鼠疫是由鼠疫耶尔森菌（以下简称鼠疫菌）引起的一种烈性传染病，发病急、传播快且病死率极高。历史上发生过3次鼠疫大流行，导致上亿人口死亡。近20年来全球鼠疫疫情呈上升趋势，2000 - 2018年，世界卫生组织（WHO）共收到来自美洲、非洲和亚洲21个国家报告的2万多起鼠疫病例 [1]。我国动物间鼠疫一直较为活跃，且除个别年份外，几乎每年都有人间鼠疫发生。2019年11月，北京市首先出现2例内蒙古自治区输入性肺鼠疫病例，随后内蒙古自治区又报道2例腺鼠疫病例，提示这一甲类传染病仍对人们的生命安全具有极大的潜在威胁 [2,3,4]。链霉素是WHO鼠疫手册 [5]和我国《鼠疫诊疗方案（试行）》（卫办应急发[2011]第18号） [6]中治疗鼠疫的首选药物。但值得注意的是，2021年Dai等 [7]发现国内1株鼠疫菌因编码核糖体蛋白S12的rpsL基因第128 bp位点的碱基发生了突变，从而产生了对链霉素的高度耐药性。为此，本研究应用基于TaqMan-MGB荧光探针的实时荧光PCR法（简称MGB荧光探针法），选取鼠疫流行较为严重的玉树藏族自治州（以下简称玉树州）鼠疫自然疫源地内分离的鼠疫菌，检测链霉素耐药位点rpsL基因第128 bp位点碱基的突变情况，判断当地菌株的耐药情况，为鼠疫疫情的防控提供参考。

目的:探讨ZNA （ZIP Nucleic Acid）探针的PCR性能及其在沙眼衣原体（CT）核酸定量检测中的研究。方法:使用CT阳性质粒，比较偶联不同ZIP数量的ZNA探针的PCR扩增曲线差异；比较ZNA探针与29mer普通Taqman探针（DNA长探针）、20mer普通Taqman探针（DNA短探针）、MGB探针在PCR扩增曲线、反复冻融稳定性及低浓度质粒检出率的差异；使用CT阳性临床样本，比较ZNA探针与DNA长探针、DNA短探针、MGB探针扩增曲线差异及低浓度样本检出率的差异。结果:（1）偶联5个ZIP单位的ZNA探针Ct值和荧光值最优，与偶联1个ZIP的探针相比：Ct值提升1.34 （灵敏度提升2.37倍），荧光值提升30%。（2）偶联5个ZIP的ZNA探针的扩增效率是优选的普通Taqman探针和MGB探针的2.14~2.64倍，荧光值高17%~90%。（3）四组探针冻融稳定性结果显示，ZNA探针的稳定性最佳，低浓度（1×10 4拷贝/mL）的Ct值偏离最小（CV%= 1.4），优于DNA长探针、DNA短探针、MGB探针（CV%= 1.7~3.7）。（4）用35例CT临床样本比较四组探针（DNA长探针、DNA短探针、MGB探针、ZNA探针）的PCR扩增性能，相对于其他三组探针，ZNA探针的扩增灵敏度分别提升1.60倍、0.99倍和1.06倍，且Ct值一致性分析结果显示，ZNA探针对临床样本的检出性能提升更优。（5）使用低浓度质粒模板（分别为200、100、50和10拷贝/mL）比较四组探针的扩增灵敏度，ZNA探针的检出率均优于DNA长探针、DNA短探针、MGB探针；在最低浓度10拷贝/mL时，其他三组探针的检出率只有15%~20%，ZNA探针仍有30%。（6）在20例不同低浓度（分别为200、150、100和50拷贝/mL）临床样本中ZNA探针检出率最高，分别为100%、95%、90%和70%。 结论:偶联5个ZIP的ZNA探针的扩增效率、荧光值、冻融稳定性、临床样本的扩增性能及低浓度样本检出灵敏度都优于普通Taqman探针和MGB探针，ZNA探针可作为一种设计灵活和合成易得的新探针技术，在基因表达领域可进一步提升检测的灵敏度及低浓度样本的检出率。

