感染患者的临床特点、实验室检查结果、治疗、预后，并复习相关文献。采用独立样本 t检验或秩和检验。 结果:12例患者均为女性，年龄18~85岁，平均（51±23）岁；均无明确鸟类接触史。其中3例RA，7例SLE，1例pSS，1例未分化CTD；4例隐球菌脑膜炎，8例肺隐球菌病；12例均无人类免疫缺陷病毒感染，起病前均曾单用或联合应用激素、免疫抑制剂、生物制剂治疗；血隐球菌抗原检测均阳性；6例行脑脊液检查，2例脑脊液墨汁染色阳性，2例脑脊液培养阳性，3例颅内压明显增高[最高>600 mmH 2O）（1 mmH 2O=0.009 8 kPa）]；7例行肺穿刺活检，7例肺组织病理学检查确诊阳性；6例发病时淋巴细胞<1.0×10 9/L，共2例检测了外周血CD4 + T细胞且水平明显降低。治疗方面，12例均静脉应用抗真菌药物治疗（4~6周），12例应用氟康唑，2例氟康唑联合两性霉素，1例氟康唑联合氟胞嘧啶，1例氟康唑联合两性霉素、氟胞嘧啶，均改为口服氟康唑序贯治疗，总疗程4~21个月，11例均痊愈，1例隐球菌脑膜炎症状缓解。 结论:CTD合并新型隐球菌感染临床症状不典型，发病可能与免疫抑制剂和糖皮质激素的应用有关，外周血淋巴细胞尤其是CD4 + T细胞降低更易感染，早期诊断早治疗是提高此病治愈率、改善预后的关键。

总结1例脐血干细胞移植后接受嵌合抗原受体T细胞治疗并发人疱疹病毒6B（HHV-6B）脑炎患儿的护理经验。患儿，女，4岁，2021年5月28日确诊为急性T淋巴细胞白血病。护理要点包括全面细致地鉴别观察症状，为早诊断早治疗提供信息；制订专项管理方案，实施个体化护理；制订共享决策沟通模式，预防院内继发性感染；以患儿为中心，做好腰椎穿刺护理；评估患儿及家属需求，疏解负面情绪；完善出院前准备，注重延续护理。经过积极的治疗和精心的护理，患儿病情好转出院。持续随访6个月，患儿为持续缓解状态，无不良后遗症，生活恢复正常。