患儿，女，胎龄33 +2周时早产，出生体重1650 g，母亲妊娠期常规超声检查显示胸廓比增大，心包积液。胎儿彩色多普勒超声：脐绕颈，心胸比增大，心包积液。孕33周时胎儿双顶径7.2 cm(孕32周、孕31周、孕30周时分别为7.1 cm、6.9 cm、6.8 cm)。出生身长40.3 cm(3%~10%)，出生体重1650 g(5%~10%)，头围29 cm(10%~50%)，全身散在出血点。出生后数小时，患儿出现呼吸困难，立即给予机械通气。随后超声检查发现双侧室管膜下出血，出生第11天CT扫描显示双侧前颞蛛网膜下腔变宽，左侧脑室扩张，颅内多发低密度影，肝门区钙化，左侧腋窝钙化(见图1)。血液计数显示血小板减少。血液生化指标提示肝功能AST 229.4 U/L，ALT 986.5 U/L，其他各项实验室检查正常。彩色超声显示肝脏增大(肋下47 mm)，脾肿大(肋下30 mm)，心房间隔缺损(4.8 mm)，动脉导管未闭(3.4 mm)，心包积液，异常密度影和肝门附近的钙化，腹部X线检查显示腹水、腹腔积液，住院期间血小板最低时11×10 9 / L。

目的:探讨自噬抑制剂Spautin-1对小鼠创伤性颅脑损伤(TBI)后焦虑样行为的影响及其机制。方法:36只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为假手术组、TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组，每组12只。后2组小鼠采用改良的Feeney自由落体硬膜外撞击法建立TBI模型。造模后10 min，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠侧脑室注射2 μL Spautin-1溶液(10 mmol/L)，另外2组注射等量溶剂。造模后1、7、14 d采用神经系统症状评分(NSS)评估小鼠的运动、感觉和反射功能。造模后15、16 d分别采用旷场实验、高架十字迷宫实验评估小鼠的焦虑样行为。造模后16 d采用尼氏染色检测小鼠杏仁核区尼氏小体的数量，免疫荧光染色检测小鼠杏仁核区神经元特异性核蛋白(NeuN)阳性细胞数、白细胞介素(IL)-18及IL-1β阳性星形胶质细胞数，Western blotting实验检测小鼠杏仁核区自噬、焦亡相关蛋白的表达。结果:(1)造模后1、7 d，与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠的NSS评分增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。(2)造模后15、16 d，与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠旷场实验的跨格次数、中央区停留时间百分比下降，高架十字迷宫实验的进入开放臂次数(OE)百分比、开放臂停留时间(OT)百分比下降；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠的跨格次数、中央区停留时间百分比、OE百分比、OT百分比升高，差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区尼氏小体、NeuN阳性细胞数减少；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区尼氏小体、NeuN阳性细胞数增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。(4)与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区IL-1β、IL-18阳性星形胶质细胞百分比增加；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区IL-1β、IL-18阳性星形胶质细胞百分比减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。(5)与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、成孔蛋白D-N末端片段(GSDMD-N)、泛素特异性肽酶(USP)13及B淋巴细胞瘤-2相互作用蛋白(Beclin1)的表达上调，微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ值升高；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区NLRP3、活化Caspase-1、GSDMD-N、USP13、Beclin1蛋白的表达下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:自噬抑制剂Spautin-1能够改善小鼠TBI后的焦虑样行为，其机制可能与抑制小鼠杏仁核区星形胶质细胞的自噬依赖性焦亡相关。

目的:探讨女性乳腺浸润性导管癌组织中泛素特异性蛋白酶18(USP18)、泛素特异性蛋白酶20(USP20)、泛素特异性蛋白酶25(USP25)的表达与临床病理特征和预后的关系.方法:选取2017年3月-2020年3月四川省妇幼保健院和雅安市人民医院收治的女性乳腺浸润性导管癌患者98例作为研究对象,采用免疫组织化学方法检测乳腺浸润性导管癌组织和癌旁组织USP18、USP20、USP25的表达情况,分析癌组织中USP18、USP20和USP25的表达与临床病理特征间的关系.多因素Logistic回归分析女性乳腺浸润性导管癌预后的独立危险因素.Kaplan-Meier生存曲线分析USP18、USP20、USP25阴性和阳性表达患者预后的差异.结果:乳腺浸润性导管癌组织中USP20、USP18、USP25阳性表达率较癌旁组织更高(P＜0.05);乳腺浸润性导管癌组织中USP20的阳性表达与分化程度、TNM分期有关(P＜0.05);USP18的阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、分子亚型、分化程度有关(P＜0.05);USP25的阳性表达与淋巴结转移及分化程度有关(P＜0.05).多因素Logistic回归分析显示淋巴结转移、TNM Ⅲ期、USP18阳性表达、USP20阳性表达、USP25阳性表达均是影响患者预后的独立危险因素(P＜0.05).Kaplan-Meier生存曲线发现USP18、USP20、USP25阳性表达患者的3年未复发生存率分别为59.65％、59.32％、58.62％,分别低于USP18、USP20、USP25阴性表达患者的82.05％、83.78％、84.21％.结论:USP18、USP20、USP25在女性乳腺浸润性导管癌中的表达情况与淋巴结转移、TNM分期、分化程度以及分子亚型密切相关.USP18、USP20、USP25阳性表达是影响患者预后的独立危险因素,且与患者3年未复发生存率有关.

