目的 研究苦参碱通过调控转化生长因子-β/信号传导蛋白(TGF-β/Smads)信号通路改善糖尿病肾病(DN)的作用及机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分为NC组、DN组、DN+苦参碱组和DN+二甲双胍组,每组10只.除NC组外,其余各组均用高脂高糖饮食加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立小鼠DN模型,造模成功后DN+苦参碱组灌胃给予苦参碱治疗4周,DN+二甲双胍组给予二甲双胍,DN组和NC组给予等量0.9％NaCl.用蛋白质印迹(Western blot)法检测小鼠肾组织中Ⅳ型胶原蛋白(Col Ⅳ)、纤连蛋白(FN)、Smad同源物2/3(Smad2/3)和磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)的表达水平;用生化法检测小鼠血糖、血肌酸酐和尿素氮水平.结果 NC组、DN组和DN+苦参碱组小鼠血糖水平分别为(8.16±2.53)、(24.84±4.67)和(23.88±3.57)mmol·L-1;血肌酸酐水平分别为(36.48±5.63)、(97.51±10.59)和(41.88±7.26)mmol·L-1;尿素氮水平分别为(53.11±4.72)、(91.50±8.62)和(63.29±5.69)mmol·L-1;肾组织中Col Ⅳ蛋白的表达水平分别为1.00±0.19、3.34±0.58和1.99±0.44,FN蛋白的表达水平分别为1.00±0.21、3.63±0.47和1.79±0.43,p-Smad2/3/Smad2/3 分别为 1.00±0.18、2.74±0.51 和 1.08±0.33.上述指标,NC组与DN组相比,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 苦参碱能够有效抑制TGF-β/Smads信号通路的激活,减少细胞外基质相关蛋白的聚积,从而发挥保护DN肾损伤的作用.

为研究雷公藤甲素(triptolide,TP)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)雌性大鼠生殖系统的毒性作用及机制,将 50 只SD大鼠随机分为正常组(Con),模型组(CIA),雷公藤片临床等效剂量 0.5、1、2 倍组(含雷公藤甲素3.75、7.5、15 μg·kg-1·d-1),每组 10 只,首次免疫后当日开始灌胃给药,每天 1 次,给药 42 d.分别于第 21、42 天取材,计算子宫和卵巢脏器指数;显微镜下观察子宫和卵巢组织病理形态学变化;ELISA法检测卵巢组织匀浆中雌二醇(estradiol,E2)及细胞色素P450A1(aromatase,CYP19A1)水平;免疫组织化学法检测卵巢组织中通路相关蛋白转化生长因子 β3(transforming growth factor β3,TGFβ3)、细胞信号传导分子 3(mothers against decapentaplegic homolog 3,Smad3)及肾上腺核受体 1(steroido-genic factor-1,SF-1)表达水平.并在体外建立中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞系,经TP给药(30、60、120 nmol·L-1)24 h后MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中TGFβ3、Smad3 及SF-1蛋白表达,并通过免疫荧光检测SF-1因子入核情况.结果表明,与模型组比较,TP各给药组在给药21、42 d子宫腺体数、总卵泡数、成熟卵泡数、黄体数均有降低趋势,但差异并无统计学意义,仅 2 倍TP在给药 42 d时可显著增加闭锁卵泡数;TP 3.75 μg·kg-1·d-1在给药 21 d 即可显著降低 E2 水平,但对雌激素合成限速酶 CYP19A1 无显著影响,但可显著降低卵巢组织TGFβ3、Smad3 因子表达,且无论给药 21 d还是 42 d,TP 7.5、15 μg·kg-1·d-1均显著降低SF-1 因子表达.TP可显著促进体外卵巢细胞凋亡,给药 24 h后,凋亡主要集中在凋亡晚期;且 60 nmol·L-1 TP即可显著降低TGFβ3、Smad3 及SF-1 蛋白表达,并呈剂量依赖性.综上所述,2 倍以下临床等效剂量的TP灌胃 21、42 d并未引起CIA大鼠子宫、卵巢组织明显的生殖损伤,仅在 2 倍临床等效剂量给药 42 d时,闭锁卵泡数发生显著变化.TP通过抑制TGFβ3/Smad3/SF-1 通路表达发挥体内生殖靶器官及体外卵巢细胞生殖毒性作用.

