Background::Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common malignant tumors in the world. The ubiquitin-specific peptidase 25 (USP25) protein has been reported to participate in the development of several cancers. However, few studies have reported its association with HCC. In this study, we aimed to investigate the function and mechanism of USP25 in the progression of HCC.Methods::We analyzed USP25 protein expression in HCC based on The Cancer Genome Atlas (TCGA) and International Cancer Genome Consortium (ICGC) database cohorts. Then, we constructed USP25-overexpressing and USP25-knockdown HepG2, MHCC97H, and L-O2 cells. We detected the biological function of USP25 by performing a series of assays, such as Cell Counting Kit-8 (CCK-8), colony formation, transwell, and wound healing assays. Western blotting and quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) analyses were performed to detect the interaction between USP25 and the Wnt/β-catenin signaling pathway. The relationship between USP25 and tripartite motif-containing 21 (TRIM21) was assessed through mass spectrometry and co-immunoprecipitation (Co-IP) analysis. Finally, we constructed a mouse liver cancer model with the USP25 gene deletion to verify in vivo role of USP25. Results::USP25 was highly expressed in HCC tissue and HCC cell lines. Importantly, high expression of USP25 in tissues was closely related to a poor prognosis. USP25 knockdown markedly reduced the proliferation, migration, and invasion of HepG2 and MHCC97H cells, whereas USP25 overexpression led to the opposite effects. In addition, we demonstrated that USP25 interacts with TRIM21 to regulate the expression of proteins related to epithelial-mesenchymal transition (EMT; E-cadherin, N-cadherin, and Snail) and the Wnt/β-catenin pathway (β-catenin, Adenomatous polyposis coli, Axin2 and Glycogen synthase kinase 3 beta) and those of their downstream proteins (C-myc and Cyclin D1). Finally, we verified that knocking out USP25 inhibited tumor growth and distant metastasis in vivo. Conclusions::In summary, our data showed that USP25 was overexpressed in HCC. USP25 promoted the proliferation, migration, invasion, and EMT of HCC cells by interacting with TRIM21 to activate the β-catenin signaling pathway.

目的:探讨女性乳腺浸润性导管癌组织中泛素特异性蛋白酶18(USP18)、泛素特异性蛋白酶20(USP20)、泛素特异性蛋白酶25(USP25)的表达与临床病理特征和预后的关系.方法:选取2017年3月-2020年3月四川省妇幼保健院和雅安市人民医院收治的女性乳腺浸润性导管癌患者98例作为研究对象,采用免疫组织化学方法检测乳腺浸润性导管癌组织和癌旁组织USP18、USP20、USP25的表达情况,分析癌组织中USP18、USP20和USP25的表达与临床病理特征间的关系.多因素Logistic回归分析女性乳腺浸润性导管癌预后的独立危险因素.Kaplan-Meier生存曲线分析USP18、USP20、USP25阴性和阳性表达患者预后的差异.结果:乳腺浸润性导管癌组织中USP20、USP18、USP25阳性表达率较癌旁组织更高(P＜0.05);乳腺浸润性导管癌组织中USP20的阳性表达与分化程度、TNM分期有关(P＜0.05);USP18的阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、分子亚型、分化程度有关(P＜0.05);USP25的阳性表达与淋巴结转移及分化程度有关(P＜0.05).多因素Logistic回归分析显示淋巴结转移、TNM Ⅲ期、USP18阳性表达、USP20阳性表达、USP25阳性表达均是影响患者预后的独立危险因素(P＜0.05).Kaplan-Meier生存曲线发现USP18、USP20、USP25阳性表达患者的3年未复发生存率分别为59.65％、59.32％、58.62％,分别低于USP18、USP20、USP25阴性表达患者的82.05％、83.78％、84.21％.结论:USP18、USP20、USP25在女性乳腺浸润性导管癌中的表达情况与淋巴结转移、TNM分期、分化程度以及分子亚型密切相关.USP18、USP20、USP25阳性表达是影响患者预后的独立危险因素,且与患者3年未复发生存率有关.

