目的 探讨姜黄素(curcumin,CUR)对乙醛酸诱导的小鼠肾结石形成模型中肾损伤的保护作用及其机制.方法 通过连续腹腔注射乙醛酸,建立小鼠肾结石形成模型.以一水草酸钙(calcium oxalate monohydrate,COM)诱导 HK-2细胞作为体外模型.小鼠模型经CUR作用后,测定肾小管损伤、炎症细胞因子水平,研究CUR对小鼠肾结石的保护作用;CUR对COM诱导HK-2作用后,检测细胞活力及炎症因子;Western blot检测小鼠肾组织和HK-2细胞Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)和核因子红血球相关因子2(NRF2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路相关蛋白;为进一步探讨CUR对TLR4/NF-κB和NRF2/HO-1通路的调控作用,采用NRF2抑制剂ML385和TLR4激动剂CCL-34分别作用于COM诱导的HK-2细胞,以进行功能增益和功能丧失检测.结果 CUR改善小鼠肾结石形成模型损伤,抑制炎症和抗氧化作用;促进COM诱导HK-2细胞的活力,抑制炎症因子的表达.CUR抑制TLR4/NF-κB通路中蛋白的表达,促使NRF2从细胞质转移到细胞核,并促进HO-1的表达.ML385和CCL-34分别抵消CUR对COM诱导HK-2细胞抗炎作用的影响.结论 CUR通过调控小鼠肾结石形成模型TLR4/NF-κB和NRF2/HO-1通路改善肾损伤.

目的:探讨外周血单个核细胞（PBMC）Toll样受体3（TLR3）信号通路的活化在重组HBsAg（rHBsAg）免疫应答中的作用及机制。方法:收集13名健康献血者外周血制备血液制品时滤除的白细胞，分离培养PBMC后分别给予TLR3激动剂聚肌苷酸-聚胞苷酸（Poly I：C组）及PBS（对照组）处理，48 h后收集部分细胞，采用流式细胞术检测TLR3信号通路蛋白水平；在活化（Poly I：C组）/未活化（对照组）TLR3信号通路后，采用rHBsAg处理两组PBMC 72 h，采用流式细胞术检测PBMC中树突状细胞（DC）、T、B淋巴细胞及其亚群比例。采用配对 t检验、配对资料的符号秩和检验和典型相关分析进行统计学分析。 结果:Poly I：C组PBMC TLR3信号通路中TLR3蛋白阳性细胞百分比（19.21%）、TLR3蛋白表达量（8 983.95）、NF-κB蛋白的表达量（26 193.13）、磷酸化NF-κB（pNF-κB）蛋白阳性细胞百分比（13.73%）及其占NF-κB的比例（16.03%）、磷酸化IRF3（pIRF3）蛋白阳性细胞百分比（12.64%）及其占IRF3的比例（21.80%）均明显高于对照组（分别为11.54%、8 086.00、22 340.66、8.72%、9.71%、9.57%、19.12%）（ P<0.05），TRIF蛋白阳性细胞百分比（89.75%）和蛋白表达量（304 219.54）均高于对照组（89.64%、288 149.72）（ P>0.05）；经rHBsAg处理后，Poly I：C组髓样DC（mDC）（2.90%）、浆细胞样DC（1.80%）、B细胞（5.31%）比例及浆细胞占B细胞比例（67.71%）均明显高于对照组（1.83%、0.81%、4.23%、58.82%）（ P<0.05）；TLR3信号通路相关蛋白阳性细胞百分比和蛋白表达量与免疫细胞之间均存在典型相关，TLR3蛋白表达量与浆细胞比例、pIRF3蛋白表达量与浆细胞和mDC比例、pNF-κB和pIRF3蛋白阳性细胞百分比与CD4 +T细胞的比例均正相关。 结论:Poly I：C可以活化PBMC TLR3/TRIF/NF-κB和TLR3/TRIF/IRF3信号通路，促进下游信号分子发挥功能，进而促进DC的成熟，诱导CD4 +T细胞免疫反应，促进B细胞的成熟分化，促进rHBsAg的免疫应答。