目的:研究泛Janus激酶(Janus kinase,JAK)抑制剂托法替布(tofacitinib)对转化生长因子-β1(transfor-ming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的作用及机制,为临床治疗结缔组织病相关的间质性肺疾病提供理论依据.方法:(1)体外培养人胚胎肺成纤维细胞(human fetal lung fibroblast 1,HFL-1),设立6个组,分别为DMSO空白对照组、TGF-β1诱导组、TGF-β1联合不同浓度托法替布(0.5、1.0、2.0、5.0 μmol/L)药物干预实验组.采用CCK-8法检测细胞活力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力.(2)采用实时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)、蛋白免疫印迹实验(Western blotting)检测 α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ 型胶原蛋白(collagen Ⅰ,COL1)基因及蛋白的表达水平.应用RT-PCR和酶联免疫吸附试验检测各组白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的基因和细胞培养上清液中的蛋白水平.(3)在不同组的细胞培养基中加入DMSO载体对照,以1.0μmol/L和5.0 μmol/L的托法替布预培养30 min,然后加入TGF-β1处理1 h、6 h和24 h.以Western blotting检测Smad2/3、信号传导和转录激活因子3(sig-nal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的蛋白磷酸化水平.结果:(1)托法替布抑制TGF-β1诱导的HFL-1细胞活力及迁移能力.(2)与空白对照组相比,TGF-β1诱导组HFL-1的α-SMA、COL1A1和FN1基因表达显著上调(P＜0.05).5.0 μmol/L托法替布干预组的α-SMA基因表达与TGF-β1诱导组相比显著下调(P＜0.05)o 0.5～5.0 μmol/L托法替布各干预组与TGF-β1诱导组相比均可抑制FN1基因表达(P＜0.05).各干预组与TGF-β1诱导组相比,COL1A1基因的表达无明显变化.(3)Western blotting结果提示,TGF-(31诱导组细胞α-SMA、FN1蛋白水平较对照组显著增加(P＜0.05),COL1A1表达未见明显差异.托法替布不同浓度干预组与TGF-β1诱导组相比,α-SMA蛋白表达均有下降,其中2.0 μmol/L和5.0 μmol/L干预组与诱导组间的差异有统计学意义(P＜0.05).托法替布不同浓度干预组的FN1蛋白水平均有下降,但与TGF-β1诱导组相比差异无统计学意义.各干预组的COL1A1蛋白表达与TGF-β1诱导组相比差异无统计学意义.(4)TGF-β1诱导48 h,HFL-1细胞中IL-6基因及培养上清液中IL-6的表达水平较对照组显著升高,各浓度托法替布干预组与TGF-β1诱导组相比均有所降低.TGF-β1诱导1 h、6 h和24 h,STAT3蛋白磷酸化水平增加,托法替布预刺激抑制了 6 h时Smad2/3的磷酸化水平,在1 h、6 h和24 h时均抑制了 STAT3的磷酸化水平.结论:托法替布能抑制TGF-β1诱导的HFL-1细胞向肌成纤维细胞方向转化,其机制可能是通过抑制Smad2/3经典通路以及抑制TGF-β1所诱导的STAT3磷酸化,从而对肺纤维化疾病进展发挥保护作用.

转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β1)/Smad信号通路传导途径及其调控的相关蛋白与肝纤维化的发生发展密切相关.中医药抗肝纤维化作用显著,黄酮类、萜类、皂苷类、酚酸类、多糖类等多种中药有效成分均可通过调节TGF-β1/Smad信号通路抑制肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)增殖活化及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成,减少胶原蛋白沉积,改善肝功能,降低肝组织炎症浸润水平.目前,中医药治疗肝纤维化仍存在一些局限性,如体外细胞实验较少;中药复方抗肝纤维化具体发挥作用的成分尚未明确,且多途径间的协同作用亟须关注;相关研究多为基础实验,缺乏双盲、多中心、随机对照的临床试验研究.今后亦可将调控分子信号通路与中医辨证施治相结合,组合而成新的方药,为抗肝纤维化新药的研发提供一定的思路.