目的:研究支气管哮喘(哮喘)患者白细胞介素17(IL-17)基因多态性与激素干预疗效的关系。方法:本研究为横断面研究。采用随机抽样方法，选取2018年5月至2020年5月三二〇一医院呼吸与危重症医学科收治的84例哮喘患者作为研究对象。患者均接受激素治疗，记录治疗效果。以TaqMan MGB探针技术对IL-17A和IL-17F进行基因分型，采用非条件logistic分析IL-17各基因型分布与治疗效果的关系。结果:84例患者中2例治疗期间被剔除，显效36例，有效27例，无效19例。总有效例数63例，总有效率为75.00%。不同疗效哮喘患者性别、年龄、体质量指数、病程、病情程度及发病季节比较，差异均无统计学意义( P值均>0.05)。非条件logistic分析显示IL-17F基因rs763780位点CT基因型较TT基因型和CC基因型患者治疗无效风险增加1.69倍(95% CI：12.23~2.34， P<0.001)，IL-17A基因rs3748067位点GA基因型较GG基因和AA基因型治疗无效风险增加2.45倍(95% CI：1.54~3.91， P<0.001)。rs763780位点CT基因型患者疗效低于TT基因型和CC基因型的风险增加1.27倍(95% CI：1.01~1.59， P＝0.043)，rs3748067位点GA基因型患者治疗效果低于GG基因型和AA基因型的风险增加1.93倍(95% CI：1.53~2.45， P<0.001)。 结论:IL-17基因多态性与哮喘激素治疗效果相关。IL-17A基因rs3748067位点和IL-17F基因rs763780位点SNP与激素治疗效果相关。rs3748067位点GA基因型和rs763780位点CT基因型可降低激素治疗效果。

目的:探讨ABCB11基因V444A突变与原发性肝胆管结石发生的相关性。方法:采取病例对照研究方法选取联勤保障部队第九〇〇医院肝胆病中心2017年10月至 2019年6月确诊的164 例福建籍原发性肝胆管结石患者［男91例，女73例，年龄（46.0±13.0）岁］和 164 名同一地区健康对照人群［男99名，女65名，年龄（43.8±16.7）岁］为研究对象。采用 TaqMan-MGB 探针方法对ABCB11基因V444A SNPs 多态性位点进行检测，计算上述位点等位基因和基因型频率，采用Pearson χ 2检验对所检出的等位基因及基因型进行关联分析；logistic 回归分析各基因型与肝胆管结石患病相关性。 结果:两组人群年龄和性别比较差异均无统计学意义（均 P>0.05）；Hardy-Weinberg平衡检验结果显示对照组人群中V444A位点的基因型及等位基因频率符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律，所选人群具有代表性（ P=0.161）；V444A位点等位基因及基因型共检出T、C 2个等位基因，TT、TC、CC 3个基因型，病例组中T、C等位基因频率分别为28.4%和71.6%，对照组中T、C等位基因频率分别为35.4%和64.6%，两组等位基因频率分布差异无统计学意义（ P=0.054），病例组中TT、TC、CC的基因型频率为5.5%、45.7%、48.8%，对照组中TT、TC、CC的基因型频率为14.6%、41.5%、43.9%，两组基因型分布差异有统计学意义（ P=0.023）；V444A位点基因型与肝内胆管结石的发病风险的多因素分析发现该位点TC型杂合突变可能增加原发性肝内胆管结石的患病风险。 结论:ABCB11基因V444A突变可能是肝内胆管结石发病的一个危险因素。