目的:研究高效液相色谱-电雾式检测法(HPLC-CAD)测定蓖麻油中三蓖麻油酸甘油酯含量,并与美国药典(USP)的蒸发光散射检测法(ELSD)进行对比,探讨不同检测方法的合理性.方法:RP-HPLC-ELSD法色谱柱C18柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:A甲醇,B异丙醇;梯度洗脱:0～20 min,A 100％～50％;20～23 min,A 50％～0％;23～25 min,A 0％～100％;25～35 min,A 100％,流速 1.0 mL·min-1,柱温35℃;检测器温度40℃,氮气流速1.5 L·min-1;采用标准曲线法或面积归一化法进行定量.RP-HPLC-CAD法色谱柱C18柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:A甲醇,B异丙醇;梯度洗脱:0～20 min,A 100％～50％;20～22 min,A 50％～30％;22～30 min,A 30％;30～32 min,A 30％～100％;32～40 min,A 100％;柱温35℃;采集频率:10 Hz,滤波常数:3.6 s,蒸发温度:50℃;采用标准曲线法或面积归一化法进行定量.结果:分别对ELSD与CAD检测器采用面积归一化法对蓖麻油中三蓖麻油酸甘油酯含量检测的结果和方法合理性进行了比较与探讨,并在此基础上讨论了以三油酸甘油酯和三蓖麻油酸甘油酯为对照品,采用标准曲线法进行含量测定的可行性.结论:在蓖麻油中三蓖麻油酸甘油酯含量的检测中,CAD检测器的响应一致性高于ELSD检测器,采用CAD检测器进行峰面积归一化法或标准曲线法的检测结果与质谱的检测结果基本一致.

目的:探究去泛素化酶(USP11)通过调节胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)表达影响口腔鳞状细胞癌(OSCC)恶性表型的分子机制.方法:免疫组化和Western blot检测OSCC患者(n=50)癌组织和癌旁组织中USP11蛋白表达,Western blot检测USP11蛋白在正常人口腔上皮角质细胞(HOK)和人OSCC细胞SCC-25和CAL-27中表达;Kaplan-Meier生存模型分析USP11高低表达对OSCC患者生存率的影响;siRNA USP11(si-USP11)转染SCC-25和CAL-27细胞敲低内源性USP11表达;CCK-8、划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭;Western blot检测敲低USP11后的IGF2BP3蛋白表达;敲低USP11和过表达IGF2BP3,检测OSCC细胞增殖、迁移和侵袭的变化;过表达USP11同时敲低IGF2BP3,检测敲低IGF2BP3对USP11过表达OSCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响;裸鼠接种SCC-25细胞构建皮下移植瘤模型,考察敲低USP11对SCC-25细胞成瘤抑制作用.结果:与癌旁组织相比,OSCC患者癌组织中USP11蛋白免疫组化评分显著升高(P＜0.01);与HOK细胞相比,SCC-25和CAL-27细胞USP11蛋白表达显著增加(P＜0.01).敲低USP11降低OSCC细胞增殖、迁移和侵袭能力(P＜0.01),下调IGF2BP3蛋白表达.过表达IGF2BP3逆转USP11敲低对OSCC细胞增殖、迁移和侵袭能的抑制作用;敲低IGF2BP3逆转USP11过表达对OSCC细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用.裸鼠致瘤性实验显示敲低USP11抑制移植瘤模型中 SCC-25细胞体内生长.结论:USP11在OSCC患者癌组织中表达升高且高表达患者预后更差,USP11通过上调IGF2BP3蛋白表达促进OSCC细胞增殖、迁移和侵袭.