目的 探究老年慢性心力衰竭(CHF)合并肺部感染患者病原菌分布及转化生长因子β1(TGF-β1)/信号传导蛋白Smads(Smads)信号通路表达.方法 选取2021年1月-2021年6月唐山市工人医院收治的老年CHF合并肺部感染患者100例为感染组;另选取医院同期收治的单纯老年CHF患者100例作为对照组.收集所有研究对象的临床资料,对病原菌进行鉴定,比较两组TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达水平及血清TGF-β1、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用Spearman相关性分析老年CHF合并肺部感染患者TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达水平与其纽约心脏协会(NYHA)心功能分级之间的相关性.结果 感染组患者共分离出病原菌118株,其中革兰阴性菌69株(58.47％),革兰阳性菌40株(33.90％),真菌9株(7.63％);感染组患者的TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达水平及血清TGF-β1、TNF-α及IL-8水平高于对照组(P＜0.05);心功能Ⅰ～Ⅱ级组患者的TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达水平低于心功能Ⅲ～Ⅳ级组(P＜0.05);相关性分析结果显示,老年CHF合并肺部感染患者的TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达水平与其NYHA分级呈正相关关系(P＜0.05).结论 老年CHF合并肺部感染患者的病原菌以革兰阴性菌为主,其TGF-β1/Smads信号通路可能被过度激活,且可能与患者心功能存在一定关系.

目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对小鼠接触性皮炎(CHS)的抑制作用及机制.方法:0.5%2,4-二硝基氟苯(DNFB)涂抹小鼠腹部连续2 d致敏,5 d后用0.25%DNFB涂抹左耳发敏,右耳涂抹丙酮和橄榄油混合液作为对照,于致敏前2 d灌胃给予DHA处理.HE染色观察小鼠皮肤组织病理学变化,免疫组化染色观察小鼠耳部皮肤CD4+T、CD8+T细胞浸润情况,测定脾脏指数.ELISA检测血清IL-6、IFN-γ、IL-10、TGF-β和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1变化,Western blot检测皮肤Smad2和Smad3磷酸化水平,流式细胞术检测皮肤和脾脏免疫细胞浸润情况.结果:DHA可显著改善CHS小鼠耳朵肿胀、皮肤红斑及脾脏指数(P<0.05).组织病理学结果显示,DHA处理可明显抑制CHS小鼠皮肤增厚和炎症细胞浸润.流式细胞术结果显示,DHA处理后皮肤和脾脏中浸润的CD4+T细胞、CD8+T细胞、树突状细胞和巨噬细胞显著减少(P<0.05).ELISA结果显示,相对于模型组,DHA处理组血清IL-6、IFN-γ、TGF-β和MCP-1水平明显降低(P<0.05).Western blot结果表明DHA处理显著抑制皮肤Smad2和Smad3磷酸化水平(P<0.05).结论:DHA通过减少免疫细胞浸润和调节TGF-β/Smad信号传导抑制CHS,为治疗CHS提供了新的药物选择和实验依据.

目的 研究刺老苞根皮水提物对成骨细胞TGF-β/BMPs信号通路的影响.方法 建立大鼠骨折模型,随机分为模型组,刺老苞根皮水提物低、中、高剂量(3.6、1.8、0.9 g/kg)组,ig给药7d后腹主动脉取血,分离血清;培养大鼠原代成骨细胞,经碱性磷酸酶染色、茜素红染色鉴定合格后,分别以对应组别的动物血清连续培养48 h,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting技术分别检测各组细胞中骨形态发生蛋白质-2(BMP-2)、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad家族相关蛋白1、2(Smad-1、Smad-2)mRNA和蛋白表达.结果 与模型组比较,刺老苞根皮水提物不同浓度的含药血清组BMP-2、TGF-β、Smad-1 mRNA表达均显著升高(P＜0.05、0.01),中、高剂量含药血清组Smad-2 mRNA表达显著升高(P＜0.05);低、中、高剂量含药血清组的BMP-2、TGF-β、Smad-l、Smad-2蛋白表达均显著升高(P＜0.05).结论 刺老苞根皮水提物通过上调TGF-β/BMPs信号传导通路中的BMP-2、TGF-β、Smad-1、Smad-2表达,促进成骨细胞增殖.

