目的:探讨血液透析（hemodialysis，HD）患者血清成纤维细胞生长因子21（fibroblast growth factor 21，FGF21）与肌少症的关系，并在细胞水平初步探索尿毒症状态下FGF21与骨骼肌代谢相关信号通路的关系。方法:该前瞻性观察性研究搜集2018—2019年苏州大学附属第三医院血液净化中心接受HD的患者资料。以ELISA法检测HD患者血清FGF21浓度，同时根据第四胸椎（the fourth thoracic vertebra，T4）及第一腰椎（the first lumbar vertebra，L1）计算机断层扫描（computed tomography，CT）平面骨骼肌指数（skeletal muscle index，SMI）将患者分为肌少症组及非肌少症组，分析FGF21与肌少症的关系。体外培养小鼠C2C12成肌细胞，分别给予健康人血清、健康人血清+不同浓度FGF21、尿毒症血清、尿毒症血清+不同浓度FGF21干预细胞，并采用Western印迹法检测各组肌肉环指蛋白-1（muscle ring finger protein-1，MURF1）、肌肉萎缩相关的F-box蛋白（muscle atrophy F-box，MAFbx/Atrogin-1）、成肌分化因子（myogenic differentiation，MyoD）、肌细胞生成素（myogenin，MyoG）的表达。结果:共有118例HD患者被纳入此项研究，其中男性64例（54.2%），女性54例（45.8%），年龄为（52.64±15.29）岁。118例HD患者有CT T4图像，根据T4 SMI性别特异性最低四分位数（ P25）为截点值分组（男性 < 59.92 cm 2/m 2，女性 < 46.75 cm 2/m 2），肌少症组29例，非肌少症组89例，肌少症患者比例高达24.58%。82例患者有L1横断面图像，根据L1 SMI性别特异性最低四分位数（ P25）为截点值分组（男性 < 29.02 cm 2/m 2，女性 < 24.50 cm 2/m 2），肌少症组20例，非肌少症组62例，肌少症患者比例高达24.39%。根据T4 SMI分组结果显示，肌少症组患者血清FGF21水平高于非肌少症组，但两组间差异无统计学意义［448.52（183.96，1 684.08）ng/L比273.65（152.83，535.54）ng/L， Z=-1.741， P=0.082］。根据L1 SMI分组结果显示，肌少症组患者血清FGF21水平显著高于非肌少症组［460.95（188.91，1 276.38）ng/L比239.10（133.25，466.36）ng/L， Z=-2.170， P=0.030］。分别根据T4 SMI及L1 SMI进行分组，二元Logistic回归分析结果均显示FGF21升高是HD患者发生肌少症的独立影响因素（根据T4 SMI分组： OR=4.085，95% CI 1.778～9.388， P=0.001；根据L1 SMI分组： OR=7.327，95% CI 1.841～29.160， P=0.005）。在T4和L1平面，FGF21预测HD患者发生肌少症的受试者工作特征曲线下面积分别为0.636（95% CI 0.494～0.779， P=0.036）和0.684（95% CI 0.535～0.833， P=0.018）。细胞实验结果显示，在尿毒症血清中给予外源性FGF21干预后，肌管细胞MURF1、Atrogin-1表达升高，而MyoD、MyoG表达显著降低（均 P < 0.05）。 结论:HD患者血清FGF21升高与肌少症风险增加相关。FGF21在尿毒症状态下可能通过调节泛素蛋白酶体系统的表达，减少骨骼肌细胞蛋白的合成及分化，导致肌肉萎缩的发生。