2024年7月3日,浙江大学医学院附属第二医院肿瘤研究所/浙江大学转化医学研究院孙毅教授团队在《美国科学院学报》(PNAS)发表题为"The CRL3KCTD10 ubiquitin ligase-USP18 axis coordinately regulates cystine uptake and ferroptosis by modulating SLC7A11"的研究论文(DOI:10.1073/pnas.2320655121),报道了E3泛素连接酶CRL3KCTD10和去泛素蛋白酶18 (USP18)协同调控胱氨酸转运蛋白载体家族7A成员11(SLC7A11)的稳定性,从而调控肿瘤细胞的胱氨酸吸收和铁死亡.

目的:探讨HBV感染患者外周血干扰素刺激基因（ISGs）表达水平变化及其与干扰素治疗疗效的关系。方法:选取首都医科大学大兴教学医院2018年4月至2023年5月收治的80例HBV感染患者纳入HBV组，另选取同期进行健康体检者80例作为对照组。对比两组外周血黏病毒抗性蛋白A（MxA）mRNA、泛素特异性蛋白酶18（USP18）mRNA、细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3）mRNA表达水平，HBV组患者均给予重组人干扰素α-2b持续治疗24周，依照干扰素应答情况，分为干扰素应答组（n=38）与干扰素无应答组（n=42）两个亚组，通过Logistic回归分析外周血指标与干扰素应答的关系，并观察HBV组患者干扰素治疗前后MxA mRNA、USP18 mRNA、SOCS3 mRNA水平变化。结果:HBV组治疗前外周血MxA mRNA水平低于对照组，USP18 mRNA、SOCS3 mRNA水平高于对照组（P<0.05）；干扰素应答组治疗前外周血MxA mRNA水平高于干扰素无应答组，USP18 mRNA、SOCS3 mRNA水平低于干扰素无应答组（P<0.05）；Logistic回归分析显示USP18 mRNA、SOCS3 mRNA高表达是HBV感染患者干扰素无应答危险因素，MxA mRNA高表达是干扰素应答保护因素；干扰素应答组治疗前、治疗2周、12周、24周后外周血MxA mRNA表达水平高于干扰素无应答组，USP18 mRNA、SOCS3 mRNA表达水平低于干扰素无应答组（P<0.05）。结论:HBV感染者应用干扰素治疗中，MxA高表达、USP18、SOCS3低表达者具有较佳的干扰素应答疗效。

目的:研究高效液相色谱-电雾式检测法(HPLC-CAD)测定蓖麻油中三蓖麻油酸甘油酯含量,并与美国药典(USP)的蒸发光散射检测法(ELSD)进行对比,探讨不同检测方法的合理性.方法:RP-HPLC-ELSD法色谱柱C18柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:A甲醇,B异丙醇;梯度洗脱:0～20 min,A 100％～50％;20～23 min,A 50％～0％;23～25 min,A 0％～100％;25～35 min,A 100％,流速 1.0 mL·min-1,柱温35℃;检测器温度40℃,氮气流速1.5 L·min-1;采用标准曲线法或面积归一化法进行定量.RP-HPLC-CAD法色谱柱C18柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:A甲醇,B异丙醇;梯度洗脱:0～20 min,A 100％～50％;20～22 min,A 50％～30％;22～30 min,A 30％;30～32 min,A 30％～100％;32～40 min,A 100％;柱温35℃;采集频率:10 Hz,滤波常数:3.6 s,蒸发温度:50℃;采用标准曲线法或面积归一化法进行定量.结果:分别对ELSD与CAD检测器采用面积归一化法对蓖麻油中三蓖麻油酸甘油酯含量检测的结果和方法合理性进行了比较与探讨,并在此基础上讨论了以三油酸甘油酯和三蓖麻油酸甘油酯为对照品,采用标准曲线法进行含量测定的可行性.结论:在蓖麻油中三蓖麻油酸甘油酯含量的检测中,CAD检测器的响应一致性高于ELSD检测器,采用CAD检测器进行峰面积归一化法或标准曲线法的检测结果与质谱的检测结果基本一致.