目的:探讨温阳益气方改善心梗后心力衰竭大鼠肺结构重塑的作用和机制.方法:建立大鼠心力衰竭模型,分成6组,温阳益气方高、中、低(2.0,1.0,0.5 g·kg-1 ·d-1)剂量组,强的松组(0.1g·kg-1·d-1),模型组和假手术组(以同等体积的蒸馏水灌胃),连续灌胃8周.灌胃结束后,彩色多普勒超声诊断仪测定左心室舒张末期内径(left ventricular end diastolic diameter,LVIDd),左心室收缩末期内径(left ventricular end systolic diameter,LVIDs),短轴缩短分数(fractional shortening,FS)和射血分数(ejection fraction,EF);测定湿肺/体质量和干肺/体质量,肺组织苏木素-伊红(HE)染色切片,酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠肺组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),胶原蛋白(Collagen),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),p-Smad3蛋白家族(drosophila mothers against decapentaplegic,p-Smad3)蛋白表达量.结果:与模型组比较,温阳益气方高、中剂量组LVIDd,LVIDs明显升高,FS,EF明显降低(P＜0.05);与假手术组及强的松组比较,温阳益气方低剂量组LVIDd,LVIDs明显降低,FS,EF明显升高(P＜0.05);与模型组比较,温阳益气方高、中剂量组湿肺/体质量、干肺/体质量明显升高(P＜0.05);与假手术组及强的松组比较,温阳益气方低剂量湿肺/体质量、干肺/体质量明显降低(P＜0.05),模型组肺泡严重破化,淋巴细胞浸润明显;假手术组及强的松组未见明显肺泡破化,无淋巴细胞浸润,无胶原蛋白沉淀;温阳益气方高、中剂量组肺泡破化轻,胶原蛋白沉淀也较少;温阳益气方低剂量组淋巴细胞浸润明显,肺泡壁明显增厚;与模型组比较,温阳益气方高、中剂量组α-SMA,Collagen,TGF-β1,p-Smad3明显降低(P＜0.05),TGF-β1,p-Smad3 mRNA明显降低(P＜0.05);与假手术组及强的松组比较,温阳益气方低剂量组α-SMA,Collagen,TGF-β1,p-Smad3明显升高(P＜0.05).TGF-β1 mRNA与TGF-β1,p-Smad3 mRNA,α-SMA,Collagen;p-Smad3 mRNA与p-Smad3,α-SMA,Collagen正相关关系明显(P＜0.05).结论:温阳益气方能阻断TGF-β1/Smad3通路信号传导,抑制α-SMA,Collagen,TGF-β1,p-Smad3蛋白的表达,进而抑制成纤维细胞的活化增殖,降低肺部胶原蛋白的沉淀,最终达到抑制肺部组织重塑的作用.

在肺纤维化发病过程中,多条SMAD依赖及非SMAD依赖信号通路参与上皮-间充质细胞转分化(EMT)及纤维化的形成和发展,其中转化生长因子-β(TGF-β)/SMAD信号通路在EMT的形成及信号通路间的联系中发挥着关键性的作用.在该通路中,TGF-β与受体结合后,激活下游的SMAD蛋白,活化的SMAD2与SMAD3形成同源或异源二聚体后与SMAD4共同进入细胞核,与纤维化相关转录因子相互作用,共同调节靶基因的沉默或激活,从而促进EMT及肺纤维化的形成.本文对该通道与EMT及肺纤维化的关系作一综述.

目的:研究苦碟子注射液(简称苦碟子)对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用及机制.方法:采用单侧输尿管结扎法制备大鼠肾间质纤维化模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、缬沙坦(0.01 g·kg-1)组、苦碟子低、高剂量(0.15,0.30 g·kg-1)组.各组大鼠在给药后第7,14天分批次处死,采集血液,肾组织,测定血清肌酐(serum creatinine,SCr),尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)含量;肾组织匀浆检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;肾脏苏木素-伊红(HE),马松(Masson)染色观察肾脏病理变化;免疫组化法检测各组大鼠肾组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),磷酸化-Smad2/3(phosphorylated Smad2/3,p-Smad2/3),骨形成蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)的表达,并行半定量分析;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织TGF-β1,Smad2,Smad3,BMP-7及Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)mRNA表达.结果:苦碟子能降低肾间质纤维化大鼠血肌酐水平,能减轻肾间质小管损伤,减少肾间质胶原相对面积,MDA含量,下调TGF-β1,p-Smad2/3,Col Ⅰ的表达;增加SOD的活性以及BMP-7表达水平,与苦碟子低剂量组比较,以苦碟子高剂量(0.30 g·kg-1)组效果最为显著(P＜0.05).结论:苦碟子对大鼠肾间质纤维化的保护作用,可能与其降低大鼠肾组织氧化应激水平、抑制TGF-β1/Smad/ BMP-7信号通路传导,从而抑制细胞外基质增生有关.