目的:制备靶向递送Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）激动剂的细胞膜包被纳米囊泡，探讨其诱导肿瘤相关巨噬细胞极化治疗骨肉瘤的作用及其机制。方法:通过聚碳酸酯膜挤出器制备载TLR4激动剂的细胞膜包被纳米囊泡，利用透射电镜和粒度仪检测其形状及粒径，并测量和计算纳米囊泡对TLR4激动剂的载药性能。将载TLR4激动剂纳米囊泡应用DiD红色荧光染料标记后与巨噬细胞体外共孵育培养，通过共聚焦荧光显微镜检测纳米囊泡对巨噬细胞的靶向性及调控巨噬细胞功能的作用。体外细胞实验中构建细胞共培养体系，未处理组、TLR4激动剂组、载TLR4激动剂纳米囊泡组分别处理上层巨噬细胞后，收集下层骨肉瘤细胞进行CCK-8、克隆形成实验，评估对骨肉瘤细胞活力、增殖等功能的影响。动物实验中构建小鼠骨肉瘤皮下移植瘤模型，将小鼠随机分为未处理组、TLR4激动剂组、载TLR4激动剂纳米囊泡组。尾静脉注射后利用小动物活体成像实验观察纳米囊泡的体内肿瘤靶向性，连续检测计算肿瘤组织的体积。取皮下移植瘤切片染色标记巨噬细胞相关标志物，评估其对巨噬细胞极化的作用；切片行TUNEL荧光染色观察骨肉瘤细胞凋亡水平。结果:透射电镜显示载TLR4激动剂纳米囊泡呈圆形，粒径约200 nm。0.05 mg TLR4激动剂与0.1 mg纳米囊泡共孵育是制备载药纳米囊泡的最佳条件，包封率约35%，载药量约0.11 mg/mg，可高效装载递送TLR4激动剂。共聚焦荧光显微镜显示DiD标记的载TLR4激动剂纳米囊泡在巨噬细胞中明显聚积，且M1型巨噬细胞标志物（iNOS）荧光明显增强，可诱导巨噬细胞发生M1型极化。体外细胞实验光镜下可见载TLR4激动剂纳米囊泡组骨肉瘤细胞数量明显减少，细胞皱缩、变圆；CCK-8、克隆形成实验显示，相比未处理组和TLR4激动剂组，载TLR4激动剂纳米囊泡组骨肉瘤细胞活力、增殖能力明显降低。小动物活体成像实验显示载TLR4激动剂纳米囊泡在体内肿瘤组织局部富集，而在全身其他脏器无分布。载TLR4激动剂纳米囊泡组肿瘤组织生长明显被抑制，取皮下移植瘤切片染色显示M1型巨噬细胞标志物（iNOS）荧光明显增强（iNOS相对荧光强度为3.27±0.19），而M2型巨噬细胞标志物（CD163）荧光明显下降（CD163相对荧光强度为0.14±0.04）。TUNEL荧光染色显示骨肉瘤细胞凋亡水平明显升高（TUNEL相对荧光强度为9.53±0.21）。结论:细胞膜包被纳米载TLR4激动剂囊泡可靶向递送TLR4激动剂至骨肉瘤肿瘤组织，诱导肿瘤相关巨噬细胞极化，重塑肿瘤免疫抑制微环境，促进骨肉瘤细胞凋亡，从而杀伤骨肉瘤。

目的:观察脓毒症患者外周血Toll样受体（Toll-like receptor, TLR）表达谱变化，分析活化TLR7对脓毒症患者CD8+T细胞杀伤活性的影响。方法:采用横断面研究方法，纳入2020年6月至2021年6月在新乡医学院第一附属医院就诊的脓毒症患者和对照者，于就诊本院后1 h内采血，分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs），逆转录实时定量PCR法检测PBMCs中TLR1~10 mRNA，流式细胞术检测CD8 +T细胞中TLR7和TLR9，分析TLR对预后的诊断价值。分选CD8 +T细胞，使用TLR7激动剂CL097刺激CD8 +T细胞，CD8 +T细胞与人脐静脉内皮细胞直接接触或间接接触共培养，检测免疫检查点受体表达、靶细胞死亡比例、毒性分子和细胞因子分泌。组间比较采用 t检验或Mann-Whitney检验，刺激前后比较采用配对 t检验或配对Wilcoxon秩和检验。 结果:纳入58例脓毒症患者和24例对照者。PBMCs中TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8和TLR10 mRNA在脓毒症患者和对照者之间的差异无统计学意义（均 P>0.05）。脓毒症患者PBMCs中TLR9 mRNA低于对照者[0.94(0.81, 1.15) vs. 1.14(0.82, 2.12)， P=0.046]，但CD8 +T细胞中TLR9平均荧光强度与对照者差异无统计学意义[(23.83±7.44) vs. (24.95±7.97)， P=0.548]。脓毒症患者PBMCs中TLR7 mRNA[1.01 (0.88, 1.15) vs. 1.61(1.04, 2.63)， P<0.001]和CD8 +T细胞中TLR7平均荧光强度[(130.0±45.07) vs. (250.9±79.09)， P<0.001）均低于对照者。对脓毒症患者存活组和死亡组TLR7水平进行ROC曲线分析，TLR7 mRNA和TLR7 MFI曲线下面积分别为0.70和0.73（均 P<0.05），预测价值较好。脓毒症患者CD8 +T细胞中免疫检查点受体mRNA表达升高、直接接触杀伤功能及分泌毒性分子、细胞因子水平降低（均 P<0.05）。在直接接触共培养体系中，CL097刺激可增加脓毒症患者CD8 +T细胞诱导靶细胞死亡比例[(11.92±2.81)% vs. (9.28±2.03)%， P=0.008]，促进毒性分子和细胞因子分泌。在间接接触共培养体系中，CD8 +T细胞诱导靶细胞死亡比例和毒性分子分泌在经CL097刺激和无CL097刺激之间的差异无统计学意义。 结论:TLR7水平降低对脓毒症患者预后不佳有提示意义。脓毒症患者存在CD8+T细胞功能衰竭，TLR7激动剂可增强脓毒症患者CD8+T细胞杀伤功能。