目的 探讨脑胶质瘤组织去泛素化酶USP9X表达水平与病人生存预后的关系.方法 选取2016年6月至2018年6月手术切除的108例脑胶质瘤组织标本和25例颅内减压术中切除的正常脑组织为对照,免疫组织化学染色法检测组织USP9X蛋白表达水平,根据染色强度评分和阳性细胞比例评分≥4分定为高表达.随访截止2023年5月,计算总体生存时间.结果 108例胶质瘤中,WHO分级Ⅱ级38例,Ⅲ级46例,Ⅳ级24例.WHO分级Ⅳ级(79.17％)、Ⅲ级(58.69％)、Ⅱ级(39.47％)脑胶质瘤组织USP9X高表达率均明显高于正常脑组织(24.00％,P＜0.05),并且WHO分级越高,USP9X高表达率越高(P＜0.05).随访期间,失访8例,死亡68例(高表达组51例,低表达组17例).多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示USP9X高表达是脑胶质瘤不良生存预后的独立危险因素(OR=2.173;95％CI 1.412～5.572;P＜0.001),生存曲线分析显示USP9X高表达病人的中位总体生存期较低表达病人明显缩短(P＜0.05).结论 脑胶质瘤组织USP9X呈高表达,与病人不良生存预后有关.

目的:通过对比《中华人民共和国药典》2020年版(ChP 2020)、2023年美国药典(USP-NF 2023)、欧洲药典11.0版(EP 11.0)、日本药典18版(JP 18)中注射剂不溶性微粒检测方法相关内容,分析不同药典对不溶性微粒的监管要求,供业界参考.以治疗性蛋白注射液为代表,结合目前各监管机构对注射液中不溶性微粒的要求,指出现有要求未能对此类生物技术药物中具有免疫原性潜力的小粒径(0.1～10 μm)蛋白聚集体微粒进行控制,并从三方面提出建议以加强此类药物的质量控制,更好地保障患者的用药安全.方法:通过对比ChP 2020、USP-NF 2023、EP 11.0、JP 18中注射剂不溶性微粒检测的章节内容,对检测方法、限定标准和系统适用性检测等内容进行分析总结.通过收集归纳中、美、日、欧关于生物技术药物中不溶性微粒的药典要求和相关技术指导原则,明确目前不同机构对于生物技术药物中不溶性微粒的监管要求.结果 与结论:(1)对于注射液中不溶性微粒检查方法,不同药典收载的方法均为光阻法和显微计数法,但是对各方法的适用条件的限定不同.此外,USP-NF 2023、EP 11.0和JP 18中提出的检测方法一致,Chp 2020主要在25 mL以下规格的供试品检测方面与其他三部药典有较大差异;在系统适用性检测方面,USP-NF 2023更为全面,Chp 2020在此方面要求较少;在微粒计数和限定标准方面,各药典一致;(2)对于生物技术药物,除Chp 2020外,其他药典均收载了生物技术药物不溶性微粒的检测方法,但是并未对0.1～10μm小粒径微粒进行计数和控制,仍然无法控制小粒径蛋白聚集体可能带来的免疫原性的危害;也未见各机构明确对生物技术药物中有免疫原风险的小粒径不溶性微粒的监管要求和标准.为此笔者分别在方法学研究方面、数据收集方面、研发技术要求方面提出三点建议,以更好地保障患者的用药安全.

目的 探索 USP19 调控结肠癌细胞侵袭转移的作用和机制.方法 通过组织标本免疫组化染色和生物信息学方法分析验证 USP19 在结肠癌组织中的作用,通过Transwell小室检测 USP19 对结肠癌细胞侵袭、迁移能力的影响,通过基因敲低及过表达实验验证 USP19 相关调控的分子机制.结果 25 对结肠癌临床标本的免疫组化染色和蛋白印迹实验结果均显示 USP19 在结肠癌组织中显著高表达,通过 TCGA数据库预后分析发现 USP19 高表达组的结肠癌患者 10 年总生存率显著低于 USP19 低表达组,提示 USP19 高表达与结肠癌不良预后密切相关.通过细胞实验发现USP19 可促进结肠癌细胞侵袭转移,对其分子机制探索发现 USP19 可通过调控肿瘤细胞上皮-间充质转化(EMT)来增强结肠癌细胞侵袭能力和迁移能力.结论 USP19 在结肠癌侵袭转移相关调控中起关键作用,为结肠癌转移的具体调控机制提供了新的线索和思路.