目的:探讨女性乳腺浸润性导管癌组织中泛素特异性蛋白酶18(USP18)、泛素特异性蛋白酶20(USP20)、泛素特异性蛋白酶25(USP25)的表达与临床病理特征和预后的关系.方法:选取2017年3月-2020年3月四川省妇幼保健院和雅安市人民医院收治的女性乳腺浸润性导管癌患者98例作为研究对象,采用免疫组织化学方法检测乳腺浸润性导管癌组织和癌旁组织USP18、USP20、USP25的表达情况,分析癌组织中USP18、USP20和USP25的表达与临床病理特征间的关系.多因素Logistic回归分析女性乳腺浸润性导管癌预后的独立危险因素.Kaplan-Meier生存曲线分析USP18、USP20、USP25阴性和阳性表达患者预后的差异.结果:乳腺浸润性导管癌组织中USP20、USP18、USP25阳性表达率较癌旁组织更高(P＜0.05);乳腺浸润性导管癌组织中USP20的阳性表达与分化程度、TNM分期有关(P＜0.05);USP18的阳性表达与TNM分期、淋巴结转移、分子亚型、分化程度有关(P＜0.05);USP25的阳性表达与淋巴结转移及分化程度有关(P＜0.05).多因素Logistic回归分析显示淋巴结转移、TNM Ⅲ期、USP18阳性表达、USP20阳性表达、USP25阳性表达均是影响患者预后的独立危险因素(P＜0.05).Kaplan-Meier生存曲线发现USP18、USP20、USP25阳性表达患者的3年未复发生存率分别为59.65％、59.32％、58.62％,分别低于USP18、USP20、USP25阴性表达患者的82.05％、83.78％、84.21％.结论:USP18、USP20、USP25在女性乳腺浸润性导管癌中的表达情况与淋巴结转移、TNM分期、分化程度以及分子亚型密切相关.USP18、USP20、USP25阳性表达是影响患者预后的独立危险因素,且与患者3年未复发生存率有关.

目的 探讨乳腺癌中泛素特异性蛋白酶20(ubiquitin-specific proteases 20,USP20)、低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-α)表达变化及意义.方法 免疫组织化学及免疫荧光方法用于检测USP20与HIF-α阳性细胞的表达变化以及细胞定位,并分析它们之间的关系;shRNA-USP20慢病毒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞构建乳腺癌MDA-MB-231 USP20过表达细胞系,siRNA-USP20构建乳腺癌MDA-MB-231USP20敲减细胞系,通过荧光定量PCR与Westem blot检测USP20基因及蛋白的过表达和敲减水平,并观察过表达以及敲减USP20前后 HIF-α基因和蛋白的表达变化.结果 USP20与HIF-α在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为69.62%(55/79)和 46.83%(37/79),而在邻近相对正常组织中的表达均为阴性,与邻近相对正常组织相比,乳腺癌组织中USP20与HIF-α阳性表达均显著增加,差异均有统计学意义(P＜0.01),USP20与HIF-α阳性表达均主要在乳腺癌组织细胞质中,少量在细胞核;且乳腺组织中USP20表达与HIF-1α表达呈正相关(P＜0.01);过表达USP20后HIF-α的mRNA 的表达不变,蛋白表达显著增加(P＜0.01).敲减USP20后HIF-α mRNA表达轻微降低,但差异均无统计学意义(P＞0.05),而蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).结论 乳腺癌中USP20和HIF-α表达均显著增加,且呈正相关关系,过表达USP20后HIF-α蛋白表达显著增加,敲减USP20后HIF-α蛋白表达显著降低,USP20可能通过影响HIF-α的表达进而促进乳腺癌发生发展.

目的 观察消木丹颗粒对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠胆固醇合成的影响,基于mTORC1/USP20/HMGCR通路探讨其治疗NAFLD作用机制.方法 60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组(多烯磷脂酰胆碱)和中药低、中、高剂量组(消木丹颗粒).空白组予普通饲料喂养,其余组均予高脂饲料喂养12周建立NAFLD大鼠模型.造模成功后,各给药组予相应药物灌胃,空白组和模型组予无菌蒸馏水灌胃,连续4周.记录大鼠体质量、肝质量,计算肝指数,全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,HE染色、油红O染色观察肝组织形态,实时荧光定量PCR和Western blot检测大鼠肝组织核糖体S6激酶(S6K)、泛素特异性蛋白酶20(USP20)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)mRNA及p-S6K、S6K、USP20、HMGCR蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠体质量、肝质量、肝指数显著升高(P<0.01,P<0.05),肝叶体积增大,边缘变钝;血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C含量显著升高,HDL-C含量显著降低(P<0.01);大部分肝细胞脂肪变性、有明显空泡和炎性浸润,脂滴增多,肝组织USP20、HMGCR mRNA表达显著升高(P<0.01),p-S6K、USP20、HMGCR蛋白表达显著升高(P<0.01).与模型组比较,中药高剂量组和西药组大鼠体质量、肝质量、肝指数显著降低(P<0.01,P<0.05),肝脏外观改善;血清ALT、AST、TC、LDL-C含量降低,HDL-C含量升高(P<0.01,P<0.05);肝细胞脂肪变性和气球样变减轻,脂滴沉积减少,肝组织USP20、HMGCR mRNA及p-S6K、USP20、HMGCR蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05).结论 消木丹颗粒可能通过mTORC1/USP20/HMGCR通路调节胆固醇合成,进而发挥治疗NAFLD作用.