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对大鼠脊髓损伤(SCI)后微血管内皮细胞(EC)葡萄糖转运体1(GLUT1)表达的作用及机制。方法:改良Allen’s法制作Sprague-Dawley大鼠SCI模型，观察SCI 1 d后抑制HMGB1作用脊髓GLUT1表达。培养大鼠脑脊髓EC，建立氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型，观察减少HMGB1对OGD 6 h/R 12 h处理EC的GLUT1表达的作用。使用Toll样受体4(TLR4)、TRIF及核转录因子-κB(NF-κB)的激动剂或抑制剂，激动或抑制通路蛋白作用，观察TLR4/TRIF/NF-κB通路在体内外HMGB1调节GLUT1表达中的作用。统计学方法采用单因素方差分析，两两比较采用Tukey’s检验。结果:SCI 1 d后大鼠脊髓GLUT1表达增高(SCI 1 d组高于sham组，1.655±0.083比1.000±0， q＝24.580， P<0.01)。丙酮酸乙酯(实验组低于SCI组，1.356±0.096比2.107±0.115， q＝14.730， P<0.01)或甘草甜素(实验组低于SCI组，1.311±0.093比2.107±0.115， q＝15.620， P<0.01)抑制HMGB1作用减少SCI 1 d大鼠脊髓GLUT1表达。SC 1 d大鼠激动TLR4增加GLUT1表达(实验组高于SCI组，1.880±0.120比1.655±0.076， q＝5.032， P<0.05)，抑制TRIF(实验组低于SCI组1.427±0.118比1.655±0.076， q＝5.109， P<0.05)或抑制NF-κB(实验组低于SCI组1.301±0.076比1.655±0.076， q＝7.948， P<0.01)都可减少GLUT1表达。体外培养的脑脊髓EC，加入含HMGB1的星形胶质细胞条件培养基(ACM)并进行OGD 6 h/R 12 h处理后增加GLUT1表达(OGD 6 h/R 12 h组高于Normal组，2.122±0.075比1.000±0， q＝38.720， P<0.01)，减少ACM内HMGB1含量降低GLUT1表达(实验组低于OGD 6 h/R 12 h组，1.316±0.131比1.950±0.166， q＝8.737， P<0.01)。抑制TLR4(CLI-095：实验组低于OGD 6 h/R 12 h组，1.753±0.103比2.230±0.103， q＝13.515， P<0.01；C34：实验组低于OGD 6 h/R 12 h组，1.306±0.038比2.230±0.103， q＝16.440， P<0.05)，抑制TRIF(实验组低于OGD 6 h/R 12 h组，1.383±0.027比2.230±0.103， q＝23.750， P<0.05)或抑制NF-κB(实验组低于OGD 6 h/R 12 h组，1.149±0.064比2.230±0.103， q＝17.510， P<0.05)都可减少加入ACM并进行OGD 6 h/R 12 h处理的EC的GLUT1表达。 结论:抑制HMGB1作用减少SCI后EC的GLUT1表达，HMGB1通过TLR4/TRIF/NF-κB信号通路发挥上述调节作用。

