目的:总结分析 USP9 X基因变异致限于女性型X-连锁综合征型智力障碍99型(MRXS99F，OMIM：300968)的临床及基因型特点，提高临床医师对该病的认识。 方法:对2020年3月(例1)和2020年6月(例2)南京医科大学附属儿童医院收治的2例MRXS99F患儿的临床资料及基因型进行分析，并查阅国内外数据库相关文献，总结该病的临床特征及基因变异特点。结果:2例患儿分别为6月龄(例1)及5岁(例2)，均表现为神经运动发育迟缓。例1同时表现为身材矮小、皮肤色素分布不均、特殊面容、肌张力低下、反复呼吸道感染、喉软骨发育不良、房间隔缺损、喂养困难、听力异常及脑发育不良；例2脑电图异常。全外显子组测序技术检测显示，2例患儿分别携带 USP9 X基因变异：c.6972+1G>A和c.6437C>T，2种变异均未见于大型人群数据库及既往文献中报道，为罕见变异。全球共4篇文献报道了22例 USP9 X基因变异致MRXS99F病例，结合本研究共24例。既往22例患儿临床表现多特殊面容(20/22例)；均有智力低下并运动和语言发育迟缓；22例基因变异类型均为新生变异。 结论:在国内首次报道该病的临床特点， USP9 X基因功能缺失变异导致的MRXS99F主要表现为精神运动发育迟滞、语言障碍、特殊面容合及多种先天性畸形等，对于不明原因的发育迟缓、特殊面容且并多种先天畸形患儿，应尽早行高通量测序等遗传学检测明确病因。

目的:探讨腱鞘纤维瘤（fibroma of tendon sheath，FTS）的临床病理特征、免疫表型及分子遗传学特征。方法:收集四川大学华西医院病理科2008年1月至2019年4月诊断为FTS或腱鞘滑膜纤维瘤的病例共134例。回顾上述病例的临床及组织学特点，并进行免疫组织化学、荧光原位杂交（FISH）及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测。结果:FTS共134例，男性67例，女性67例。中位年龄38岁（范围2~85岁）。肿瘤中位大小1.8 cm（范围0.1~6.8 cm）。最常见的病变部位为上肢（76/134，57%）。获得随访的28例患者均无复发。组织学上，经典型FTS 114例，边界较清，细胞成分较少，少量梭形的纤维母细胞杂乱地分布于致密的胶原硬化间质中，可见特征的狭长裂隙或薄壁血管；富于细胞型FTS（CFTS）20例，大多边界较清，细胞丰富区多与经典的少细胞区同时存在，偶见核分裂象，但缺乏病理性核分裂象。经典型FTS中，8例进行了免疫组织化学检测，多数病例（5/8）表达平滑肌肌动蛋白（SMA）。CFTS中，13例进行了免疫组织化学检测，均表达SMA。对20例CFTS和32例经典型FTS进行USP6基因重排的FISH检测，CFTS中11/20具有USP6基因重排，伴结节性筋膜炎（nodular fasciitis，NF）特征的12例CFTS中有7例具有USP6基因重排，不伴NF特征的8例CFTS中具有USP6基因重排占比为4/8；经典型FTS有3%（1/32）具有USP6基因重排。对所有经过FISH检测USP6基因重排结果为阳性，并可获得足够组织样本的病例（8例CFTS和1例经典型FTS）进行RT-PCR实验，CFTS中1例（1/8）成功检测到MYH9-USP6融合基因；经典型FTS未检测出目标融合基因。结论:FTS是一种相对少见的良性的纤维母细胞/肌纤维母细胞肿瘤。本研究及近来文献报道发现部分经典型FTS中也具有USP6基因重排，提示经典型FTS和CFTS可能为同一疾病谱系的不同阶段。USP6基因重排的FISH检测可作为FTS与其他肿瘤的重要辅助诊断工具。

20多年前，研究者们首次发现动脉瘤样骨囊肿中存在USP6基因所在染色体位点17p13的恒定易位，随着研究的不断深入和检测手段不断进步，研究者们在多种疾病中发现USP6基因的恒定重排，揭示了其克隆性增殖的本质，加深了对该家族肿瘤的认识。该家族肿瘤不仅具有相同的USP6基因重排，同时在组织形态学上也存在一定重叠，有学者提出应将其归类为同一家族谱系，即USP6基因介导的肿瘤家族。本文不仅对该家族肿瘤的临床病理特征、分子遗传学特征、诊断及鉴别诊断要点进行了回顾，同时对该类肿瘤的特殊发现及现有的相关分子检测技术手段及应用进行了总结。