目的 研究泛素特异性蛋白酶 13(ubiquitin-specific protease 13,USP13)在对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的肝脏炎性应激反应中的作用.方法 将Usp13+/+小鼠和Usp13-/-小鼠均设置为对照组(CON,APAP 0 h)和 3个实验组(APAP 2 h、APAP 4 h和APAP 12 h),每组 6 对小鼠;饥饿 18 h后实验组小鼠腹腔注射 300 mg/kg APAP建立肝脏炎性应激反应模型,分别于 2、4、12 h 收集小鼠肝脏组织和血清;对照组在 0 h收集小鼠肝脏组织和血清.HE染色观察肝脏组织病理变化;免疫组化观察肝脏组织中炎性细胞浸润情况;ELISA检测血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;Western blot检测肝脏细胞色素P450 2E1(cytochrome p450 2E1,CYP2E1)蛋白表达和谷胱甘肽(glutathione,GSH)试剂盒检测肝脏GSH变化水平;Western blot检测c-Jun N端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路的激活情况;qPCR检测炎性因子相关基因的转录水平表达.结果 与对照组相比,APAP 2 h和 4 h组小鼠肝脏CYP2E1 蛋白表达无明显变化、GSH显著下降(P<0.0001)、JNK通路激活和炎症因子表达升高(P<0.001).与对照组相比,APAP 12 h组小鼠肝脏发生明显坏死,F4/80+细胞数量增加(P<0.001)、Ly6G+细胞数量增加(P<0.01)以及血清ALT、AST水平升高(P<0.01).但与Usp13+/+小鼠相比,Usp13敲除对APAP诱导肝脏炎性应激反应的病理生理过程并无明显影响.结论 USP13 缺失不影响 APAP 诱导的肝脏炎性应激反应过程中的各种病理生理过程,这不同于USP13 参与多种肝脏疾病发生发展的报道,提示USP13 在肝脏疾病作用的复杂性.[营养学报,2024,46(1):56-61]

目的:通过对比《中华人民共和国药典》2020年版(ChP 2020)、2023年美国药典(USP-NF 2023)、欧洲药典11.0版(EP 11.0)、日本药典18版(JP 18)中注射剂不溶性微粒检测方法相关内容,分析不同药典对不溶性微粒的监管要求,供业界参考.以治疗性蛋白注射液为代表,结合目前各监管机构对注射液中不溶性微粒的要求,指出现有要求未能对此类生物技术药物中具有免疫原性潜力的小粒径(0.1～10 μm)蛋白聚集体微粒进行控制,并从三方面提出建议以加强此类药物的质量控制,更好地保障患者的用药安全.方法:通过对比ChP 2020、USP-NF 2023、EP 11.0、JP 18中注射剂不溶性微粒检测的章节内容,对检测方法、限定标准和系统适用性检测等内容进行分析总结.通过收集归纳中、美、日、欧关于生物技术药物中不溶性微粒的药典要求和相关技术指导原则,明确目前不同机构对于生物技术药物中不溶性微粒的监管要求.结果 与结论:(1)对于注射液中不溶性微粒检查方法,不同药典收载的方法均为光阻法和显微计数法,但是对各方法的适用条件的限定不同.此外,USP-NF 2023、EP 11.0和JP 18中提出的检测方法一致,Chp 2020主要在25 mL以下规格的供试品检测方面与其他三部药典有较大差异;在系统适用性检测方面,USP-NF 2023更为全面,Chp 2020在此方面要求较少;在微粒计数和限定标准方面,各药典一致;(2)对于生物技术药物,除Chp 2020外,其他药典均收载了生物技术药物不溶性微粒的检测方法,但是并未对0.1～10μm小粒径微粒进行计数和控制,仍然无法控制小粒径蛋白聚集体可能带来的免疫原性的危害;也未见各机构明确对生物技术药物中有免疫原风险的小粒径不溶性微粒的监管要求和标准.为此笔者分别在方法学研究方面、数据收集方面、研发技术要求方面提出三点建议,以更好地保障患者的用药安全.

近日,温州医科大学李校堃院士团队在Nature Communications期刊在线发表题为"FGF18 alleviates hepatic ischemia-reperfusion injury via the USP16-mediated KEAP1/Nrf2 signaling pathway in male mice"的论文.该研究证实FGF18在肝缺血再灌注过程中扮演关键作用,其可显著改善肝缺血再灌注过程中的损伤,主要体现在通过降低氧化应激以及炎症水平,最终减少肝细胞的凋亡.在缺血再灌注过程中,肝星状细胞可分泌FGF18并作用于肝细胞,从而保护肝细胞.

比较标准草案和《美国药典》恩替卡韦有关物质的测定方法,确定恩替卡韦有关物质的测定方法.采用Welch uLtimate AQ-C18柱(4.6 nm×250 mm,5μm),体积流量为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为254 nm.标准草案以水-乙腈-5％三氟乙酸(95:5:0.05)为流动相A、乙腈为流动相B,进行梯度洗脱;《美国药典》以水-乙腈(97∶3)为流动相A、乙腈为流动相B,进行梯度洗脱.均采用自身对照法测定.两种方法中非对映异构体RRS、RRR、SRR,8-羟基恩替卡韦和8-羟甲基恩替卡韦分离度均符合要求.标准草案非对映异构体RRS、RRR、SRR回收率分别为98.2％,98.5％和98.6％,RSD％分别为1.4％,1.9％/和1.8％;《美国药典》非对映异构体RRS、RRR、SRR回收率分别为99.8％,98.2％和98.5％,RSD％分别为1.4％,1.7％和1.9％.标准草案灵敏度较高,分析时间较短,可用于恩替卡韦有关物质的测定.