目的:观察针灸对帕金森病(PD)Thy1-α突触核蛋白(αSyn)转基因模型小鼠中脑黑质磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1(PINK1)/帕金蛋白(Parkin)信号通路的影响.方法:将24只Thy1-αSyn转基因小鼠随机分为模型组、针刺组、针灸组和西药组;同窝野生型小鼠6只作为野生组.针刺组取百会和阳陵泉进行针刺;针灸组在针刺组的基础上加灸关元穴;西药组按10 mg/(kg·bw)剂量予雷帕霉素腹腔注射;野生组与模型组给与固定捆绑,不干预.观测各组小鼠总体转棒实验(ORP)评分;采用免疫组织化学法检测各组小鼠脑黑质的酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元;免疫荧光化学法检测αSyn;免疫印迹法检测αSyn、微管相关蛋白轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、自噬蛋白sequestosome-1(SQSTM-1/p62)、PINK1、Parkin及泛素特异性蛋白酶30(USP30)蛋白表达;荧光定量聚合酶链反应法检测LC3B、p62、PINK1、Parkin及USP30 mRNA表达水平.结果:与野生组相比,模型组小鼠ORP评分及p62、PINK1与Parkin蛋白表达水平显著降低(P<0.01),PINK1 mRNA表达水平降低(P<0.05),USP30蛋白和mRNA表达水平上升(P<0.05).与模型组相比,针刺组和针灸组的ORP评分上升(P<0.05),针灸组和西药组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达上升(P<0.05),针刺组、针灸组及西药组p62、PINK1及Parkin蛋白表达上升(P<0.05),USP30蛋白表达显著降低(P<0.01);针刺组和针灸组Parkin mRNA表达水平增高(P<0.05),针灸组USP30 mRNA表达水平降低(P<0.05).结论:针灸可调节Thy1-αSyn转基因PD模型小鼠PINK1/Parkin信号通路相关分子表达,促进αSyn自噬降解,发挥多巴胺能神经元的保护作用.

目的:通过观察乳腺癌组织中泛素特异性蛋白酶 20(USP20)、Ezrin表达变化及其与临床病理特征之间的关系,探讨乳腺癌组织中USP20 与Ezrin表达的相关性及临床意义.方法:免疫组织化学及免疫荧光方法用于检测USP20 与Ezrin阳性细胞的表达变化以及细胞定位,并分析它们与乳腺癌患者临床病理特征的关系;shRNA-USP20 慢病毒转染乳腺癌MDA-MB-231 细胞,通过荧光定量PCR与Western Blot检测USP20 基因及蛋白的过表达水平,然后观察过表达USP20 后Ezrin基因和蛋白的表达变化.结果:USP20 与Ezrin在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为69.6%和78.5%,而在邻近相对正常组织中的表达均为阴性,与邻近相对正常组织相比,乳腺癌组织中USP20 与Ezrin阳性表达均显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.01);USP20 与Ezrin阳性表达均主要在乳腺癌组织细胞质中,少量在细胞核.两者在乳腺癌组织中的阳性表达与患者的年龄、性别、WHO分级、分子分型和有无淋巴结转移均无关;shRNA-USP20 慢病毒转染乳腺癌MDA-MB-231 细胞后,USP20 蛋白及mRNA的表达均明显增加(P<0.01),过表达USP20后Ezrin的mRNA表达不变,蛋白表达显著增加(P<0.01).结论:乳腺癌组织中USP20 和Ezrin表达呈正相关关系,且过表达USP20 后Ezrin蛋白表达显著增加,USP20 和Ezrin可能共同促进乳腺癌发生发展,其机制可能与USP20 去泛素化作用有密切关系,这为临床治疗、预后及进一步研究提供重要的实验依据.

目的 探讨泛素化特异性蛋白酶22(USP22)在甲状腺乳头状癌、甲状腺腺瘤和结节性甲状腺肿中的表达情况,分析其与临床病理参数的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测惠州市中心人民医院2010-2015年收治的10例结节性甲状腺肿、20例甲状腺腺瘤和60例甲状腺乳头状癌组织中USP22蛋白的表达,分析其与性别、年龄、肿物大小、多灶性、包膜浸润和Ⅵ区淋巴结转移等临床病理特征的关系.结果 USP22在甲状腺乳头状癌组织中的表达高于甲状腺腺瘤组织及结节性甲状腺肿组织,差异有统计学意义(P<0.05);USP22的表达与Ⅵ区淋巴结转移和肿瘤大小有关(P<0.05),而与性别、年龄、多灶性、包膜浸润等特征无关(P>0.05).结论 与结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤相比,USP22在甲状腺乳头状癌组织细胞中高表达,其高表达与肿瘤大小和Ⅵ区淋巴结转移有关.USP22蛋白可能是一种新的预测甲状腺乳头状癌预后的肿瘤标记物以及生物治疗靶点.