目的:探讨骨保护素（OPG）基因多态性与贵州省燃煤污染型地方性氟中毒（简称燃煤型地氟病）的关系。方法:2018、2019年，采用病例对照研究方法，在贵州省典型燃煤型地氟病病区毕节市选取燃煤型地氟病患者260例作为病例组，根据《地方性氟骨症诊断标准》（WS 192-2008）将病例组分为重症组和轻症组，每组130例；同时，在贵州省非燃煤型地氟病病区长顺县选取无氟斑牙及氟骨症症状者130例作为对照组。提取研究对象全血基因组DNA，采用 TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR法对所有样本OPG基因rs2460985、rs2073618、rs6469804、rs6993813 4个单核苷酸多态性（SNP）位点进行基因分型和遗传模式分析，比较其等位基因、基因型及所构建的单倍型在对照、轻症、重症组中频率分布的差异。 结果:经Hardy-Weinberg平衡检验，4个SNP位点基因型频率在对照、轻症、重症组中均达到遗传平衡（ P均> 0.05）。OPG基因rs6469804位点基因型频率组间比较差异有统计学意义（χ 2 = 10.615， P < 0.05），且该位点基因型频率对照组与重症组比较差异有统计学意义（χ 2 = 6.784， P < 0.05）。遗传模式分析结果显示，rs6469804位点对照组与重症组比较最优遗传模式为超显性遗传模式，在该模式下基因型AA + GG和AG频率分布差异有统计学意义[比值比（ OR）= 1.94，95%置信区间（ CI）：1.16 ~ 3.23， P < 0.05]，基因型AG是燃煤型地氟病发生的危险因素；rs2073618位点对照组与轻症组比较最优遗传模式为隐性遗传模式，在该模式下基因型GG + GC和CC频率分布差异有统计学意义（ OR = 3.17，95% CI：1.08 ~ 9.30， P < 0.05），基因型CC是燃煤型地氟病发生的危险因素。对照组与轻症组比较，单倍型C-C-G-T、T-G-A-C是燃煤型地氟病发生的危险因素（调整 OR = 2.41、1.98，95% CI：1.29 ~ 4.50、1.22 ~ 3.23， P均< 0.05）；对照组与重症组比较，单倍型T-G-A-C是燃煤型地氟病发生的危险因素（调整 OR = 1.87，95% CI：1.14 ~ 3.07， P < 0.05）。 结论:OPG基因rs6469804位点基因型AG和rs2073618位点基因型CC可能是燃煤型地氟病发生的危险因素。

目的 采用快速分子诊断方法中TaqMan荧光定量PCR技术,应用于利福平和异烟肼一线抗结核药物耐药基因的诊断中,评价其性能,建立高灵敏度、高特异度、高准确性并且快速的筛查方法,为结核分枝杆菌耐药性的诊断和治疗提供依据并探讨其应用价值,努力改善耐药结核病的检测和可行性.方法 本研究针对利福平ropB基因531位点突变和异烟肼katG基因315位点突变的特点,设计TaqMan-MGB引物和探针,通过反应条件优化,建立TaqMan荧光定量PCR方法;用克隆到pUC57载体上的阳性标准品及不同菌株评价该方法的特异性、灵敏度、重复性和精密度,采用甘油三酯、胆红素和血红素进行了干扰性实验.结果 TaqMan荧光定量PCR方法的检测限可达10copies/μl;在交叉干扰实验中,检测了 5种常见呼吸道感染细菌国家标准菌株,均未检出,基因野生型和突变型探针特异性较好,不受其它基因干扰;批内、批间的CT值变异系数均小于5％,标准曲线R2=0.998,扩增效率均在90％以上;该反应迅速,检测时间为1h.结论 本研究建立的TaqMan荧光定量PCR方法有助于及时发现结核分枝杆菌耐药情况,对结核病的耐药检测与后续治疗具有重要意义.

本研究根据华支睾吸虫cox1 基因序列设计合成特异性引物和探针,建立基于TaqMan MGB探针的人粪便中华支睾吸虫虫卵实时荧光PCR检测方法,同时评价该方法的特异性、敏感性、重复性.采用建立的荧光PCR方法对临床样本进行检测,并与改良加藤厚涂片法检测结果进行比对.结果显示,本研究建立的方法与形态和种属关系相近的寄生虫无交叉反应;以9.97×107～9.97×100 copies/μL浓度的质粒作为标准品建立标准曲线,检测灵敏度为 9.97 copies/μL;组内、组间重复性试验变异系数均小于 0.4%.采用该方法检测 280 份居民粪便样本,检出阳性 54 份,经对比该方法敏感性高于改良加藤厚涂片法.本研究所建立的方法可用于华支睾吸虫虫卵的检测及诊断.