目的 分析泛素特异性蛋白酶18(USP18)在人胃癌细胞株中的表达及其作用,探讨其与胃癌发生、发展的关系.方法 蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测永生化胃黏膜上皮细胞株GSE和胃癌细胞株(AGS、MKN45、MKN25、BGC823、BGC803、SGC7901)中USP18蛋白和mRNA表达水平;CCK-8法和Transwell实验检测USP18在胃癌细胞侵袭和增殖中的作用.结果 GSE细胞中USP18 mRNA的含量表达低于各胃癌细胞株(F=794.052,P＜0.000 1).6种胃癌细胞株中,BGC823和BGC803中USP18 mRNA的相对含量高,分别为17.62±0.55和13.52±0.50,而在MKN28和MKN45细胞中的含量低,分别为1.40±0.17和4.23±0.26.在蛋白水平上,USP18在GSE细胞中的表达最低,在6株胃癌细胞中,USP18在侵袭能力较强的SGC7901和BGC803细胞中的表达最高,而在AGS和MKN45细胞中的表达最低.与对照组相比,干扰USP18后SGC7901和BGC803的侵袭和增殖能力降低,差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论 USP18在侵袭能力较强的胃癌细胞株中高表达,下调USP18能抑制胃癌细胞的侵袭和增殖.

目的 分析泛素特异性蛋白酶25(USP25)在乳腺癌及癌旁正常组织中的表达,探讨USP25与乳腺癌临床病理特征、分子分型的关系及临床意义.方法 采用免疫组化EnVision法检测122例乳腺癌组织及50例癌旁正常组织石蜡标本中USP25蛋白的表达,并通过qRT-PCR检测12例新鲜乳腺癌组织及配对癌旁正常组织中USP25 mRNA的表达,查阅相关临床资料,分析USP25表达与临床病理特征的关系.结果 乳腺癌组织中USP25蛋白及mRNA的表达水平均明显高于癌旁正常组织(P＜0.001);且USP25的表达与乳腺癌分化程度、淋巴结转移、Ki-67及三阴型乳腺癌等临床病理特征有关(P=0.015、P=0.006、P=0.001、P=0.006).结论 USP25与乳腺癌细胞的浸润与转移能力、恶性程度有关,其在乳腺癌发生、发展中可能扮演着重要角色.

去泛素化酶(DUBs)通过逆转泛素激活酶(E1)-泛素结合酶(E2)-泛素连接酶(E3)介导的泛素化过程,参与包括DNA复制、DNA损伤修复、炎症、贫血、凋亡、内吞等机体的生理病理过程.USP52,USP25,USP19属DUBs中的泛素特异性水解酶家族(USPs),与不同的伴侣分子相关联,USP52可去泛素化伴侣分子ASF1A,促进组蛋白H3-H4二聚体入核和DNA复制、修复顺利进行,两者高表达可使肿瘤的增殖能力和DNA损伤耐受性增强.USP52(别名PAN2)又可与PAN3形成复合物参与mRNA的代谢.牛痘相关激酶(VRK2)调节USP25的活性,影响后者对伴侣分子TRiC的稳定性,进而影响蛋白错误折叠.USP19(b亚型)和Hsp90,CHIP(E3连接酶)形成复合物调节错误折叠蛋白的命运.本文系统综述了去泛素化酶(DUBs)家族相关成员及其通过与伴侣分子相互作用在肿瘤等疾病的发生发展中所起的作用及其相关研究进展.