目的:通过分析乳腺癌的临床病理特征及观察乳腺癌组织细胞中泛素特异蛋白酶20(ubiquitin-specific proteases20,USP20)的表达情况,探讨二者间的关系及USP20的临床意义.方法:收集经临床病理确诊为浸润性导管癌的乳腺癌组织标本42例,同时选取癌旁相对正常组织作为对照;采用免疫组织化学方法检测USP20在乳腺癌和癌旁组织中的表达情况.结果:42例乳腺癌组织中,27例(64.29％) USP20呈阳性表达,与癌旁组织阳性表达(21.43％)相比显著增加(x2=15.75,P＜0.01);病理分型中,低分化与高、中分化的总和比较,USP20阳性表达率明显增加(P＜0.05);临床分期越晚,USP20阳性表达率越高(x2=8.571,P＜0.05).结论:乳腺癌组织中USP20阳性表达与肿瘤分化程度、临床分期有密切关系,提示USP20与乳腺癌恶性程度成正相关,这为临床治疗、预后及进一步研究提供重要的实验依据.

目的 评价选择性脑低温对大鼠脑缺血再灌注时皮质小泛素样修饰蛋白(SUMO)化的影响.方法 清洁级健康雄性SD大鼠120只,8周龄,体重200～ 250 g,采用随机数字表法分为4组(n=30):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、选择性脑低温组(H组)和37℃生理盐水组(N组).采用线栓法阻断大鼠右侧大脑中动脉,缺血2h后I/R组拔除线栓恢复灌注,H组拔除线栓即刻由右侧颈内动脉以100 ml·kg-1·h-1速率输注10～13℃生理盐水20 min,N组以同样速率输注37℃生理盐水20 min.于再灌注后6、24和48 h时进行神经功能缺陷评分,采用TUNEL法检测缺血侧皮质细胞凋亡率,Western blot法测定缺血侧皮质SUMO特异性蛋白酶3(SENP3)、结合状态SUMO2/3表达水平.结果 与S组比较,其余3组大鼠各时点神经功能缺陷评分和细胞凋亡率升高,结合状态SUMO2/3表达上调,I/R组和N组SENP3表达上调,H组SENP3表达下调(P＜0.01);与I/R组比较,H组神经功能缺陷评分和细胞凋亡率降低,结合状态SUMO2/3表达上调,SENP3表达下调(P＜0.05).结论 选择性脑低温减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的机制与其增强皮质SUMO化有关.

表观遗传修饰参与了药物成瘾的形成过程,而在药物成瘾过程中组蛋白泛素化水平的变化仍未可知.药物成瘾过程中常表现为多巴胺(dopamine,DA)表达量的升高,因此本研究欲探讨多巴胺升高对神经细胞组蛋白泛素化的影响及其机制.Western印迹结果显示,在终浓度0.8 mmol/L的多巴胺作用8h后,人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞中环指蛋白20(ring finger protein 20,RNF20)表达量降低(0.29±0.032 vs.1.0±0.025,P＜0.0001),泛素化组蛋白H2B(H2Bub1)表达量下降(0.28±0.032 vs.1.0±0.017,P＜0.0001).但是RT-PCR结果显示,多巴胺处理SH-SY5Y细胞后,RNF20在mRNA水平的表达无明显变化.在SH-SY5Y细胞中沉默RNF20的表达,H2Bub1在蛋白质水平的表达明显降低(0.20±0.069 vs.1.0±0.060,P=0.001).在加入多巴胺的基础上,分别加入蛋白酶体抑制剂MG132、自噬体形成抑制剂3-MA以及空泡型H+-ATP酶特异性抑制剂Baf-A1等药物来检测RNF20的降解途径,结果发现,加入MG132、3-MA以及Baf-A1后,RNF20表达量均比DA处理组显著上升(1.51±0.095,P=0.0003;0.89±0.075,P=0.0021;2.74±0.099,P＜0.0001;vs.0.27±0.044).上述结果表明,在SH-SY5Y细胞中,RNF20对H2Bub1具有调控作用,多巴胺可通过泛素化及自噬两种途径促进RNF20降解,从而抑制组蛋白H2B泛素化.