Background::Ubiquitination plays an essential role in many biological processes, including viral infection, and can be reversed by deubiquitinating enzymes (DUBs). Although some studies discovered that DUBs inhibit or enhance viral infection by various mechanisms, there is lack of information on the role of DUBs in virus regulation, which needs to be further investigated.Methods::Immunoblotting, real-time polymerase chain reaction, in vivo/ in vitro deubiquitination, protein immunoprecipitation, immunofluorescence, and co-localization biological techniques were employed to examine the effect of ubiquitin-specific protease 3 (USP3) on APOBEC3G (A3G) stability and human immunodeficiency virus (HIV) replication. To analyse the relationship between USP3 and HIV disease progression, we recruited 20 HIV-infected patients to detect the levels of USP3 and A3G in peripheral blood and analysed their correlation with CD4 + T-cell counts. Correlation was estimated by Pearson correlation coefficients (for parametric data). Results::The results demonstrated that USP3 specifically inhibits HIV-1 replication in an A3G-dependent manner. Further investigation found that USP3 stabilized 90% to 95% of A3G expression by deubiquitinating Vif-mediated polyubiquitination and blocking its degradation in an enzyme-dependent manner. It also enhances the A3G messenger RNA (mRNA) level by binding to A3G mRNA and stabilizing it in an enzyme-independent manner. Moreover, USP3 expression was positively correlated with A3G expression ( r= 0.5110) and CD4 + T-cell counts ( r= 0.5083) in HIV-1-infected patients. Conclusions::USP3 restricts HIV-1 viral infections by increasing the expression of the antiviral factor A3G. Therefore, USP3 may be an important target for drug development and serve as a novel therapeutic strategy against viral infections.

目的:探讨女性乳腺浸润性导管癌组织中泛素特异性蛋白酶18(USP18)、泛素特异性蛋白酶20(USP20)、泛素特异性蛋白酶25(USP25)的表达与临床病理特征和预后的关系.方法:选取2017年3月-2020年3月四川省妇幼保健院和雅安市人民医院收治的女性乳腺浸润性导管癌患者98例作为研究对象,采用免疫组织化学方法检测乳腺浸润性导管癌组织和癌旁组织USP18、USP20、USP25的表达情况,分析癌组织中USP18、USP20和USP25的表达与临床病理特征间的关系.多因素Logistic回归分析女性乳腺浸润性导管癌预后的独立危险因素.Kaplan-Meier生存曲线分析USP18、USP20、USP25阴性和阳性表达患者预后的差异.结果:乳腺浸润性导管癌组织中USP20、USP18、USP25阳性表达率较癌旁组织更高(P＜0.05);乳腺浸润性导管癌组织中USP20的阳性表达与分化程度、TNM分期有关(P＜0.05);USP18的阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、分子亚型、分化程度有关(P＜0.05);USP25的阳性表达与淋巴结转移及分化程度有关(P＜0.05).多因素Logistic回归分析显示淋巴结转移、TNM Ⅲ期、USP18阳性表达、USP20阳性表达、USP25阳性表达均是影响患者预后的独立危险因素(P＜0.05).Kaplan-Meier生存曲线发现USP18、USP20、USP25阳性表达患者的3年未复发生存率分别为59.65％、59.32％、58.62％,分别低于USP18、USP20、USP25阴性表达患者的82.05％、83.78％、84.21％.结论:USP18、USP20、USP25在女性乳腺浸润性导管癌中的表达情况与淋巴结转移、TNM分期、分化程度以及分子亚型密切相关.USP18、USP20、USP25阳性表达是影响患者预后的独立危险因素,且与患者3年未复发生存率有关.