目的 探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)调控小窝蛋白-1(Cav-1)对脂多糖(LPS)所致大鼠急性肺损伤(ALI)的影响.方法 采用随机数字表法将40只SD大鼠分为对照组(NS组)、LPS组(L组)、LPS+SIRT1激动剂SRT1720组(S组)和LPS+SIRT1抑制剂EX527组(E组),每组各10只.S组和E组大鼠分别尾静脉注射SRT1720 10 mg/kg、EX527 1 μg/kg,30 min后L组、S组和E组滴鼻LPS 5 mg/kg(用0.9％氯化钠注射液稀释至0.5 mL)制备ALI模型,NS组滴鼻等量0.9％氯化钠注射液.6 h后颈动脉放血处死大鼠,取肺组织并在光镜下观察肺组织损伤情况(采用Smith评分评估),采用ELISA法检测肺组织IL-6、TNF-α水平和髓过氧化物酶(MPO)活性,计算肺组织湿重/干重(W/D)值.采用免疫组化法测定肺组织SIRT1、Cav-1、Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平,采用实时荧光定量PCR法检测肺组织SIRT1、Cav-1、TLR4mRNA表达水平.结果 与NS组比较,L组、S组和E组Smith评分、IL-6、TNF-α水平、MPO活性及W/D值升高,SIRT1、Cav-1表达下调,TLR4表达上调(均P＜0.05).与L组比较,S组Smith评分及IL-6、TNF-α水平降低,SIRT1、Cav-1表达上调,TLR4表达下调(均P＜0.05);E组Smith评分、IL-6、TNF-α水平、MPO活性及W/D值升高,SIRT1、Cav-1表达下调,TLR4表达上调(均P＜0.05).与S组比较,E组Smith评分、IL-6、TNF-α水平、MPO活性及W/D值升高,SIRT1、Cav-1表达下调,TLR4表达上调(均P＜0.05).结论 SIRT1通过上调Cav-1的表达减轻LPS所致大鼠ALI的严重程度.

目的:研究雷公藤内酯醇(TPL)对皮质神经元缺氧/复氧(H/R)损伤的影响,并基于Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路探讨其作用机制.方法:分离并体外培养SD大鼠乳鼠皮层神经元,通过缺氧4h复氧24h制备H/R损伤皮质神经元模型,设正常对照组、模型组、TPL(25mg/L)组、TPL(25mg/L)+TAK242(TLR4 抑制剂,1mg/L)组和 TPL(25mg/L)+LPS(TLR4 激动剂,0.1mg/L)组.各组分别给药干预24h后,采用MTT法检测神经元活力,流式细胞术检测神经元凋亡,ELISA法检测培养液中炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6]含量,Western blot法检测神经元TLR4/NF-κB 信号通路相关蛋白[TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、B淋巴细胞瘤-2 基因(bcl-2)、bcl-2 相关 X 蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、激活型Caspase-3(cleaved Caspase-3)]表达.结果:与模型组比较,TPL组皮质神经元活力显著升高、凋亡率显著降低(P<0.05);培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6 含量显著降低(P<0.05);TLR4 表达量及p-NF-κB p65/NF-κB p65、Bax/bcl-2、cleaved Caspase-3/Caspase-3 表达比值均显著降低(P<0.05).TAK242 可显著增强TPL对H/R损伤皮质神经元活力、凋亡、炎症因子含量、TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达的调控作用;而 LPS 则显著逆转 TPL 对 H/R 损伤皮质神经元各检测指标的调控作用.结论:TPL可以通过抑制 TLR4/NF-κB 通路活化减轻炎症反应和神经元凋亡,进而对皮质神经元H/R损伤起到保护作用.

目的 基于Toll样受体 4(TLR4)信号通路探讨金雀异黄酮(GEN)对急性心肌梗死(AMI)大鼠左心室功能的影响及潜在机制.方法 100 只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、GEN(GEN,40 mg/kg)组、GEN+TAK242(TLR4 抑制剂,10 mg/kg)组和GEN+LPS(TLR4激动剂,5 mg/kg)组,每组 20 只.采用结扎冠状动脉左前降支的方法构建AMI大鼠模型,经1 次/d给药治疗 4 周后,通过心脏超声检测大鼠左心室功能;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、基质裂解素2(ST2)、脑利钠肽(BNP)水平;计算左心室质量指数(LVMI);苏木精-伊红(HE)染色法观察左心室心肌组织病理学改变;马森(Masson)染色法观察左心室心肌组织纤维化状况并计算胶原容积分数(CVF);ELISA法检测左心室心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;蛋白免疫印迹法检测TLR4、核因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Col-Ⅲ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达.结果 与模型组比较,GEN组左心室功能改善,左心室收缩末期内径(LVIDs)和左心室舒张末期内径(LVIDd)降低,左心室短轴缩短率(LVFS)和左心室射血分数(LVEF)升高;血清AngⅡ、ST2、BNP水平和LVMI降低;左心室心肌组织病理性改变和纤维化状况均改善,CVF降低;心肌组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低;TLR4、TGF-β1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA表达量和p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).TAK242 能够增强GEN对AMI大鼠上述指标的调控作用;LPS则能够阻断GEN对AMI大鼠各指标的调控作用.结论 GEN具有抑制AMI大鼠心室重构,改善左心室功能的作用,其机制可能与抑制TLR4 信号通路,减轻炎症反应,减少细胞外基质生成有关.