目的 应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR技术快速检测青海省海西州鼠疫自然疫源地鼠疫菌耐链霉素基因,为今后该地区突发人间鼠疫的精准临床用药提供理论依据.方法 分离培养海西地区1957-2009年间取自鼠疫患者、媒介昆虫及中间宿主的代表性鼠疫菌110株,提取其DNA,针对我国链霉素耐药基因rpsl基因设计引物P-F和P-R和TaqMan-MGB探针Probe1[FAM]和Probe2[VIC],利用荧光定量PCR技术,进行耐药rpsl基因筛查.结果 110株被试菌株中FAM检测均为阳性(RFU峰值＞2000);VIC阳性的为0株(RFU峰值＜200).阳性对照和空白对照成立.结论 实时荧光定量PCR结果显示,该地区未检测出耐链霉素菌株.

目的 建立乙醇脱氢酶1B(ADH1B)基因rs1229984(G/A)和乙醛脱氢酶2基因rs671 (G/A)多态性的实时荧光定量PCR分型方法.方法 分别采用双TaqMan-MGB探针法建立ADH1B-rs1229984多态性,和ARMS-TaqMan探针法建立ALDH2-rs671多态性的实时荧光定量PCR分型方法.根据荧光定量PCR的循环阈值(Ct值)的差值△Ct值判定等位基因型,并采用所建方法对345例中国汉族人进行了分型检测.结果 所建方法对345例研究对象分型检测显示,ADH1B-rs1229984多态性的GG(ADH1B* 1/*1)、GA(ADH1B* 1/*2)和AA (ADH1B* 2/*2)型的△Ct值(△Ct=G型TaqMan-MGB探针Ct值-A型TaqMan-MGB探针Ct值)分别为-13.72±1.33(40例)、0.50±0.17(150例)和6.62 ±0.54(155例);ALDH2-rs671的GG(ALDH2* 1/*1)、GA(ALDH2* 1/*2)和AA (ALDH2*2/*2)型的△Ct值(△Ct=G引物反应体系Ct值-A引物反应体系Ct值)分别为-15.30±0.84(239例)、0.17 ±0.45(96例)和15.86±0.74(10例).345例研究对象中,ADH1B* 1/*2和AL-DH2* 1/* 1(31.3％)、ADH1B*2/*2和ALDH2* 1/* 1(28.7％)是2个等位基因的主要组合型(60％),未见ADH1B* 1/*1和ALDH2 * 2/*2组合型.结论 所建分型检测方法皆具有闭管、一步检测、准确和高通量等特点.

目的:探讨维生素D受体(VDR)及其基因多态性与鼻咽癌的关联.方法:采用荧光定量PCR检测48例鼻咽癌患者(鼻咽癌组)和48例对照者(对照组)外周血单个核细胞中的VDR mRNA.运用TaqMan-MGB荧光探针PCR法检测所有研究对象的FokI和ApaI位点基因型.结果:鼻咽癌组VDR mRNA△Ct值为9.32±0.91,对照组为7.31±1.04,鼻咽癌组VDR mRNA表达量显著低于对照组(t=10.08,P＜0.01).采用多因素Logistic回归分析,结果显示FokI点Ff基因型在鼻咽癌组中的分布显著高于对照组(调整OR=1.97,95％CI=1.33～2.91).未发现ApaI位点各基因型在对照组和鼻咽癌组中分布存在差异.进一步采用单倍型分析,结果显示,与fa单倍型相比,Fa单倍型在对照组中的分布显著高于鼻咽癌组(调整OR=o.65,95％CI=0.48～0.87).2组FokI位点不同基因型中VDR mRNA表达水平差异有统计学意义(F=194.5,P＜0.01).结论:VDR基因遗传变异与鼻咽癌有密切关联.