目的 探讨乳腺癌中泛素特异性蛋白酶20(ubiquitin-specific proteases 20,USP20)、低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-α)表达变化及意义.方法 免疫组织化学及免疫荧光方法用于检测USP20与HIF-α阳性细胞的表达变化以及细胞定位,并分析它们之间的关系;shRNA-USP20慢病毒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞构建乳腺癌MDA-MB-231 USP20过表达细胞系,siRNA-USP20构建乳腺癌MDA-MB-231USP20敲减细胞系,通过荧光定量PCR与Westem blot检测USP20基因及蛋白的过表达和敲减水平,并观察过表达以及敲减USP20前后 HIF-α基因和蛋白的表达变化.结果 USP20与HIF-α在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为69.62%(55/79)和 46.83%(37/79),而在邻近相对正常组织中的表达均为阴性,与邻近相对正常组织相比,乳腺癌组织中USP20与HIF-α阳性表达均显著增加,差异均有统计学意义(P＜0.01),USP20与HIF-α阳性表达均主要在乳腺癌组织细胞质中,少量在细胞核;且乳腺组织中USP20表达与HIF-1α表达呈正相关(P＜0.01);过表达USP20后HIF-α的mRNA 的表达不变,蛋白表达显著增加(P＜0.01).敲减USP20后HIF-α mRNA表达轻微降低,但差异均无统计学意义(P＞0.05),而蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).结论 乳腺癌中USP20和HIF-α表达均显著增加,且呈正相关关系,过表达USP20后HIF-α蛋白表达显著增加,敲减USP20后HIF-α蛋白表达显著降低,USP20可能通过影响HIF-α的表达进而促进乳腺癌发生发展.

目的 观察消木丹颗粒对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠胆固醇合成的影响,基于mTORC1/USP20/HMGCR通路探讨其治疗NAFLD作用机制.方法 60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组(多烯磷脂酰胆碱)和中药低、中、高剂量组(消木丹颗粒).空白组予普通饲料喂养,其余组均予高脂饲料喂养12周建立NAFLD大鼠模型.造模成功后,各给药组予相应药物灌胃,空白组和模型组予无菌蒸馏水灌胃,连续4周.记录大鼠体质量、肝质量,计算肝指数,全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,HE染色、油红O染色观察肝组织形态,实时荧光定量PCR和Western blot检测大鼠肝组织核糖体S6激酶(S6K)、泛素特异性蛋白酶20(USP20)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)mRNA及p-S6K、S6K、USP20、HMGCR蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠体质量、肝质量、肝指数显著升高(P<0.01,P<0.05),肝叶体积增大,边缘变钝;血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C含量显著升高,HDL-C含量显著降低(P<0.01);大部分肝细胞脂肪变性、有明显空泡和炎性浸润,脂滴增多,肝组织USP20、HMGCR mRNA表达显著升高(P<0.01),p-S6K、USP20、HMGCR蛋白表达显著升高(P<0.01).与模型组比较,中药高剂量组和西药组大鼠体质量、肝质量、肝指数显著降低(P<0.01,P<0.05),肝脏外观改善;血清ALT、AST、TC、LDL-C含量降低,HDL-C含量升高(P<0.01,P<0.05);肝细胞脂肪变性和气球样变减轻,脂滴沉积减少,肝组织USP20、HMGCR mRNA及p-S6K、USP20、HMGCR蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05).结论 消木丹颗粒可能通过mTORC1/USP20/HMGCR通路调节胆固醇合成,进而发挥治疗NAFLD作用.

目的:研究高效液相色谱-电雾式检测法(HPLC-CAD)测定蓖麻油中三蓖麻油酸甘油酯含量,并与美国药典(USP)的蒸发光散射检测法(ELSD)进行对比,探讨不同检测方法的合理性.方法:RP-HPLC-ELSD法色谱柱C18柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:A甲醇,B异丙醇;梯度洗脱:0～20 min,A 100％～50％;20～23 min,A 50％～0％;23～25 min,A 0％～100％;25～35 min,A 100％,流速 1.0 mL·min-1,柱温35℃;检测器温度40℃,氮气流速1.5 L·min-1;采用标准曲线法或面积归一化法进行定量.RP-HPLC-CAD法色谱柱C18柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:A甲醇,B异丙醇;梯度洗脱:0～20 min,A 100％～50％;20～22 min,A 50％～30％;22～30 min,A 30％;30～32 min,A 30％～100％;32～40 min,A 100％;柱温35℃;采集频率:10 Hz,滤波常数:3.6 s,蒸发温度:50℃;采用标准曲线法或面积归一化法进行定量.结果:分别对ELSD与CAD检测器采用面积归一化法对蓖麻油中三蓖麻油酸甘油酯含量检测的结果和方法合理性进行了比较与探讨,并在此基础上讨论了以三油酸甘油酯和三蓖麻油酸甘油酯为对照品,采用标准曲线法进行含量测定的可行性.结论:在蓖麻油中三蓖麻油酸甘油酯含量的检测中,CAD检测器的响应一致性高于ELSD检测器,采用CAD检测器进行峰面积归一化法或标准曲线法的检测结果与质谱的检测结果基本一致.