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)激动剂LPS腹腔注射对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的预防作用及其作用机制.方法 将60只大鼠根据随机数字表法分为LPS干预组(0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg,均为小剂量)、维拉帕米干预组、模型组、假手术组,每组15只.构建MIRI模型前7 d,LPS干预组给予0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg LPS腹腔注射,维拉帕米干预组给予2.5%维拉帕米(2 mg/kg)腹腔注射,假手术组与模型组给予等容量生理盐水腹腔注射;均每日1次.然后,除假手术组外,其余组大鼠进行缺血再灌注处理.处理后72 h,采用超声检测各组大鼠心功能,苏木精—伊红(HE)染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测算各组大鼠心肌梗死面积;采用 Western blotting法检测大鼠心肌组织FoxO3a、pFoxO3aS253、Beclin-1及LC蛋白.结果 与假手术组比较,模型组大鼠左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(LVFS)减小(P均<0.05);心肌损伤严重,心肌梗死面积百分比升高(P均<0.05);心肌组织中pFoxO3aS253蛋白相对表达量降低(P<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量升高(P均<0.05).与模型组比较,维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠LVEF、LVFS增加(P均<0.05);0.1 mg/kg及0.5 mg/kg LPS干预组大鼠心肌病变改善不明显,维拉帕米干预组和1 mg/kg LPS干预组大鼠心肌纤维水肿、断裂、坏死及炎细胞浸润程度均减轻;维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠心肌梗死面积百分比降低(P均<0.05),pFoxO3aS253蛋白相对表达量升高(P均<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量下降(P均<0.05).结论 小剂量TLR4激动剂LPS可预防大鼠MIRI,其作用机制可能与促使FoxO3a磷酸化及抑制Beclin-1、LC激活有关.

目的:探讨羟氯喹(HCQ)对系统性红斑狼疮(SLE)小鼠肺损伤以及Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的影响.方法:取32只雌性MRL/lpr狼疮小鼠(自发型SLE小鼠模型)随机分为模型组、HCQ(80 mg/kg)组、HCQ(80 mg/kg)+TAK242(TLR4 抑制剂,0.3 mg/kg)组和 HCQ(80 mg/kg)+LPS(TLR4 激动剂,2.5 mg/kg)组,每组8只;另取8只同龄雌性C57BL/6小鼠设为正常对照组.各组分别连续给药治疗5周后,通过肺功能仪检测肺功能指标[气道阻力(Raw)、动态肺顺应性(Cdyn)、第0.1秒用力呼气容积(FEV0.1)],ELISA法检测肺泡灌洗液中炎症因子[干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-6]水平和血清中免疫学指标[抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(ds-DNA)]水平,HE染色法和Masson染色法观察肺组织病理学改变和纤维化状况,并进行病理评分和计算胶原容积分数(CVF),RT-qPCR法和Western blot法检测肺组织TLR4、NF-κB p65、IκBα mRNA和蛋白表达.结果:与模型组比较,HCQ组小鼠Raw明显降低且Cdyn、FEV0.1明显升高(均P＜0.05);肺泡灌洗液IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6水平和血清ANA、ds-DNA水平明显降低(均P＜0.05);肺组织病理学改变和纤维化状况明显改善,病理评分和CVF明显降低(均P＜0.05);肺组织TLR4、NF-κB p65、IκBα mRNA和蛋白表达量均明显降低(均P＜0.05).TAK242能够明显增强HCQ对SLE小鼠各检测指标的调控作用、LPS则能够明显逆转HCQ对SLE小鼠各检测指标的调控作用(均P＜0.05).结论:HCQ可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路及其介导的炎性反应,从而减轻SLE小鼠肺损伤,改善其肺功能.