目的:观察针灸对帕金森病(PD)Thy1-α突触核蛋白(αSyn)转基因模型小鼠中脑黑质磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1(PINK1)/帕金蛋白(Parkin)信号通路的影响.方法:将24只Thy1-αSyn转基因小鼠随机分为模型组、针刺组、针灸组和西药组;同窝野生型小鼠6只作为野生组.针刺组取百会和阳陵泉进行针刺;针灸组在针刺组的基础上加灸关元穴;西药组按10 mg/(kg·bw)剂量予雷帕霉素腹腔注射;野生组与模型组给与固定捆绑,不干预.观测各组小鼠总体转棒实验(ORP)评分;采用免疫组织化学法检测各组小鼠脑黑质的酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元;免疫荧光化学法检测αSyn;免疫印迹法检测αSyn、微管相关蛋白轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、自噬蛋白sequestosome-1(SQSTM-1/p62)、PINK1、Parkin及泛素特异性蛋白酶30(USP30)蛋白表达;荧光定量聚合酶链反应法检测LC3B、p62、PINK1、Parkin及USP30 mRNA表达水平.结果:与野生组相比,模型组小鼠ORP评分及p62、PINK1与Parkin蛋白表达水平显著降低(P<0.01),PINK1 mRNA表达水平降低(P<0.05),USP30蛋白和mRNA表达水平上升(P<0.05).与模型组相比,针刺组和针灸组的ORP评分上升(P<0.05),针灸组和西药组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达上升(P<0.05),针刺组、针灸组及西药组p62、PINK1及Parkin蛋白表达上升(P<0.05),USP30蛋白表达显著降低(P<0.01);针刺组和针灸组Parkin mRNA表达水平增高(P<0.05),针灸组USP30 mRNA表达水平降低(P<0.05).结论:针灸可调节Thy1-αSyn转基因PD模型小鼠PINK1/Parkin信号通路相关分子表达,促进αSyn自噬降解,发挥多巴胺能神经元的保护作用.

目的 研究非肌层浸润膀胱癌(NMIBC)组织中核糖核酸结合蛋白15(RBM15)、泛素特异性肽酶 24(USP24)蛋白表达及与临床预后的关系.方法 选取2018 年1 月—2020 年1 月西安市中心医院肿瘤科诊治NMIBC患者90 例为研究对象.应用免疫组化法检测癌及癌旁组织中RBM15、USP24 蛋白表达;比较不同临床病理特征NMI-BC患者RBM15、USP24 蛋白表达差异;Spearman秩相关分析膀胱癌组织中RBM15 与USP24 蛋白表达的相关性.随访3 年,应用Kaplan-Meier曲线分析(Log-Rank检验)RBM15、USP24 蛋白表达对无进展生存预后的影响;多因素COX模型分析NMIBC患者无进展生存预后的影响因素.结果 膀胱癌组织中RBM15、USP24 蛋白阳性率分别为66.67%(60/90)、74.44%(67/90),高于癌旁组织6.67%(6/90)、11.11%(10/90),差异有统计学意义(χ2 =69.761、73.739,P均<0.001).NMIBC癌组织中RBM15 与USP24 表达呈正相关(r =0.716,P<0.001).NMIBC癌组织中RBM15、USP24 阳性率在肿瘤分期 T1 期、病理分级高级别中分别高于肿瘤分期 Ta/Tis 期、病理分级低级(χ2/P = 11.903/0.001,10.866/0.001;17.457/<0.001,11.433/0.001).RBM15 阳性组和阴性组 3 年无进展生存率分别为 45.00%(27/60)和90.00%(27/30).USP24 阳性组和阴性组3 年无进展生存率分别为50.75%(34/67)和86.96%(20/23).RBM15 阳性组、USP24 阳性组累积无进展生存率明显低于 RBM15 阴性组、USP24 阴性组(χ2/P = 8.057/0.005、15.379/<0.001).COX模型分析结果表明,肿瘤分期T1 期、病理分级高级别、RBM15 阳性、USP24 阳性是影响NMIBC患者无进展生存期的独立危险因素[OR(95%CI)=1.614(1.227～2.214),1.917(1.319～2.799),1.839(1.228～2.753),1.744(1.245～2.443)].结论 NMIBC癌组织中RBM15、USP24 表达均升高,两者与肿瘤分期及病理分级有关,是影响NMIBC患者无进展生存期的独立危险因素.